CN104271144B - 成肌细胞分化促进剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及选自下列的肽：Ala‑Hyp‑Gly，Hyp‑Gly‑Pro，Leu‑Hyp，Glu‑Hyp，Gly‑Pro‑Hyp，Pro‑Ala，Hyp‑Gly和Pro‑Hyp，或其药学可接受的盐，其具有优于常规领域的成肌细胞分化促进效应。

Description

成肌细胞分化促进剂
【技术领域】
本发明涉及包含肽分子等的成肌细胞分化促进剂。
【背景技术】
最近，运动器官综合征和少肌症(肌肉量和肌肉强度减小,及身体功能降低)的预防等受到关注，及需要由肌肉量和肌肉强度的增加改善该症状。对于健康人也需求肌肉疲乏的预防和肌肉的增强。
在肌肉细胞分化的初始过程，未分化的细胞分化为作为肌肉纤维来源的细胞的成肌细胞。成肌细胞进一步分化，及表达特异于肌肉细胞的蛋白。肌肉细胞的分化中的特征性现象是细胞融合，即，单核细胞的成肌细胞融合而分化为作为多核细胞的肌管细胞的现象。而且，通过自成熟的肌管细胞形成具有收缩能力的肌肉纤维的过程而肌肉完成。在成肌细胞分化期间，产生特征性蛋白诸如原肌球蛋白和肌球蛋白重链，并将这些用作分化标志物(非-专利文献1)。
肽分子已知具有各种药理学效应。例如，专利文献1描述，二肽诸如Hyp-Gly具有破骨细胞分化抑制效应，碱性磷酸酶抑制效应等。非-专利文献2描述，肽诸如Hyp-Gly-Pro具有抗氧化效应。专利文献2描述，诸如Pro-Gly和Hyp-Gly(其还在它们的上游区和/或在它们的下游区具有达10氨基酸)的肽具有刺激骨等的生长，维持和修复的效应。
专利文献3描述，刺梨(Rosa roxburghii)，大豆肽，C12肽等具有成肌细胞活化效应。但是，不知道是否这些肽分子具有成肌细胞分化促进效应。
非-专利文献3显示，当橄榄球运动员结合锻炼摄取胶原肽和乳清肽的等量混合物3个月时的肌肉重量变化率。尽管在摄入此等量混合物之后肌肉重量增加(图2)，体重也增加(图1)，及肌肉，每体重的肌肉重量比率相比开始时更减少。与此相比，在本发明中，肌肉重量与体重的比显著地增加，如描述于随后-描述的试验例2。
【现有技术文献】
【专利文献】
专利文献1：WO2010/038323
专利文献2：日本特表2006-502971
专利文献3：日本特开2008-156294
【非专利文献】
非专利文献1：J.Biol.Chem.，Vol.286，No.4,41455(2011)
非专利文献2：日本氨基酸学会第5次学术大会(JSAAS2011)要点集，p.74
非专利文献3：Food Style 21，Vol.14，No.7,62-65(2010)
【发明内容】
【发明要解决的技术课题】
本发明旨在提供相比以往技术更优良的包含肽分子的成肌细胞分化促进剂。
【解决课题的技术方案】
经锐意的努力的结果，本发明人发现，肽分子Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp具有优良的成肌细胞分化促进效应，由此完成了本发明。特别是，本发明如下。
[1]成肌细胞分化促进剂，其包含选自下列的肽：Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
[2]根据[1]的成肌细胞分化促进剂，其包含选自下列的肽：Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
[3]根据[1]的成肌细胞分化促进剂，其包含选自下列的2种或更多肽：Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
[4]根据[1]～[3]之任一项的成肌细胞分化促进剂，其中促进剂为下列形式：用于口服施用的制剂，用于向肌肉直接施用的注射剂，经皮剂，栓剂，滴鼻剂或吸入剂。
[5]饮料或食品或饲料，其包含选自下列的肽：Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
【发明效果】
本发明可提供相比以往技术更优良的成肌细胞分化促进剂，其包含Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp的肽分子。
【实施方式】
以下详细地说明本发明。
【1.肽】
本发明中使用的肽是Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp，且这些肽可为药学可接受的盐的形式。优选的肽的例包括Hyp-Gly和Pro-Hyp。
"药学可接受的盐"的例包括无机酸盐诸如盐酸盐，硫酸盐和磷酸盐，有机酸盐诸如甲磺酸盐，苯磺酸盐，琥珀酸盐和草酸盐，无机碱式盐诸如钠盐，钾盐和钙盐，及有机碱式盐诸如三乙基铵盐。
本肽可例如，由"固相合成方法"和"液相合成方法"(例如,日本特开2003-183298)合成。作为固相合成方法，知道Fmoc方法和Boc方法，及本肽可以任何这些方法合成。以下会具体描述固相合成方法的一例。将表面用氨基修饰的具有约0.1mm的直径的聚苯乙烯聚合物凝胶珠用作固相，及将二异丙基碳二亚胺用作稠合剂。首先，将C-端氨基酸的氨基用Fmoc基团或Boc基团保护，并使与上述的聚苯乙烯聚合物凝胶的氨基形成肽键。将固相用溶剂好好洗净，及除去残留的剂和氨基酸，然后除去与固相结合的氨基酸的氨基的保护基。随后，由使用保护了氨基的氨基酸依次重复相同的反应，在固相上合成肽。最后，将固相在三氟乙酸中消化，以将肽自固相分开，由此可合成肽。
本肽也可通过用2种或更多种内切蛋白酶和外切蛋白酶的组合水解明胶来产生。而且，可将由以上水解获得的肽混合物本身，或由肽混合物的部分纯化获得的混合物用作成肌细胞分化促进剂。
在本发明中，本肽可化学修饰。化学修饰可对个体氨基酸，例如，在羟脯氨酸的羟基，在N-端氨基酸的氨基，及在C-端氨基酸的羧基实施。该化学修饰致使溶解在弱酸性至中性条件下，及也使与随后描述的其他活性成分的兼容性改善。
具体而言，在羟脯氨酸的羟基的化学修饰包括，例如，O-乙酰化。在N-端氨基酸的氨基的化学修饰包括，例如，聚肽基化，琥珀酰化，马来酰化，乙酰化，脱氨基化，苯甲酰化，烷基磺酰化，烯丙基磺酰化，二硝基苯基化，三硝基苯基化，氨甲酰化，苯基氨甲酰化和巯基化等。在C-端氨基酸的羧基的化学修饰包括，例如，酯化和酰胺化。当将本肽阳离子化时，可实施乙二胺化，精胺化等。
至于化学修饰的具体手段或处理条件，应用通常的肽化学修饰技术。例如，羟脯氨酸的羟基的O-乙酰化可通过使乙酸酐在水溶剂或非水溶剂中发挥作用来达到。例如，C-端氨基酸的羧基的酯化可例如，通过在悬浮于甲醇后，使干氯化氢气体通气来达到，及其酰胺化可通过向其作用碳二亚胺等来达到。而且，作为化学修饰的其他具体例，可应用描述于专利公开No.62-44522和专利公开No.5-79046的化学修饰技术。
【2.成肌细胞分化促进剂】
本肽等具有成肌细胞分化促进效应，如描述于随后-描述的测试例。因此，本肽等可用于治疗或预防需要肌肉增强的各种疾病。本发明的成肌细胞分化促进剂可用于，例如，运动器官综合征的治疗，少肌症的治疗，运动员、学生等的训练效果的改善，老年人、长期住院患者等的体力增强及家畜肉质改善。
本发明的成肌细胞分化促进剂可以各种形式的药学制备物经口或肠胃外施用。所述形式的例包括用于口服施用的片剂，颗粒剂，胶囊剂，粉剂，液剂，悬浮剂和乳剂，及用于肠胃外施用的注射剂，经皮剂，栓剂，滴鼻剂和吸入剂。优选的例包括直接施用到患病的位点诸如肌肉的片剂，颗粒剂，胶囊剂和液剂。本肽优选由口服施用摄取，因为其在消化道内很少被消化为氨基酸，但快速被吸收到肠道。本肽可与膳食或饮料混合而摄取。
本肽的剂量依赖于患者的状态或体重，化合物的种类，施用途径等而改变。在口服施用的情况中，是一个成年人每天，例如，约0.1～1000mg，优选约1～500mg，及更优选约30～200mg，及在直接施用到患病的部分诸如肌肉的情况中是，例如，约0.01～200mg，优选约0.1～100mg，及更优选约1～50mg。其他形式的制备物的剂量可参照这些剂量而适当确定。这些制备物可以每天一到几次的剂量施用，或可每一到几天施用一次。
本发明的成肌细胞分化促进剂可适当包含其他活性成分和制剂用成分，只要其不干扰本发明的效应。其他活性成分的例包括肌肉-增强剂诸如雄性激素，及肌肉-增强补充物诸如氨基酸混合物。配制的其他活性成分的量可依赖于个体效应适当变化。
制备成药学制备物中使用的药学可接受的载体的例可包括稀释剂，粘合剂(糖浆,阿拉伯胶,明胶,山梨糖醇,黄蓍胶,聚乙烯吡咯烷酮)，赋形剂(乳糖,蔗糖,玉米淀粉,磷酸钾,山梨糖醇,甘氨酸)，润滑剂(硬酯酸镁,滑石,聚乙二醇,氧化硅)，崩解剂(马铃薯淀粉)和保湿剂(月桂基硫酸钠)。本药学制备物可根据常规知道的技术通过混合本肽，其他活性成分，药学可接受的载体等来产生。
【3.饮料或食品或饲料】
由于本肽等是源于明胶的肽，其对于日常摄入或应用是非常安全的。因此，其作为使用本肽等的优良的成肌细胞分化促进效应的包含本肽等的饮料或食品或饲料也有用。例如，本发明可用于老年人、长期住院患者等的体力增强，运动员、学生等的训练效果的改善及家畜肉质改善。本发明的饮料或食品或饲料中使用的本肽等的含量可依赖于待利用的效应而适当改变。
【实施例】
在下文中，会通过实施例，比较例和测试例更详细描述本发明，但不以任何方式限于此。
【实施例1～22和比较例1～4】
使用上述的肽固相合成方法，合成以下实施例1～8和比较例1的肽。使用这些肽，制备以下实施例9～21的2种肽的等摩尔比混合物，及制备以下比较例2和3的2种氨基酸的等摩尔比混合物。而且，使用以下实施例22和比较例4的可商购的胶原肽。
(实施例1)Ala-Hyp-Gly(AOG)
(实施例2)Hyp-Gly-Pro(OGP)
(实施例3)Leu-Hyp(LO)
(实施例4)Glu-Hyp(EO)
(实施例5)Gly-Pro-Hyp(GPO)
(实施例6)Pro-Ala(PA)
(实施例7)Hyp-Gly(OG)
(实施例8)Pro-Hyp(PO)
(实施例9)OG和PO的混合物(OG+PO)
(实施例10)OG和AOG的混合物(OG+AOG)
(实施例11)OG和OGP的混合物(OG+OGP)
(实施例12)OG和LO的混合物(OG+LO)
(实施例13)OG和EO的混合物(OG+EO)
(实施例14)OG和GPO的混合物(OG+GPO)
(实施例15)OG和PA的混合物(OG+PA)
(实施例16)PA和AOG的混合物(PA+AOG)
(实施例17)PA和OGP的混合物(PA+OGP)
(实施例18)PA和LO的混合物(PA+LO)
(实施例19)PA和EO的混合物(PA+EO)
(实施例20)PA和GPO的混合物(PA+GPO)
(实施例21)PA和PO的混合物(PA+PO)
(实施例22)胶原肽"M型(新田明胶制)"
LC-MS/MS分析的结果，此胶原肽含有以下各自肽。
Hyp-Gly：7573ppm，Pro-Ala：2541ppm，Ala-Hyp-Gly：331ppm，Pro-Hyp：184ppm，Gly-Pro-Hyp：85ppm，Glu-Hyp：72ppm，Hyp-Gly-Pro：7ppm
(比较例1)Ala-Hyp(AO)
(比较例2)Hyp和Gly的混合物(O+G)
(比较例3)Pro和Hyp的混合物(P+O)
(比较例4)胶原肽"HDL-50SP(新田明胶制)"
LC-MS/MS分析的结果，此胶原肽含有以下各自肽。
Hyp-Gly：11ppm，Pro-Hyp：8ppm
【试验例1】
【成肌细胞培养中的成肌细胞分化促进测试】
使用含有10％FBS，100U/mL钠青霉素G，100μg/mL链霉素和1.0g/L NaHCO3的D-MEM培养基(D-MEM培养基(10％FBS,+P/S))培养源于小鼠的C2C12成肌细胞。于37℃含有95％空气和5％CO2的温育器中进行培养。在C2C12成肌细胞90％汇合的状态下，将所述培养基用包括2％马血清(HS)，100U/mL钠青霉素G，100μg/mL链霉素和1.0g/L NaHCO3的D-MEM培养基(D-MEM培养基(2％HS+P/S))取代，然后每2天重复D-MEM培养基(2％HS+P/S)取代，以使其分化为肌管细胞。每培养基取代向培养基以100μM的终浓度加入实施例1～21和比较例1～3的肽，及向细胞连续暴露其8天。
用以下过程进行蛋白印迹方法。将用于蛋白测量的细胞在回收时用PBS洗涤两次，及将细胞用细胞刮具刮下及转移到管中，及于4℃及以250×g离心3分钟，然后将PBS完全去除。对于各管，使细胞悬浮于100μL的缓冲剂(20mM HEPES-NaOH(pH7.5)，0.5％NP-40,1mMEDTA,100μM AEBSF,1μg/mL抑肽酶,10μg/mL亮抑酶肽,1mM DTT,1mM正钒酸钠,10mM氟化钠,10μM钼酸铵,10mM焦磷酸钠)中，然后在冰冷却下通过使用超声分散器对各样品进行3次5s的粉碎，之后对蛋白的量进行定量。蛋白的量的定量根据Bradford的方法，使用牛血清白蛋白作为标准蛋白进行。在SDS-PAGE结束之后，在用甲醇平衡及通过用转移缓冲剂(48mMTris,39mM甘氨酸)浸润而预润湿的PVDF膜上，使用印迹装置以每1cm2的膜1.5mA进行1小时电转移。在转移结束之后，将PVDF膜用含有6％脱脂乳的PBS(-)封闭1小时。将第一抗体以述下方式稀释，及于4℃过夜进行抗原-抗体反应。将缀合了过氧化物酶的针对各第一抗体的第二抗体以下列比在含有6％脱脂乳的PBS(-)中稀释：小鼠抗-肌球蛋白重链单克隆抗体(MF20)培养上清1/2000，小鼠抗-原肌球蛋白单克隆抗体(CH1)培养上清1/2000，兔抗-GAPDH多克隆抗体1/3000，缀合了过氧化物酶的抗-小鼠IgG 1/5000，及缀合了过氧化物酶的抗-兔IgG1/2000，使反应30分钟，及用PBS(-)进行10分钟3次的洗涤。然后将膜浸入Immobilon TM蛋白印迹化学发光HRP基体3分钟，及由LAS-4000(GE HEALTHCARE,Buckinghamshire,UK)检测。将条带由imageJ转变为数，及表示为相对于100的对照值的数值。成肌细胞分化促进测试的结果显示于表1。
[表1]
原肌球蛋白 肌球蛋白重链
对照 100 100
实施例1 AOG 191 218
实施例2 OGP 181 166
实施例3 LO 195 143
实施例4 EO 140 214
实施例5 GPO 165 217
实施例6 PA 169 131
实施例7 OG 419 334
实施例8 PO 307 278
实施例9 OG+PO 715 613
实施例10 OG+AOG 615 550
实施例11 OG+OGP 610 525
实施例12 OG+LO 623 509
实施例13 OG+EO 586 541
实施例14 OG+GPO 597 539
实施例15 OG+PA 613 407
实施例16 PA+AOG 473 339
实施例17 PA+OGP 454 321
实施例18 PA+LO 451 301
实施例19 PA+EO 442 343
实施例20 PA+GPO 439 328
实施例21 PA+PO 449 322
比较例1 AO 44 62
比较例2 O+G 7 87
比较例3 P+O 1 95
如描述于非-专利文献1，将原肌球蛋白和肌球蛋白重链用作成肌细胞分化标志物。以上测试结果展示，在实施例1～8的各肽的测试中，相比对照产生更大量的作为成肌细胞分化标志物的原肌球蛋白和肌球蛋白重链。因此，需知，这些肽具有成肌细胞分化促进效应。
其揭示，包含选自Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp的2种肽的肽混合物具有协同成肌细胞分化促进效应。尤其是，在实施例9中的Hyp-Gly和Pro-Hyp的混合物呈现显著的成肌细胞分化促进效应。在比较例2和3中的仅氨基酸的混合物未呈现类似效应，这揭示，作为肽分子的Pro-Hyp和Hyp-Gly的混合物开始发生成肌细胞分化促进效应。
【试验例2】
【临床测试】
通过使用实施例22和比较例4的胶原肽作为测试胶原肽进行临床测试。受试者是34名不是运动员的、年龄24～61的健康女性。它们随机分配到实施例22的胶原肽摄取组(17人)和比较例4的胶原肽摄取组(17人)，并进行双盲测试。它们连续每天摄取5g相应胶原肽10周。为了评估，通过使用TANITA体组成监测器右和左区域内部扫描50V BC-622-BK测量各受试者的肌肉重量(kg：含有含水量)。而且，去掉在相同的时间测量的含水量(kg)，及计算每体重的肌肉重量(％)比率及评价。结果以平均值±标准偏差显示于表2。表中的标记**是指在双因素ANOVA中，关于比较例4，以P<0.001的显著性。
[表2]
起点(％) 10周后(％)
实施例22 16.07±3.68 22.19±4.08**
比较例4 16.10±3.08 16.71±3.99
如显示于表2，用特定酶水解的丰富地包含Hyp-Gly，Pro-Ala，Pro-Hyp等的肽混合物(实施例22)相比用通常知道的普通酶水解的肽混合物(比较例4)，在肌肉重量百分率中呈现显著有效性。
【工业实用性】
本发明能提供相比以往技术更优良的包含源于天然的胶原的肽的成肌细胞分化促进剂。

Claims (13)

1.选自下列的肽或其药学可接受的盐用于制备成肌细胞分化促进剂的用途：Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp。
2.权利要求1的用途，其中促进剂包含选自下列的肽：Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
3.权利要求1的用途，其中促进剂包含选自下列的2种或更多肽：Ala-Hyp-Gly，Hyp-Gly-Pro，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Pro-Ala，Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
4.权利要求1～3之任一项的用途，其中促进剂为下列形式：用于口服施用的制剂，用于向肌肉直接施用的注射剂，经皮剂，栓剂，滴鼻剂或吸入剂。
5.权利要求1～3之任一项的用途，其中促进剂用于运动器官综合征的治疗，少肌症的治疗，运动员、学生等的训练效果的改善，老年人、长期住院患者等的体力增强及家畜肉质改善。
6.权利要求1～3之任一项的用途，其中一个成年的每天肽剂量在口服施用的情况中是约1～1000mg，及在直接施用到患病的部分的情况中是约0.01～200mg。
7.权利要求1～3之任一项的用途，其中促进剂包含其他活性成分和/或制剂用成分。
8.用于促进成肌细胞分化的组合物，其包含Hyp-Gly-Pro和Pro-Ala的肽或其药学可接受的盐，并且还包含选自下列的肽：Ala-Hyp-Gly，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
9.用于促进成肌细胞分化的组合物，其包含Hyp-Gly-Pro和Pro-Ala的肽或其药学可接受的盐，并且还包含选自下列的2种或更多肽：Ala-Hyp-Gly，Leu-Hyp，Glu-Hyp，Gly-Pro-Hyp，Hyp-Gly和Pro-Hyp，或其药学可接受的盐。
10.权利要求8或9的组合物，其中组合物为下列形式：用于口服施用的制剂，用于向肌肉直接施用的注射剂，经皮剂，栓剂，滴鼻剂或吸入剂。
11.权利要求8或9的组合物，其中组合物用于运动器官综合征的治疗，少肌症的治疗，运动员、学生等的训练效果的改善，老年人、长期住院患者等的体力增强及家畜肉质改善。
12.权利要求8或9的组合物，其中一个成年的每天肽剂量在口服施用的情况中是约1～1000mg，及在直接施用到患病的部分的情况中是约0.01～200mg。
13.权利要求8或9的组合物，其中组合物包含其他活性成分和/或制剂用成分。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102348361B1 (ko) * 2015-09-15 2022-01-11 (주)아모레퍼시픽 아미노산을 함유하는 근세포 분화 촉진용 조성물
JP6877924B2 (ja) * 2016-09-07 2021-05-26 新田ゼラチン株式会社 表皮細胞間機能強化剤
CN107759660A (zh) * 2017-12-05 2018-03-06 陕西慧康生物科技有限责任公司 一种三肽‑29的液‑固相合成方法
JPWO2021015040A1 (zh) * 2019-07-25 2021-01-28
WO2023022174A1 (ja) * 2021-08-18 2023-02-23 株式会社 ニッピ 筋肉疲労および／または即発性筋肉痛を抑制する食品組成物
CN113929769B (zh) * 2021-09-07 2023-11-28 中国科学院理化技术研究所 一种促进成肌细胞增殖的活性肽及其应用

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002255847A (ja) * 2001-02-26 2002-09-11 Miyagi Kagaku Kogyo Kk コラーゲン産生促進剤、それを含む機能性食品および医薬品
EP1504033A2 (en) 2002-05-03 2005-02-09 Millenium Biologix Inc. Connective tissue stimulating peptides
JP4286513B2 (ja) * 2002-09-26 2009-07-01 株式会社ファンケル 抗老化用組成物
WO2007017671A1 (en) * 2005-08-09 2007-02-15 Cambridge Enterprise Limited Collagen peptides, methods and uses
JP2008156294A (ja) 2006-12-25 2008-07-10 Lion Corp 筋芽細胞活性化剤
WO2009035169A1 (ja) * 2007-09-14 2009-03-19 Nippon Meat Packers, Inc. 血圧上昇抑制作用を有するぺプチド
JP4995155B2 (ja) * 2008-07-23 2012-08-08 株式会社ディーエイチシー 生体コラーゲン合成促進剤並びに生体コラーゲン合成促進用化粧品及び医薬部外品
JP4490498B2 (ja) * 2008-09-30 2010-06-23 新田ゼラチン株式会社 疾病抑制剤
SG10201401809RA (en) * 2009-04-28 2014-06-27 Meiji Co Ltd Collagen Peptide Composition Having Good Blood Transfer Properties, And Food And Drink Containing Same
MX2011013016A (es) * 2009-06-05 2012-04-20 Link Medicine Corp Derivados de aminopirrolidinona y usos de los mismos.
TWI507203B (zh) * 2011-01-27 2015-11-11 Nitta Gelatin Kk The use of a collagen peptide mixture for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for diabetes mellitus
JP2013227228A (ja) * 2012-04-24 2013-11-07 Jnc Corp 筋肉増加剤

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