TWI507203B - The use of a collagen peptide mixture for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for diabetes mellitus - Google Patents

The use of a collagen peptide mixture for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for diabetes mellitus Download PDF

Info

Publication number
TWI507203B
TWI507203B TW101102754A TW101102754A TWI507203B TW I507203 B TWI507203 B TW I507203B TW 101102754 A TW101102754 A TW 101102754A TW 101102754 A TW101102754 A TW 101102754A TW I507203 B TWI507203 B TW I507203B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
hyp
gly
pro
ala
peptide
Prior art date
Application number
TW101102754A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201309320A (zh
Inventor
Fumihito Sugihara
Naoki Inoue
Seiko Koizumi
Tadashi Yoshimoto
Hiroshi Oyama
Original Assignee
Nitta Gelatin Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nitta Gelatin Kk filed Critical Nitta Gelatin Kk
Publication of TW201309320A publication Critical patent/TW201309320A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI507203B publication Critical patent/TWI507203B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06043—Leu-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C07K5/0823—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Pro-amino acid; Derivatives thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

膠原蛋白肽混合物用以製造糖尿病之治療或預防劑的用途
本發明係關於一種糖尿病之治療或預防劑。更詳細而言，本發明係關於一種含有藉由分2個階段對膠原蛋白進行酵素處理而獲得之肽的糖尿病之治療或預防劑。
糖尿病係一種血糖值處於異常高之狀態之疾病，可分成由於胰腺之β細胞因某些原因被破壞導致胰島素枯竭而產生之1型糖尿病、及雖於血液中存在胰島素但無法調整血糖值之2型糖尿病。胰島素於骨骼肌中促進葡萄糖之攝入，於肝臟中抑制葡萄糖新生(gluconeogenesis)，且促進肝糖之合成，藉此調整血糖值。胰高血糖素樣肽-1(GLP-1，glucagon-like-peptide-1)係自存在於下小腸及大腸中之L細胞向血管內分泌，與胰腺β細胞上之GLP-1受體結合，而促進胰島素分泌。二肽基肽酶IV(DPPIV，dipeptidyl-peptidase IV)係藉由識別成為標靶之蛋白質的N末端第2位之丙胺酸或脯胺酸並切斷二胺基酸而使該蛋白質失活。所分泌之GLP-1因DPPIV而失活，僅有10~15%自肝臟經由門靜脈循環於體內(非專利文獻1)。因此，藉由抑制DPPIV或藉由促進GLP-1分泌，可促進胰島素分泌，降低血糖值，故而最近DPPIV抑制劑及GLP-1分泌促進劑作為糖尿病之治療或預防劑備受關注。
作為DPPIV抑制劑，已知有西他列汀等各種合成藥品。然而，由於該等係首要考慮糖尿病之治療而追求高藥效 者，故而存在低血糖症等副作用。因此，業界正在研究分解飲食用素材而獲得之肽。該等肽之DPPIV抑制活性雖不及合成藥品般優異，但就擔保對人體之安全性，即便日常服用亦不產生副作用之方面而言極為有用。
具有DPPIV抑制活性之含有飲食用素材之分解物的混合物例如記載於如下專利文獻中。
於專利文獻1中，記載有源自含有膠原蛋白之飲食用素材之製備物。然而，並未記載實施例所記載之膠原蛋白肽混合物係以何種酵素或水解條件分解膠原蛋白而製備，又，對該膠原蛋白肽混合物中含有何種肽等亦未作任何記載。
於專利文獻2中，記載有以膠原蛋白酶等處理膠原蛋白或明膠，進而以蛋白酶進行處理而獲得之分解物之混合物具有DPPIV抑制活性。然而，該蛋白酶不具有本發明之第2階段之酵素處理中使用的酵素所具有之胺基肽酶N活性或脯胺醯三肽基胺基肽酶活性。又，對於上述蛋白酶分解物之混合物中含有何種肽等未作記載。
另一方面，具有DPPIV抑制活性之肽記載於如下文獻中。
於專利文獻3中，記載有乳酪之水溶性餾分中所含之24個肽具有DPPIV抑制活性。然而，該肽除1個以外均為含有5個以上胺基酸之長肽。於專利文獻4中，記載有以膠原蛋白酶等處理膠原蛋白或明膠而獲得之肽即Gly-X-Y-(Gly-Z-W)n(n為0~4之整數，X為Pro或Leu，Y、Z及W分別獨立 地為相同或不同之任意胺基酸(Gly除外))等具有DPPIV抑制活性。然而，該肽除1個以外均為含有5個以上胺基酸之長肽。於非專利文獻2中，記載有含有脯胺酸之二肽、三肽具有DPPIV抑制活性，報告有尤其是於N末端側含有疏水性胺基酸之二肽具有較高活性。
上述肽具有缺乏腸道吸收性之問題。
具有GLP-1分泌促進活性之含有飲食用素材之分解物的混合物例如記載於如下文獻中。
於專利文獻5中，記載有大豆蛋白質之木瓜蛋白酶分解物之混合物。於非專利文獻3中，記載有卵蛋白質之水解物之混合物具有GLP-1分泌促進活性，但其他蛋白質之水解物之混合物未顯示GLP-1分泌促進活性。於非專利文獻4中，記載有乳清及酪蛋白之水解物之混合物。於非專利文獻5及6中，記載有源自玉米之玉米蛋白的水解物之混合物具有GLP-1分泌促進活性與DPPIV抑制活性，預測於該混合物中包含具有GLP-1分泌促進活性之肽與具有DPPIV抑制活性之肽。
然而，對於該等混合物中含有何種肽未作任何記載。
又，於該等文獻中，並未記載將膠原蛋白用作飲食用素材之情況。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本專利特開2010-13423號公報
[專利文獻2]日本專利特開2009-284798號公報
[專利文獻3]日本專利特開2007-39424號公報
[專利文獻4]WO2008/066070號公報
[專利文獻5]日本專利特開2010-138143號公報
[非專利文獻]
[非專利文獻1]實驗醫學，Vol.29，No.5，(增刊)，p.820-835，2011
[非專利文獻2]太田徹他，「含有DPPIV抑制脯胺酸之肽之檢索及合成之研究」，第57次日本食品科學工學會要旨，2010年9月2日，2Ea6
[非專利文獻3]Mol.Nutr.Food Res.,2011,55,476-484
[非專利文獻4]Eur.J.Nutr.,(2004)43：127-139
[非專利文獻5]化學與生物，Vol.49，No.1，p.11-13，2011
[非專利文獻6]Endocrinology,July 2010,151(7)：3095-3104
本發明所欲解決之課題在於提供一種副作用較少，安全性較高，且腸道內之吸收及向細胞內之轉移較容易的含有肽之糖尿病之治療或預防劑。又，本發明所欲解決之課題在於提供一種大量地含有該肽之膠原蛋白肽混合物、及該膠原蛋白肽混合物之製造方法。
本發明者為解決上述課題而進行潛心研究，結果發現： 藉由分2個階段對膠原蛋白或明膠進行酵素處理而獲得之膠原蛋白肽混合物及其中所含之肽意外地具有DPPIV抑制活性及/或GLP-1分泌促進活性。亦發現，該肽與先前已知之肽不同，大部分含有Hyp，並且為二肽或三肽之低分子，故而腸道內之吸收或向細胞內之轉移較為容易。進而亦發現，藉由使用利用特殊之酵素組合的2階段酵素處理之上述製造方法，可製造大量地含有該肽之膠原蛋白肽混合物。基於以上見解，本發明者等人完成本發明。
即，本發明係如下所述。
[1]一種膠原蛋白肽混合物，其含有選自Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、其化學改質體及其藥學上所容許之鹽中之3種以上。
[2]如上述[1]之膠原蛋白肽混合物，其含有Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp及Leu-Hyp-Gly。
[3]一種糖尿病之治療或預防劑，其含有如上述[1]或[2]之膠原蛋白肽混合物。
[4]一種DPPIV抑制劑，其含有如上述[1]或[2]之膠原蛋白肽混合物。
[5]一種GLP-1分泌促進劑，其含有如上述[1]或[2]之膠原蛋白肽混合物。
[6]一種糖尿病之治療或預防劑，其含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、 Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽。
[7]一種DPPIV抑制劑，其含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp及Ser-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽。
[8]一種GLP-1分泌促進劑，其含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽。
[9]一種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽，其選自由Glu-Hyp及Glu-Hyp-Gly所組成之群。
[10]一種製造方法，其係藉由分2個階段對膠原蛋白或明膠進行酵素處理而製造含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽之膠原蛋白肽混合物之方法，且1次酵素處理中所使用之酵素係選自由膠原蛋白酶、硫醇蛋白酶、絲胺酸蛋白酶、酸性蛋白酶、鹼性蛋白酶及金屬蛋白酶所組成之群， 2次酵素處理中所使用之酵素係具有胺基肽酶N活性之酵素或兼具有胺基肽酶N活性及脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素，或者為具有胺基肽酶N活性之酵素及具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素的組合。
[11]如上述[1]或[2]之膠原蛋白肽混合物，其係用以治療或預防糖尿病。
[12]一種選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽，其係用以治療或預防糖尿病。
[11]一種選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp及Ser-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽，其係用以抑制DPPIV。
[12]一種選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽，其係用以促進GLP-1之分泌。
[13]一種治療或預防糖尿病之方法，其包括將如[1]或[2]之膠原蛋白肽混合物投予至需要其之對象(較佳為患者)。
[14]一種治療或預防糖尿病之方法，其包括將選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽投予至需要其之對象(較佳為患者)。
[15]一種DPPIV之抑制方法，其包括將選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp及Ser-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽投予至需要其之對象(較佳為患者)。
[16]一種促進GLP-1之分泌之方法，其包括將選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽投予至需要其之對象(較佳為患者)。
有時將本發明中所使用之上述肽簡稱為「特定之肽」。又，有時將表示構成上述肽分子之各胺基酸單元之三縮略字以一縮略字表示。具體而言，有時縮寫如下：Leu=L、Hyp=O、Gly=G、Pro=P、Ala=A、Glu=E、Ile=I、Ser=S、F=Phe。
本發明之糖尿病之治療或預防劑、DPPIV抑制劑及GLP-1分泌促進劑無副作用，安全性較高，進而，對消化酵素之抗藥性、腸道中之體內吸收及向細胞內之轉移較容易，故而亦適於經口投予。又，根據本發明之膠原蛋白肽混合物之製造方法，可有效且確實地獲得大量含有上述特定之肽之膠原蛋白肽混合物。
以下，對本發明之糖尿病之治療或預防劑、DPPIV抑制劑、GLP-1分泌促進劑及膠原蛋白肽混合物之製造方法等進行詳細說明，但本發明之範圍並不限定於該等說明，對於如下例示以外之情形，亦可於不損及本發明之主旨之範圍內適當地進行變更而實施。
1.膠原蛋白肽混合物及特定之肽
本發明之膠原蛋白肽混合物係含有選自EOG、EO、LOG、PA、SO、AOG、其化學改質體及其藥學上所容許之鹽中之3種以上的膠原蛋白肽混合物。本膠原蛋白肽混合物中所含之3種以上之肽中，較佳為含有EOG、EO、LOG之任一種，進而較佳為含有EOG、LOG之任一種，尤佳為含有LOG。選自EOG、EO、LOG、PA、SO、AOG、其化學改質體及其藥學上所容許之鹽中之3種以上的重量合計較佳為相對於膠原蛋白肽混合物為2重量%以上，更佳為3重量%以上，進而較佳為4重量%以上。
本發明中所使用之特定之肽係選自由EOG、EO、LOG、PA、SO、AOG、POG、LO、IO、SOG、GPO、(POG)5 、 PO、OG、PG、PP及AO所組成之群。EOG、EO、LOG、PA、SO、AOG、POG、LO、IO及SOG具有DPPIV抑制活性，且EOG、EO、LOG、PA、SO、AOG、GPO、(POG)5 、PO、OG、PG、PP及AO具有GLP-1分泌促進活性。由於EOG、EO、LOG、PA、SO及AOG同時具有DPPIV抑制活性及GLP-1分泌促進活性，故而為較佳之肽。作為更佳之肽，可列舉EOG、EO、LOG，作為進而較佳之肽，可列舉EOG、LOG，作為尤佳之肽，可列舉LOG。
特定之肽例如可藉由下述由胺基酸合成之方法、及分2個階段對膠原蛋白或明膠進行酵素處理之方法而製備。其中，亦可藉由該等方法以外之方法製備，例如亦可代替下述2階段酵素處理法而使用省略1次酵素處理之方法或同時進行1次酵素處理及2次酵素處理之方法。
<由胺基酸合成之方法>
可由胺基酸合成特定之肽。作為由胺基酸合成之方法，通常存在(1)固相合成法與(2)液相合成法(例如參照日本專利特開2003-183298號公報)，於為前者之情形時，進而已知有(A)Fmoc(fluorenyl-methoxy-carbonyl，茀基甲氧基羰基)法與(B)Boc(tert-butoxy-carbonyl，第三丁氧基羰基)法，特定之肽可藉由任一種方法合成。
以下以固相法為一例進行詳細說明。可藉由將脯胺酸固定於載體聚苯乙烯上，使用Fmoc基或者Boc基作為胺基之保護基的公知之固相合成法而合成。即，於藉由使用表面 經胺基改質之直徑0.1 mm左右的聚苯乙烯高分子凝膠之珠粒作為固相且使用二異丙基碳二醯亞胺(DIC，Diisopropyl Carbodiimide)作為縮合劑之脫水反應，使以Fmoc(fluorenyl-methoxy-carbonyl)基保護胺基之脯胺酸與羥基脯胺酸鍵結(肽鍵)後，利用溶劑充分洗淨固相而去除殘留之羥基脯胺酸等。其後，去除與固相鍵結之脯胺酸之保護基(脫保護)，藉此可合成PO。繼而，利用相同之方法使該PO之羥基脯胺酸之胺基與甘胺酸鍵結(肽鍵)，藉此可獲得POG。如此，依序鍵結胺基酸，藉此可合成目標之肽。
<化學改質>
特定之肽可對構成胺基酸之胺基或羧基進行化學改質，對於羥基脯胺酸而言，可對羥基進行化學改質。藉由該化學改質，可自弱酸性轉化成中性而提高溶解性，從而謀求與其他DPPIV抑制劑之相溶性提高等。具體而言，對於羥基脯胺酸之羥基，可列舉O-乙醯化等化學改質，對於甘胺酸之α-羧基，可列舉酯化、醯胺化等化學改質，對於脯胺酸之α-胺基，可列舉多肽化、琥珀醯化、順丁烯二醯化、乙醯化、脫胺基化、苯甲醯化、烷基磺醯化、烯丙基磺醯化、二硝基苯基化、三硝基苯基化、胺基甲醯化、苯基胺基甲醯化、硫醇化等化學改質。只要根據其他DPPIV抑制劑之種類等選擇適當之化學改質即可。又，亦可藉由進行乙二胺化、精胺化等使特定之肽呈鹼性。
特定之肽之化學改質之具體方法或處理條件適用通常之肽之化學改質技術。關於羥基脯胺酸之羥基之化學改質， 例如O-乙醯化可藉由在水溶劑中或非水溶劑中使乙酸酐發揮作用等而進行。關於甘胺酸之α-羧基之化學改質，例如酯化可藉由懸浮於甲醇中後通入乾燥氯化氫氣體而進行，醯胺化可藉由使碳二醯亞胺等發揮作用而進行。作為化學改質之其他具體例，可應用日本專利特公昭62-44522號公報或日本專利特公平5-79046號公報等中所記載之化學改質技術。
<藥學上所容許之鹽>
作為藥學上所容許之鹽，例如可列舉：鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、氫溴酸鹽等無機酸鹽，乙酸鹽、甲基磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、琥珀酸鹽、草酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽等有機酸鹽，鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽等無機鹼鹽，三乙基銨鹽等有機鹼鹽等。可根據常用方法，將特定之肽製成藥學上所容許之鹽。
2.膠原蛋白肽混合物之製造方法
藉由分2個階段對膠原蛋白或明膠進行酵素處理之方法，可製造膠原蛋白肽混合物。又，藉由進一步純化所製備之膠原蛋白肽混合物，亦可製造特定之肽。
藉由該酵素處理之方法，具體而言，藉由如下2階段酵素處理可獲得含有上述特定之肽之膠原蛋白肽混合物，即於以通常之方法對膠原蛋白或明膠進行1次酵素處理後，使用具有胺基肽酶N活性之酵素或兼具有胺基肽酶N活性及脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素、或者具有胺基肽酶N活性之酵素及具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素的 組合進行2次酵素處理。
作為原料之膠原蛋白，並無特別限定，例如可列舉源自牛、豬等哺乳動物之膠原蛋白，源自鯊魚、鯛魚等魚類之膠原蛋白等。該等可自上述哺乳動物之骨、皮部分，及上述魚類之骨、皮、鱗部分等獲得。具體而言，只要對上述骨、皮、鱗等實施脫脂、去灰分處理、萃取處理等先前公知之處理即可。又，原料之明膠可藉由以熱水萃取等先前公知之方法處理上述膠原蛋白而獲得。
<1次酵素處理>
作為1次酵素處理中所使用之酵素，只要為可切斷膠原蛋白或明膠之肽鍵之酵素，則並無特別限定，通常可使用稱作蛋白質分解酵素或蛋白酶之酵素。具體而言，例如可列舉：膠原蛋白酶、硫醇蛋白酶、絲胺酸蛋白酶、酸性蛋白酶、鹼性蛋白酶、金屬蛋白酶等，該等可單獨使用或者組合複數種使用。作為上述硫醇蛋白酶，已知有源自植物之木瓜凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、鳳梨蛋白酶、無花果蛋白酶，源自動物之組織蛋白酶、鈣依賴性蛋白酶等。又，作為上述絲胺酸蛋白酶，已知有胰蛋白酶、組織蛋白酶D等，作為上述酸性蛋白酶，已知有胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等。再者，作為所使用之酵素，若考慮將所製備之膠原蛋白肽混合物及特定之肽用於醫藥或特定保健用食品等，則較佳為使用源自病原性微生物之酵素以外之酵素。
作為1次酵素處理之處理條件，例如可相對於膠原蛋白或明膠100重量份，使用酵素0.1~5重量份，並於30~65℃ 下處理1~72小時。藉由上述膠原蛋白或明膠之1次酵素處理而獲得之膠原蛋白肽混合物的平均分子量較佳為500~2000，更佳為500~1800。可認為只要平均分子量處於上述範圍內，則充分地生成分子量相對較大之肽。亦可於1次酵素處理後，視需要使酵素失活，作為該情形時之失活溫度，例如為70~100℃。
<2次酵素處理>
作為2次酵素處理中所使用之酵素，可列舉具有胺基肽酶N活性之酵素或兼具有胺基肽酶N活性及脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素、或者具有胺基肽酶N活性之酵素及具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素的組合。此處，「胺基肽酶N活性」基本上為具有使胺基酸自肽鏈之N末端游離之作用之肽酶，且於自N末端起第2位上存在脯胺酸或羥基脯胺酸以外之胺基酸之情形時發揮作用。又，「脯胺醯三肽基胺基肽酶活性」係指從自N末端起第3位為脯胺酸或羥基脯胺酸之基質游離N末端3殘基之肽酶。再者，作為所使用之酵素，若考慮將所製備之膠原蛋白肽混合物及特定之肽用於醫藥或特定保健用食品等中，則較佳為使用源自病原性微生物之酵素以外之酵素。具體而言，作為具有胺基肽酶N活性之酵素，例如可列舉胺基肽酶N(EC3.4.11.2；Yoshimoto,T.,et al.,Agric.Biol.Chem.,52：217-225(1988)等)。又，作為具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素，例如可列舉脯胺醯三肽基胺基肽酶(EC3.4.14.-；Banbula,A.,et al.,J.Biol.Chem.,274：9246- 9252,(1999)等)。
於2次酵素處理中，進行使用上述酵素，例如源自麴菌(Aspergillus)屬之具有胺基肽酶N活性之酵素及具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素的酵素反應。藉由該反應，生成1次酵素處理物中不含之特定之肽。
作為2次酵素處理之處理條件，例如可相對於1次酵素處理物100重量份，使用酵素0.01~5重量份，並於30~65℃下處理1~72小時。藉由上述2次酵素處理而獲得之膠原蛋白肽混合物之平均分子量較佳為500~1800，更佳為500~1500。該2次酵素處理之主要目的在於生成特定結構之肽分子，較佳為以藉由1次酵素處理而獲得之膠原蛋白肽混合物中，相對較大之肽不會過度水解之方式，且以成為上述平均分子量之範圍之方式進行2次酵素處理。於2次酵素處理後必須使酵素失活，作為失活溫度，例如為70~100℃。
進而，作為2次酵素處理中所使用之酵素，可根據副產物之分解等目的、成為原料之膠原蛋白之種類、1次酵素處理中所使用之酵素之種類，使用除上述胺基肽酶N活性或脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之外兼具有不同活性之酵素，或併用具有不同活性之酵素。
作為此種其他活性，例如可藉由脯胺酸酶活性或羥基脯胺酸酶活性等二肽酶活性發揮作用而分解副生成之二肽。又，由於胺基肽酶N活性基本上係使N末端側之胺基酸逐個游離者，故而根據成為原料之膠原蛋白之種類或1次酵 素處理中所使用之酵素之種類，存在1次酵素處理中之分解不充分，而使2次酵素處理所需之時間變長之情形。因此，例如藉由使脯胺酸之羧基側水解之內肽酶即脯胺醯寡肽酶活性等其他活性發揮作用，使不需要之部位形成為寡肽等塊狀物而切斷去除，由此可更有效地進行2次酵素處理。
<2階段之酵素處理>
對該2階段酵素處理進行詳細說明，首先藉由1次酵素處理，生成介由經口免疫耐受機制之有助於骨、軟骨組織之炎症緩解的分子量相對較大之肽，例如[X1 -Gly-X2 -Hyp-Gly-Pro](X1 及X2 ≠Hyp)。
於其後之2次酵素處理中，藉由使胺基肽酶N活性作用於上述[X1 -Gly-X2 -Hyp-Gly-Pro]，而使C末端之脯胺酸游離，獲得[X1 -Gly-X2 -Hyp-Gly]，或者進而使N末端之X1 游離而獲得[Gly-X2 -Hyp-Gly]。
進而，使胺基肽酶N活性作用於上述[X1 -Gly-X2 -Hyp-Gly]，而切斷甘胺酸與X2 間之肽鍵，藉此可獲得特定之肽[X2 -Hyp-Gly](X2 =Leu、Pro、Glu、Ser或Ala)。
又，使脯胺醯三肽基胺基肽酶活性作用於上述[Gly-X2 -Hyp-Gly]，而切斷羥基脯胺酸與甘胺酸間之肽鍵，形成[Gly-X2 -Hyp]，繼而，藉由使胺基肽酶N活性作用而切斷甘胺酸與X2 間之肽鍵，由此可獲得特定之肽[X2 -Hyp](X2 =Leu、Glu、Ile或Ser)。
如此，若使胺基肽酶N活性與脯胺醯三肽基胺基肽酶活 性之兩者發揮作用，則可有效地獲得本發明之特定之肽中腸道吸收性優異之二肽，故而較佳。
專利文獻2中所使用之酵素例如蛋白酶N「AMANO」G不含具有胺基肽酶N活性之酵素或具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素。因此，於與專利文獻2之實施例1(HACP-01-N)相同之條件下製備肽混合物(CPT-Cont)，並以LC-MS(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，液相色譜質譜聯用法)/MS(Mass Spectrometry，質譜法)分析法進行分析，結果於該混合物中除GPO以外不含特定之肽(參照比較例2)。
<膠原蛋白肽混合物之純化>
藉由上述2階段酵素處理及視需要追加之醱酵，可製備膠原蛋白肽混合物。其中，於該膠原蛋白肽混合物中含有特定之肽以外之胺基酸及肽，故而視需要亦可藉由先前公知之方法進行純化。作為純化方法，例如可列舉超過濾、凝膠過濾層析法、離子交換層析法、逆相層析法、親和層析法等各種液相層析法等。
對該膠原蛋白肽混合物進行區分、純化，藉此可獲得特定之肽。作為區分、純化之方法，並無特別限制，例如可列舉：超過濾、凝膠過濾層析法、離子交換層析法、逆相層析法、親和層析法等各種液相層析法，及組合該等之方法等之類的先前公知之方法。具體而言，例如可以下述方式進行區分、純化。即，首先，分2次將上述膠原蛋白肽混合物之約2 g/10 mL添加至離子交換管柱(例如DEAE Toyopearl 650 M管柱(Tosoh公司製造)或SP Toyopearl 650 M管柱(Tosoh公司製造)等)中，回收以蒸餾水溶出之空隙容積餾分。繼而，將回收之餾分添加至具有與上述離子交換管柱相反之離子交換基的管柱(例如SP Toyopearl 650 M管柱(Tosoh公司製造)或DEAE Toyopearl 650 M管柱(Tosoh公司製造)等)中，回收以蒸餾水溶出之空隙容積餾分。繼而，將該餾分添加至凝膠過濾管柱(例如Sephadex LH-20管柱(Farumacia公司製造)等)中，並以30%甲醇水溶液進行溶出而回收相當於作為化學合成品之特定之肽所溶出的位置之餾分。將該餾分供給至裝載有逆相管柱(例如μBondasphere 5μC18 300 Å管柱(Waters公司製造)等)之高效液相層析儀(HPLC，high performance liquid chromatography)，根據含有0.1%三氟乙酸之32%以下之乙腈水溶液之直線濃度梯度進行區分。然後，將所回收之特定之肽餾分減壓乾固，藉此可以高濃度獲得特定之肽。
3.糖尿病之治療或預防劑
本發明之膠原蛋白肽混合物及特定之肽等具有DPPIV抑制活性及/或GLP-1分泌促進活性，可用作糖尿病之治療或預防劑。此處，所謂糖尿病之治療或預防劑，係指於糖尿病之治療及/或預防中所使用之藥劑。又，亦可含有於特定保健用食品、健康食品、各種食材中而利用。
含有膠原蛋白肽混合物及特定之肽等的糖尿病之治療或預防劑可經口或非經口地以各種形態之製劑投予。作為其形態，例如可列舉：錠劑、顆粒劑、膠囊劑、散劑、粉 劑、液劑、注射劑、經皮劑、栓劑、滴鼻劑及吸入劑等，較佳為列舉經口地投予之錠劑、顆粒劑、膠囊劑等，及非經口地投予之注射劑、經皮劑等。膠原蛋白肽混合物及特定之肽等的投予量根據患者之狀態或體重、化合物之種類、投予路徑等而不同。於對成人每日經口投予之情形時，例如可列舉約0.1~1000 mg，較佳為約1~500 mg，更佳為約10~200 mg。於為注射劑之情形時，例如可列舉約0.01~200 mg，較佳為約0.1~100 mg，更佳為約1~50 mg。其他形態之製劑可參考該等投予量而適當地決定。該等製劑可1日1次~分數次投予，或1~數日投予1次。再者，於經口投予之情形時，藉由在餐前投予，可將血糖值控制在正常範圍內。由於特定之肽，尤其是含有Hyp之肽對消化酵素之耐性較高，故而幾乎不會引起向胺基酸之分解，又，自腸道中迅速地經血液吸收，或者自腸道中經腸道表面細胞或L細胞直接吸收，故而較佳為利用經口投予之攝取。
作為用於經口投予製劑之醫藥載體，例如可列舉：賦形劑(結晶性纖維素、乳糖、砂糖、玉米澱粉、磷酸鉀、山梨糖醇、甘胺酸等)、結合劑(糖漿、阿拉伯樹膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮等)、潤滑劑(硬酯酸鎂、滑石、聚乙二醇、二氧化矽等)、崩解劑(馬鈴薯澱粉等)及濕潤劑(月桂基硫酸鈉等)等慣用者。經口投予製劑可藉由先前公知之方法，將混合有膠原蛋白肽混合物或特定之肽等與上述醫藥載體者利用打錠成型製成錠劑，或者此外亦可製備成顆粒劑、散劑、膠囊劑等固體劑，溶液劑、 懸濁劑、乳劑等液劑，及凍結乾燥製劑等任意之形態。於該情形時，較佳為相當於製劑總量，以0.001重量份以上之比例調配上述特定之肽。更佳為以0.01重量份以上之比例進行調配。若未達0.001重量份，則有無法充分地表現出本發明之效果之虞。
於非經口投予之情形時，例如可使用注射用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄糖水溶液等以注射劑或點滴劑之形式，或者栓劑等之形式製劑化。於注入靜脈中之情形時，使用以生理食鹽水等稀釋膠原蛋白肽混合物或特定之肽等而成者，作為其濃度，較佳為如上所述般將特定結構之肽分子之含量設為0.1 mol/L以上。又，上述特定之肽之含量較佳為10 μmol/L以上。
<其他有效成分>
本發明之含有膠原蛋白肽混合物及特定之肽等的糖尿病之治療或預防劑可於不阻礙本發明之效果之範圍內適當地與其他有效成分組合。作為其他有效成分，例如可列舉其他糖尿病治療劑(胰島素製劑、磺醯脲劑、雙胍類系藥劑、α-葡萄糖苷酶抑制劑、抗胰島素性改善劑、胰島素分泌促進劑、GLP-1類似物等)等。於該情形時，可以調配劑之形式使用，或者亦可併用。
4. DPPIV抑制劑/GLP-1分泌促進劑
如上所述，本發明之DPPIV抑制劑可用作糖尿病之治療或預防劑。除此之外，本DPPIV抑制劑進而可用於例如發作、缺血、帕金森氏病、偏頭痛等中樞神經系疾病，關節 炎、慢性類風濕性關節炎等免疫及自體免疫疾病，及腫瘤等之治療及預防中(日本專利特表2004-534836號公報、及「二肽基肽酶IV抑制劑之關節炎發病抑制效果」，田中澄子等人著，炎症，Vol.18,No.3,1998年5月)。
如上所述，本發明之GLP-1分泌促進劑可用作糖尿病之治療或預防劑。除此之外，本GLP-1分泌促進劑進而具有肺之表面活性劑分泌促進作用、心臟之心肌保護作用及心功能改善作用、腦之神經細胞保護作用、記憶能力之增加作用及食慾抑制作用、消化道之胃排泄降低作用、腎臟之鈉調節作用等。因此，可用於治療及預防需要該等作用之疾病，例如肥胖、神經變性症狀(阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨丁頓舞蹈症、肌萎縮性側索硬化症、腦中風、多發性硬化症、腦之損傷、脊髄損傷及末梢神經障礙等)等(非專利文獻1及日本專利特開2010-90129號公報)。
[實施例]
以下，對於本發明之糖尿病之治療或預防劑中所含的膠原蛋白肽混合物及特定之肽等，藉由其性能評價試驗與其調配例更具體地說明本發明，但本發明並不限定於該等。以下，為方便起見，有時將「重量份」僅記載為「份」，將「重量%」僅記載為「%」。
[特定之肽之準備]
下述性能評價試驗及調配例中所使用的特定之肽係藉由上述固相法而合成。
即，首先，於藉由將表面經胺基改質之直徑0.1 mm左右 的聚苯乙烯高分子凝膠之珠粒用作固相且將二異丙基碳二醯亞胺(DIC)10份用作縮合劑之脫水反應，使以Fmoc(fluorenyl-methoxy-carbonyl)基保護胺基之脯胺酸45份與丙胺酸45份鍵結(肽鍵)後，以溶劑(乙醇)充分洗淨固相，而去除殘留之脯胺酸等。其後，利用三氟乙酸之溫浸將鍵結於固相的脯胺酸之保護基去除(脫保護)，藉此合成PA。
於上述肽分子之合成中，使用Liberty肽合成系統(CEM Corporation製造)。
以相同之方式合成LO、EO、IO、SO、LOG、POG、EOG、SOG、AOG、AO、GPO、(POG)5 、PO、OG、PG及PP。使用LC-MS/MS測定EO及EOG之[m/z]，結果EO為261.1>132.0，EOG為318.1>225.0。
[其他肽之準備]
作為下述性能評價試驗及調配例中所使用的比較用之其他肽，與上述特定之肽同樣地藉由固相法合成PAG、FO及IOG之各肽。
[實施例1：含有特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備1]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之含有特定之肽的源自豬皮之膠原蛋白肽混合物(CPT-PU)係根據如下所示之方法而獲得。
即，使作為源自豬皮之膠原蛋白之熱改性物的明膠(I型膠原蛋白)1 kg溶解於75℃之溫水4 L中，將溫度調節為60℃後，作為1次反應，藉由添加源自黃色麴黴菌之蛋白酶10 g，於pH值5.0~6.0、溫度45~55℃之條件下保持3小時 而進行酵素水解處理。繼而，作為2次酵素反應，於其中分別添加源自Aspergillus oryzae(米麴菌)之胺基肽酶N(EC3.4.11.2)及脯胺醯三肽基胺基肽酶(EC3.4.14.-)7.5 g，使其可溶化之後，於50℃下反應5小時。反應後，花費10分鐘將該反應液加熱處理至100℃，其後，冷卻至60℃，使用活性碳與過濾助劑(矽藻土)過濾，並於120℃下對所獲得之母液高溫殺菌處理3秒鐘。並且，將殺菌後之母液噴霧乾燥，而獲得源自豬皮之膠原蛋白肽混合物(CPT-PU)。
將該CPT-PU供給至薄層層析儀(TLC，Thin-Layer Chromatography)中。即，於TLC板(商品名「Cellulose F」，Merck公司製造)上滴加10 μg可溶於水之CPT-PU(斑點原點)，乾燥後，利用溶劑(正丁醇：乙酸：水=4：1：2)展開。藉由噴霧靛紅-Zn顯色液，確認藍色斑點之顯色Rf值與同一板中的合成肽POG之Rf值一致，從而確認該CPT-PU含有該肽。
進而，對上述CPT-PU進行LC-MS/MS分析。其中，由於該CPT-PU中含有多種肽，分析較為困難，故而於利用Sep-PakC18卡式管柱(cartridge column)(Waters公司製造)，對該樣品進行逆相層析區分分取後，以20 μL之MQ水溶解經凍結乾燥之樣品，而進行LC-MS/MS分析。
根據上述分析，確認該CPT-PU亦包含肽LOG、EOG、SOG、AOG、PA。
根據利用LC-MS/MS之定量分析可知：上述CPT-PU係包含PA 4%，AOG、POG各2%，LOG、EOG、SOG各1.5% 者。
此處，利用LC-MS/MS之測定分析係以如下方式進行。
使用「NANOSPACE SI-2」(資生堂公司製造)作為HPLC裝置。該裝置安裝有管柱：Hypersil GOLD PFP 2.1×150 mm，5 μm。移動相設為(A)0.2%甲酸及2 mM含乙酸銨水溶液、(B)甲醇，設定梯度，並於注入量：1 μl、管柱溫度：40℃之條件下施加線性梯度。於如下條件下使用與此連接之MS/MS(串聯型質量分析儀：TSQ Vantage，Thermo Fisher Scientific Inc.)裝置。即，使用離子化法(positive ESI(正離子電噴射離子化))，將SRM條件設為如下(以下，以[m/z]表示)：LOG為302.2>189.4；POG為286.1>189.3；PA為187.1>70.3；EO為261.1>132.0；LO為245.1>132.3；IO為245.2>132.1；EOG為318.1>225.4；SOG為276.1>189.4；SO為219.1>132.2；AOG為260.1>189.4。
[實施例2：含有特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備2]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之含有特定之肽的源自魚鱗之膠原蛋白肽混合物(CPT-P-H)除使用源自魚鱗之明膠以外，藉由與上述CPT-PU之製造相同之操作而獲得。
與上述CPT-PU之情形同樣地利用TLC對該CPT-P-H進行分析，結果確認到肽POG之存在。
進而，根據LC-MS/MS分析，確認該CPT-P-H亦包含肽LOG、EOG、SOG、AOG、PA。
根據利用LC-MS/MS之定量分析可知：上述CPT-P-H係 包含PA 2.5%，SOG、LOG、AOG各2%，POG 1.5%，EOG 1%者。
[實施例3：含有特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備3]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之含有特定之肽的源自豬皮之膠原蛋白肽混合物(CPT-P-20)係根據如下所示之方法而獲得。
即，於一面加溫一面使作為源自豬皮之膠原蛋白之熱改性物的明膠(I型膠原蛋白)1 kg溶解於20 mM Tris-HCl緩衝液(pH值7.5)4 L中後，冷卻至40℃，作為1次酵素反應，於添加1 g之膠原蛋白酶(新田明膠公司製造，Collagenase N2)後，於pH值7.0~7.8、40℃之條件下保持24小時，藉此進行酵素分解處理。繼而，作為2次酵素反應，向該反應液中添加源自Aspergillus niger(黑麴菌)之胺基肽酶N(EC3.4.11.2)及脯胺醯三肽基胺基肽酶(EC3.4.14.-)各10 g，使其可溶化之後，於pH值4.0、50℃之條件下反應5小時。反應後，花費10分鐘將該反應液加熱處理至100℃，其後，冷卻至60℃，使用活性碳與過濾助劑(矽藻土)過濾，並於120℃下對所獲得之母液高溫殺菌處理3秒鐘。然後，將殺菌後之母液噴霧乾燥，而獲得CPT-P-20。
與上述CPT-PU之情形同樣地利用TLC對該CPT-P-20進行分析，結果確認到肽POG之存在。
進而，根據LC-MS/MS分析，確認該CPT-P-20亦包含肽PA、LOG、AOG、EOG、SOG、EO、LO、IO、SO。
根據利用LC-MS/MS之定量分析可知：上述CPT-P-20係 包含PA 3%，LOG 2.5%，EOG 2%，AOG 1%，POG、SOG、EO、LO、IO、SO各0.5%者。
[實施例4：含有特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備4]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之含有特定之肽的源自豬皮之膠原蛋白肽混合物(CPT-P-22)係根據如下所示之方法而獲得。
即，於一面加溫一面使作為源自豬皮之膠原蛋白之熱改性物的明膠(I型膠原蛋白)1 kg溶解於20 mM Tris-HCl緩衝液(pH值7.5)4 L中後，冷卻至40℃，作為1次酵素反應，於添加1 g之膠原蛋白酶(新田明膠公司製造，Collagenase N2)後，於pH值7.0~7.8、40℃之條件下保持24小時，藉此進行酵素分解處理。繼而，作為2次酵素反應，向該反應液中添加源自Aspergillus oryzae之胺基肽酶N(EC3.4.11.2)及脯胺醯三肽基胺基肽酶(EC3.4.14.-)各10 g，使其可溶化之後，於pH值4.0、50℃之條件下反應3小時。反應後，花費10分鐘將該反應液加熱處理至100℃，其後，冷卻至60℃，使用活性碳與過濾助劑(矽藻土)過濾，並於120℃下對所獲得之母液高溫殺菌處理3秒鐘。然後，將殺菌後之母液噴霧乾燥，而獲得CPT-P-22。
與上述CPT-PU之情形同樣地利用TLC對該CPT-P-22進行分析，結果確認到肽POG之存在。
進而，根據LC-MS/MS分析，確認該CPT-P-22亦包含肽LOG、EOG、SOG、AOG、EO、LO、IO、PA。
根據利用LC-MS/MS之定量分析可知：上述CPT-P-22係 包含PA 3%，LOG 2.5%，POG、AOG、EOG各1%，SOG、EO、LO、IO各0.5%者。
[實施例5：含有特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備5]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之含有特定之肽的源自豬皮之膠原蛋白肽混合物(CPT-P-25)係根據如下所示之方法而獲得。
即，於一面加溫一面使作為源自豬皮之膠原蛋白之熱改性物的明膠(I型膠原蛋白)1 kg溶解於20 mM Tris-HCl緩衝液(pH值7.5)4 L中後，冷卻至40℃，作為1次酵素反應，於添加1 g之膠原蛋白酶(新田明膠公司製造，Collagenase N2)後，於pH值7.0~7.8、40℃下保持24小時，藉此進行酵素分解處理。繼而，作為2次酵素反應，向該反應液中添加源自Aspergillus niger之胺基肽酶N(EC3.4.11.2)及脯胺醯三肽基胺基肽酶(EC3.4.14.-)各7.5 g，使其可溶化之後，於pH值4.0、50℃之條件下反應3小時。反應後，花費10分鐘將該反應液加熱處理至100℃，其後，冷卻至60℃，使用活性碳與過濾助劑(矽藻土)過濾，並於120℃下對所獲得之母液高溫殺菌處理3秒鐘。然後，將殺菌後之母液噴霧乾燥，而獲得CPT-P-25。
與上述CPT-PU之情形同樣地利用TLC對該CPT-P-25進行分析，結果確認到肽POG之存在。
進而，根據LC-MS/MS分析，確認該CPT-P-25亦包含肽LOG、EOG、SOG、AOG、EO、LO、PA。
根據利用LC-MS/MS之定量分析可知：上述CPT-P-25係 包含POG 4%，PA 2.5%，LOG 1%，AOG、EOG、SOG、EO、LO各0.5%者。
[實施例6：含有特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備6]
源自魚鱗之膠原蛋白肽(CPT-PP)除作為1次反應，使用源自奇異果之奇異果蛋白酶(EC3.4.22.14)20 g以外，藉由與實施例2之CPT-P-U之製造相同的操作而獲得。
與上述CPT-PU之情形同樣地利用TLC對該CPT-PP進行分析，結果確認到肽POG之存在。
進而，根據LC-MS/MS分析，確認該CPT-PP亦包含肽LOG、EOG、SOG、AOG、EO、PA。
根據利用LC-MS/MS之定量分析可知：上述CPT-PP係包含PA 5%，LOG 2%，AOG、EOG、SOG、EO各1.5%，POG 0.5%者。
[比較例1：不含特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之除GPO以外不含特定之肽之任一種的比較用之膠原蛋白肽混合物(CPT-JB)係根據如下所示之方法而獲得。
即，於一面加溫一面使作為源自豬皮之膠原蛋白之熱改性物的明膠(I型膠原蛋白)1 kg溶解於20 mM Tris-HCl緩衝液(pH值7.5)4 L中後，冷卻至40℃，作為1次酵素反應，於添加1 g之膠原蛋白酶(新田明膠公司製，Collagenase N2)後，於pH值7.0~7.8、40℃之條件下保持18小時，藉此進行酵素分解處理。繼而，花費10分鐘將藉由酵素水解處理而獲得之溶液加熱處理至100℃，其後，冷卻至60℃，使 用活性碳與過濾助劑(矽藻土)過濾，並於120℃下對所獲得之母液高溫殺菌處理3秒鐘。然後，將殺菌後之母液噴霧乾燥，而獲得CPT-JB。
又，與上述CPT-PU之情形同樣地藉由TLC對該CPT-JB進行分析，進而進行LC-MS/MS分析，結果除GPO以外，未確認到存在特定之肽之任一種。
[比較例2：不含特定之肽之膠原蛋白肽混合物的準備]
下述性能評價試驗及調配例中所使用之不含特定之肽之任一種的比較用之膠原蛋白肽混合物(CPT-Cont)係根據如下所示之方法而獲得。
即，使膠原蛋白肽HACP-01(Jellice公司製造，膠原蛋白酶分解物)10 g與蛋白酶N「AMANO」G(Amano-Enzyme公司製造，源自Bacillus subtilis(枯草桿菌))0.1 g溶解於水中，並於55℃下加熱1小時而進行酵素處理後，於80℃下加熱處理30分鐘而使酵素失活。將該酵素處理溶液凍結乾燥，而獲得CPT-Cont。
又，與上述CPT-PU之情形同樣地藉由TLC對該CPT-Cont進行分析，進而，進行LC-MS/MS分析，結果未確認到存在特定之肽之任一種。
[性能評價試驗]
將使用上述各肽及膠原蛋白肽混合物進行之各性能評價試驗之詳細情況示於以下。
<評價試驗1：DPPIV抑制活性>
使用DPPIV抑制活性測定套組「DPPIV Drug Discovery Kit-AK-499」(Biomol公司製造)測定DPPIV抑制活性。使用H-Gly-Pro-7-胺基-4-甲基香豆素「P189-9090 AMC基質」(Biomol公司製造)作為肽樣品基質，並使用DPPIV「E434-9090 DPPIV酵素；人重組體」(Biomol公司製造)作為酵素。
抑制活性係以抑制50%之DPPIV活性時之濃度進行評價。該值越低抑制活性越高，可以較少量有效地抑制DPPIV活性。
將關於肽之結果示於表1中，將關於膠原蛋白肽混合物之結果示於表2中。
<評價試驗2：GLP-1分泌促進活性>
使用源自人類之腸道L細胞(NCI-H716細胞：ATCC(American Type Culture Collection，美國標準菌種保存中心)製造)，利用包含10%之FBS(Fetal Bovine Serum，胎牛血清)之RPIM培養基(ATCC製造)，以5×105 cells/ml×200 μl(1×105 cells/well)播種於Pre-coated poly-L-lysin plate(聚賴胺酸預包被培養板)(96 wells plate)上，並培養2日。確認細胞接著於板上後，將培養基置換成試驗培養基(146 mM NaCl，5 mM KCl，1.5 mM CaCl2 ，1 mM MgSO4 ，20 mM HEPES(4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid，4-羥乙基哌乙磺酸)，5.6 mM葡萄糖(glucose)，2 mg/ml BSA(Bovine Serum Albumin，牛血清白蛋白))，以各終濃度成為5 mM之方式添加樣品。利用PBS(Phosphate Buffered Saline，磷酸鹽緩衝液)將1小時後之培養上清液稀釋30倍，並利用GLP-1 ELISA套組(Lewis製造)，按照操作說明進行試驗。
將未添加樣品(Blank)之GLP-1分泌設為100%，而算出樣品5 mM添加區之GLP-1分泌促進率。
將關於肽之結果示於表3中，將關於膠原蛋白肽混合物之結果示於表4中。
<評價試驗3：腸道吸收性>
使威斯特系雄性大白鼠(170 g)絕食一晚而供給至實驗。 使用上述各肽各215 nmol/10 mL，對檢體試樣進行胃內投予。
作為試驗方法，於大白鼠之心臟與門靜脈上裝著套管而進行單向性灌注。作為灌注液，使用於包含NaCl 9.0 g、5.75% KCl 8 mL、10.55% KH2 PO4 2 mL、19% MgSO4 2 mL、NaHCO3 2.73 g、葡萄糖3.43 g、水1255 mL之Krebs-Ringer重碳酸液(KRB液(Krebs-Ringer bicarbonate buffer，克林二氏重碳酸鹽緩衝液)，pH值7.4)中，相對於上述KRB液500 mL，添加有牛血清白蛋白10 g、地塞米松(0.123 mg/mL)0.5 mL、正腎上腺素(0.024 mg/mL)0.5 mL者。
向自門靜脈提取之灌注試樣溶液5.0 mL中添加30%磺基水楊酸0.5 mL，遽烈地攪拌，於冰箱中放置一晚。於3000 rpm之條件下將該試樣離心分離10分鐘，進行蛋白質去除。對離心上清液比色定量其0.5 mL中之羥基脯胺酸量，藉此獲得游離型Hyp量。
進而，於螺紋口試管中稱取上述離心上清液3.0 mL，向其中添加當量之濃鹽酸，並於110℃下水解24小時。以蒸發器將其濃縮乾固，去除鹽酸，使其溶解於5 mL之蒸餾水中，添加數滴飽和氫氧化鋰溶液，而將pH值調整成5~7，並定容成10 mL。藉由對該溶液2 mL比色定量羥基脯胺酸量而獲得總Hyp量。自水解後之總Hyp量減去水解前之游離型Hyp量而獲得的值成為肽態Hyp量。首先由該肽態Hyp量確認大白鼠門靜脈灌注液中所吸收之檢體試樣之各肽的定量值。
上述羥基脯胺酸量之比色測定係藉由Firschein and Shill法而進行，具體而言，以如下方式進行。
即，於試樣溶液2 mL中添加2-丙醇2 mL，並充分地攪拌。向其中添加氧化劑之氯胺T液0.5 mL並準確放置4分鐘後，進行冰冷。向其中添加對二甲基胺基苯甲醛溶液5 mL，充分地攪拌後，於沸水中準確加熱2分鐘。其後，立即進行冰冷，放置1小時後，以波長575 nm進行比色定量。
再者，氯胺T液係將氯胺T(5 g)溶解於蒸餾水50 mL中而製備，並冷藏保存，使用前以乙酸緩衝液(pH值6.0)稀釋成1：4而使用。又，對二甲基胺基苯甲醛溶液(艾利希(Ehrlich)溶液)係向對二甲基胺基苯甲醛粉末20 g中添加濃鹽酸22 mL，於沸水中加熱溶解後，立即於冰水中冷卻，添加2-丙醇122 mL進行攪拌溶解而製備。
繼而，使用下述HPLC分析及質量分析(LC/MS/MS)進行回收於大白鼠門靜脈灌注液中之肽，即腸道所吸收之上述各肽之鑑定、定量。
(HPLC分析)
藉由逆相HPLC分析進行灌注液中之肽之分析。作為HPLC裝置，使用包含輸送泵、脫氣裝置(Degasser)、自動取樣器、管柱烘箱、紫外分光光度計、印表機、系統控制器之日本分光公司製造之LCSS-905系統。逆相管柱係使用Nova Pak C18(3.9×150 mm)。
使用含0.1%TFA(trifluoroacetic acid，三氟乙酸)之乙腈- 水系之線性梯度移動層，試樣注入量為70 μL，流速為1 mL/min。
(LC/MS/MS分析)
作為HPLC裝置，使用U980HPLC(日本分光公司製造)，該裝置安裝有ODS(C18)管柱(Mightysil RP-18，2×250 mm，Kanto Chemical Co.,Ltd製造)。作為移動相溶劑，設為含0.2%甲酸之乙腈-水系，根據線性梯度，花費40分鐘將濃度自0%提高至40%乙腈，以100%乙腈洗淨10分鐘。試樣注入量為10 μL，管柱溫度為40℃。
MS分析係以基於4通道之Multiple Reaction Monitoring(多反應監測)法之利用Quattro LC質量分光光度計(Micromass，Manchester，UK)之MS/MS方式而進行。即，以[M+H]+ 之m/z及其碎片離子種之m/z監控源自HPLC之溶出液。此時，作為[M+H]+ m/z，分別使用如下數值進行監控：LOG為302.2>189.4；POG為286.1>189.3；PA為187.1>70.3；EO為261.1>243.4；LO為245.1>132.3；IO為245.2>132.1；EOG為318.1>225.4；SOG為276.1>189.4；SO為219.1>132.2；AOG為260.1>189.4。
以最終濃度3%之磺基水楊酸處理灌注液，進行蛋白質去除。凍結乾燥上清液，並使乾燥粉末10 mg溶解於蒸餾水中，進行陽離子交換樹脂管柱處理，而獲得氨溶出餾分。去除該餾分之溶劑，並使其溶解於蒸餾水中，而進行LC/MS/MS分析。
結果如表5所示。
<評價試驗4：利用葡萄糖負荷試驗之葡萄糖耐受性評價>
以通常飼料(MF，Oriental Yeast)餵養6週大之雄性ob/ob小白鼠(日本SLC)7日，使其馴化而供給至實驗。使該小白鼠絕食一晚(16小時)後，經口投予各膠原蛋白肽(0.85 g/kg)或酪蛋白(0.85 g/kg，DMV公司，荷蘭)，並於30分鐘後經口投予葡萄糖(2 g/kg)，實施葡萄糖負荷試驗(2 g/kg)確認對葡萄糖耐受性產生之效果。於0、15、30、60及120分鐘後，使用血中葡萄糖測定裝置(Glutest R，三和化學研究所公司製造)測定血糖值，算出AUC0-120 min 而進行評價。
結果如表6所示。
<性能評價試驗之結果考察>
如上所述，Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp具有DPPIV抑制活性。尤其是Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp及Ser-Hyp-Gly之DPPIV抑制活性較高。又，Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp具有GLP-1分泌促進活性。進而，由於該等肽對消化酵素之耐性較高，故而幾乎不產生向胺基酸之分解，又，由於自腸道中經血液迅速地吸收，或者自腸道中經腸道表面細胞或L細胞直接吸收，故而藉由經口投予顯示優異之效果。
[調配例]
使用上述特定之肽而獲得本發明之製劑。將該等之調配例示於以下。
<實施例7~12>
根據表7所示之調配混合各材料，相對於表7中記載之調配整體，以10份之比例使用作為賦形劑之結晶性纖維素，並利用常法打錠成形，藉此獲得可用作經口用之實施例7~12之製劑。
<實施例13>
使用上述CPT-PU製造咀嚼型之錠劑。
具體而言，混合下述調配成分，使用打錠成型器，製備一粒0.8 g之咀嚼型之錠劑。該咀嚼型之錠劑於將總量設為100%時，包含POG 1%，PA 2%，AOG 1%，LOG、EOG、 SOG各0.75%。
<實施例14>
使用上述CPT-PU，混合下述調配成分，使其溶解於100~140 mL之熱水中而製備飲用之清湯粉(1袋6.0 g)。該清湯粉於將總量設為100%時，包含POG 0.7%，PA 1.4%，AOG 0.7%，LOG、EOG、SOG各0.6%。
<實施例15>
使用上述CPT-PU，混合下述調配成分，使其溶解於100~150 mL之水中而製備飲用之果汁粉(1袋13.0 g)。該果汁粉於將總量設為100%時，包含POG 0.8%，PA 1.6%，AOG 0.8%，LOG、EOG、SOG各0.6%者。
<實施例16>
使用上述CPT-PU，按照下述調配成分，並使其他調配成分溶解於純化水中，製備成pH值3.5、B'×9.0%後，於110℃下實施30秒加熱殺菌處理，冷卻至10℃後無菌填充至紙袋中，而製備清涼飲料(1袋125 mL)。該清涼飲料於將總量設為100%時，包含POG 0.05%，PA 0.1%，AOG 0.05%，LOG、EOG、SOG各0.04%。
<實施例17>
首先，於將上述CPT-PU及明膠浸漬於下述調配成分中之純化水(B)中，並使其膨潤30分鐘後，加熱30分鐘使其達到80℃而完全溶解，製成明膠溶液。繼而，於下述調配成分中之純化水(A)中溶解牛奶低聚糖、麥芽還原糖粉、赤藻糖醇、及難消化性糊精，煮乾後，添加阿斯巴甜、上述明膠溶液、及預先溶解於純化水(A)之一部分中之檸檬酸(晶體)、胡椒薄荷香精、薄荷香精、檸檬香精、及紅花黃色素，於製備成B'×79~81%後進行脫泡，並填充至澱粉模具中而於室溫下乾燥24小時，從而製備膠質果凍(1粒4 g)。該膠質果凍於將總量設為100%時，包含POG 0.1%，PA 0.2%，AOG 0.1%，LOG、EOG、SOG各0.08%。
<實施例18>
使用實施例6之製劑，以LOG之濃度成為2.5 mM之方式使其可溶於已滅菌之生理食鹽水中，藉此獲得靜脈注入用液劑。
[產業上之可利用性]
根據本發明，可提供一種糖尿病之治療或預防劑。又，可提供一種可用作糖尿病之治療或預防劑的膠原蛋白肽混合物、及其製造方法。

Claims (9)

  1. 一種含有選自Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、其化學改質體及其藥學上所容許之鹽中之3種以上之膠原蛋白肽混合物的用途，其係用以製造糖尿病之治療或預防劑者。
  2. 如請求項1之用途，其中膠原蛋白肽混合物含有Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp及Leu-Hyp-Gly。
  3. 一種含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽的用途，其係用以製造糖尿病之治療或預防劑者。
  4. 一種含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp及Ser-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽的用途，其係用以製造二肽基肽酶IV抑制劑者。
  5. 一種含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro-Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體、或該等之藥學上所容許之鹽的用途，其係用以製造胰高血糖素 樣肽-1分泌促進劑者。
  6. 一種Pro-Ala或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽、或者Pro-Ala或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽與含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Ser-Hyp及Ala-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽之混合物的用途，其係用以製造糖尿病之治療或預防劑者。
  7. 一種Pro-Ala或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽、或者Pro-Ala或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽與含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Ser-Hyp及Ala-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽之混合物的用途，其係用以製造二肽基肽酶IV抑制劑者。
  8. 一種Pro-Ala或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽、或者Pro-Ala或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽與含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Ser-Hyp及Ala-Hyp-Gly所組成之群中的至少1種肽或其化學改質體或該等之藥學上所容許之鹽的混合物的用途，其係用以製造胰高血糖素樣肽-1分泌促進劑者。
  9. 一種製造方法，其係藉由分2個階段對膠原蛋白或明膠進行酵素處理而製造含有選自由Glu-Hyp-Gly、Glu-Hyp、Leu-Hyp-Gly、Pro-Ala、Ser-Hyp、Ala-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp、Ile-Hyp、Ser-Hyp-Gly、Gly-Pro-Hyp、(Pro-Hyp-Gly)5 、Pro-Hyp、Hyp-Gly、Pro- Gly、Pro-Pro及Ala-Hyp所組成之群中的至少1種肽之膠原蛋白肽混合物之方法，且1次酵素處理中所使用之酵素係選自由膠原蛋白酶、硫醇蛋白酶、絲胺酸蛋白酶、酸性蛋白酶、鹼性蛋白酶及金屬蛋白酶所組成之群，2次酵素處理中所使用之酵素係具有胺基肽酶N活性之酵素或兼具有胺基肽酶N活性及脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素，或者為具有胺基肽酶N活性之酵素及具有脯胺醯三肽基胺基肽酶活性之酵素的組合。
TW101102754A 2011-01-27 2012-01-20 The use of a collagen peptide mixture for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for diabetes mellitus TWI507203B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011015095 2011-01-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201309320A TW201309320A (zh) 2013-03-01
TWI507203B true TWI507203B (zh) 2015-11-11

Family

ID=46580873

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW101102754A TWI507203B (zh) 2011-01-27 2012-01-20 The use of a collagen peptide mixture for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for diabetes mellitus

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9061003B2 (zh)
JP (1) JP5612131B2 (zh)
CN (1) CN103347530B (zh)
CA (1) CA2825157C (zh)
TW (1) TWI507203B (zh)
WO (1) WO2012102308A1 (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5887630B2 (ja) * 2011-08-11 2016-03-16 岡山県 ジペプチジルペプチダーゼ−ｉｖ阻害剤の製造方法
CN106831980B (zh) * 2011-11-04 2020-09-15 株式会社日皮 Dpp-4抑制剂
WO2014017474A1 (ja) * 2012-07-25 2014-01-30 株式会社ニッピ コラーゲンペプチド組成物の製造方法、ｄｐｐ－４阻害剤および血糖値上昇抑制剤
WO2014092150A1 (ja) * 2012-12-13 2014-06-19 新田ゼラチン株式会社 筋芽細胞分化促進剤
JP6240447B2 (ja) * 2012-12-26 2017-11-29 新田ゼラチン株式会社 エラスチン産生促進剤
CN105188727A (zh) * 2013-04-26 2015-12-23 新田明胶株式会社 美白促进剂或特应性皮炎改善剂
JP2015059087A (ja) * 2013-09-17 2015-03-30 新田ゼラチン株式会社 変形性関節症または骨粗鬆症の治療剤もしくは予防剤
CN105294830A (zh) * 2014-06-18 2016-02-03 陈光健 一种二肽分子及其制备方法和应用
JP6877924B2 (ja) * 2016-09-07 2021-05-26 新田ゼラチン株式会社 表皮細胞間機能強化剤
JP6826726B2 (ja) * 2017-01-19 2021-02-10 サラヤ株式会社 糖取り込み促進用経口組成物
JP7068942B2 (ja) * 2018-06-25 2022-05-17 サンスター株式会社 トリペプチド含有組成物
CN113164769A (zh) * 2019-02-28 2021-07-23 新田明胶株式会社 脑功能调节剂以及含有其的食品或饮料产品
CA3137531A1 (en) * 2019-07-25 2021-01-28 Nitta Gelatin Inc. Hair growing agent and food or beverage product comprising same
CN110800858B (zh) * 2019-11-22 2021-06-15 中国农业大学 一种鲟鱼蛋白肽粉及其制备方法与应用
ES2902196B2 (es) * 2020-09-25 2024-01-26 Viscofan Sa Polvo seco de colágeno con propiedades saciantes y método para su preparación
WO2023085342A1 (ja) * 2021-11-10 2023-05-19 長瀬産業株式会社 ＳａｐＢタンパク質の修飾体、ＳａｐＢタンパク質およびその修飾体の調製方法、並びにＳａｐＢタンパク質またはその修飾体を溶解した水溶液

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009035169A1 (ja) * 2007-09-14 2009-03-19 Nippon Meat Packers, Inc. 血圧上昇抑制作用を有するぺプチド

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4862235B2 (ja) * 2001-02-27 2012-01-25 Ｊｎｃ株式会社 血糖値上昇抑制剤
WO2005117933A1 (en) * 2004-05-27 2005-12-15 Campina Nederland Holding B.V. Use of protein hydrolysates for the manufacture of a medicament for prophylaxis and/or treatment of a dpp-iv mediated condition
JP4915833B2 (ja) 2005-07-01 2012-04-11 雪印メグミルク株式会社 ジペプチジルペプチダーゼｉｖ阻害剤
WO2008066070A1 (fr) * 2006-11-29 2008-06-05 Uha Mikakuto Co., Ltd. Inhibiteur de dipeptidylpeptidase-iv
JP2009284798A (ja) 2008-05-28 2009-12-10 Uha Mikakuto Co Ltd ジペプチジルペプチダーゼｉｖ阻害剤の製造方法
JP2010013423A (ja) 2008-07-07 2010-01-21 Lion Corp ジペプチジルペプチダーゼ−ｉｖ阻害剤
JP4490498B2 (ja) 2008-09-30 2010-06-23 新田ゼラチン株式会社 疾病抑制剤
JP2010138143A (ja) 2008-12-15 2010-06-24 Hokkaido Univ Ｇｌｐ−１分泌促進剤
CA2759424C (en) 2009-04-28 2018-01-02 Meiji Co., Ltd. Collagen peptide composition having good ability to enter the blood and food or beverage containing the same

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009035169A1 (ja) * 2007-09-14 2009-03-19 Nippon Meat Packers, Inc. 血圧上昇抑制作用を有するぺプチド

Also Published As

Publication number Publication date
CN103347530A (zh) 2013-10-09
US9061003B2 (en) 2015-06-23
JPWO2012102308A1 (ja) 2014-06-30
TW201309320A (zh) 2013-03-01
CN103347530B (zh) 2015-04-01
JP5612131B2 (ja) 2014-10-22
WO2012102308A1 (ja) 2012-08-02
CA2825157A1 (en) 2012-08-02
US20130303448A1 (en) 2013-11-14
CA2825157C (en) 2019-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI507203B (zh) The use of a collagen peptide mixture for the manufacture of a therapeutic or prophylactic agent for diabetes mellitus
EP1831361B1 (en) Protein hydrolysate enriched in peptides inhibiting dpp-iv and their use
JP5176964B2 (ja) ジペプチジルペプチダーゼｉｖ阻害剤
US8227424B2 (en) Collagen peptide, dipeptide and malady inhibitor
JP2010520274A (ja) ホエーからのａｃｅ抑制ペプチド及び同物を提供する方法
US20090131331A1 (en) Novel Nutraceutical Compositions
CN103987724A (zh) Dpp-4抑制剂
JP5778692B2 (ja) 疾病抑制剤
AU2006239562B2 (en) Compositions comprising tripeptides inhibiting ace
JP2009284798A (ja) ジペプチジルペプチダーゼｉｖ阻害剤の製造方法
WO2021015040A1 (ja) 育毛剤、およびこれを含む飲食品
TW202228755A (zh) 育毛劑及包含其之飲食品