CN105296405A - 一种复合微生物液体饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种复合微生物液体饲料添加剂及其制备方法。一种复合微生物液体饲料添加剂，其特征在于：它是将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌分别进行单菌种培养，得到的种子培养液再分别进行发酵罐培养，最后把它们的培养液按重量百分比混合起来得到的pH值为3.5～4.0，所述制剂中菌数均≥3.0×109cfu/ml。本发明利用五种有益微生物菌株制备的复合微生物液体饲料添加剂，在经过动物饮食摄取后，不仅能促进动物肠道内有益菌的生长，抑制病原微生物，还能利用它们各自的优点，使肠道内的微生物达到一个平衡状态，增强食欲，调节免疫功能并预防各类肠道疾病。
Description
技术领域
本发明属于饲料添加剂领域，特别涉及一种复合微生物液体饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
为了完善饲料的营养性，提高饲料的利用率，促进动物的生长、疾病的预防和完善饲料的品质，而在饲料中添加了饲料添加剂。目前，饲料添加剂可分为维生素添加剂、微量元素添加剂、氨基酸添加剂、香料及引诱剂、酶制剂、微生态制剂等。微生态制剂主要包括乳酸杆菌，芽孢杆菌，酵母菌等经培养而生产出的一种活菌制剂。微生态制剂种类较多，市场潜力巨大，但对于微生态制剂中液体复合微生物添加剂的研究报道很少。
发明内容
发明目的：本发明是针对现有技术的不足，提出的一种复合微生物液体饲料添加剂及其制备方法。该复合微生物液体饲料添加剂能抑制和阻止肠内有害菌的繁殖，使肠内菌群保持平衡，能使动物粪便中有害气体的浓度得到了有效降低，改善了饲养环境，优化生态环境，通过刺激肠道内免疫系细胞，增强了免疫作用，调节了动物胃肠道的微生态平衡，增强食欲，促进消化，预防疾病。
技术手段：为实现上述技术目的，本发明提出了一种复合微生物液体饲料添加剂，它是将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌分别进行单菌种培养，得到的种子培养液再分别进行发酵罐培养，最后把它们的培养液按重量百分比混合得到，所述制剂中植物乳杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，粪肠球菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，嗜酸乳杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，凝结芽孢杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，侧孢短芽孢杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，pH值为3.5～4.0。
其中，所述各菌种的种子培养液的重量百分数为：植物乳杆菌的种子培养液25％～35％，粪肠球菌的种子培养液15％～20％，嗜酸乳杆菌的种子培养液25％～35％，凝结芽孢杆菌的种子培养液15％～25％，侧孢短芽孢杆菌的种子培养液10％～15％。
本发明进一步提出了上述的复合微生物液体饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)种子培养液的制备：
植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌种子培养液的制备：分别将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下接种于第一液体培养基中，pH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养15～18小时，分别得到培养后的的植物乳杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml，培养后的粪肠球菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml，培养后的嗜酸乳杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml；
凝结芽孢杆菌种子培养液的制备：将凝结芽孢杆菌在无菌条件下接种于第二液体培养基中pH调至7.2～7.5，40℃～45℃培养42～44小时，得到培养后的凝结芽孢杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml；
侧孢短芽孢杆菌种子培养液的制备：将侧孢短芽孢杆菌在无菌条件下接种于第三液体培养基中，pH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养46～48小时，得到的培养后的侧孢短芽孢杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml；
(2)复合微生物液体饲料添加剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下分别接种于第一培养基中，pH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在35℃～37℃的发酵罐中静置培养24～26小时；
凝结芽孢杆菌种子液在无菌条件下接种于第二液体培养基中，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，40℃～45℃培养40～44小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为4.0～4.5，侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下接种于第三液体培养基中，pH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，35℃～37℃培养36～40小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为6.0～7.0；
把制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌的培养液按其重量百分数为：植物乳杆菌的培养液25％～35％，粪肠球菌的培养液15％～20％，嗜酸乳杆菌的培养液25％～35％，凝结芽孢杆菌的培养液15％～25％，侧孢短芽孢杆菌的培养液10％～15％混合得到的一种复合微生物液体饲料添加剂。
具体地，所述的第一液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g。
所述的第二液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1.0g、磷酸二氢钾2.0g。
所述的第三液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g。
本发明所使用的菌种功能如下：
(1)植物乳杆菌，促进糖类、蛋白质、微量元素的吸收；抑制致病菌的生长，维持肠道内菌群平衡；有一定的免疫调节作用。
(2)粪肠球菌，能够改善肠道内微生态平衡，防治动物肠道菌丛区系紊乱；能够将饲料中的纤维变软，提高饲料的转化率；能够产生多种抗菌物质，这些抗菌物质对动物体内常见的致病菌具有良好的抑制作用。
(3)嗜酸乳杆菌，调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖，能分泌抗生物素类物质(嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素、乳酸菌素)，对肠道致病菌产生的拮抗作用。
(4)凝结芽孢杆菌，凝结芽孢杆菌在肠道中定植，发酵产生大量抗菌凝固素、乳酸、氨基酸、维生素和多种消化酶；提高饲料品质，促进饲料的消化吸收，降低料重比；有效改善动物由于应激、过敏反应引起的菌群失调性腹泄。
(5)侧孢短芽孢杆菌，对轻型或重型急性肠炎等，均有明显疗效；能分泌大量几丁质酶，分解病原真菌的细胞壁；能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，抑制致病菌的生长繁殖。
有益效果：与现有技术相比，本发明利用五种有益微生物菌株制备的复合微生物液体饲料添加剂，在经过动物饮食摄取后，制剂中的有益微生物菌体在动物肠道内定植，促进动物肠道内有益菌的生长，维持肠道内平衡。制剂中的植物乳杆菌抑制病原菌的生长，粪肠球菌能产生多种抗菌物质，嗜酸乳杆菌能分敏抗生素类物质，侧孢短芽孢杆菌能够分泌几丁质酶分解病原菌的细胞壁，抑制病原微生物。所以这种复合微生物液体饲料添加剂不仅能促进动物肠道内有益菌的生长，抑制病原微生物，能利用它们各自的优点，使肠道内的微生物物达到一个平衡状态，增强食欲，调节免疫功能并预防各类肠道疾病。
具体实施方式
下面结合以下具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明不仅仅局限于以下实施例。
实施例1
一种复合微生物液体饲料添加剂及其制备方法，包括以下步骤：
(1)种子培养液的制备
植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌种子培养液的制备：分别将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下接种于液体培养基中，所述的液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g，pH调至7.2～7.5，35℃～37℃单菌种培养15～18小时，分别得到含量≥3.0×109cfu/ml的培养后的植物乳杆菌的种子培养液，含量≥3.0×109cfu/ml培养后的粪肠球菌的种子培养液，含量≥3.0×109cfu/ml培养后的嗜酸乳杆菌的种子培养液。
凝结芽孢杆菌种子培养液的制备：将凝结芽孢杆菌在无菌条件下接种于液体培养基中，所述的液体培养基为：各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾2g，pH调至7.2～7.5，40℃～45℃培养46～48小时，含量≥3.0×109cfu/ml培养后的凝结芽孢杆菌的种子培养液；
侧孢短芽孢杆菌种子培养液的制备：将侧孢短芽孢杆菌在无菌条件下接种于液体培养基中，所述的液体培养基为：各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g，PH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养46～48小时，得到含量≥3.0×109cfu/ml培养后的侧孢短芽孢杆菌的种子培养液。
(2)复合微生物液体饲料添加剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下分别接种于同一培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g，接种量为培养基重量的2％，在35℃～37℃的发酵罐中静置培养24-26小时，凝结芽孢杆菌的种子液无菌条件下接种于液体培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾2g，pH调至7.2～7.5，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，40℃～45℃培养40～44小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为4.0～4.5，侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下接种于液体培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、氯化钠3.0g，pH调至7.2～7.5，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，35℃～37℃培养26～30小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为6.0～7.0，把培养好的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌这5种单菌种微生物液体按照重量百分数为30％、15％、30％、15％、10％进行混合后即可得到一种复合微生物液体饲料添加剂。
经测定，该多菌种微生物复合饮料制剂橙黄，其中植物乳酸菌的菌数为4.0×109cfu/ml，粪肠球菌的菌数为4.2×109cfu/ml，嗜酸乳杆菌的菌数为4.5×109cfu/ml，凝结芽孢杆菌的菌数为3.7×109cfu/m，侧孢短芽孢杆菌的菌数为3.3×109cfu/ml，pH值为3.8。
实施例2
(1)种子培养液的制备：
采用同实施例1相同的方法，制得种子培养液；
(2)复合微生物液体饲料添加剂的制备
别将步骤(1)制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下分别接种于同一培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g，接种量为培养基重量的2％，在35℃～37℃的发酵罐中静置培养24-26小时，凝结芽孢杆菌的种子液无菌条件下接种于液体培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾2g，PH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，40℃～45℃培养40～44小时，使菌体芽孢出孢率达40％，ph值为4.0～4.5，侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下接种于液体培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、氯化钠3.0g，PH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，35℃～37℃培养26～30小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为6.0～7.0，把培养好的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌这5种单菌种微生物液体按照重量百分数为30％、20％、20％、20％、10％进行混合后即可得到一种复合微生物液体饲料添加剂。
经测定，该多菌种微生物复合饮料制剂橙黄色，其中植物乳酸菌的菌数为4.0×109cfu/ml，粪肠球菌的菌数为4.2×109cfu/ml，嗜酸乳杆菌的菌数为3.0×109cfu/ml，凝结芽孢杆菌的菌数为3.6×109cfu/ml，侧孢短芽孢杆菌的菌数为3.2109cfu/ml，pH值为4.0。
实施例3
(1)种子培养液的制备：
采用同实施例1相同的方法，制得种子培养液；
(2)复合微生物液体饲料添加剂的制备
别将步骤(1)制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌的种子液在无菌条件下分别接种于同一培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g，接种量为培养基重量的2％，在35℃～37℃的发酵罐中静置培养24～26小时，凝结芽孢杆菌的种子液无菌条件下接种于液体培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1g、磷酸二氢钾2g，PH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，40℃～45℃培养40～44小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为4.0～4.5，侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下接种于液体培养基中，培养基各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、氯化钠3.0g，PH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，35℃～37℃培养26～30小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为6.0～7.0，把培养好的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌这5种单菌种微生物液体按照重量百分数为35％、15％、25％、15％、10％进行混合后即可得到一种复合微生微生物液体饲料添加剂。
经测定，该多菌种微生物复合饮料制剂橙黄，其中植物乳酸菌的菌数为5.1×109cfu/ml，粪肠球菌的菌数为4.0×109cfu/ml，嗜酸乳杆菌的菌数为3.5×109cfu/ml，凝结芽孢杆菌的菌数为3.7×109cfu/ml，侧孢短芽孢杆菌的菌数为3.2×109cfu/ml，pH值为3.6。
Claims (6)
1.一种复合微生物液体饲料添加剂，其特征在于：它是将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌分别进行单菌种培养，得到的种子培养液再分别进行发酵罐培养，最后把它们的培养液按重量百分比混合得到，所述制剂中植物乳杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，粪肠球菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，嗜酸乳杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，凝结芽孢杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，侧孢短芽孢杆菌的菌数≥3.0×109cfu/ml，pH值为3.5～4.0。
2.根据权利要求1所述的复合微生物液体饲料添加剂，其特征在于，所述各菌种的种子培养液的重量百分数为：植物乳杆菌的种子培养液25％～35％，粪肠球菌的种子培养液15％～20％，嗜酸乳杆菌的种子培养液25％～35％，凝结芽孢杆菌的种子培养液15％～25％，侧孢短芽孢杆菌的种子培养液10％～15％。
3.根据权利要求1所述的复合微生物液体饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)种子培养液的制备：
植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌种子培养液的制备：分别将植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下接种于第一液体培养基中，PH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养15～18小时，分别得到培养后的植物乳杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml，培养后的粪肠球菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml，培养后的嗜酸乳杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml；
凝结芽孢杆菌种子培养液的制备：将凝结芽孢杆菌在无菌条件下接种于第二液体培养基中，pH调至7.2～7.5，40℃～45℃培养42～44小时，得到培养后的凝结芽孢杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml；
侧孢短芽孢杆菌种子培养液的制备：将侧孢短芽孢杆菌在无菌条件下接种于第三液体培养基中，pH调至7.2～7.5，35℃～37℃培养46～48小时，得到培养后的侧孢短芽孢杆菌的种子培养液含量≥3.0×109cfu/ml；
(2)复合微生物液体饲料添加剂的制备
分别将步骤(1)制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌在无菌条件下分别接种于第一培养基中，pH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在35℃～37℃的发酵罐中静置培养24～26小时；
凝结芽孢杆菌种子液在无菌条件下接种于第二液体培养基中，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，40℃～45℃培养40～44小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为4.0～4.5，侧孢短芽孢杆菌的种子液在无菌条件下接种于第三液体培养基中，pH调至7.2～7.5，接种量为培养基重量的2％，在溶氧度为30％即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为30％的条件下，35℃～37℃培养36～40小时，使菌体芽孢出孢率达40％，pH值为6.0～7.0；
把制备得到的植物乳杆菌、粪肠球菌、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌的培养液按其重量百分数为：植物乳杆菌的培养液25％～35％，粪肠球菌的培养液15％～20％，嗜酸乳杆菌的培养液25％～35％，凝结芽孢杆菌的培养液15％～25％，侧孢短芽孢杆菌的培养液10％～15％混合得到的一种复合微生物液体饲料添加剂。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第一液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：葡萄糖20.0g、蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母粉5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、磷酸氢二钾2.0g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.25g。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第二液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、酵母粉10.0g、葡萄糖6.0g、硫酸镁1.0g、磷酸二氢钾2.0g。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的第三液体培养基的各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g。
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