CN104250287A - 肿瘤靶向多肽及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了肿瘤靶向多肽及应用。肿瘤靶向多肽的基序的通式为XX(Y/F)(D/E)(D/E)XX，基序的C端和/或N端可选连接有1～3个氨基酸，X为20种天然氨基酸中的任一种或其D型氨基酸。体内外实验证明，该肿瘤靶向多肽不仅具有肿瘤血管和肿瘤细胞的靶向性，而且具有肿瘤血管和肿瘤细胞的穿透性，属于目前最为理想的一类肿瘤靶向多肽，在肿瘤分子诊断和靶向治疗中具有重要应用价值。

Description

肿瘤靶向多肽及应用
技术领域
本发明涉及一种靶向多肽，特别涉及一种肿瘤靶向多肽及其应用。
背景技术
肿瘤靶向制剂一般是多肽，一般通过与肿瘤血管或者肿瘤细胞表面分子特异性结合，在肿瘤血管或者肿瘤细胞中富集。
肿瘤靶向多肽在肿瘤分子诊断和靶向治疗中具有重要的应用价值。肿瘤靶向多肽一方面可以通过与分子成像试剂偶联，应用于肿瘤分子成像；另一方面可以通过与抗肿瘤药物偶联，应用于肿瘤靶向治疗。例如美国科学院院士Ruoslahti Errki教授发现一类含RGD基序的肿瘤靶向多肽，这类肿瘤靶向多肽结合靶点是肿瘤新生血管中的整合素av。根据Ruoslahti Errki教授的研究成果，目前许多含RGD基序的肿瘤靶向多肽，已经进入各期临床实验中，其中部分已经取得了良好的效果。例如含RGD基序的肿瘤靶向多肽Cilengitide，经过II期临床实验证实对胶质瘤具有良好疗效，目前已经进入III期临床实验中。
Ruoslahti Errki教授根据肿瘤靶向多肽的靶向性和穿透性，将肿瘤靶向多肽分为四种类型：第一种类型具有肿瘤血管的靶向性；第二种类型具有肿瘤细胞的靶向性；第三种类型同时具有肿瘤血管和肿瘤细胞的靶向性；第四种类型不仅具有肿瘤血管和肿瘤细胞的靶向性，而且具有肿瘤血管和肿瘤细胞的穿透性，这种类型肿瘤靶向多肽不仅与肿瘤血管和肿瘤细胞结合，而且可以穿透细胞膜进入细胞质内。Ruoslahti Errki教授认为这种类型肿瘤靶向多肽是目前最为理想的肿瘤靶向多肽，例如他们研究发现的iRGD肽。
发明内容
本发明的目的在于提供一种肿瘤靶向多肽及其应用。
本发明所采取的技术方案是：
肿瘤靶向多肽，其基序的通式为XX(Y/F)(D/E)(D/E)XX（SEQ ID NO：7），基序的C端和/或N端可选连接有1～3个氨基酸，X为20种天然氨基酸中的任一种或其D型氨基酸。
作为本发明的进一步改进，多肽的基序的通式为XXYDEXX。
作为本发明的进一步改进，多肽通过其末端氨基酸成环。
作为本发明的进一步改进，多肽的基序两端分别连接有一个Cys。
作为本发明的进一步改进，多肽的基序为RWYDENA。
一种肿瘤靶向制剂，偶联上述的任一种肿瘤靶向多肽。
本发明的有益效果是：
体内外实验证明，该肿瘤靶向多肽不仅具有肿瘤血管和肿瘤细胞的靶向性，而且具有肿瘤血管和肿瘤细胞的穿透性，属于目前最为理想的一类肿瘤靶向多肽，在肿瘤分子诊断和靶向治疗中具有重要应用价值。
将本发明的多肽与分子标记偶联，可以很好地结合在肿瘤细胞上，可以很好地应用于肿瘤的筛查、诊断。
将本发明的多肽与药物分子偶联，可以起到靶向治疗的效果。
附图说明
图1是肿瘤靶向性实验结果；
图2是肿瘤细胞穿透性实验结果；
图3是肿瘤血管靶向性和穿透性实验结果；
图4是肿瘤红外荧光分子成像实验结果；
图5是肿瘤SPECT分子成像实验结果；
图6是抗肿瘤靶向凋亡肽靶向治疗实验结果；
图7是抗肿瘤纳米颗粒靶向治疗实验结果。
具体实施方式
肿瘤靶向多肽，其基序的通式为（XX(Y/F)(D/E)(D/E)XX，基序的C端和/或N端可选连接有1～3个氨基酸，X为20种天然氨基酸中的任一种或其D型氨基酸。
作为本发明的进一步改进，多肽的基序的通式为XXYDEXX。
作为本发明的进一步改进，多肽的基序为RWYDENA。
作为本发明的进一步改进，多肽通过其末端氨基酸成环。环肽在体内可以更为稳定的存在，起效时间可以进一步延长。
作为本发明的进一步改进，多肽的基序两端分别连接有一个Cys。更进一步的，多肽通过其两端连接的Cys形成二巯键成环。
一种肿瘤靶向制剂，偶联有上述的任一种肿瘤靶向多肽。在该制剂中，多肽起到靶向作用，与其偶联的起效分子可以是诊断试剂，也可以是用于治疗的药物，如肿瘤杀伤肽、化疗用小分子药物等。为了使起效分子可以很好地偶联在多肽上，可以使用本领域常用的偶联基团。为了保证靶向效果，偶联的位点不应选择在基序上。
上述肿瘤靶向多肽可以由左旋或右旋氨基酸组成，由右旋氨基酸在体内更稳定地存在，是更佳的选择。
下述实验中所使用的肽如下
肽名称 序列(斜体的两个C环化) SEQ ID NO：
35 CRWYDENAC 1
Con CGGGGGGGC 2
Biotin-35 Biotin-CRWYDENAC   
Biotin-C Biotin-CGGGGGGGC  
Cy5-35 Cy5-CRWYDENAC  
Cy5-C Cy5- CGGGGGGGC  
35-AP D（KLAKLAKKLAKLAK）-GG-CRWYDENAC 3
(35-AP)D D（KLAKLAKKLAKLAK-GG-CRWYDENAC） 4
C-AP D（KLAKLAKKLAKLAK）-GG- CGGGGGGGC 5
AP D（KLAKLAKKLAKLAK） 6
HYNIC-35 HYNIC- CRWYDENAC  
HYNIC-C HYNIC- CGGGGGGGC  
数据分析：
计数结果应用统计软件SPSS16.0进行分析，采用Levene法对各组计数结果进行方差齐性检验。如果各组方差齐性(P>0.05时，方差齐性)，然后采用独立样本t检验，分析组间是否有显著差异(P<0.05时，有显著差异)。
肿瘤靶向性实验
根据表达35肽的T7噬菌体与细胞的结合数目，能够间接反应35肽与细胞的结合能力。因此，我们首先构建外源性表达35肽的T7噬菌体（35噬菌体），然后通过计算该噬菌体与细胞的结合数目，即噬菌体计数实验来检测35肽与细胞的结合能力。具体操作如下：
1)   合成3末端磷酸化编码靶向肽的DNA序列，按照下列表格体系退火：
编号 反应体系 体积（μl）
1 dH2O 7
2 10× reaction Buffle 3
3 10μM 编码正链DNA（3’磷酸化） 20
4 10uM 编码反链DNA（3’磷酸化） 20
2)   95℃ 5分钟，冰上放置冷却。
3)   4% TBE琼脂糖凝胶电泳，鉴定退火前后产物，退火后产物为双链DNA退火前为单链DNA，因此，电泳时退火后产物比退火前电泳速度慢；
4)   按照下列体系将靶向肽编码DNA序列插入T7噬菌体中；
编号 反应体系 体积（μl）
1 上述退火产物 1
2 T7 select vector arms 1
3 Ligation high 2
5)   16℃连接2小时；
6)   T7 select packaging extract 冰上解冻，加入上述连接产物，22℃包装2小时；
7)   加入270 μl LB终止反应。10倍体积系列稀释连接产物，T7噬菌体计数铺板。
应用噬菌体计数实验方法，首先检测35噬菌体与鼻咽癌细胞CNE2的结合情况，然后检测35肽是否可以阻断35噬菌体与鼻咽癌细胞CNE2的结合。具体操作如下： 
1)   胰酶消化细胞，计数，1.0×106个/管，200μl无血清1640重悬细胞；
2)   阻断实验时加入相应浓度的35肽，冰上孵育30分钟（结合实验直接进入第3步）；
3)   加入1.0×108个噬菌体，冰上孵育结合1小时；
4)   PBS冲洗3次，1ml/次，400g，离心5分钟； 
5)   1ml TBS重悬沉淀，稀释103～104倍，取100μl计数； 
6)   T7噬菌体感受菌BL21，接种，按照V/V=1/100接种，37℃，200转/分，摇菌为4小时至OD值为0.5-1.0，感染菌处于对数生长中期，24小时内4℃保存待用；
7)   准备好噬菌体培养底层胶，37℃预温待用；准备好上层胶，45℃水浴预温待用；
8)   待测噬菌体用LB培养基按照10倍浓度梯度系列稀释，每次稀释换新枪头，每个待检测浓度准备1个EP管；
9)   4ml EP管中加入100μl对数生长期BL21，加入100μl待检测噬菌体；
10)             加入4ml 45℃预温上层胶，迅速倒入37℃预温噬菌体培养底层胶培养皿中，室温5分钟待凝固；
11)             37℃培养4小时，对噬菌体白斑进行计数。根据稀释倍数，计算对应管待测噬菌体滴度。
应用流式细胞分析术，检测Cy5-35荧光肽与鼻咽癌细胞CNE2的结合情况。我们首先合成35肽和Con肽与荧光染料Cy5偶联的Cy5-35荧光肽，然后将Cy5-35荧光肽与细胞孵育，最后通过流式细胞分析来检测其结合情况。具体实验步骤如下： 
1)   胰酶消化细胞，计数，调整浓度为1.0×106个/管，100μl无血清1640重悬细胞；
2)   加入PBS溶解的Cy5-C或者Cy5-35，浓度分别为5μM和10μM，细胞在冰上孵育结合30分钟；
3)   PBS冲洗3次，1ml/次，400g，离心5分钟；
4)   1ml PBS重悬细胞；
5)   流式细胞仪检测。
实验结果如图1所示，噬菌体计数结合实验表明，在4℃和37℃条件下，35噬菌体与鼻咽癌细胞CNE2的结合能力，均比对照噬菌体的结合能力强（图1 A）；噬菌体计数阻断实验表明，35肽可以阻断35噬菌体与鼻咽癌细胞CNE2的结合，阻断效应具有浓度依赖性（图1 B）；流式细胞分析术结果表明，Cy5-35荧光肽与鼻咽癌细胞CNE2的结合能力，随着肽浓度的增加而增强（图1 C）。该结果证明35肽具有鼻咽癌细胞的靶向性。
肿瘤细胞穿透性实验
应用噬菌体计数实验方法，检测35噬菌体是否可以穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2中，实验操作同肿瘤靶向性实验中的噬菌体计数实验方法，不同之处在于步骤2）～4）的操作如下：
2)   加入1.0×108个表达35肽的35噬菌体或对照肽的T7噬菌体，37℃结合1小时；
3)   PBS冲洗1次，1ml/次，400g，离心5分钟，0.1M 甘氨酸盐酸，500mM氯化钠，pH2.5冲洗1次，1ml/次，400g，离心5分钟，PBS冲洗1次，1ml/次，400g，离心5分钟；
4)   内化实验为1ml 含1%NP-40 TBS重悬沉淀，稀释103～104倍，取100μl计数。
应用流式细胞分析术，检测Cy5-35荧光肽是否可以穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2中，具体操作如下：
1)      细胞加入荧光肽，37℃孵育结合2小时；
2)      胰酶消化细胞，计数，调整浓度为1.0×106个/管，100μl无血清1640重悬细胞；
3)      PBS冲洗3次，1ml/次，400g，离心5分钟；
4)      1ml PBS重悬细胞；
5)      流式细胞仪检测。
应用细胞免疫荧光实验，检测Bitoin-35肽是否可以穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2，具体操作如下：
1)      细胞加入Bitoin-35肽或Bitoin-C肽，37℃孵育结合2小时；
2)      PBS冲洗3次，1ml/次，每次5分钟；
3)      4%多聚甲醛固定10分钟；
4)      0.1%Triton-X100 破膜5分钟；
5)      5% BSA 封闭30分钟；
6)      PBS冲洗2次，1ml/次，每次5分钟；
7)      加入FITC-streptavidin 避光结合1小时；
8)      PBS冲洗3次，1ml/次，每次5分钟；
9)      加入1:2000 DAPI 室温避光5分钟；
10)  PBS冲洗1次，1ml/次，每次5分钟；
11)  Anti-fade 封片，共聚焦显微镜观察。
肿瘤细胞穿透性实验结果如图2所示，噬菌体内化计数结果显示，在4℃条件下，35噬菌体穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2效果不明显，在37℃条件下，35噬菌体可以明显穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2中（图2 A）；流式细胞分析结果显示，Cy5-35荧光肽穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2，穿透效果呈现浓度依赖性（图2 B）；细胞免疫荧光实验结果表明，Biotin-35肽可以穿透细胞膜进入鼻咽癌细胞CNE2中（图2 C）。该结果证明35肽具有鼻咽癌细胞穿透性。
肿瘤血管靶向性和穿透性实验
应用冰冻切片和免疫组织化学反应实验方法，检测Cy5-35荧光肽是否同时具有肿瘤血管的靶向性和穿透性。具体操作如下：
1)      取9只4周龄雄性BALB∕c裸鼠；
2)      胰酶消化鼻咽癌CNE2细胞，计数，调整浓度为1.0×106个/ml，20% Matrigel 1640重悬，200μl/只裸鼠，腋下皮下注射；
3)      1-2周观察肿瘤形成情况，测量肿瘤大小，根据肿瘤大小将其随机化分3组，分别为PBS组，对照肽Cy5-C组以及Cy5-35组，每组3只小鼠；
4)      200μl PBS溶解300μg荧光肽，尾静脉注射荧光肽；
5)      取肿瘤组织，进行冰冻切片，-80℃冰箱保存；
6)      从-80℃冰箱取出冰冻切片，自然干燥后，于预冷的丙酮中固定10min，PBS洗5次，5min/次；
7)      去除内源性过氧化物酶：3% H2O2 浸泡10-20min，PBS洗3次，5min/次；
8)      10%BSA封闭，室温20min；
9)      加anti-CD31 mouse一抗，4℃过夜，；
10)  PBS洗3次，5min/次；
11)  加Anti-mouse FITC二抗，室温避光1小时，PBS洗3次，5min/次；
12)  加入DAPI，室温5分钟，PBS洗3次，5min/次；
13)  Anti-fade 封片。共聚焦显微镜观察。
肿瘤血管靶向性和穿透性实验结果如图3所示：组织免疫化学反应实验结果表明，尾静脉注射Cy5-35荧光肽30分钟后，Cy5-35荧光肽与血管标志物CD31明显共定位（图3 A）；尾静脉注射Cy5-35荧光肽2小时后，Cy5-35荧光肽不仅与血管标志物CD31明显共定位，而且部分Cy5-35荧光肽穿透肿瘤血管进入肿瘤组织中（图3 B）。该结果证明35肽具有鼻咽癌血管靶向性和穿透性。
肿瘤红外荧光分子成像
应用荷瘤小鼠肿瘤红外荧光分子成像 实验方法，检测Cy5-35荧光肽在裸鼠各个脏器和肿瘤中分布情况。小动物活体成像实验操作方法如下：
1) 取9只4周龄雄性BALB∕c裸鼠；
2) 胰酶消化鼻咽癌CNE2细胞，计数，调整浓度为1.0×106个/ml，20% Matrigel 1640重悬，200μl/只裸鼠，腋下皮下注射；
3) 1-2周观察肿瘤形成情况，测量肿瘤大小，根据肿瘤大小将其随机化分3组，分别为PBS组，对照肽Cy5-C组以及Cy5-35组，每组3只小鼠；
4) 200μl PBS溶解300μg荧光肽，尾静脉注射荧光肽，小动物活体动物成像仪动态检测荧光肽在裸鼠各个脏器和肿瘤中的分布情况；
5) 取各个脏器和肿瘤，匀浆，测各个脏器和肿瘤的荧光强度，统计分析。
为了检测Cy5-35荧光肽是否可以在其它肿瘤的红外荧光分子成像，按照上述方法，将其应用乳腺癌MDA-MB-231裸鼠动物模型中。 
实验结果如图4显示：尾静脉注射24小时后，Cy5-35荧光肽在肿瘤中明显富集（图4 A）；尾静脉注射24小时后，Cy5-35荧光肽在肿瘤明显富集，肺脏中有少量富集（图4 B）；尾静脉注射24小时后，Cy5-35荧光肽在肿瘤中的单位重量肽含量明显大于其他脏器（图4 C）。此外，尾静脉注射24小时后，Cy5-35荧光肽也可以在乳腺癌红外荧光分子成像(图4 D)。该结果证明35肽可以应用于鼻咽癌和乳腺癌的活体分子成像。 
肿瘤SPECT分子成像实验   
将HYNIC修饰后35肽标记99m Tc，应用于荷瘤小鼠SPECT成像中。实验方法如下：
1) 100μl EDDA/tricine 溶液(20 mg/ml tricine，10 mg/ml EDDA， pH 7)溶解100μg HYNIC-35多肽；
2) 加入20μl tin(II) 溶液 (10 mg SnCl2·2H2O溶解于10 ml 0.1 N HCl)；
3) 加入1ml 99m TcO4 (800MBq)溶液；
4) 100℃加热10分钟，冷却至室温；
5) 100μl/只尾静脉注射于荷瘤裸鼠中；
6) 分别在注射后2小时，4小时，6小时，12小时SPECT检测HYNIC-35肽分布情况。
SPECT实验结果显示，注射后4小时以后，HYNIC-35肽主要分布于肿瘤和肾脏中（图5 A和B）。该结果证明HYNIC-35肽可以应用肿瘤SPECT成像。
 
抗肿瘤凋亡肽靶向治疗实验 
为了检测35肽在肿瘤靶向治疗中的效果，我们将35肽、对照肽C分别与促凋亡多肽（AP）偶联，形成35-AP和C-AP偶联肽。促凋亡多肽发挥促凋亡作用的机制是破坏细胞内的线粒体膜，激活内源性凋亡途径。促凋亡多肽只有进入细胞内才能发挥促凋亡作用。由于35肽具有细胞穿透性，因此，35-AP偶联肽首先通过35肽内化进入肿瘤细胞中，然后促凋亡肽AP发挥其促凋亡肽的作用，从而发挥其靶向治疗的效果。
首先应用Cleaved Caspase 3/7流式细胞分析试剂盒，评价35-AP偶联肽在细胞中的作用。具体操作如下：
1) 细胞铺板24小时后，1640溶解的肽与细胞37℃孵育4小时；
2) TrypLE Expression 胰酶消化细胞，计数，调整浓度为1.0×106个/ml，取300μl加入流式分析管中；
3) 加入10μl 30× FLICA 工作液，混匀；
4) 37℃，5% CO2培养箱孵育1小时，每隔15分钟混匀1次；
5) 加2ml Washing buffer冲洗3次，400g，离心5分钟；
6) 加入1ml Washing buffer重悬细胞；
7) 流式细胞仪检测。
然后应用CCK-8试剂盒，检测35-AP偶联肽在不同鼻咽癌细胞株中的IC50。具体操作如下：
1) 在96孔板中配制100μl的细胞悬液，将培养板在培养箱37℃，5% CO2预培养24小时；
2) 向培养板加入10μl不同浓度的靶向肽与凋亡肽偶联肽；
3) 将培养板在培养箱孵育48小时；
4) 向每孔中加入10μl CCK8；
5) 将培养板在培养箱中孵育1-4小时；
6) 用酶标仪测定在450nm处的吸光度，计算IC50。
最后将35-AP偶联肽应用于裸鼠皮下移植瘤模型，检测其体内靶向治疗效果。具体操作如下：
1) 取24只4周龄雄性BALB∕c裸鼠；
2) 胰酶消化鼻咽癌CNE2细胞，计数，调整浓度为1.0×106个/ml，20% Matrigel 1640重悬，200μl/只裸鼠，腋下皮下注射；
3) 1-2周观察肿瘤形成情况，测量肿瘤大小，根据肿瘤大小将其随机化分3组，分别为PBS组，对照肽AP组以及35-AP组，每组8只小鼠；
4) 尾静脉注射肽，肽注射量为200μg/只，体积为200μl/只裸鼠，每间隔1天注射1次，共注射6次，每次注射前测量肿瘤长和宽，肿瘤体积=0.52×（长×宽×宽）。
5) 根据肿瘤大小进行统计分析。
实验结果如图5所示：流式细胞分析术结果表明，35肽和促凋亡肽AP分别与鼻咽癌细胞CNE2孵育，均无法引起细胞凋亡；35肽和促凋亡肽AP混合，与鼻咽癌细胞CNE2孵育，无法引起细胞凋亡；对照肽C与凋亡肽偶联形成的C-AP，与鼻咽癌细胞CNE2孵育，无法引起细胞凋亡；35肽与凋亡肽偶联形成35-AP，与鼻咽癌细胞CNE2孵育，可以引起细胞凋亡；右旋氨基酸组成的35-AP，与鼻咽癌细胞CNE2孵育，可以引起细胞凋亡（图6 A）；35-AP与其它鼻咽癌细胞SUNE1、CNE1、5-8F和HONE1孵育，均可以引起细胞凋亡（图6 B）；细胞免疫荧光实验结果表明，35-AP与鼻咽癌细胞CNE2孵育，可以激活细胞中Cleaved Caspase 3（图6 C）；35-AP在多种肿瘤细胞中的IC50约为50μM（图6 D）；在裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型中，与两个对照组比较，35-AP可以明显减少肿瘤体积（图6 E）。该结果证明35肽可以应用于鼻咽癌靶向治疗。
抗肿瘤纳米颗粒靶向治疗实验 
将35肽偶联含顺铂纳米颗粒，形成一种抗肿瘤纳米颗粒，应用于肿瘤靶向治疗中。实验方法如下：
首先检测抗肿瘤纳米颗粒的孔径和顺铂的释放，具体如下：
1) 将Cy5偶联或者不偶联的35肽与PEG3.4K-PCL7.5K以1:1比例键合，加入等比例顺铂，形成抗肿瘤纳米颗粒；
2) 电镜下检测抗肿瘤纳米颗粒大小和顺铂释放。
然后检测抗肿瘤纳米颗粒在肿瘤细胞的摄取情况，具体实验如下：
1) 抗肿瘤纳米颗粒与肿瘤细胞37℃孵育4小时；
2) 胰酶消化细胞，1640培养基重悬细胞；
3) 流式细胞分析检测肿瘤细胞对抗肿瘤纳米颗粒的摄取情况。
继续检测抗肿瘤纳米颗粒在肿瘤组织中的富集情况，具体实验如下：
1) 1mg/kg体重在荷瘤小鼠中，尾静脉注射带Cy5荧光抗肿瘤纳米颗粒；
2) 6小时后，对各个脏器和肿瘤红外成像，观察分布情况。
最后检测抗肿瘤纳米颗粒在肿瘤靶向治疗中的治疗效果，具体实验如下：
1) 2mg/kg体重尾静脉注射抗肿瘤纳米颗粒，每周3次，连续注射3周；
2) 动态检测肿瘤体积；
3) 3周后，取肿瘤，检测大小和肿瘤。
实验结果显示，抗肿瘤纳米颗粒的孔径约为100nm（图7 A），颗粒内含的顺铂可以释放（图7 B）；颗粒不仅可以在肿瘤细胞中富集（图7 C），而且可以在肿瘤组织中富集（图7 D）；该纳米颗粒可以有效地抑制肿瘤的生长（图7 E和F）。该结果证明这种抗肿瘤纳米颗粒可以应用肿瘤靶向治疗中。
<110>  中山大学附属肿瘤医院
 
<120>  肿瘤靶向多肽及其应用
 
<130> 
 
<150>  CN201310413634.5
<151>  2013-09-11
 
<160>  7    
 
<170>  PatentIn version 3.5
 
<210>  1
<211>  9
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  环肽
<222>  (1)..(9)
<223>  通过末端Cys形成二硫键成环
 
<400>  1
 
Cys Arg Trp Tyr Asp Glu Asn Ala Cys
1               5                  
 
 
<210>  2
<211>  9
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  环肽
<222>  (1)..(9)
<223>  通过Cys形成二硫键成环
 
<400>  2
 
Cys Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Cys
1               5                  
 
 
<210>  3
<211>  25
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  D型氨基酸
<222>  (1)..(14)
 
<220>
<221>  环肽
<222>  (17)..(25)
<223>  通过Cys形成二硫键成环
 
<400>  3
 
Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Gly Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Cys Arg Trp Tyr Asp Glu Asn Ala Cys
            20                  25 
 
 
<210>  4
<211>  25
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  D型氨基酸
<222>  (1)..(25)
 
<220>
<221>  环肽
<222>  (17)..(25)
<223>  通过Cys形成二硫键成环
 
<400>  4
 
Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Gly Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Cys Arg Trp Tyr Asp Glu Asn Ala Cys
            20                  25 
 
 
<210>  5
<211>  25
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  D型氨基酸
<222>  (1)..(14)
 
<220>
<221>  环肽
<222>  (17)..(25)
<223>  通过Cys形成二硫键成环
 
<400>  5
 
Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Gly Gly
1               5                   10                  15     
 
 
Cys Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Cys
            20                  25 
 
 
<210>  6
<211>  14
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  D型氨基酸
<222>  (1)..(14)
 
<400>  6
 
Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Leu Ala Lys Leu Ala Lys
1               5                   10                 
 
 
<210>  7
<211>  7
<212>  PRT
<213>  人工多肽
 
 
<220>
<221>  Xaa
<222>  (1)..(7)
<223>  Xaa可以是任意天然氨基酸的D型对映体
 
<220>
<221>  可替换的氨基酸
<222>  (3)..(3)
<223>  Tyr可被Phe替换
 
<220>
<221>  可替换的氨基酸
<222>  (4)..(5)
<223>  Asp可被Glu替换
 
<400>  7
 
Xaa Xaa Tyr Asp Glu Xaa Xaa
1               5          

Claims (8)

1.肿瘤靶向多肽，其基序的通式为XX(Y/F)(D/E)(D/E)XX，基序的C端和/或N端可选连接有1～3个氨基酸，X为20种天然氨基酸中的任一种或其D型氨基酸。
2.根据权利要求1所述的肿瘤靶向多肽，其特征在于：所述多肽的基序的通式为XXYDEXX。
3.根据权利要求1所述的肿瘤靶向多肽，其特征在于：所述多肽通过其末端氨基酸成环。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的肿瘤靶向多肽，其特征在于：所述多肽的基序两端分别连接有一个Cys。
5.根据权利要求1～3任意一项所述的肿瘤靶向多肽，其特征在于：所述多肽的基序为RWYDENA。
6.权利要求1～5任意一项所述的肿瘤靶向多肽在制备肿瘤诊断试剂中的应用。
7.权利要求1～5任意一项所述的肿瘤靶向多肽在制备肿瘤靶向药物中的应用。
8.一种肿瘤靶向制剂，所述制剂上偶联有权利要求1～6任意一项所述的肿瘤靶向多肽。
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