CN104263573A - 一种贵腐葡萄的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种贵腐葡萄的制备方法,包括如下步骤:1)灰葡萄孢菌种的制备;2)葡萄原料及前处理;3)人工接种灰葡萄孢;4)贵腐葡萄的获得。通过对采摘下来的成熟葡萄喷撒灰葡萄孢菌剂,并控制葡萄所处环境的温度、湿度,使其在人工环境中侵染葡萄果实、发生贵腐作用,同时避免杂菌污染的干扰;克服天然贵腐葡萄产量少且不稳定的问题,为大规模生产优质甜型葡萄酒提供稳定的葡萄原料来源。

Description

一种贵腐葡萄的制备方法
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域,具体为一种贵腐葡萄的制备方法。
背景技术
贵腐葡萄酒是世界上最高档的葡萄酒之一,它由发生贵腐作用后的葡萄为原料生产的高档甜白葡萄酒。贵腐作用是由于葡萄在接近成熟期感染了灰葡萄孢(Botytis cinerea)所引起的,灰葡萄孢的侵染和生长能够使葡萄原料的水分挥发,导致葡萄果实中糖类、有机酸、多元醇等成分发生变化,最终形成含糖量很高且芳香浓郁的贵腐葡萄。灰葡萄孢侵染葡萄果实后,一般情况下会引起葡萄灰霉病从而引起减产,但在早晚阴冷湿润、下午干燥炎热的特殊环境下则会引发贵腐作用。分析其主要原因是,早晚的湿冷条件有利于灰葡萄孢的生长及其侵染葡萄的发生,而中午过后的干热天气才能使葡萄果粒里的水分从感染处蒸发,脱水提高了葡萄的甜度。
由于发生贵腐作用的条件极为苛刻,目前仅有欧洲少数几个葡萄产区能通过自然发生的途径获得贵腐葡萄,而且贵腐作用的自然发生受气候环境条件影响很大,成功的机率很不稳定,远远不能满足高档葡萄酒对优质贵腐葡萄的需求。
发明内容
本发明的目的是提供了一种人工制备贵腐葡萄的方法,使制得的贵腐葡萄与天然贵腐葡萄品质相近,克服天然贵腐葡萄产量少且不稳定的问题,为大规模生产优质甜型葡萄酒提供稳定的葡萄原料来源。
本发明的技术方案:一种贵腐葡萄的制备方法,包括如下步骤:
1)灰葡萄孢菌种的制备:将灰葡萄孢菌株接种、液态发酵至浓度为106-108CFU/mL,过滤、洗涤、干燥,并粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉;
2)葡萄原料及前处理:以成熟的白色酿酒葡萄品种为原料,原料果实汁液含糖量达到180g/L-220g/L;采摘其果穗置于可控湿控温的密室中,同时确保果穗间通风透气,调节室内温度至3-10℃预冷;
3)人工接种灰葡萄孢:
A、菌粉悬浮液的配制:将灰葡萄孢菌粉按质量体积比0.1%-5%的量与水混合,按质量体积比加入0.1%-2%的聚谷氨酸,0.05%-0.5%的胶体壳聚糖,充分混合均匀备用;
B、接种:将灰葡萄孢菌粉悬浮液按5mL-50mL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面,接种后保持室温3-10℃,室内空气相对湿度60-70%,待葡萄果实表面有明显白色丝状菌斑生成,说明接种成功;
4)贵腐葡萄的获得:接种成功后,将室温调整至10-20℃,室内空气相对湿度40-50%,随后定期取样测定果实汁液含糖量,当含糖量达到300g/L-340g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
优选的,所述灰葡萄孢菌种液态发酵工艺如下:
1)从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体,制备生物量为106-108CFU/mL的原种悬浮液,并按体积比4%-10%的量接种于种子培养基中;
2)在10℃-20℃条件下,振荡发酵或搅拌发酵至菌体重量与培养基体积比值达到5%-8%终止发酵。
优选的,所述种子培养基的制备工艺如下:
1)取质量比为1:1的马铃薯和大麦芽,马铃薯粉碎至直径不大于1cm的小块,大麦芽粉碎至粒径20目;
2)加水稀释,所述水的质量为马铃薯和大麦芽总质量的2.5倍;
3)60℃糖化8h;
4)经40目滤网或滤筛过滤除渣;
5)补充水,使培养基的体积与糖化前的体积一致,
6)110-121℃湿热灭菌20min。
优选的,所述菌株选自中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257或ACCC36258,或由野生灰葡萄孢菌株筛选得出。
优选的,所述白色酿酒葡萄品种包括赛美容、索味浓、霞多丽、雷司令等。
优选的,所述胶体壳聚糖由乙酰度达到75%以上的壳聚糖粉与12mol/L浓盐酸或冰乙酸按质量体积比5:1-5:3混合搅拌酸化后加水稀释获得。
胶体壳聚糖能抑制杂菌生长,同时促进灰葡萄孢的菌丝分化成孢子,聚谷氨酸能起表面保湿作用,同时可抑制部分杂菌生长。
优选的,所述葡萄原料采收时要求其果实充分成熟,果穗完整,无掉粒,无病果烂果。
本产品的制备方法具有如下显著的有益效果:
1、本发明通过人工接种灰葡萄孢,通过调控环境温度和湿度,使灰葡萄孢在低温高湿条件下侵染葡萄果实,并在低温低湿条件下发生贵腐作用,提高灰葡萄孢侵染葡萄并发生贵腐作用的成功率和稳定性,提高贵腐葡萄的产率;
2、所喷撒的菌粉悬浮液对葡萄表面起保湿作用,抑制杂菌生长,促进灰葡萄孢生长并侵染葡萄果实,使灰葡萄孢在低温条件侵染成熟葡萄果实,并发生贵腐作用;
3、本发明的制备方法,使贵腐葡萄的获得能不依赖特定的自然环境,大大提高贵腐葡萄的产量,使贵腐葡萄能实现产业化生产,满足高档葡萄酒对高品质葡萄的需求;
4、本发明的制备方法工艺简单、成本低、质量可控,适于推广应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种修改或改动,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
1)灰葡萄孢菌种制备
A、种子培养基:马铃薯200g粉碎至直径不大于1cm小块,大麦芽200g粉碎至粒径20目左右,加入1L自来水中,60℃糖化8h,40目滤网过滤除渣,滤液用自来水补足至1L体积,110℃湿热灭菌20min;种子培养基可按比例扩大配制量;
B、菌株:选择中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257;
C、发酵:接种发酵从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体,制备生物量为106CFU/mL的原种悬浮液,按体积比4%的量接种于种子培养基中,10℃条件下在摇瓶中振荡发酵,或在发酵罐机械搅拌发酵罐中发酵5d,至菌体重量与培养基体积比值达到5%终止发酵;
D、菌种粉剂制备:将发酵所得菌体过滤收集,用无菌水洗涤3次后,于20℃真空干燥至含水量小于30%,粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉。
2)葡萄原料及前处理
以成熟的白色酿酒葡萄品种赛美容为原料;果实采收时要求充分成熟,原料果实汁液含糖量达到180g/L,果穗完整,基本无掉粒,无病果烂果;采收的果穗平铺于托盘中以确保通风透气,最后将果穗和容器置于可控湿控温的冷库中,调节室内温度至3℃。
3)人工接种灰葡萄孢        
A、菌粉悬浮液的配制:将灰葡萄孢菌粉按质量体积比5%的量悬浮于清水中,按质量体积比加入0.1%的聚谷氨酸,0.05%的胶体壳聚糖,充分混合均匀备用;
B、接种:将灰葡萄孢菌粉悬浮液按5mL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面,接种后保持室温3℃,室内空气相对湿度70%,萄孢在低温条件下迅速在葡萄果实表面形成优势菌群,并侵染葡萄果实,培养7d,待葡萄果实表面有明显白色丝状菌斑生成,说明接种成功。
4)贵腐葡萄的获得:接种成功后,将室温调整至20℃,室内空气相对湿度50%,随后定期取样测定果实汁液含糖量,当含糖量达到300g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
 实施例2 
1)灰葡萄孢菌种制备
A、种子培养基:马铃薯300g粉碎至直径不大于1cm小块,大麦芽300g粉碎至粒径20目左右,加入1.5L自来水中,60℃糖化8h,40目滤网或滤筛过滤除渣,滤液用自来水补足至1.5L体积,121℃湿热灭菌20min;种子培养基可按比例扩大配制量;
B、菌株:选择中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36258;
C、发酵:接种发酵从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体,制备生物量为108CFU/mL的原种悬浮液,按体积比10%的量接种于种子培养基中,20℃条件下在摇瓶中振荡发酵,或在发酵罐机械搅拌发酵罐中发酵10d,至菌体重量与培养基体积比值达到8%终止发酵;
D、菌种粉剂制备:将发酵所得菌体过滤收集,用无菌水洗涤3次后,于20℃真空干燥至含水量小于30%,粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉。
2)葡萄原料及前处理        
以成熟的白色酿酒葡萄品种霞多丽为原料;果实采收时要求充分成熟,原料果实汁液含糖量达到200g/L,果穗完整,基本无掉粒,无病果烂果;采收的果穗平铺于托盘中以确保通风透气,最后将果穗和容器置于可控湿控温的培养室中,调节室内温度至10℃预冷。
3)人工接种灰葡萄孢        
A、菌粉悬浮液的配制:将灰葡萄孢菌粉按质量体积比0.1%的量悬浮于清水中,按质量体积比加入2%的聚谷氨酸,0.5%的胶体壳聚糖,充分混合均匀备用;
B、接种:将灰葡萄孢菌粉悬浮液按50mL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面,接种后保持室温10℃,室内空气相对湿度60%,萄孢在低温条件下迅速在葡萄果实表面形成优势菌群,并侵染葡萄果实,培养3d,待葡萄果实表面有明显白色丝状菌斑生成,说明接种成功。
4)贵腐葡萄的获得:接种成功后,将室温调整至15℃,室内空气相对湿度40%,随后定期取样测定果实汁液含糖量,当含糖量达到340g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
实施例3
1)灰葡萄孢菌种制备
A、种子培养基:马铃薯300g粉碎至直径不大于1cm小块,大麦芽300g粉碎至粒径20目左右,加入1.5L自来水中,60℃糖化8h,40目滤网或滤筛过滤除渣,滤液用自来水补足至1.5L体积,121℃湿热灭菌20min;种子培养基可按比例扩大配制量;
B、菌株:选择广西本地的野生灰葡萄孢菌株;
C、发酵:接种发酵从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体,制备生物量为108CFU/mL的原种悬浮液,按体积比6%的量接种于种子培养基中,15℃条件下在摇瓶中振荡发酵,或在发酵罐机械搅拌发酵罐中发酵6d,至菌体重量与培养基体积比值达到7%终止发酵;
D、菌种粉剂制备:将发酵所得菌体过滤收集,用无菌水洗涤3次后,于20℃真空干燥至含水量小于30%,粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉。
2)葡萄原料及前处理        
以成熟的白色酿酒葡萄品种索味浓为原料;果实采收时要求充分成熟,原料果实汁液含糖量达到220g/L,果穗完整,基本无掉粒,无病果烂果;采收的果穗平铺于托盘中以确保通风透气,最后将果穗和容器置于可控湿控温的培养室中,调节室内温度至5℃。
3)人工接种灰葡萄孢               
A、菌粉悬浮液的配制:将灰葡萄孢菌粉按质量体积比0.1%的量悬浮于清水中,按质量体积比加入1.5%的聚谷氨酸,2.5%的胶体壳聚糖,充分混合均匀备用;
B、接种:将灰葡萄孢菌粉悬浮液按40mL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面,接种后保持室温5℃,室内空气相对湿度65%,萄孢在低温条件下迅速在葡萄果实表面形成优势菌群,并侵染葡萄果实,培养6d,待葡萄果实表面有明显白色丝状菌斑生成,说明接种成功。
4)贵腐葡萄的获得:接种成功后,将室温调整至10℃,室内空气相对湿度45%,随后定期取样测定果实汁液含糖量,当含糖量达到330g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
实施例4
实施例4与实施例1的培育方法相似,其区别在于:所选取的葡萄原料为雷司令,原料果实汁液含糖量达到190g/L,菌粉的添加量为0.5%(w/v),聚谷氨酸的添加量为0.5%(w/v),胶体壳聚糖的添加量为1%(w/v),接种及侵染期的温度为6.5℃,湿度为62.5%,侵染培养时间为5d,接种成功后的温度为17.5℃,湿度为47.5%,当含糖量达到320g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
实施例5
实施例5与实施例2的培育方法相似,其区别在于:所选取的葡萄原料为霞多丽,原料果实汁液含糖量达到210g/L,菌粉的添加量为0.5%(w/v),聚谷氨酸的添加量为1.0%(w/v),胶体壳聚糖的添加量为0.5%(w/v),接种及侵染期的温度为8℃,湿度为67.5%,侵染培养时间为4d,接种成功后的温度为12.5℃,湿度为42.5%,当含糖量达到310g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
上述实施例的相关实验数据如下表所示:
                                                 

Claims (6)

1.一种贵腐葡萄的制备方法,包括如下步骤:
1)灰葡萄孢菌种的制备:将灰葡萄孢菌株接种、液态发酵至浓度为106-108CFU /mL,过滤、洗涤、干燥,并粉碎成粒径小于200目的灰葡萄孢菌粉;
2)葡萄原料及前处理:以成熟的白色酿酒葡萄品种为原料,原料果实汁液含糖量达到180g/L-220g/L;采摘其果穗置于可控湿控温的密室中,同时确保果穗间通风透气,调节室内温度至3-10℃预冷;
3)人工接种灰葡萄孢:
A、菌粉悬浮液的配制:将灰葡萄孢菌粉按质量体积比0.1%-5%的量与水混合,按质量体积比加入0.1%-2%的聚谷氨酸,0.05%-0.5%的胶体壳聚糖,充分混合均匀备用;
B、将灰葡萄孢菌粉悬浮液按5mL-50mL/穗果实的量均匀喷撒于葡萄果穗表面,接种后保持室温3-10℃,室内空气相对湿度60-70%,待葡萄果实表面有明显白色丝状菌斑生成,说明接种成功;
4)贵腐葡萄的获得:接种成功后,将室温调整至10-20℃,室内空气相对湿度40-50%,取样测定果实汁液含糖量,当含糖量达到300g/L-340g/L时,即可获得贵腐葡萄成品。
2.如权利要求1所述的贵腐葡萄的制备方法,其特征在于,所述灰葡萄孢菌种液态发酵工艺如下:
1)从原种斜面刮取灰葡萄孢孢子或菌丝体,制备生物量为106-108CFU /mL的原种悬浮液,并按体积比4%-10%的量接种于种子培养基中;
2)在10℃-20℃条件下,振荡发酵或搅拌发酵至菌体重量与培养基体积比值达到5%-8%终止发酵。
3.如权利要求2所述的贵腐葡萄的制备方法,其特征在于,所述种子培养基的制备工艺如下:
1)取质量比为1:1的马铃薯和大麦芽并粉碎,马铃薯粉碎至直径不大于1cm的小块,大麦芽粉碎至粒径20目;
2)加水稀释,所述水的质量为马铃薯和大麦芽总质量的2.5倍;
3)60℃糖化8h;
4)经40目滤网或滤筛过滤除渣;
5)补充水,使培养基的体积与糖化前的体积一致;
6)110-121℃湿热灭菌20min。
4.如权利要求1所述的贵腐葡萄的制备方法,其特征在于,所述灰葡萄孢菌株选自中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257或ACCC36258,或由野生灰葡萄孢菌株筛选得出。
5.如权利要求1所述的贵腐葡萄的制备方法,其特征在于,所述胶体壳聚糖由乙酰度达到75%以上的壳聚糖粉与12mol/L浓盐酸或冰乙酸按质量体积比5:1-5:3混合搅拌酸化后加水稀释获得。
6.如权利要求1所述的贵腐葡萄的制备方法,其特征在于,所述葡萄原料采收时要求其果实充分成熟,果穗完整,无掉粒,无病果烂果。
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