ES2882634T3 - Compuestos peptídicos y conjugados con péptidos para el tratamiento del cáncer mediante quimioterapia mediada por receptores - Google Patents

Compuestos peptídicos y conjugados con péptidos para el tratamiento del cáncer mediante quimioterapia mediada por receptores Download PDF

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Alain Larocque
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Abstract

Un compuesto peptídico que tiene al menos un 80 % de identidad de secuencia con un compuesto de Fórmula (X): GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO: 10) en donde al menos un grupo protector y/o al menos un agente de marcaje está opcionalmente conectado a dicho compuesto peptídico en un extremo N y/o C-terminal.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos peptídicos y conjugados con péptidos para el tratamiento del cáncer mediante quimioterapia mediada por receptores
Solicitudes relacionadas
La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad de la Solicitud de patente de los Estados Unidos con número de serie 62/259178, presentada el 24 de noviembre de 2015.
Campo de la descripción
La presente descripción se refiere a los compuestos peptídicos y compuestos conjugados, procesos, métodos y usos de los mismos para tratar el cáncer.
Antecedentes de la descripción
Cáncer
De acuerdo con un informe reciente de la Organización Mundial de la Salud (febrero de 2014), 8,2 millones de pacientes murieron de cáncer en 2012. Por tanto, el cáncer es un problema de salud cada vez mayor en los países desarrollados y en desarrollo. También se ha estimado que el número de casos de cáncer anuales aumentará de 14 millones en 2012 a 22 millones dentro de las próximas dos décadas (OMS, 2014). Actualmente, los tratamientos clásicos para el cáncer son la quimioterapia, la radioterapia y la cirugía.
La resistencia a la quimioterapia sigue siendo una de las principales causas del fracaso del tratamiento del cáncer. Este fenotipo de resistencia es el resultado de numerosos mecanismos. La comprensión "tradicional" de la resistencia a múltiples fármacos (MDR) y sus mecanismos impulsores simplifica en exceso la complejidad de una red de cáncer celular perturbada y se centra en varias vías/familias de genes (Orit, 2013). Desde esa perspectiva, la resistencia a los fármacos se asocia más bien con la inducción de la salida del fármaco, la activación de la reparación del ADN, las variaciones en las proteínas diana, la disminución de la captación del fármaco, la alteración del metabolismo, el secuestro y los cambios en las vías apoptóticas (Fodalet, 2011; Gillet, 2010). Recientemente, también se ha inferido que la heterogeneidad intratumoral es un facilitador importante de la resistencia a los fármacos en referencia a las diferencias observadas entre las células cancerosas que se originan dentro del mismo tumor. De hecho, se ha encontrado que muchos tumores humanos primarios contienen subpoblaciones celulares genéticamente distintas que se informa que son principalmente el resultado de procesos estocásticos y señales de microambiente. Además de las diferencias genéticas o la heterogeneidad dentro de un tumor, la resistencia terapéutica también puede ser causada por varios otros procesos no genéticos, como los cambios epigenéticos asociados con la modificación de la cromatina o la metilación del ADN (Sanz-Moreno, 2008). Un estudio de estos procesos se realizó en un sistema con un solo clon genético y concluyó que existía variabilidad funcional entre las células tumorales (Kreso, 2013; Marusyk, 2013). Claramente, la integración de supuestos genéticos y no genéticos, así como también la heterogeneidad, deben incluirse en el diseño de nuevos modelos experimentales y computacionales para tener una mejor descripción y, en última instancia, una solución al problema de la MDR. Resistencia a múltiples fármacos
El progreso clínico en el tratamiento de los tumores primarios ha sido lento. Uno de los problemas asociados con el tratamiento de estos tumores es su respuesta relativamente débil a los fármacos anticancerosos (Zhou, 2008; Silvia, 2015). La eficacia de la quimioterapia y la inmunoterapia se ha visto afectada por el fenotipo de MDR inherente o adquirido por las células cancerosas. Uno de los principales mecanismos implicados en el fenotipo de MDR implica la expresión de la glicoproteína P (P-gp), un transportador de membrana que bombea varios fármacos anticancerosos de las células de MDR. La P-gp también se expresa en un gran número de tejidos secretores normales tales como riñón, hígado e intestino. En humanos, se ha informado que la P-gp está codificada por dos genes MDR (MDR1 y MDR3). La MDR1 humana confiere el fenotipo de resistencia, mientras que la MDR3 humana no. Así, la P-gp puede considerarse como un "guardián" que limita la entrada de los fármacos mediante la expulsión de las células cancerosas al evitar que alcancen concentraciones citotóxicas.
Heterogeneidad tumoral
Heterogeneidad intra e intertumoral
El cáncer es un enemigo tortuoso que revela nuevas complejidades justo cuando los científicos encuentran nuevas formas de abordarlas. Se ha puesto una esperanza reciente en la nueva generación de "terapias dirigidas" que se centran en defectos moleculares específicos en las células cancerosas, prometiendo una terapia más efectiva y menos tóxica que los agentes quimioterapéuticos imprecisos (Fisher, 2013). Sin embargo, los investigadores ahora se están dando cuenta de que pueden haber subestimado anteriormente una de las complejidades más antiguas y conocidas del cáncer: la heterogeneidad tumoral. Esto, en parte, explica los éxitos y las decepciones con las terapias dirigidas y debería motivar un reexamen más amplio de las estrategias de investigación actuales.
La heterogeneidad tumoral se refiere a la existencia de subpoblaciones de células, con genotipos y fenotipos distintos que pueden albergar comportamientos biológicos divergentes, dentro de un tumor primario y sus metástasis, o entre tumores del mismo subtipo histopatológico (intra e intertumorales, respectivamente) (Corbin, 2013). Con el advenimiento de las técnicas de secuenciación profunda, se reconoce cada vez más el alcance y la prevalencia de la heterogeneidad intra e intertumoral. Hay características de la heterogeneidad intratumoral que forman parte de la evaluación patológica de rutina, pero su determinación aún no forma parte del proceso de toma de decisiones clínicas. El pleomorfismo nuclear es otro ejemplo de heterogeneidad intratumoral, que se explica en la clasificación del cáncer de mama, por ejemplo. También es evidente para los médicos que tratan el cáncer que existe una marcada variación en el comportamiento del tumor entre pacientes con el mismo tipo de tumor y entre diferentes sitios de tumor en el mismo paciente; este último suele manifestarse como respuestas diferenciales o mixtas a la terapia.
Evolución clonal como modelo de progresión y heterogeneidad tumoral
Nowell (1976) propuso por primera vez un modelo evolutivo clonal del desarrollo del cáncer y se basa en modelos darwinianos de selección natural, es decir, las células genéticamente inestables acumulan alteraciones genéticas y que las presiones selectivas favorecen el crecimiento y la sobrevivencia de subpoblaciones variantes con una ventaja en la aptitud biológica. La heterogeneidad espacial y temporal puede permitir que el tumor en su conjunto se adapte a un microambiente tumoral fluctuante. En resumen, se argumenta que los tumores heterogéneos deben verse como ecosistemas o sociedades complejos, en los que incluso una subpoblación tumoral menor puede influir en el crecimiento de todo el tumor y, de esta manera, mantener activamente la heterogeneidad tumoral (Heppner, 1984; Marusyk, 2010; Bonavia, 2011). ). En este modelo, los subclones ocupan varios nichos dentro del microambiente tumoral y la ventaja de sobrevivencia de la "sociedad" tumoral supera a las de la subpoblación individual; las relaciones entre subclones pueden ser competitivas, comensales o mutualistas para este propósito. Implicaciones clínicas de la heterogeneidad tumoral
La cuestión de la heterogeneidad del cáncer, que incluye las relaciones entre subpoblaciones dentro y entre las lesiones tumorales, puede tener profundas implicaciones para la terapia con fármacos en el cáncer. La terapia dirigida, que intenta explotar la dependencia de un tumor de una vía crítica de proliferación o sobrevivencia, ha mejorado significativamente los resultados de los pacientes en un intervalo de tipos de tumores sólidos, pero en la mayoría de los casos de enfermedad avanzada, también es evidente que las terapias dirigidas no ayudan todos los pacientes seleccionados molecularmente e incluso cuando se observa un beneficio clínico, a menudo es de duración limitada (Gore, 2011; Diaz, 2012). La heterogeneidad tumoral puede explicar en parte estos fenómenos clínicos, y esto impulsa el desarrollo de una plataforma más eficiente que elude el fenotipo MDR. Roselli y otros, 2015, describen que la Sortilina está asociada con la agresividad del cáncer de mama y contribuye a la adhesión e invasión de las células tumorales. Además, se ha informado que la Sortilina se expresa en diferentes tumores sólidos, que incluyen los cánceres de mama, colorrectal, pulmón, próstata y ovario (Roselli y otros, 2015; Ghaemimanesh y otros, 2014). Andersen y otros, 2010 (Identification of a linear epitope in Sortilin that partakes in pro-neurotrophin binding, JBC, vol. 285, núm 16) describen que una secuencia lineal de Sortilina expuesta a la superficie está implicada en la unión de pro-neurotrofina y en la apoptosis celular.
Resumen de la invención
El alcance de la invención se define por el conjunto de reivindicaciones adjuntas.
Resumen De La Descripción
En consecuencia, un primer aspecto de la descripción, pero que no forma parte de la invención reivindicada, es un compuesto peptídico que tiene al menos un 80 % de identidad de secuencia con un compuesto seleccionado entre los compuestos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (111), Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI) y Fórmula (XII):
Xi X2X3X4X5GVX6AKAGVX7NX8 FKSESY (I) (SEQ ID NO: 1)
(Xg)nGVXi 0AKAGVXi i NXi 2 FKSESY (II) (SEQ ID NO: 2)
YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO: 3)
YKXi 8 LRR(Xi 9)nPLRDPALRX20X2 i L (IV) (SEQ ID NO: 4)
IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO: 5)
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO: 6)
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO: 7)
GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO: 8)
GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO: 9)
YKSLRRKAPRWDAPLRDP ALRQLL (XI) (SEQ ID NO: 11)
YKSLRRKAPRWDA YLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO: 12)
YKSLRRKAPRWDA YLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO: 13)
en donde
Xi , X2 , X3 , X4 , X5 , X6 , X7 , X8 , X9 , X10, X11, X12, X13, X14, X15, X18 y X19 se seleccionan independientemente de cualquier aminoácido;
X16, X17, X20 y X21 se seleccionan independientemente de Q, P, Y, I y L;
n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
cuando X9está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido;
cuando X i 9está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido;
y en donde al menos un grupo protector y/o al menos un agente de marcaje está opcionalmente conectado a dicho péptido en un extremo N y/o C-terminal.
También se describe un compuesto peptídico que comprende un compuesto seleccionado de los compuestos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (XI) y Fórmula (XII):
Xi X2X3X4X5GVX6AKAGVX7NX8 FKSESY (I) (SEQ ID NO: 1)
(X9)nGVXi 0AKAGVXi i NXi 2 FKSESY (II) (SEQ ID NO: 2)
YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO: 3)
YKXi 8 LRR(Xi 9)nPLRDPALRX20X2 i L (IV) (SEQ ID NO: 4)
IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO: 5)
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO: 6)
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO: 7)
GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO: 8)
GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO: 9)
YKSLRRKAPRWDAPLRDP ALRQLL (XI) (SEQ ID NO: 11)
YKSLRRKAPRWDA YLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO: 12)
YKSLRRKAPRWDA YLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO: 13)
en donde
Xi , X2 , X3 , X4 , X5 , X6 , X7 , X8 , X9 , X10, X11, X12, X13, X14, X15, X18 y X19 se seleccionan independientemente de cualquier aminoácido;
X16, X17, X20 y X21 se seleccionan independientemente de Q, P, Y, I y L;
n es 0, 1,2, 3, 4 o 5;
cuando X9está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido;
cuando X i 9está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido;
y en donde al menos un grupo protector y/o al menos un agente de marcaje está opcionalmente conectado a dicho péptido en un extremo N y/o C-terminal.
En un aspecto adicional descrito en la presente descripción, hay un compuesto conjugado que tiene la fórmula A-(B)n,
en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
A es un compuesto peptídico como se define en la presente descripción, en donde dicho péptido está opcionalmente protegido por un grupo protector; y
B es al menos un agente terapéutico, en donde B está conectado a A.
En un aspecto adicional descrito en la presente descripción, hay un compuesto conjugado que tiene la fórmula A-(B)n,
en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
A es un compuesto peptídico como se define en la presente descripción, en donde dicho péptido está opcionalmente protegido por un grupo protector; y
B es al menos un agente terapéutico, en donde B está conectado a A en una amina libre de dicho compuesto peptídico, en una posición N-terminal de dicho compuesto peptídico, en un -SH libre de dicho compuesto peptídico o en un carboxilo libre de dicho compuesto peptídico.
Un aspecto adicional descrito en la presente descripción es un compuesto conjugado que tiene la fórmula de A-(B)n, en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
A es un compuesto peptídico como se define en la presente descripción, en donde dicho péptido está opcionalmente protegido por un grupo protector; y
B es al menos un agente terapéutico, en donde B está conectado a A en una amina libre de un residuo de lisina de dicho compuesto peptídico, opcionalmente mediante un enlazador, o en una posición N-terminal de dicho compuesto peptídico, opcionalmente mediante un enlazador.
También se describe un proceso para preparar el compuesto conjugado descrito en la presente descripción, el proceso que comprende:
hacer reaccionar un enlazador junto con dicho agente terapéutico para obtener un intermediario;
purificar opcionalmente dicho intermediario;
hacer reaccionar dicho intermediario junto con dicho compuesto peptídico para obtener dicho compuesto conjugado en el que dicho agente terapéutico está conectado a dicho compuesto peptídico a través de dicho enlazador; y
purificar opcionalmente dicho compuesto conjugado;
en donde el agente terapéutico está conectado al compuesto peptídico en una amina libre de un residuo de lisina o en un N-terminal; y en donde el compuesto peptídico comprende 1, 2, 3 o 4 moléculas de agente terapéutico conectadas al mismo.
También se describe un método para tratar un cáncer que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite.
También se describe un método para tratar un cáncer que implica la expresión de la sortilina que comprende poner en contacto al menos una célula cancerosa que expresa sortilina con al menos un compuesto como se define en la presente descripción.
También se describe un método para tratar una enfermedad que implica la expresión de la sortilina que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto como se definió en la presente descripción.
También se describe el uso de un compuesto descrito en la presente descripción para tratar un cáncer.
También se describe una biblioteca que comprende al menos dos de los compuestos descritos en la presente descripción.
También se describe un liposoma, grafeno o nanopartícula que comprende al menos un compuesto como se define en la presente descripción.
También se describe un liposoma, grafeno o nanopartícula recubiertos con al menos un compuesto como se define en la presente descripción.
También se describe un liposoma, grafeno o nanopartícula que se carga con al menos un agente terapéutico o ARNip y el liposoma se recubre con al menos un compuesto como se define en la presente descripción.
También se describe un sistema de suministro de fármacos que comprende un liposoma, grafeno o nanopartícula como se define en la presente descripción.
También se describe el uso de tal liposoma, grafeno o nanopartícula como se define en la presente descripción, en un sistema de suministro de fármacos.
También se describe un multímero que comprende dos o más compuestos descritos en la presente descripción. Breve descripción de las figuras
Otras características y ventajas de la descripción resultarán más evidentes a partir de la siguiente descripción de aspectos específicos como se ilustra a modo de ejemplos en las figuras adjuntas en donde:
La Figura 1 muestra la interacción entre el péptido Katana y la sortilina mediante el uso de resonancia superficial de plasmones. El péptido Katana biotinilado se inmovilizó en un chip sensor de estreptavidina. A. Se inyectó la sortilina soluble sobre el péptido inmovilizado. La señal de la resonancia superficial de plasmones se monitoreó luego a lo largo del tiempo.
La Figura 2 es una representación de la técnica anterior de la bomba de salida, de la glicoproteína P (P-gp o MDR1) en la superficie celular. La bomba de salida, P-gp o MDR1, asociada con la resistencia a múltiples fármacos, se expresa en gran medida en la superficie celular de muchas células cancerosas y varios tejidos. La Figura 3 muestra la inmunodetección de la sortilina en líneas celulares de cáncer humano. Se separaron cantidades iguales de proteína de lisados de células cancerosas humanas mediante electroforesis en gel. Después de la electroforesis, las proteínas se transfirieron a la membrana de PVDF y se inmunodetectó la sortilina mediante el uso de un anticuerpo monoclonal dirigido contra este receptor de la sortilina. La sortilina podría visualizarse mediante un anticuerpo secundario dirigido contra IgG de ratón unido a peroxidasa de rábano picante y reactivos quimioluminiscentes.
La Figura 4 es una representación esquemática de (A) un fármaco anticanceroso conjugado con el péptido Katana y (B) un fitoquímico conjugado con el péptido Katana.
La Figura 5 muestra las estructuras de los conjugados fármaco-péptido Katana. Ejemplos de los conjugados de péptido Katana con docetaxel (A) y doxorrubicina (B) y de un conjugado fitoquímico de péptido Katana con curcumina (C). Pueden incorporarse diferentes números (n = 1 a 4) de agentes anticancerosos o moléculas fitoquímicas en el N-terminal y las lisinas del péptido Katana.
La Figura 6 muestra la captación de los fármacos sin conjugar y de los conjugados de fármaco Katana-péptido en las células MDCK transfectadas con MDR1. 6A. Las células MDCK-MDR1 se incubaron con 50 nM de [3H]-Docetaxel o del conjugado [125I]-péptido Katana-docetaxel (KBA105) durante 1 hora a 37 °C en presencia o ausencia del inhibidor de la P-gp (MDR1) ciclosporina A (CsA) (10 pM). 6B. Las células MDCK-MDR1 se incubaron con 50 nM de [14C]-Doxorrubicina o del conjugado [125I]-péptido Katana-Doxorrubicina (KBB106) durante 1 hora a 37 °C en presencia o ausencia de CsA (10 pM). Después de la incubación, las células se lavaron y se cuantificó la radioactividad acumulada en las células. Los resultados se expresaron en términos de captación en fmol/mg de proteína.
La Figura 7 muestra la captación del conjugado de docetaxel y Katana radiomarcado (KBA105) en células cancerosas SKOV3 (Figura 7A) y SK-MEL28 (Figura 7B). Las células se incubaron durante hasta 2 horas con los compuestos radiomarcados. Después de la incubación, las células se lavaron 3 veces con PBS y luego se cuantificó la radioactividad acumulada. Los resultados se expresaron en términos de captación (fmol/mg de proteína) en función del tiempo.
La Figura 8 muestra que la captación del conjugado de Katana Doxorrubicina (KBB106) se reduce en células en las que se reduce la expresión de la sortilina o por ligandos de la sortilina. A. Se transfectaron las células cancerosas de ovario con ARNip de la sortilina (siSortilina) durante 24 horas y luego se incubaron con KBB106. La acumulación de KBB106 se monitoreó mediante la liberación de doxorrubicina fluorescente en función del tiempo. B. Se incubaron las células cancerosas de ovario con KBB106 en presencia o ausencia del ligando de la sortilina (péptido Katana, progranulina). La acumulación de KBB106 se estimó mediante la liberación de la doxorrubicina fluorescente.
La Figura 9 muestra que el conjugado de docetaxel induce una muerte celular mejor y sostenida de las células cancerosas de ovario. 9A. El efecto de KBA105 sobre la apoptosis de las células cancerosas de ovario (SKOV3) se comparó con el del docetaxel. Después de la incubación, las células se lavaron y se tiñeron para anexina V.
9B. El docetaxel conjugado induce una apoptosis más fuerte que el docetaxel sin conjugar. Este nivel de apoptosis es similar a la medida del docetaxel en presencia del inhibidor de la P-gp (MDR1), ciclosporina A (CsA). 9C. Potencial apoptótico aumentado dependiente de la dosis por KBA015 en comparación con el docetaxel. Las células se incubaron durante 5 horas con una concentración creciente de KBA105 o docetaxel y luego se determinaron los niveles de apoptosis. Los resultados se expresan en términos de porcentaje de apoptosis en función de la concentración de fármaco.
La Figura 10 muestra el efecto de los conjugados Katana-fármaco sobre la apoptosis de células cancerosas de ovario, piel y mama. Las células cancerosas se incubaron durante 5 horas con 2 pM de conjugados Katanafármaco o docetaxel o cabazitaxel sin conjugar. Después de la incubación, las células se lavaron y se tiñeron para Anexina V. Los resultados se expresan en términos de porcentaje de apoptosis para los diferentes fármacos.
La Figura 11 muestra la inversión del efecto del conjugado Katana-fármaco sobre la apoptosis de células cancerosas por péptido sin conjugar y ligandos de la sortilina. Se incubaron las células cancerosas de ovario (SKOV3) durante 5 horas con 2 pM de los conjugados de docetaxel-fármaco Katana KBA-105 (11A) y KBA-201 (11B) en ausencia o presencia de péptido libre, neurotensina (NT) y progranulina. Después de la incubación, las células se lavaron y se tiñeron para Anexina V. Los resultados se expresan en términos de porcentaje de apoptosis de las células cancerosas SKOV3.
La Figura 12 muestra un aumento de los efectos antimigratorios del docetaxel conjugado con el péptido Katana sobre las células cancerosas de ovario.
La Figura 13 es una serie de gráficos que proporcionan la validación del suministro de la plataforma Katana y la evidencia de la internalización mediada por receptor del docetaxel conjugado en células cancerosas de ovario. La incubación conjunta de neurotensina (13A) o el péptido Katana (péptido libre) (13B) con docetaxel no altera el efecto del docetaxel sobre la migración celular. Por el contrario, la adición del péptido libre o neurotensina al conjugado Katana-docetaxel invierte sus efectos sobre la migración de SKOV3. 13C. Los resultados muestran que el silenciamiento del gen de la sortilina con ARNip específico de la sortilina revierte el efecto del docetaxel conjugado (KBA105) sobre la migración de las células cancerosas de ovario.
La Figura 14 muestra el efecto de los conjugados Katana-fármaco sobre la migración de células cancerosas de ovario, piel y mama. Las células se incubaron durante 2 horas con diferentes conjugados de Katana Taxano y luego se realizó la migración celular. Todos los conjugados afectaron fuertemente la migración de las diversas células cancerosas.
La Figura 15 muestra el efecto de los conjugados Katana-fármaco sobre la migración de células cancerosas de ovario. 15A. Las células se incubaron durante 2 horas con una concentración creciente de doxorrubicina o doxorrubicina conjugada (KBB106) y se realizó la migración celular. 15B. Los resultados muestran que la Neurotensina (NT) y el péptido Katana (KBP106) invirtieron el efecto de KBB106 sobre la migración de células cancerosas de ovario (ES-2). 15C. La Progranulina (PGR), un ligando de la sortilina, también revirtió el efecto de la doxorrubicina conjugada (KBB106) sobre la migración de células cancerosas de ovario (ES-2).
La Figura 16 es una representación de la expresión relativa de la sortilina en cánceres de ovario y tumores cerebrales. 16A. La sortilina se detectó mediante transferencia Western en tejidos humanos normales y biopsias de cáncer de ovario (de Ghaemimanesh y otros 2014). Los resultados muestran que la sortilina se sobreexpresa en las biopsias de cáncer de ovario en comparación con los tejidos normales. Los niveles del gen de la sortilina se estimaron en muestras de ADNc (Origene; Rockville, MD, EE. UU.) de pacientes con diferentes grados de tumores cerebrales (16B) y de ovario (16C).
La Figura 17 es una representación de la técnica anterior de la expresión de la sortilina (SORT1) en cánceres humanos del sitio web Human Protein Atlas (http://www.proteinatlast.org).
La Figura 18 muestra la expresión de la sortilina en tejidos de ovario mediante inmunohistoquímica (IHC). 18A. La sortilina se sobreexpresa en el tumor de ovario primario y en la metástasis de ovario y es casi indetectable en el tejido de ovario sano no maligno. 18B. La sortilina también se detectó mediante IHC en una serie de tejido de ovario normal, tumores benignos, tumores limítrofes, tumores malignos, así como también en metástasis de cánceres de ovario. Los resultados indican que la expresión de la sortilina aumentó en función de sus fenotipos malignos y es mayor en las metástasis de ovario.
La Figura 19 es una representación de la farmacocinética del conjugado Docetaxel-péptido Katana (KBA-105). A los ratones se les inyectó el conjugado radiomarcado a 5 mg/kg. El plasma se colectó en diferentes puntos de tiempo, se contó la radioactividad y se graficaron los niveles plasmáticos en función del tiempo. A continuación, se extrajeron los parámetros farmacocinéticos de la curva mediante el uso del software «PK solutions».
La Figura 20 es un gráfico que muestra la concentración de docetaxel sin conjugar y conjugado en función del tiempo. Los ratones se inyectaron iv con [3H]-Docetaxel radiomarcado o [125I]-KBA105 radiomarcado a una dosis equivalente de docetaxel (Docetaxel = 2,2 mg/kg; KBA105 = 5 mg/kg). Se colectaron muestras de plasma en diferentes momentos y se cuantificó la radioactividad. Los resultados se expresaron en términos de concentración de KBA105 o de Docetaxel en el plasma en función del tiempo. Se estimó el área bajo la curva para el período de tiempo (AUC1-24) para KBA105 y Docetaxel mediante el uso del software GraphPad Prism. Se calculó que la relación entre el AUC1-24 para KBA105 y Docetaxel fue de alrededor de 35.
La Figura 21 muestra la distribución en el tejido de [125I]-Péptido Katana-Docetaxel. Se inyectaron ratones CD-1 con el conjugado radiomarcado a 5 mg/kg mediante inyecciones de bolo iv (21A) o 2,2 mg de docetaxel radiomarcado (21B). En los tiempos indicados (1 h, 6 h, 24 h), los ratones se sacrificaron y se perfundieron con solución salina durante 8 min. A continuación, se colectaron los tejidos y se midió la radioactividad. Los resultados se expresan en términos de ng/g de tejido.
La Figura 22 muestra el efecto de KBA105 y Docetaxel sobre los tumores subcutáneos de ovario. A los ratones se les implantaron en el flanco las células cancerosas SKOV3. El crecimiento tumoral se monitoreó por luminiscencia mediante el uso del sistema de obtención de imágenes de infrarrojo cercano de Carestream. Cuando los tumores alcanzaron una luminiscencia similar, los ratones se trataron con Docetaxel (22A) o KBA105 (22B) a una dosis equivalente de docetaxel (10 mg/kg/semana).
La Figura 23 muestra la cuantificación de la luminiscencia de la Figura 22. Los resultados se expresaron en términos de intensidad de luminiscencia en función de los días posteriores al tratamiento.
La Figura 24 es un gráfico que muestra el peso corporal de los ratones tratados con Docetaxel y KBA105 monitoreados durante los días de tratamiento. Los resultados indican que, a la dosis administrada, el Docetaxel tiene un fuerte efecto sobre el peso corporal. Por el contrario, a la dosis equivalente de Docetaxel, KBA105 no tiene ningún efecto sobre el peso corporal de los ratones. Estos resultados indican que a una dosis equivalente de docetaxel, KBA105 se tolera mejor.
La Figura 25 muestra el efecto de la doxorrubicina conjugada (KBB106) y la doxorrubicina sin conjugar sobre tumores subcutáneos de ovario. 25A. A los ratones se les implantaron en el flanco células cancerosas de ovario ES-2. El crecimiento tumoral se midió mediante el uso de un calibre. Cuando los tumores alcanzaron un volumen tumoral de aproximadamente 150 mm3, los ratones se trataron con Doxorrubicina o KBB106 a una dosis equivalente de Doxorrubicina (6 mg/kg/semana). 25B. Los resultados muestran un aumento del volumen tumoral en el día 14 posterior al tratamiento en ratones tratados con doxorrubicina o KBB106 en comparación con el grupo de vehículo. 25C. Debido a la eficacia y tolerabilidad de KBB106, los tratamientos de ratones con el conjugado continuaron hasta el día 66 posterior al tratamiento.
La Figura 26 muestra el efecto de la doxorrubicina conjugada (KBB106) sobre los tumores subcutáneos de ovario. 26A. A los ratones se les implantaron en el flanco células cancerosas de ovario SKOV3. Cuando los tumores alcanzaron un volumen de aproximadamente 150 mm3, los ratones se trataron con KBB106 (18 mg/kg/semana) como indican las flechas. Los resultados muestran la progresión del volumen tumoral (se restó el volumen tumoral inicial en el DO) en ratones tratados con KBB106 en comparación con el grupo de vehículo.
26B. Se monitoreó el peso corporal de los ratones durante los tratamientos. La ausencia de pérdida de peso corporal en ratones tratados con KBB106 sugiere que los tratamientos fueron bien tolerados.
La Figura 27 muestra el efecto del docetaxel conjugado (KBA106) y el docetaxel sin conjugar sobre los tumores subcutáneos de mama. 27A. A los ratones se les implantaron en el flanco células cancerosas de mama MDA-MB231 que expresan luciferasa. El crecimiento tumoral por luminiscencia se visualizó mediante el uso de un sistema de obtención de imágenes in vivo de Carestream. Los ratones se trataron con el vehículo, docetaxel (15 mg/kg/semana) o KBA106 (50 mg/kg/semana). Se restó la intensidad de luminiscencia inicial. 27B. Los resultados muestran la carga tumoral residual evaluada por la luminiscencia restante asociada con las células cancerosas en el día 74. No hubo ningún valor disponible (N/A) para los ratones tratados con el vehículo, ya que todos los ratones fueron sacrificados porque el tamaño de sus tumores alcanzó el límite del punto final. 27C. Los resultados de luminiscencia tumoral se expresaron en términos de porcentaje de progresión en el D74 posterior al tratamiento en comparación con la luminiscencia tumoral inicial. En el grupo de Docetaxel, la luminiscencia del tumor aumentó en un 100 % mientras que en el grupo tratado con KBA106 la luminiscencia disminuyó en un 100 %. En el grupo KBA106, no se detectó luminiscencia el día 74 posterior al tratamiento, lo que sugiere que no hay tumores residuales en estos ratones.
La Figura 28 muestra el efecto de la curcumina conjugada (KBC106) y la curcumina sin conjugar sobre la proliferación de células cancerosas. Se incubaron células cancerosas de mama (MDA-MB231) con concentraciones crecientes de KBC106 o curcumina. Después de 72 horas, se realizó un ensayo de incorporación de timidina para evaluar las propiedades antiproliferativas de ambas moléculas. Los valores de IC50 se extrajeron de las curvas antiproliferativas. Los resultados muestran que KBC106 tiene una actividad de antiproliferación más fuerte (aproximadamente 100 veces) contra estas células cancerosas de mama en comparación con la curcumina sin conjugar.
La Figura 29 muestra la captación dependiente de la sortilina preferencial de la curcumina conjugada (KBC106) en células cancerosas de ovario ES-2. A. Las células cancerosas se incubaron con KBC106 o curcumina. La captación de ambas moléculas se evaluó mediante imágenes de fluorescencia en vivo. Se detectó una mayor acumulación de fluorescencia para KBC1006, lo que indica una mejor internalización celular para el conjugado. B. La captación de KBC106 se monitoreó mediante la formación de imágenes de fluorescencia in vitro en presencia de los ligandos de la sortilina, neurotensina (NT) y progranulina, así como también de péptido Katana libre. La acumulación de KBC106 en células cancerosas de ovario fue inhibida por los ligandos de la sortilina. C. Los resultados de la acumulación de KBC106 se expresaron en términos de intensidad de fluorescencia de KBC106 en presencia o ausencia de los ligandos de la sortilina. Los datos demuestran la competencia farmacológica de la captación de KBC106 por los ligandos de la sortilina.
La Figura 30 es una demostración de que la curcumina conjugada (KBC106) induce la apoptosis de las células cancerosas.
La Figura 31 es una demostración de que la curcumina conjugada (KBC106) inhibe el crecimiento tumoral de tumores subcutáneos endometriales (MES). A los ratones se les implantaron en el flanco células cancerosas de endometrio (MES). El crecimiento tumoral se midió mediante el uso de un calibre. Cuando los tumores alcanzaron un volumen de alrededor de 150 mm3, los ratones se trataron con KBC106 a 60 mg/kg/dos veces por semana.
Descripción detallada de la descripción
El término "compuestos peptídicos" o "péptidos Katana", "péptido Katana Biopharma1' o "KBP", como se usa en la presente descripción, se refiere, por ejemplo, a péptidos derivados de proteínas bacterianas o de ligandos de receptores que se dirigen a receptores expresados en células cancerosas, que incluyen las células cancerosas resistentes a múltiples fármacos. Por ejemplo, los compuestos peptídicos pueden derivarse de proteínas bacterianas involucradas en la penetración celular o de los ligandos de la sortilina, por ejemplo, progranulina y neurotensina. En ciertos ejemplos, los compuestos peptídicos están conectados (por ejemplo, mediante un enlace covalente, un átomo o un enlazador) a al menos un agente terapéutico (tal como un agente anticanceroso o un fitoquímico), formando de esta manera un compuesto conjugado que puede usarse, por ejemplo, para tratar un cáncer. En ciertos otros ejemplos, pueden usarse compuestos peptídicos en la superficie de los liposomas. Por ejemplo, los compuestos peptídicos pueden usarse para recubrir liposomas o nanopartículas que pueden cargarse con al menos un agente terapéutico (tal como un agente anticanceroso o fitoquímico, o genes o ARNip).
El término "compuestos peptídicos de la familia 1 de péptidos Katana Biopharma" o "compuestos peptídicos de la familia 1 de KBP" se refiere a compuestos de péptidos derivados de proteínas penetrantes de células bacterianas. Por ejemplo, los compuestos peptídicos de la familia 1 de KBP pueden derivarse de una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos de IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (SEQ ID NO: 5). Más abajo se muestran los ejemplos no limitantes de compuestos peptídicos de la familia 1 de KBP:
Secuencias de aminoácidos
KBP- IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM - Fórmula (V) (representada por la SEQ ID NO: 5)
101
KBP- Succinil-IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY - Fórmula (XXXVI) (comprende la SEC ID
102 NO: 6 en donde un grupo succinilo está unido al extremo N-terminal)
KBP- IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (Biotina) - Fórmula (XXXVII) (comprende la SEC
103 ID NO: 7 en donde una molécula de biotina está conectada a la misma en el extremo C-terminal)
KBP- GVQAKAGVINMFKSESY - Fórmula (VIII) (representada por la SEQ ID NO: 8)
104
KBP- Acetil-GVRAKAGVRNMFKSESY - Fórmula (XXXVIII) (representada por la SEQ ID
105 NO: 14)
KBP- Acetil-GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY - Fórmula (XXXIX) (representada por la SEQ ID
106 NO: 15)
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-101 está representado por la secuencia de aminoácidos de IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (SEQ ID NO: 5).
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-102 está representado por la secuencia de aminoácidos de Succinil-IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY que comprende la secuencia peptídica de la SEQ ID NO: 6 en donde un grupo succinilo está unido al mismo en el extremo N-terminal.
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-103 está representado por la secuencia de aminoácidos de IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK(Biotina) que comprende la secuencia peptídica de la SEQ ID NO: 7 en donde una molécula de biotina está conectada al mismo en el extremo C-terminal.
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-104 está representado por la secuencia de aminoácidos de GVQAKAGVINMFKSESY (SEQ ID NO: 8).
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-105 está representado por la secuencia de aminoácidos de Acetil-GVRAKAGVRNMFKSESY (SEQ ID NO: 14).
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-106 está representado por la secuencia de aminoácidos de Acetil-GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (SEQ ID NO: 15).
El término "compuestos peptídicos de la familia 2 de péptidos Katana Biopharma" o "compuestos peptídicos de la familia 2 de KBP" se refiere a péptidos derivados de los ligandos de la sortilina, progranulina y neurotensina. Por ejemplo, los péptidos pueden derivarse de la progranulina humana, de rata o de ratón. Por ejemplo, los compuestos peptídicos de la familia 2 de KBP pueden derivarse de la progranulina humana, por ejemplo que tiene la secuencia de aminoácidos KCLRREAPRWdAp LRDPALRQLL (SEC ID NO: 19), de la progranulina de rata, por ejemplo que tiene la secuencia de aminoácidos KCLRKKTPRWDILLRDPAPRPLL (SEC ID NO: 20), de la progranulina de ratón, por ejemplo que tiene la secuencia de aminoácidos KCLRKKIPRWDMFLRDPVPRp Ll (SeQ ID NO: 21), o de la neurotensina, por ejemplo que tiene una secuencia de aminoácidos XLYENKPRRPYIL (SEQ ID NO: 22). Más abajo se muestran los ejemplos no limitantes de compuestos peptídicos de la familia 2 de KBP:
Secuencias de aminoácidos
KBP-201 Acetil-YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL - Fórmula (XXXX) (representada por la SEQ ID NO: 16) KBP-202 Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL - Fórmula (XXXXI) (representada por la SEQ ID NO: 17) KBP-203 Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL - Fórmula (XXXXII) (representada por la SEQ ID NO: 18) Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-201 está representado por la secuencia de aminoácidos de Acetil-YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 16).
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-202 está representado por la secuencia de aminoácidos de Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 17).
Como se usa en la presente descripción, el compuesto peptídico KBP-203 está representado por la secuencia de aminoácidos de Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (SEQ ID NO: 18).
El término "sortilina", como se usa en la presente descripción, se refiere a una glicoproteína de membrana neuronal de tipo 1, codificada por el gen SORT1, que pertenece a la familia de receptores de la proteína de clasificación vacuolar 10 (Vps10). La sortilina (también conocida como receptor 3 de neurotensina) se expresa abundantemente en los sistemas nerviosos central y periférico y también se expresa en otros tipos de tejidos. Por ejemplo, la expresión de la sortilina está regulada positivamente en varios cánceres que incluyen, por ejemplo, cáncer de ovario, mama, colon y próstata. La sortilina puede existir en dos formas, una forma de longitud completa (110 kDa) y una forma truncada (95 kDa), correspondiente a su dominio luminal grande (o ectodominio), que se ha detectado previamente en el medio sobrenadante de células que sobreexpresan sortilina (Navarro y otros, 2002). Los compuestos peptídicos y los compuestos conjugados que en la presente descripción se describen pueden tener una alta afinidad de unión a la sortilina y, por tanto, pueden dirigirse específicamente a células cancerosas que expresan o sobreexpresan la sortilina.
El término "compuesto" como se usa en la presente descripción se refiere a los compuestos de fórmulas (I), (II), (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII), (IX), (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV), (XVI), (XVII), (XVIII), (XIX), (XX), (XXI), (XXII), (XXIII), (XXIV) (XXV), (XXVI), (XXVII), (XXVIII), (XXIX), (XXX), (XXXI), (XXXII), (XXXIII), (XXXIV), (XXXV), (XXXVI), (XXXVIi), (XXXVIII), (XXXIX), (XXXX), (XXXXI) o (XXXXII) o a sales, solvatos, hidratos y/o profármacos farmacéuticamente aceptables de estos compuestos, isómeros de estos últimos compuestos, o mezclas racémicas de estos últimos compuestos, y/o composiciones preparadas con dichos compuestos como se indicó previamente en la presente descripción. La expresión "compuesto" también se refiere a las mezclas de los diversos compuestos descritos en la presente descripción.
Los compuestos de la presente descripción incluyen los profármacos. En general, tales profármacos serán derivados funcionales de estos compuestos que son fácilmente convertibles in vivo en el compuesto del que se deriva teóricamente. Los profármacos de los compuestos de la presente descripción pueden ser ésteres convencionales formados con un grupo hidroxi o amino disponible. Por ejemplo, un OH o nitrógeno disponible en un compuesto de la presente descripción puede acilarse mediante el uso de un ácido activado en presencia de una base y, opcionalmente, en un solvente inerte (por ejemplo, un cloruro de ácido en piridina). Algunos ésteres comunes que se han utilizado como profármacos son los ésteres fenílicos, ésteres alifáticos (C8-C24), ésteres de aciloximetilo, carbamatos y ésteres de aminoácidos. En ciertos casos, los profármacos de los compuestos de la presente descripción son aquellos en los que uno o más de los grupos hidroxi en los compuestos están enmascarados como grupos que pueden convertirse en grupos hidroxi in vivo. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de profármacos adecuados se describen, por ejemplo, en "Design of Prodrugs" ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
Los compuestos de la presente descripción incluyen formas radiomarcadas, por ejemplo, compuestos marcados por incorporación dentro de la estructura 2H, 3H, 14C, 15N, o un halógeno radioactivo tal como 125I. Puede prepararse un compuesto radiomarcado de los compuestos de la presente descripción mediante el uso de los métodos estándar conocidos en la técnica.
El término "cáncer", como se usa en la presente descripción, significa un cáncer primario o secundario e incluye un cáncer no metastásico y/o un cáncer metastásico. La referencia al cáncer incluye la referencia a las células cancerosas. Por ejemplo, el cáncer es cáncer de ovario, cáncer de cerebro, cáncer de mama, melanoma, cáncer colorrectal, glioblastoma, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de cabeza, cáncer gástrico, cáncer de riñón, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, cáncer urotelial, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, linfoma de Hodgkin, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de tejidos blandos, sarcoma óseo, cáncer de tiroides, cáncer de vejiga de células transicionales, tumor de Wilm, glioma, cáncer de páncreas o cáncer de bazo. El término "cáncer", como se usa en la presente descripción, comprende además cualquier cáncer que implique la expresión de la sortilina.
El término "agente terapéutico" como se usa en la presente descripción significa un agente capaz de producir un efecto terapéutico al inhibir, suprimir o reducir un cáncer (por ejemplo, según lo determinado por los síntomas clínicos o la cantidad de células cancerosas) en un sujeto en comparación con un control. Los ejemplos de agentes terapéuticos incluyen, por ejemplo, agentes anticancerosos y fitoquímicos.
El término "agente anticanceroso", como se usa en la presente descripción, significa un agente capaz de causar toxicidad en las células cancerosas. Por ejemplo, los taxanos, que se derivan de la corteza del árbol del tejo del Pacífico, Taxus brevifolia, pueden usarse como agentes anticancerosos. Los taxanos incluyen, por ejemplo, paclitaxel, docetaxel y cabazitaxel. Otros agentes anticancerosos incluyen, por ejemplo, los compuestos de antraciclina que actúan intercalando el ADN. Por ejemplo, las antraciclinas incluyen doxorrubicina y daunorrubicina.
El término "docetaxel" o "doce" como se usa en la presente descripción significa un agente anticanceroso que tiene la estructura:
Figure imgf000011_0001
o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, así como también sus mezclas. Por ejemplo, el docetaxel puede conjugarse con un compuesto peptídico de la presente descripción a través del átomo de oxígeno unido al átomo de carbono en la posición 2 de su cadena lateral. El docetaxel puede conectarse al compuesto peptídico directamente o mediante un enlazador.
El término "doxorrubicina" o "doxo", como se usa en la presente descripción, significa un agente anticanceroso que tiene la estructura:
Figure imgf000011_0002
o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, así como también sus mezclas. Por ejemplo, la doxorrubicina puede conjugarse con un compuesto peptídico de la presente descripción a través del átomo de oxígeno unido al átomo de carbono en la posición 14. La doxorrubicina puede conectarse al compuesto peptídico directamente o mediante un enlazador.
El término "cabazitaxel" o "cab", como se usa en la presente descripción, significa un agente anticanceroso que tiene la estructura:
Figure imgf000012_0001
o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, así como también sus mezclas. Por ejemplo, el cabazitaxel puede conjugarse con un compuesto peptídico de la presente descripción a través del átomo de oxígeno unido al átomo de carbono en la posición 2 de su cadena lateral. El cabazitaxel puede conectarse al compuesto peptídico directamente o mediante un enlazador.
El término "fitoquímico", como se usa en la presente descripción, significa compuestos químicos que se encuentran naturalmente en las plantas y que pueden usarse para tratar un cáncer. Los ejemplos de fitoquímicos incluyen, por ejemplo, curcumina, genisteína, resveratrol, epigalocatequina-(3)-galato (EGCG), piperina, sulforafano, quercetina, lupeol y p-caroteno. La curcumina (diferuloilmetano) es un pigmento amarillo presente en la especia cúrcuma (Curcuma longa) que se ha asociado con actividades antioxidantes, antiinflamatorias, anticancerosas, antivirales y antibacterianas, como lo indican más de 6000 citas (Hosseini, 2015). Otros fitoquímicos que pueden usarse incluyen, sin limitación, son los que se muestran más abajo:
Alcaloides Monoterpenos
Ácido clorogénico Geraniol
Teobromina Limoneno
Teofilina Organosulfuros
Antocianinas Alicina
Cianidina Glutatión
Malvidina Indol-3-Carbinol
Carotenoides Isotiocianatos
Beta-Caroteno Sulforafano
Luteína Otro
Licopeno Fitoquímicos
Cumestano Damnacantal
Flavan-3-oles Digoxina
Flavonoides Ácido fítico
Epicatequina Ácidos fenólicos
Catequinas Capsaicina
Hesperidina Ácido elágico
Isorhamnetina Ácido gálico
Kaempferol Ácido rosmarínico
Miricetina Ácido tánico
Naringina Fitoesteroles
Nobiletin Beta-sitosterol
Proantocianidinas Saponinas
Quercetina Estilbenos
Rutina Pterostilbeno
Tangeretina Resveratrol
Hidroxicinámico Triterpenoides
Ácidos Ácido ursólico
Ácido chicórico Xantofilas
Cumarina Astaxantina
Ácido ferúlico Beta-criptoxantina
Escopoletina
Isoflavonas
Daidzeína
Genisteína
Lignanos
Silimarina
Monofenoles
Hidroxitirosol
El término "curcumina" o "cur" como se usa en la presente descripción significa un fitoquímico que tiene la estructura:
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o sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos, así como también sus mezclas. Por ejemplo, la curcumina puede conjugarse con un compuesto peptídico de la presente descripción mediante un átomo de oxígeno de sus grupos fenol. La curcumina puede conectar al compuesto peptídico directamente o mediante un enlazador.
El término "compuestos conjugados" o "conjugados de péptido-fármaco" como se usa en la presente descripción se refiere a los compuestos que comprenden un compuesto peptídico descrito en la presente descripción conectado a al menos un agente terapéutico, opcionalmente mediante un enlazador. Los compuestos conjugados pueden comprender, por ejemplo, 1, 2, 3 o 4 moléculas de un agente terapéutico conectado a los mismos. Estas 1-4 moléculas de agente terapéutico pueden ser iguales o diferentes, es decir, podrían conectarse hasta cuatro agentes terapéuticos diferentes a los péptidos. El o los agentes terapéuticos están conectados al péptido mediante al menos un enlace covalente, al menos un átomo o al menos un enlazador. Los compuestos conjugados pueden usarse en el tratamiento de un cáncer. Los ejemplos de los compuestos conjugados incluyen, sin limitación, los compuestos conjugados que se muestran más abajo:
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El término "conjugación" como se usa en la presente descripción, se refiere, por ejemplo, a la preparación de un conjugado como se define anteriormente. Tal acción comprende conectar un compuesto peptídico junto con al menos un agente terapéutico, opcionalmente a través de un enlazador.
Por ejemplo, las siguientes son fórmulas químicas generales de algunos compuestos conjugados descritos en la presente descripción.
Conjugado docetaxel-péptido Katana:
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Conjugado doxorrubicina-péptido Katana:
Figure imgf000015_0002
Conjugado curcumina-péptido Katana:
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Por ejemplo, las siguientes son las estructuras químicas de algunos compuestos conjugados descritos en la presente descripción.
Fármaco docetaxel-KBP-102 (3:1) o KBA-102:
Figure imgf000015_0004
Fármaco docetaxel-KBP105 (2:1) o KBA-105:
Figure imgf000016_0001
Curcumina-KBP106 (2:1) o KBC-106:
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El término ''enlazador1' como se usa en la presente descripción significa una estructura química que conecta un compuesto peptídico descrito en la presente descripción con al menos un agente terapéutico. El enlazador puede conectar al compuesto peptídico en diferentes grupos funcionales de los compuestos peptídicos. Por ejemplo, el enlazador puede conectarse al compuesto peptídico en las aminas primarias (aminas (-NH2): este grupo existe en el extremo N-terminal de cada cadena polipeptídica (llamada alfa-amina) y en la cadena lateral de los residuos de lisina (Lys, K) (llamados épsilon-amina). Por ejemplo, el enlazador puede conectarse al compuesto peptídico en los carboxilos (-COOH): este grupo existe en el extremo C-terminal de cada cadena polipeptídica y en las cadenas laterales de ácido aspártico (Asp, D) y ácido glutámico (Glu, E). Por ejemplo, el enlazador puede conectar al compuesto peptídico en los sulfhidrilos (-SH): Este grupo existe en la cadena lateral de la cisteína (Cys, C). A menudo, como parte de la estructura secundaria o terciaria de una proteína, las cisteínas se unen entre sus cadenas laterales mediante enlaces disulfuro (-SS-). Estos deben reducirse a sulfhidrilos para que estén disponibles para la reticulación por la mayoría de los tipos de grupos reactivos. Por ejemplo, el enlazador puede conectarse al compuesto peptídico en los carbonilos (-CHO): Pueden crearse grupos cetona o aldehído en glicoproteínas mediante la oxidación de las modificaciones postraduccionales del polisacárido (glicosilación) con metaperyodato de sodio. Por ejemplo, el enlazador puede ser un enlazador escindible. Por ejemplo, el enlazador puede ser un enlazador no escindible.
La siguiente tabla resume la clase de reactividad y el grupo químico de algunos de los principales enlazadores para la conjugación química estándar:
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Por ejemplo, pueden usarse reticulantes homobifuncionales y heterobifuncionales. Por ejemplo, el suberato de disuccinimidilo (DSS) es un reticulante homobifuncional que tiene grupos éster de NHS reactivos con amina idénticos en cada extremo de un brazo espaciador corto. Por ejemplo, el 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo (Sulfo-SMCC) es un reticulante heterobifuncional que tiene un grupo éster sulfo-NHS reactivo con amina en un extremo y un grupo maleimida reactivo con sulfhidrilo en el extremo opuesto de un brazo espaciador de ciclohexano. Esto permite procedimientos de conjugación secuenciales de dos etapas. Entre los reticulantes homobifuncionales disponibles comercialmente se encuentran: BSOCOES (bis(2-[succinimidooxicarboniloxi]etil) sulfona; DPDPB (1,4-di-(3'-[2piridilditio]-propionamido) butano; DSS (suberato de disuccinimidilo); DST (tartrato de disuccinimidilo); sulfo DST (tartrato de sulfodisuccinimida); DSP (ditiobis(propionato de succinimidilo); DTSSP (3,3'-ditiobis(propionato de sulfosuccinimidilo); EGS (etilengligol bis(succinato de succinimidilo)); y BASED (bis(P-[4-azidosalicilamido]-etil)disulfuro yodado).
Los polipéptidos pueden conjugarse a través de una variedad de enlazadores, por ejemplo, grupos sulfhidrilo, grupos amino (aminas) o cualquier grupo reactivo apropiado. El enlazador puede ser un enlace covalente. El grupo enlazador puede comprender un brazo flexible, por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 átomos de carbono.
Los enlazadores ilustrativos incluyen, sin limitación, piridinodisulfuro, tiosulfonato, vinilsulfonato, isocianato, imidoéster, diazina, hidrazina, tiol, ácido carboxílico, enlazadores multipéptido y acetileno. Alternativamente, otros enlazadores que pueden usarse incluyen BS3[dis(sulfosuccinimidil)suberato] (que es un éster de N-hidroxisuccinimida homobifuncional que se dirige a las aminas primarias accesibles), NHS/EDC (N-hidroxisuccinimida y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (NHS/EDC permite la conjugación de grupos amina primaria con grupos carboxilo), sulfo-EMCS ([ácido N-£-maleimidocaproico]hidrazida (los sulfo-EMCS son grupos reactivos heterobifuncionales que son reactivos hacia grupos sulfhidrilo y amino), hidrazida (la mayoría de las proteínas contienen carbohidratos e hidrazida expuestos) es un reactivo útil para unir grupos carboxilo a aminas primarias).
Para formar enlaces covalentes, puede usar como grupo químicamente reactivo una amplia variedad de grupos carboxilo activos (por ejemplo, ésteres) en los que el resto hidroxilo es fisiológicamente aceptable a los niveles requeridos para modificar el péptido. Los agentes particulares incluyen, por ejemplo, N-hidroxisuccinimida (NHS), N-hidroxi-sulfosuccinimida (sulfo-NHS), maleimida-benzoil-succinimida (MBS), éster de gamma-maleimidobutiriloxisuccinimida (GMBS), ácido maleimido propiónico (MPA), ácido maleimido hexanoico (MHA) y ácido maleimido undecanoico (MUA).
Las aminas primarias son los principales objetivos de los ésteres de NHS; los ésteres de NHS reaccionan con aminas primarias para formar enlaces amida covalentes. Los grupos a-amina accesibles presentes en los extremos N-terminales de las proteínas y la £-amina de la lisina reaccionan con los ésteres de NHS. Por tanto, los compuestos conjugados descritos en la presente descripción pueden incluir un enlazador que tiene un éster de NHS conjugado con un amino N-terminal de un péptido o con una £-amina de la lisina. Se forma un enlace amida cuando el éster de NHS reacciona con las aminas primarias liberando N-hidroxisuccinimida. Los grupos reactivos que contienen succinimida pueden denominarse más simplemente grupos succinimidilo. En algunos ejemplos, el grupo funcional de la proteína será un grupo tiol y el grupo químicamente reactivo será un grupo que contenga maleimido tal como gamma-maleimida-butilamida (GMBA o MPA). Tales grupos que contienen maleimida pueden denominarse en la presente descripción grupos maleido.
Los enlazadores de amina a amina incluyen ésteres de NHS, imidoésteres y otros, ejemplos de los cuales se enumeran más abajo.
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El enlazador también puede ser un enlazador de sulfhidrilo a sulfhidrilo, tal como las maleimidas y piridilditioles que se enumeran más abajo.
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El enlazador puede ser un enlazador de amina a sulfhidrilo, que incluye compuestos de éster de NHS/maliemida. Más abajo se proporcionan los ejemplos de estos compuestos.
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El enlazador puede reaccionar con un grupo amino y una entidad no selectiva. Tales enlazadores incluyen enlazadores éster NHS/aril azida y éster NHS/diazirina, ejemplos de los cuales se enumeran más abajo.
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Los enlazadores ilustrativos de amina a carboxilo incluyen los compuestos de carbodiimida (por ejemplo, DCC (N,N-diciclohexilcarbodimida) y EDC (1-etil-3-[3-dimetilaminopropillcarbodiimida)). Los enlazadores ilustrativos de sulfhidrilo a no selectivos incluyen los compuestos de piridilditiol/aril azida (por ejemplo, APDP ((N-[4-(pazidosalicilamido)butill-3'-(2'-piridilditio)propionamida)). Los enlazadores ilustrativos de sulfhidrilo a carbohidrato incluyen los compuestos de maleimida/hidrazida (por ejemplo, BMPH ([ácido N-P-maleimidopropiónicolhidrazida), EMCH ([ácido N-E-maleimidocaproicolhidrazida), MPBH ácido 4-(4-N-maleimidofenil)butírico hidrazida) y KMUH (N-[ácido K-maleimidoundecanoicolhidrazida)) y los compuestos piridilditiol/hidrazida (por ejemplo, PDPH (3-(2-piridilditio)propionilhidrazida)). Los enlazadores ilustrativos de carbohidrato a no selectivos incluyen los compuestos de hidrazida/aril azida (por ejemplo, ABH (p-azidobenzoilhidrazida)). Los enlazadores ilustrativos de hidroxilo a sulfhidrilo incluyen los compuestos de isocianato/maleimida (por ejemplo, (N-[p-maleimidofenillisocianato)). Los enlazadores ilustrativos de amina a ADN incluyen los compuestos de éster NHS/psoraleno (por ejemplo, SPB ([4-(psoraleno-8-iloxi)l-butirato de succinimidilo)).
Para generar un punto de ramificación de complejidad variable en un péptido conjugado, el enlazador puede ser capaz de enlazar 3-7 entidades.
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TMEA y TSAT llegan a través de sus grupos maleimida con grupos sulfhidrilo. Los grupos hidroxilo y el grupo carboxi de THPP pueden reaccionar con las aminas primarias o secundarias. Otros enlazadores útiles se ajustan a la fórmula Y=C=N-Q-A-C(O)-Z, donde Q es un sistema de anillo homoaromático o heteroaromático; A es un enlace sencillo o un grupo divalente que se enlaza C1-30 sin sustituir o sustituido, Y es O o S; y Z es Cl, Br, I, N3 , N-succinimidiloxi, imidazolilo, 1-benzotriazoliloxi, OAr donde Ar es un grupo arilo activador deficiente en electrones, u OC(O)R donde R es -A-Q-N=C=Y o alquilo terciario C4 -20 (véase la patente de Estados Unidos Núm. 4,680,338).
Otros enlazadores útiles tienen la fórmula
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donde R1 es H, alquilo C1-6, alquenilo C2-6 , arilo o aralquilo C6-12 o estos acoplados con un orgánico divalente -O-, -S­ o
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donde R' es alquilo C1-6, r
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u otra estructura química que sea capaz de deslocalizar el par de electrones solitarios del nitrógeno adyacente y R4es un grupo reactivo colgante capaz de unir R3 a un vector peptídico o a un agente (véase por ejemplo la patente de Estados Unidos núm. 5,306,809).
El enlazador puede incluir al menos un residuo de aminoácido y puede ser un péptido de al menos o aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 20, 25, 30, 40 o 50 residuos de aminoácidos. Cuando el enlazador es un residuo de un solo aminoácido, puede ser cualquier aminoácido natural o no natural (por ejemplo, Gly o Cys). Cuando el enlazador es un péptido corto, puede ser un péptido rico en glicina (que tiende a ser flexible) tal como un péptido que tiene la secuencia [Gly-Gly-Gly-Gly-Ser]n donde n es un número entero de 1 a 6, inclusive (véase la patente de Estados Unidos núm. 7,271,149) o un enlazador peptídico rico en serina (véase la patente de Estados Unidos núm. 5,525,491). Los enlazadores de péptidos ricos en serina incluyen los de la fórmula [X-X-X-X-Gly]y donde hasta dos de las X son Thr, las X restantes son Ser e y es un número entero de 1 a 5, inclusive (por ejemplo, Ser-Ser-Ser-Ser-Gly, donde y es mayor que 1). Otros enlazadores incluyen los enlazadores rígidos (por ejemplo, PAPAP y (PT)nP, donde n es 2, 3, 4, 5, 6 o 7) y los enlazadores a-helicoidales (por ejemplo, A(EAAAK)nA, donde n es 1, 2, 3, 4 o 5).
El enlazador puede ser un enlazador alifático (por ejemplo, con un enlace amida al polipéptido y un enlace éster al agente terapéutico). Cuando se usa un enlazador alifático, puede variar con respecto a la longitud (por ejemploC1-C20) y las fracciones químicas que incluye (por ejemplo, un grupo amino o carbamato).
Los ejemplos de enlazadores de aminoácidos adecuados son ácido succínico, Lys, Glu y Asp, o un dipéptido tal como Gly-Lys. Cuando el enlazador es ácido succínico, un grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido, y el otro grupo carboxilo del mismo puede, por ejemplo, formar un enlace amida con un grupo amino del péptido o sustituyente. Cuando el enlazador es Lys, Glu o Asp, el grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido, y el grupo amino del mismo puede, por ejemplo, formar un enlace amida con un grupo carboxilo del sustituyente. Cuando se usa Lys como enlazador, puede insertarse un enlazador adicional entre el grupo s-amino de la Lys y el sustituyente. El enlazador adicional puede ser ácido succínico, que puede formar un enlace amida con el grupo s-amino de la Lys y con un grupo amino presente en el sustituyente. En un ejemplo, el enlazador adicional es Glu o Asp (por ejemplo, que forma un enlace amida con el grupo s-amino de la Lys y otro enlace amida con un grupo carboxilo presente en el sustituyente), es decir, el sustituyente es un residuo Ns-acilado de lisina.
El enlazador también puede ser un polipéptido ramificado. Los enlazadores peptídicos ramificados ilustrativos se describen en la patente de Estados Unidos núm. 6,759,509.
El enlazador puede proporcionar un enlace escindible (por ejemplo, un enlace tioéster) o un enlace no escindible (por ejemplo, un enlace maleimida). Por ejemplo, una proteína citotóxica puede unir a un enlazador que reacciona con las aminas libres modificadas, que están presentes en los residuos de lisina dentro del polipéptido y en el extremo amino terminal del polipéptido. Por tanto, los enlazadores útiles en los presentes compuestos conjugados pueden comprender un grupo que es reactivo con una amina primaria en el polipéptido o polipéptido modificado con el que está conjugado el resto del agente terapéutico. Más específicamente, el enlazador puede seleccionarse del grupo que consiste en monofluoro ciclooctina (MFCO), biciclo[6.1.0]nonino (BCN), N-succinimidil-S-acetiltioacetato (SATA), N-succinimidil-S-acetiltiopropionato (SATP), éster de maleimido y dibenzociclooctina (un éster de DBCO). Los ciclooctinos útiles, dentro de un enlazador dado, incluyen OCT, ALO, MOFO, DIFO, DIbO, BARAC, DIBAC y DIMAC.
El enlazador puede comprender un brazo flexible, tal como, por ejemplo, un brazo corto (<2 cadenas de carbono), un brazo de tamaño mediano (de 2-5 cadenas de carbono) o un brazo largo (3-6 cadenas de carbono).
La química de clic también puede usarse para la conjugación en un péptido (enlazadores DBCO, TCO, tetrazina, azida y alquino). Estas familias de enlazadores pueden ser reactivas frente a grupos amina, carboxilo y sulfhidrilo. Además, estos enlazadores también pueden biotinilarse, pegilarse, modificarse con un colorante de formación de imágenes fluorescente o fosforamidizarse para su incorporación en una secuencia de oligonucleótidos.
El término "intermediario", como se usa en la presente descripción, se refiere a un agente terapéutico que se ha hecho reaccionar con un enlazador formando de esta manera un intermediario o una forma activada del agente terapéutico. El intermediario puede hacerse reaccionar con un compuesto peptídico descrito en la presente descripción formando de esta manera un compuesto conjugado descrito en la presente descripción que puede usarse para tratar un cáncer.
El término "aminoácido" se refiere a los aminoácidos naturales (codificados genéticamente) o sintéticos y derivados comunes de los mismos, conocidos para los expertos en la técnica. Cuando se aplica a los aminoácidos, "estándar" o "proteinogénico" se refiere a los 20 aminoácidos codificados genéticamente en su configuración natural. De manera similar, cuando se aplica a los aminoácidos, "no estándar", "no natural" o "inusual" se refiere a la amplia selección de aminoácidos no naturales, raros o sintéticos, tales como los descritos por Hunt, S. en Chemistry and Biochemistry of the Amino Acids, Barrett, G.C., ed., Chapman y Hall: Nueva York, 1985. Algunos ejemplos de los aminoácidos no estándar incluyen los aminoácidos no alfa, D-aminoácidos.
Las abreviaturas usadas para los aminoácidos y la designación de péptidos siguen las reglas de laComisión de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB en J. Biol. Chem. 1972, 247, 977-983. Este documento ha sido actualizado: Biochem. J., 1984, 219, 345-373; Eur. J. Biochem., 1984, 138, 9-37; 1985, 152, 1; Int. J. Pept. Prot. Res., 1984, 24, siguiente a la p 84; J. Biol. Chem., 1985, 260, 14-42.;Pure Appl. Chem. 1984, 56, 595-624; Amino Acids and Peptides, 1985, 16, 387-410; y en Biochemical Nomenclature and Related Documents, 2da edición, Portland Press, 1992, pp 39-67. Las extensiones a las reglas se publicaron en el Boletín JCBN/NC-IUB 1985, 1986, 1989; véase Biochemical Nomenclature and Related Documents, 2da edición, Portland Press, 1992, pp 68-69.
El término "antagonista" se refiere a un compuesto que reduce al menos parte del efecto del ligando endógeno de una proteína, receptor, enzima, interacción o similar.
El término "inhibidor" se refiere a un compuesto que reduce la actividad normal de una proteína, receptor, enzima, interacción o similar.
El término "agonista inverso" se refiere a un compuesto que reduce la actividad de un receptor constitutivamente activo más abajo de su nivel basal.
El término "biblioteca" se refiere a una colección de compuestos que pueden usarse, por ejemplo, con fines de descubrimiento de fármacos. Por ejemplo, los compuestos de la biblioteca pueden ser compuestos peptídicos y/o compuestos conjugados descritos en la presente descripción.
El término "mezcla", como se usa en la presente descripción, significa una composición que comprende dos o más compuestos. En un ejemplo, una mezcla es una mezcla de dos o más compuestos distintos. En un ejemplo adicional, cuando se hace referencia a un compuesto como una "mezcla", esto significa que puede comprender dos o más "formas" de los compuestos, tales como sales, solvatos, profármacos o, en su caso, estereoisómeros del compuesto en cualquier relación. Un experto en la técnica comprenderá que un compuesto en una mezcla también puede existir como una mezcla de formas. Por ejemplo, un compuesto puede existir como un hidrato de una sal o como un hidrato de una sal de un profármaco del compuesto. Todas las formas de los compuestos descritos en la presente descripción están dentro del alcance de la presente solicitud.
El término "modulador" se refiere a un compuesto que imparte un efecto sobre un proceso o mecanismo biológico o químico. Por ejemplo, un modulador puede aumentar, facilitar, regular positivamente, activar, inhibir, disminuir, bloquear, prevenir, retrasar, desensibilizar, desactivar, regular negativamente, o de forma similar, un proceso o mecanismo biológico o químico. En consecuencia, un modulador puede ser un "agonista" o un "antagonista". Los procesos o mecanismos biológicos ilustrativos afectados por un modulador incluyen, pero no se limitan a, unión a enzima, unión al receptor y liberación o secreción de hormonas. Los procesos o mecanismos químicos ilustrativos afectados por un modulador incluyen, pero no se limitan a, catálisis e hidrólisis.
El término "péptido" se refiere a un compuesto químico que comprende al menos dos aminoácidos unidos covalentemente entre sí mediante el uso de enlaces amida.
El término "profármaco" como se usa en la presente descripción se refiere a un derivado de una forma activa de un compuesto o composición conocida cuyo derivado, cuando se administra a un sujeto, se convierte gradualmente en la forma activa para producir una mejor respuesta terapéutica y/o un nivel de toxicidad reducida. En general, los profármacos serán derivados funcionales de los compuestos descritos en la presente descripción que son fácilmente convertibles in vivo en el compuesto del que se deriva teóricamente. Los profármacos incluyen, sin limitación, ésteres de acilo, carbonatos, fosfatos y uretanos. Estos grupos son ilustrativos y no exhaustivos, y un experto en la técnica podría preparar otras variedades conocidas de profármacos. Los profármacos pueden formarse, por ejemplo, con grupos hidroxi, tiol, amino o carboxilo disponibles. Por ejemplo, los OH y/o NH2 disponibles en los compuestos de la descripción pueden acilarse mediante el uso de un ácido activado en presencia de una base y, opcionalmente, en un solvente inerte (por ejemplo, un cloruro de ácido en piridina). Algunos ésteres comunes que se han utilizado como profármacos son los ésteres fenílicos, ésteres alifáticos (C1-C24), ésteres de aciloximetilo, carbamatos y ésteres de aminoácidos. En ciertos casos, los profármacos de los compuestos de la descripción son aquellos en los que los grupos hidroxi y/o amino de los compuestos están enmascarados como grupos que pueden convertirse en grupos hidroxi y/o amino in vivo. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de los profármacos adecuados se describen, por ejemplo, en "Design of Prodrugs" ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
El término "grupo protector" se refiere a cualquier compuesto químico que pueda usarse para evitar que un grupo funcional potencialmente reactivo, tal como una amina, un hidroxilo o un carboxilo, en una molécula sufra una reacción química mientras se produce un cambio químico en otra parte de la molécula. Para los expertos en la técnica son conocidos varios de estos grupos protectores y pueden encontrarse ejemplos enProtective Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene y P. G. Wuts, ed, John Wiley & Sons, Nueva York, 4ta edición, 2006, 1082 pp, ISBN 9780471697541. Los ejemplos de grupos protectores de amino incluyen, pero no se limitan a, ftalimido, tricloroacetilo, benciloxicarbonilo, terc butoxicarbonilo y adamantil-oxicarbonilo. En algunos ejemplos, los grupos protectores de amino son grupos protectores de aminocarbamato, que se definen como un grupo protector de amino que cuando se une a un grupo amino forma un carbamato. En otros ejemplos, los grupos protectores de aminocarbamato son aliloxicarbonilo (Alloc), benciloxicarbonilo (Cbz), 9 fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc), tercbutoxicarbonilo (Boc) y a,a dimetil-3,5 dimetoxibenciloxicarbonilo (Ddz). Para una discusión reciente de los grupos protectores de nitrógeno más nuevos, véase: Tetrahedron 2000, 56, 2339-2358. Los ejemplos de grupos protectores de hidroxilo incluyen, pero no se limitan a, acetilo, terc-butildimetilsililo (TBDMS), tritilo (Trt), terc-butilo y tetrahidropiranilo (THP). Los ejemplos de grupos protectores de carboxilo incluyen, pero no se limitan a, éster metílico, éster terc-butílico, éster bencílico, éster trimetilsililetílico y éster 2,2,2-tricloroetílico.
El término "identidad de secuencia", como se usa en la presente descripción, se refiere al porcentaje de identidad de secuencia entre dos secuencias de polipéptidos o dos secuencias de ácidos nucleicos. Para determinar el por ciento de identidad de dos secuencias de aminoácidos o de dos secuencias de ácido nucleico, las secuencias se alinean para propósitos de una comparación óptima (por ejemplo, pueden introducirse interrupciones en la secuencia de una primera secuencia de aminoácidos o ácidos nucleicos para un alineamiento óptimo con una segunda secuencia de aminoácidos o ácido nucleico). Los residuos de aminoácidos o de nucleótidos en las posiciones de aminoácidos o en las posiciones de nucleótidos correspondientes se comparan después. Cuando una posición en la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente en la segunda secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición. El por ciento de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, % de identidad=número de posiciones idénticas solapadas/número total de posiciones.veces.100 %). En un ejemplo, las dos secuencias tienen la misma longitud. La determinación del por ciento de identidad entre dos secuencias puede lograrse mediante el uso de un algoritmo matemático. Un ejemplo preferido, no limitante de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de dos secuencias es el algoritmo de Karlin y Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.
87:2264-2268, modificado como en Karlin y Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5877. Tal algoritmo se incorpora en los programas NBLAST y XBLAST de Altschul, y otros (1990) J. Mol. Biol. 215:403. Las búsquedas de nucleótidos en BLAST pueden realizarse con el conjunto de parámetros del programa de nucleótidos NBLAST, por ejemplo, para puntuación=100, longitud de palabra=12 para obtener las secuencias de nucleótidos homólogas a unas moléculas de ácido nucleico descritas en la presente solicitud. Las búsquedas de proteínas en BLAST pueden realizarse con el conjunto de parámetros del programa XBLAST, por ejemplo, para puntuación 50, longitud de palabra=3 para obtener las secuencias de aminoácidos homólogas a una molécula proteica descrita en la presente descripción. Para obtener las alineaciones con interrupción para propósitos de comparación, puede utilizarse el Gapped BLAST como se describió en Altschul y otros, (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Alternativamente, puede usarse PSI BLAST para realizar una búsqueda iterada que detecta las relaciones distantes entre moléculas (Id.). Cuando se usan los programas BLAST, Gapped BLAST, y PSI-Blast, pueden usarse los parámetros previamente determinados de los respectivos programas (por ejemplo, XBLAST y NBLAST) (ver, por ejemplo, el sitio web de NCBI). Otro ejemplo preferido, no limitante de un algoritmo matemático utilizado para la comparación de secuencias es el algoritmo de Myers y Miller, 1988, CABIOS 4:11-17. Tal algoritmo se incorpora en el programa ALIGN (versión 2.0) que es parte del paquete de programas informáticos de alineación de secuencias GCG. Cuando se utiliza el programa ALIGN para comparar las secuencias de aminoácidos, pueden usarse una tabla de residuos ponderados PAM120, una penalización de longitud de interrupción de 12, y una penalización por interrupción de 4. El por ciento de identidad entre dos secuencias puede determinarse mediante el uso de técnicas similares a las descritas anteriormente, con o sin permitir interrupciones. En el cálculo del por ciento de identidad, se cuentan, típicamente, solo las coincidencias exactas.
La expresión "que consiste esencialmente en", como se usa en la presente descripción, pretende especificar la presencia de las características, elementos, componentes, grupos, números enteros y/o etapas, así como también aquellos que no afectan materialmente la característica básica y novedosas de las características, elementos, componentes, grupos, números enteros y/o etapas.
El término "química en fase sólida" se refiere a la realización de reacciones químicas en las que un componente de la reacción se une covalentemente a un material polimérico (soporte sólido como se define más abajo). Los métodos de reacción para realizar química en fase sólida se han vuelto más conocidos y establecidos fuera de los campos tradicionales de la química de péptidos y oligonucleótidos (Solid-Phase Synthesis: A Practical Guide, F. Albericio, ed., CRC Press, 2000, 848 pp, ISBN: 978-0824703592; Organic Synthesis on Solid Phase, 2da edición, Florencio Zaragoza Dorwald, Wiley-VCH, 2002, 530 pp, ISBN: 3-527-30603-X; Solid-Phase Organic Synthesis: Concepts, Strategies, and Applications, P. H. Toy, Y. Lam, ed, Wiley, 2012, 568 pp, ISBN: 978-0470599143).
El término "soporte sólido", "fase sólida" o "resina" se refiere a una matriz polimérica mecánica y químicamente estable utilizada para realizar la química en fase sólida. Esto se denota con "Resina", "P-" o el siguiente símbolo:
Figure imgf000023_0001
Los ejemplos de materiales poliméricos apropiados incluyen, pero no se limitan a, poliestireno, polietileno, polietilenglicol (PEG, que incluye, pero no se limita a, ChemMatrix® (Matrix Innovation, Quebec, Quebec, Canadá; J. Comb. Chem. 2006, 8, 213-220)), polietilenglicol injertado o unido covalentemente a poliestireno (también denominado PEG-poliestireno, TentaGel™, Rapp, W.; Zhang, L.; Bayer, E. In Innovations and Perspectives in Solid Phase Synthesis. Peptides, Polypeptides and Oligonucleotides; Epton, R., ed.; SPCC Ltd.: Birmingham, UK; p 205), poliacrilato (CLEAR™), poliacrilamida, poliuretano, PEGA [copolímero de polietilenglicol poli(N,N dimetilacrilamida),Tetrahedron Lett. 1992, 33, 3077-3080], celulosa, etc. Estos materiales pueden contener opcionalmente agentes químicos adicionales para formar enlaces reticulados para estabilizar mecánicamente la estructura, por ejemplo, poliestireno reticulado con divinilbenceno (DVB, normalmente 0,1-5 %, preferentemente 0,5-2 %). Este soporte sólido puede incluir como ejemplos no limitantes aminometilpoliestireno, hidroximetilpoliestireno, benzhidrilamina poliestireno (BHA), metilbenzhidrilamina (MBHA) poliestireno y otras cadenas principales poliméricas que contienen grupos funcionales químicos libres, más típicamente, NH2 u -OH, para posterior derivatización o reacción. El término también pretende incluir "Ultrarresinas" con una alta proporción ("carga") de estos grupos funcionales, tales como los preparados a partir de polietileniminas y moléculas de reticulación (J. Comb. Chem. 2004, 6, 340-349). Al final de la síntesis, las resinas generalmente se descartan, aunque se ha demostrado que pueden reciclarse (Tetrahedron Lett. 1975, 16, 3055).
En general, los materiales usados como resinas son polímeros insolubles, pero ciertos polímeros tienen una solubilidad diferencial en dependencia del solvente y también pueden emplearse para la química en fase sólida. Por ejemplo, el polietilenglicol puede utilizarse de esta manera ya que es soluble en muchos solventes orgánicos en los que pueden realizarse reacciones químicas, pero es insoluble en otros, tal como el éter dietílico. Por tanto, las reacciones pueden llevarse a cabo de forma homogénea en solución, luego el producto sobre el polímero se precipita mediante la adición de éter dietílico y se procesa como un sólido. Esto se ha denominado química de "fase líquida".
La expresión "farmacéuticamente aceptable" significa compatible con el tratamiento de sujetos tales como animales o seres humanos.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal de adición de ácido o una sal de adición de base que es adecuada o compatible con el tratamiento de sujetos tales como animales o seres humanos.
La expresión "sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente descripción significa cualquier sal orgánica o inorgánica no tóxica de cualquier compuesto de la presente descripción, o cualquiera de sus intermediarios. Los ácidos inorgánicos ilustrativos que forman las sales adecuadas incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico, así como también las sales metálicas tales como monohidrógeno ortofosfato de sodio e hidrógeno sulfato de potasio. Los ácidos orgánicos ilustrativos que forman las sales adecuadas incluyen los ácidos mono, di y tricarboxílicos tales como los ácidos glicólico, láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, benzoico, fenilacético, cinámico y salicílico, así como también los ácidos sulfónicos tales como los ácidos p-toluenosulfónico y metanosulfónico. Pueden formarse las sales mono o diácidas, y tales sales pueden existir en forma hidratada, solvatada o sustancialmente anhidra. En general, las sales de adición de ácido de los compuestos de la presente descripción son más solubles en agua y varios solventes orgánicos hidrófilos, y generalmente demuestran puntos de fusión más altos en comparación con sus formas de base libre. Un experto en la técnica conocerá la selección de la sal apropiada. Pueden usarse otras sales no farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, oxalatos, por ejemplo, en el aislamiento de los compuestos de la presente descripción, para uso en laboratorio o para la conversión posterior en una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable.
El término "sal de adición de base farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente descripción significa cualquier sal de adición de base orgánica o inorgánica no tóxica de cualquier compuesto ácido de la descripción, o cualquiera de sus intermediarios. Los compuestos ácidos de la descripción que pueden formar una sal de adición de base incluyen, por ejemplo, donde CO2H es un grupo funcional. Las bases inorgánicas ilustrativas que forman las sales adecuadas incluyen hidróxido de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio o bario. Las bases orgánicas ilustrativas que forman las sales adecuadas incluyen las aminas orgánicas alifáticas, alicíclicas o aromáticas tales como metilamina, trimetilamina y picolina o amoniaco. El experto en la técnica conocerá la selección de la sal apropiada. Pueden usarse otras sales de adición de base no farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, en el aislamiento de los compuestos de la descripción, para uso en laboratorio o para la conversión posterior en una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable.
La formación de una sal compuesta deseada se logra mediante el uso de técnicas estándar. Por ejemplo, el compuesto neutro se trata con un ácido o base en un solvente adecuado y la sal formada se aísla mediante filtración, extracción o cualquier otro método adecuado.
La formación de una sal compuesta deseada se logra mediante el uso de técnicas estándar. Por ejemplo, el compuesto neutro se trata con un ácido o base en un solvente adecuado y la sal formada se aísla mediante filtración, extracción o cualquier otro método adecuado.
El término "solvato", como se usa en la presente descripción, significa un compuesto o su sal farmacéuticamente aceptable, en donde se incorporan las moléculas de un solvente adecuado en la red cristalina. Un solvente adecuado es fisiológicamente tolerable a la dosis administrada. Los ejemplos de solventes adecuados son etanol, agua y similares. Cuando el agua es el solvente, la molécula se refiere como "hidrato". La formación de solvatos variará en dependencia del compuesto y el solvato. En general, los solvatos se forman al disolver el compuesto en el solvente apropiado y aislar el solvato al enfriar o mediante el uso de un antisolvente. El solvato se seca típicamente o azeotrópicamente bajo condiciones ambientales.
El término "sujeto" como se usa en la presente descripción incluye todos los miembros del reino animal, que incluyen los mamíferos tales como un ratón, una rata, un perro y un ser humano.
Los términos "adecuado" y "apropiado" significan que la selección del grupo o condiciones particulares dependerá de la manipulación sintética específica que va a realizarse y de la identidad de la molécula, pero la selección estaría dentro de la habilidad de una persona entrenada en la técnica. Todas las etapas del proceso descritas en la presente descripción deben realizarse en condiciones adecuadas para proporcionar el producto que se muestra. Una persona experta en la técnica comprenderá que todas las condiciones de reacción, que incluyen, por ejemplo, el solvente de reacción, el tiempo de reacción, la temperatura de reacción, la presión de reacción, la proporción de los reactivos y si la reacción debe realizarse o no en una atmósfera anhidra o inerte, pueden variar para optimizar el rendimiento del producto deseado y está dentro de su habilidad para hacerlo.
La expresión "cantidad terapéuticamente efectiva", "cantidad efectiva" o "cantidad suficiente" de un compuesto o composición de la presente descripción es una cantidad suficiente para, cuando se administra al sujeto, que incluye un mamífero, por ejemplo, un ser humano, efectúe resultados beneficiosos o deseados, incluidos los resultados clínicos y, como tal, una "cantidad terapéuticamente efectiva" o una "cantidad efectiva" depende del contexto en el que esté siendo aplicada. Por ejemplo, en el contexto del tratamiento del cáncer, es una cantidad del compuesto o composición suficiente para lograr tal tratamiento del cáncer en comparación con la respuesta obtenida sin la administración del compuesto o composición. La cantidad de un compuesto o composición dada de la presente descripción que corresponderá a una cantidad efectiva variará dependiente de varios factores, tales como el fármaco o compuesto dado, la formulación farmacéutica, la vía de administración, el tipo de enfermedad o trastorno, la identidad del sujeto o huésped que se está tratando, y similares, pero, no obstante, un experto en la técnica puede determinar de forma rutinaria. Además, como se usa en la presente descripción, una "cantidad terapéuticamente efectiva" o "cantidad efectiva" de un compuesto o composición de la presente descripción es una cantidad que inhibe, suprime o reduce un cáncer (por ejemplo, según lo determinado por los síntomas clínicos o la cantidad de células cancerosas) en un sujeto en comparación con un control.
Como se usa en la presente descripción, y como se entiende bien en la técnica, "tratamiento" o "que trata" es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados, que incluye los resultados clínicos. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados pueden incluir, pero no se limitan a, disminución de la progresión tumoral, disminución del tamaño del tumor, disminución de la tasa de crecimiento tumoral, disminución de la invasión del tumor y del potencial metastásico, alivio o mejora de uno o más síntomas o afecciones, disminución de la extensión de la enfermedad, estado de la enfermedad estabilizado (es decir, sin empeoramiento), prevención de la propagación de la enfermedad, retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" o "que trata" también puede significar prolongar la sobrevivencia en comparación con la sobrevivencia esperada si no se recibe tratamiento.
El término "tolerabilidad" o "tolerado" como se usa en la presente descripción significa un grado en el que un agente terapéutico puede ser soportado o aceptado por un sujeto tratado con el agente terapéutico. Por ejemplo, la tolerabilidad puede evaluarse al medir los diferentes parámetros tales como (i) mantenimiento o ausencia de pérdida de peso, (ii) duración del tratamiento soportado y (iii) disminución o ausencia de efectos secundarios. Por ejemplo, está bien establecido que un sujeto tolera un agente terapéutico cuando no se observa pérdida de peso durante el tratamiento mediante el uso de tal agente terapéutico.
El término "administrado" o "administrar" como se usa en la presente descripción significa la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o composición de la aplicación a una célula in vitro (por ejemplo, un cultivo celular) o in vivo (por ejemplo, en un sujeto).
Para comprender el alcance de la presente descripción, el término "que comprende" y sus derivados, como se usa en la presente descripción, pretenden ser términos abiertos que especifican la presencia de las características, elementos, componentes, grupos, números enteros y/o etapas, pero no excluya la presencia de otras características, elementos, componentes, grupos, números enteros y/o etapas no declaradas. Lo anterior también se aplica a palabras que tienen significados similares, tal como los términos "que incluye", "que tiene" y sus derivados. Finalmente, términos de grado tales como "sustancialmente", "aproximadamente" y "alrededor de" como se usan en la presente descripción significan una cantidad razonable de desviación del término modificado de manera que el resultado final no cambie significativamente. Estos términos de grado pueden interpretarse como que incluyen una desviación de al menos ±5 % del término modificado si esta desviación no niega el significado del término que modifica.
Como se usa en esta descripción y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un," "una" y "el/la" incluyen las referencias en plural a menos que el contenido lo dicte claramente de cualquier otra manera. Así, por ejemplo, una composición que contiene "un compuesto" incluye una mezcla de dos o más compuestos. Además, debería señalarse que el término "o" se emplea generalmente en su sentido de inclusión "y/o" a menos que el contenido indique claramente de cualquier otra manera.
En las composiciones que comprenden un componente "adicional" o "segundo", el segundo componente como se usa en la presente descripción es químicamente diferente de los otros componentes o primer componente. Un "tercer" componente es diferente del otro, primero y segundo componentes, y los componentes enumerados adicionalmente o "adicionales" son de manera similar diferentes.
Se pretende que las definiciones y ejemplos descritos en secciones particulares sean aplicables a otros ejemplos que en la presente descripción se describen para los que son adecuados, como entendería un experto en la técnica.
La mención de los intervalos numéricos por puntos finales en la presente descripción incluye todos los números y fracciones subsumidos dentro de ese intervalo (por ejemplo, 1 a 5 incluye 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,90, 4 y 5). También debe entenderse que se supone que todos los números y fracciones de los mismos están modificados por el término "aproximadamente".
Recientemente se ha desarrollado una plataforma que permite el transporte de agentes terapéuticos al interior de las células cancerosas para nuevas terapias dirigidas contra tumores primarios y secundarios. Este enfoque utiliza los compuestos peptídicos derivados de las proteínas bacterianas o de ligandos de receptores expresados en células cancerosas (por ejemplo, sortilinas/sindecanos). En la presente descripción, se describe la conjugación de agentes anticancerosos y fitoquímicos con uno de estos compuestos peptídicos. Por ejemplo, los agentes anticancerosos, por ejemplo, docetaxel, cabazitaxel y doxorrubicina, pueden conjugarse con los compuestos peptídicos. Los fitoquímicos, por ejemplo, la curcumina, también pueden conjugarse con los compuestos peptídicos. Además, después de la conjugación con el péptido Katana, la captación del péptido Katana conjugado no se ve afectada por el inhibidor de la P-gp, ciclosporina A, lo que confirma que los péptidos Katana no son sustratos para las bombas de salida tal como la P-gp. Estos resultados indican además que estos conjugados de péptido-fármaco podrían usarse en otras aplicaciones fuera de la oncología. Además de inducir una mayor apoptosis tumoral en comparación con el agente terapéutico sin conjugar, los compuestos conjugados descritos en la presente descripción también pueden proporcionar una mayor tolerabilidad y una toxicidad reducida.
En la presente descripción se describen los compuestos peptídicos, así como también los compuestos conjugados que comprenden al menos un agente terapéutico conectado a un compuesto peptídico. Tales compuestos pueden usarse para el tratamiento del cáncer, por ejemplo, un cáncer que implica la expresión de la sortilina.
En consecuencia, se describe en la presente descripción un compuesto peptídico que tiene al menos un 80 % de identidad de secuencia con un compuesto que se selecciona de los compuestos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (lX), Fórmula (x ), Fórmula (XI), Fórmula (Xll) y Fórmula (XIII):
X1X2X3X4X5GVX6AKAGVX7NX8FKSESY (I) (SEQ ID NO: 1)
(X9)nGVX1üAKAGVXn NX12FKSESY (II) (SEQ ID NO: 2)
YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO: 3)
YKX18LRR(X19)nPLRDPALRX20X21L (IV) (SEQ ID NO: 4)
IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO: 5)
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO: 6)
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO: 7)
GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO: 8)
GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO: 9)
GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO: 10)
YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (XI) (SEQ ID NO: 11)
YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO: 12)
YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO: 13)
En donde
X1, X2 , X3 , X4 , X5 , X6 , X7 , X8 , X9 , X10, X11, X12, X13, X14, X15, X18 y X19 se seleccionan independientemente de cualquier aminoácido;
X16, X17, X20 y X21 se seleccionan independientemente de Q, P, Y, I y L;
n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
cuando X9 está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido;
cuando X19 está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido
y en donde al menos un grupo protector y/o al menos un agente de marcaje está opcionalmente conectado a dicho péptido en un extremo N y/o C-terminal.
Por ejemplo, el compuesto peptídico es un compuesto peptídico que comprende:
X1X2X3X4X5GVX6AKAGVX7NX8FKSESY (I) (SEQ ID NO 1) (X9)nGVX10AKAGVXn NX12FKSESY (II) (SEQ ID NO 2) YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO 3) YKX18LRR(X19)nPLRDPALRX20X21L (IV) (SEQ ID NO 4) IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO 5) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO 6) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO 7) GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO 8) GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO 9) GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO 10) YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (XI) (SEQ ID NO 11) YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO 12) o YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO 13).
Por ejemplo, el compuesto peptídico es un compuesto peptídico que consiste esencialmente en:
X1X2X3X4X5 GVX6AKAGVX7 NX8 FKSESY (I) (SEQ ID NO 1) (X9)nGVX10AKAGVXn NX12FKSESY (II) (SEQ ID NO 2) YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO 3) YKX18LRR(X19)nPLRDPALRX20X21L (IV) (SEQ ID NO 4) IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO 5) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO 6) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO 7) GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO 8) GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO 9) GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO 10) YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (XI) (SEQ ID NO 11) YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO 12) o YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO 13).
Por ejemplo, el compuesto peptídico es un compuesto peptídico que consiste en:
X1X2X3X4X5 GVX6AKAGVX7 NX8 FKSESY (I) (SEQ ID NO 1) (X9)nGVX1üAKAGVXn NX12FKSESY (II) (SEQ ID NO 2) YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO 3) YKX18LRR(X19)nPLRDPALRX20X21L (IV) (SEQ ID NO 4) IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO 5) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO 6) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO 7) GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO 8) GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO 9) GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO 10) YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (XI) (SEQ ID NO 11) YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO 12) o YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO 13).
También se describe un compuesto peptídico que comprende un compuesto que se selecciona de los compuestos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (X), Fórmula (XI), Fórmula (XII) y Fórmula (XIII):
X1X2X3X4X5GVX6AKAGVX7NX8FKSESY (I) (SEQ ID NO: 1)
(Xg)nGVXi0 AKAGVXi i NX12FKSESY (II) (SEQ ID NO: 2) YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (III) (SEQ ID NO: 3) YKX18LRR(X19)nPLRDPALRX20X21L (IV) (SEQ ID NO: 4) IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (V) (SEQ ID NO: 5) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (VI) (SEQ ID NO: 6) IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK (VII) (SEQ ID NO: 7) GVQAKAGVINMFKSESY (VIII) (SEQ ID NO: 8) GVRAKAGVRNMFKSESY (IX) (SEQ ID NO: 9) GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO: 10) YKSLRRKAPRWDAPLRDP ALRQLL (XI) (SEQ ID NO: 11)
YKSLRRKAPRWDA YLRDPALRQLL (XII) (SEQ ID NO: 12)
YKSLRRKAPRWDA YLRDPALRPLL (XIII) (SEQ ID NO: 13)
En donde
X1, X2 , X3 , X4 , X5 , X6 , X7 , X8 , X9 , X10, X11, X12, X13, X14, X15, X18 y X19 se seleccionan independientemente de cualquier aminoácido;
X16, X17, X20 y X21 se seleccionan independientemente de Q, P, Y, I y L;
n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
cuando X9 está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido;
cuando X19 está presente más de una vez, cada uno de dichos X9se selecciona independientemente de cualquier aminoácido
y en donde al menos un grupo protector y/o al menos un agente de marcaje está opcionalmente conectado a dicho péptido en un extremo N y/o C-terminal.
Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico que se selecciona de los compuestos peptídicos de Fórmula (I), Fórmula (II), Fórmula (III), Fórmula (IV), Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX), Fórmula (X), Fórmula (XI), Fórmula (XII) y Fórmula (XIII).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (I) o la SEQ ID NO: 1.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (II) o la SEQ ID NO: 2.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (III) o la SEQ ID NO: 3.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (IV) o la SEQ ID NO: 4.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (V) o la SEQ ID NO: 5.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (VI) o la SEQ ID NO: 6.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (VII) o la SEQ ID NO: 7.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (VIII) o la SEQ ID NO: 8.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (IX) o la SEQ ID NO: 9.
Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (X) o la SEQ ID NO: 10.
En particular, la presente invención se refiere a un compuesto peptídico como se define en las reivindicaciones. Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (XI) o la SEQ ID NO: 11.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (XII) o la SEQ ID NO: 12.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico tiene al menos 80 %, al menos 81 %, al menos 82 %, al menos 83 %, al menos 84 %, al menos 85 %, al menos 86 %, al menos 87 %, al menos 88 %, al menos 89 %, al menos 90 %, al menos 91 %, al menos 92 %, al menos 93 %, al menos 94 %, al menos 95 %, al menos 96 %, al menos 97 %, al menos 98 % o al menos 99 % de identidad de secuencia con un compuesto peptídico representado por la Fórmula (XIII) o la SEQ ID NO: 13.
Por ejemplo, n es 0. Por ejemplo, n es 1. Por ejemplo, n es 2. Por ejemplo, n es 3. Por ejemplo, n es 4. Por ejemplo, n es 5.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (I) o la Fórmula (II).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (I) o la SEQ ID NO: 1.
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (II) o la SEQ ID NO: 2.
Por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (V), Fórmula (VI), Fórmula (VII), Fórmula (VIII), Fórmula (IX) o Fórmula (X).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (V).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (VI).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (VII).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (VIII).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (IX).
En una modalidad, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (X).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (III) o la Fórmula (IV).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (III).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (IV).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (XI), Fórmula (XII) o Fórmula (XIII). Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (XI).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (XII).
Solo por ejemplo, el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (XIII).
Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 3. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 5. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 7. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 9. En una modalidad, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12. Solo por ejemplo, el péptido está representado por la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 13.
Por ejemplo, al menos un grupo protector está conectado a dicho péptido en un extremo N y/o C-terminal.
Por ejemplo, un grupo succinilo está conectado al compuesto peptídico. Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de Succinil-IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY, correspondiente a la SEQ ID NO: 6 y que tiene un grupo succinilo unido al mismo en el extremo N-terminal.
Por ejemplo, un grupo acetilo está conectado al compuesto peptídico. Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de Acetil-GVRAKAGVRNMFKSESY (SeQ ID n O: 14). Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de Acetil-GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (SEQ ID NO: 15). Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de Acetil-YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 16). Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (SEQ iD NO: 17). Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (SEQ ID NO: 18).
Por ejemplo, al menos un agente de marcaje está conectado a dicho péptido en un extremo N y/o C-terminal.
La persona experta en la técnica comprenderá que pueden usarse los agentes de marcaje comúnmente usados. Por ejemplo, el agente de marcaje es una vitamina. Por ejemplo, el agente de marcaje es biotina.
Por ejemplo, el compuesto peptídico está biotinilado. Por ejemplo, el compuesto peptídico tiene la secuencia de IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK(Biotina), correspondiente a la SEQ ID NO: 7 y que tiene una molécula de biotina unida a la misma en el extremo C-terminal.
Por ejemplo, X16 se selecciona independientemente de Q, P, Y, I y L.
Por ejemplo, X16 es Q.
Por ejemplo, X16 es P.
Por ejemplo, Xi 6 es Y.
Por ejemplo, Xi 6 es I.
Por ejemplo, X17 se selecciona independientemente de Q, P, Y, I y L.
Por ejemplo, X17 es Q.
Por ejemplo, X17 es P.
Por ejemplo, X17 es Y.
Por ejemplo, X17 es I.
Por ejemplo, X20 se selecciona independientemente de Q, P, Y, I y L.
Por ejemplo, X20 es Q.
Por ejemplo, X20 es P.
Por ejemplo, X20 es Y.
Por ejemplo, X20 es I.
Por ejemplo, X21 se selecciona independientemente de Q, P, Y, I y L.
Por ejemplo, X21 es Q.
Por ejemplo, X21 es P.
Por ejemplo, X21 es Y.
Por ejemplo, X21 es I.
Por ejemplo, el compuesto peptídico se selecciona de:
X1X2X3X4X5GVX6AKAGVX7NX8 FKSESY (SEQ ID NO: 1)
(X9)nGVX10AKAGVXn NX12FKSESY (SEQ ID NO: 2)
YKX13LRRX14APRWDX15PLRDPALRX16X17L (SEQ ID NO: 3)
YKX18LRR(X19)nPLRDPALRX20X21L (SEQ ID NO: 4)
IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (SEQ ID NO: 5)
Succinil-IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY (que comprende la SEQ ID NO: 6 en donde
un grupo succinilo está unido al mismo en el extremo N-terminal);
IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK(Biotina) (que comprende la SEQ ID NO: 7 en donde una molécula de biotina está unida al mismo en el extremo C-terminal);
GVQAKAGVINMFKSESY (SEQ ID NO: 8);
Acetil-GVRAKAGVRNMFKSESY (SEQ ID NO: 14);
Acetil-GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (SEQ ID NO: 15);
Acetil-YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 16);
Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 17); y
Acetil-YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (SEQ ID NO: 18).
Por ejemplo, los compuestos peptídicos pueden modificarse en el C y/o N-terminal mediante la adición de uno o más residuos de aminoácidos para obtener o aumentar los sitios de unión preferenciales en el extremo terminal del péptido. Por ejemplo, el aminoácido puede ser cisteína. Por ejemplo, el aminoácido puede ser lisina.
Los compuestos peptídicos descritos en la presente descripción pueden conectarse, enlazarse, mezclarse o conjugarse con moléculas pequeñas, péptidos, péptidos anticancerosos, proteínas, oligonucleótidos, agentes de diagnóstico, agentes de formación de imágenes o radionúclidos, moléculas grandes tales como anticuerpos monoclonales, agentes terapéuticos tales como agentes anticancerosos y fitoquímicos o a sistemas de administración de fármacos que incluyen nanopartículas, liposomas, partículas de grafeno cargadas con un agente terapéutico, agente de formación de imágenes, gen, ARNip. Los compuestos conjugados resultantes pueden usarse como terapias mono o combinadas, por ejemplo, para tratar el cáncer.
En consecuencia, un segundo aspecto descrito en la presente descripción es un compuesto conjugado que tiene la fórmula de A-(B)n,
en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
A es un compuesto peptídico como se define en la presente descripción, en donde dicho péptido está opcionalmente protegido por un grupo protector; y
B es al menos un agente terapéutico, en donde B está conectado a A.
Un tercer aspecto descrito en la presente descripción es un compuesto conjugado que tiene la fórmula A-(B)n, en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
A es un compuesto peptídico como se definió en la presente descripción; y
B es al menos un agente terapéutico, en donde B está conectado a A en una amina libre de un residuo de lisina de dicho compuesto peptídico, opcionalmente mediante un enlazador, o en una posición N-terminal de dicho compuesto peptídico, opcionalmente mediante un enlazador.
En particular, la presente invención también se dirige a un compuesto conjugado como se definió en las reivindicaciones.
En una modalidad, B está conectado a A mediante un enlazador, opcionalmente un enlazador escindible.
Los agentes anticancerosos que pueden usarse incluyen, por ejemplo, agentes alquilantes, por ejemplo, mostazas de nitrógeno (melfalán, ciclofosfamida, ifosfamida), nitrosoureas, alquilsulfonatos, etileniminas, triazeno, metilhidrazinas y complejos de coordinación de platino tales como cisplatino, carboplatino, oxaliplatino.
Por ejemplo, los antimetabolitos, tales como los antagonistas de folato (tal como el metotrexato), los antagonistas de purina y los antagonistas de pirimidina (tal como el 5-fluorouracilo y la citabarina) pueden usarse como agentes anticancerígenos.
Por ejemplo, pueden usarse los productos naturales como agentes anticancerosos. Tales productos naturales incluyen los productos vegetales, por ejemplo, alcaloides de la vinca (tal como vincristina, vinblastina), taxanos (tal como paclitaxel, docetaxel y cabazitaxel), toxinas, epipodopilotoxinas (tal como etopósido) y camtotecinas (tal como irinotecán) y productos de microorganismos para ejemplo antibióticos (tal como doxorrubicina y bleomicina y enzimas tal como L-asparaginasa).
Otros agentes anticancerosos que pueden usarse incluyen, por ejemplo, maitansina, auristatina, dolastina, calicheamicina, emtansina, amanitina, pirrolobenzodiazepinas, tubulisinas, hidroxiurea, mesilato de imatinib, rituximab, epirrubicina, bortezomib, ácido zoledrónico, geftinib, leucovorina, pamidronato y gemcitabina.
Por ejemplo, las hormonas y antagonistas tales como corticosteroides (prednisona, dexametasona), estrógenos (etinilestradiol), antiestrógenos (tamoxifeno), derivados de progesterona (acetato de megestrol), andrógeno (propionato de testosterona), antiandrógeno (flutamida, bicalutamida), inhibidores de aromatasa (anastrazol), inhibidor de la 5-alfa reductasa (finasterida), análogos de GnRH (leuprolida, buserelina) y hormona de crecimiento, glucagón e inhibidor de insulina (octreótido) pueden usarse como agentes anticancerosos.
Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción pueden estar conectados a agentes anticancerosos usados para la terapia dirigida contra el cáncer, que incluyen, por ejemplo, inhibidores de tirosina quinasa (TKI) (por ejemplo, mesilato de imatinib, gefitinib, erlotinib, sorafenib, sunitinib, dasatinib, lapatinib, nilotinib y bortezomib) anticuerpos, anticuerpos monoclonales (mAB) (por ejemplo, rituximab, trastuzumab, alemtuzumab, cetuximab, bevacizumab e ipilimumab), inhibidores de la diana mecanicista de la rapamicina (mTOR) y conjugados anticuerpo-fármaco (por ejemplo, trastuzumab emtansina (T-MD1).
Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción pueden conectarse a los péptidos usados para la terapia del cáncer basados en péptidos tales como, por ejemplo, buserelina, gonadorelina, goserelina, histrelina, leuprolida, nafarelina, triptorelina, abarelix, cetrorelix, degarelix y ganirelix.
En otra modalidad, el agente terapéutico es un agente anticanceroso.
Por ejemplo, el agente anticanceroso es docetaxel, cabazitaxel, paclitaxel, doxorrubicina y daunomicina.
Por ejemplo, el agente anticanceroso es docetaxel.
Por ejemplo, el compuesto conjugado se selecciona de los compuestos de Fórmula (XIV), Fórmula (XV), Fórmula (XVI), Fórmula (XVII) y Fórmula (XVIII):
IK(docetaxel)LSGGVQAK(docetaxel)AGVINMFK(docetaxel)SESY (XIV)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 6 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo;
GVQAK(docetaxel)AGVINMFK(docetaxel)SESY (XV)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 8 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo;
GVRAK(docetaxel)AGVRNMFK(docetaxel)SESY (XVI)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 9 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo;
GVRAK(docetaxel)AGVRN(Nle)FK(docetaxel)SESY (XVII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 10 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo; y
YK(docetaxel)SLRRK(docetaxel)APRWDAPLRDPALRQL (XVIII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 11 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo.
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XIV).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XV).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XVI).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XVII).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XVIII).
En otro ejemplo, el compuesto conjugado se selecciona de:
Succinil-IK(docetaxel)LSGGVQAK(docetaxel)AGVINMFK(docetaxel)SESY (XIX)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 6 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo; y en donde un grupo succinilo está unido en el extremo N-terminal;
Acetil-GVRAK(docetaxel)AGVRNMFK(docetaxel)SESY (XX)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 14 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo;
Acetil-GVRAK(docetaxel)AGVRN(Nle)FK(docetaxel)SESY (XXI)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo; y
Acetil-YK(docetaxel)SLRRK(docetaxel)APRWDAPLRDPALRQLL (XXII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 16 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo.
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XIX).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XX).
En una modalidad, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXI).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXII).
En otro ejemplo adicional, el agente anticanceroso es doxorrubicina.
Por ejemplo, el compuesto conjugado se selecciona de los compuestos de Fórmula (XXIII), Fórmula (XXIV) y Fórmula (XXV):
GVQAK(doxorrubicina)AGVINMFK(doxorrubicina)SESY (XXIII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 8 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de doxorrubicina conectada al mismo;
GVRAK(doxorrubicina)AGVRN(Nle)FK(doxorrubicina)SESY (XXIV)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 10 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de doxorrubicina conectada al mismo; y
YK(doxorrubicina)SLRRK(doxorrubicina)APRWDAPLRDPALRQLL (XXV)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 11 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de doxorrubicina conectada al mismo.
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXIII).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXIV).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXV).
Por ejemplo, el compuesto conjugado puede seleccionarse de
Acetil-GVRAK(doxorrubicina)AGVRN(Nle)FK(doxorrubicina)SESY (XXVI)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de doxorrubicina conectada al mismo; y
Acetil-YK(doxorrubicina)SLRRK(doxorrubicina)APRWDAPLRDPALRQLL (XXVII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 16 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de doxorrubicina conectada al mismo.
En una modalidad, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXVI).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXVII).
Por ejemplo, el agente anticanceroso es cabazitaxel.
Por ejemplo, el compuesto conjugado se selecciona de los compuestos de Fórmula (XXVIII), Fórmula (XXIX) y (XXX):
GVRAK(cabazitaxel)AGVRN MFK(cabazitaxel)SESY (XXVIII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 9 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo;
GVRAK(cabazitaxel)AGVRN(Nle)FK(cabazitaxel)SESY (XXIX)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 10 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo;
y YK(cabazitaxel)SLRRK(cabazitaxel)APRWDAPLRDPALRQL (XXX)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 9 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo. En un ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXVIII).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXIX).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXX).
Por ejemplo, el compuesto conjugado puede seleccionarse de los compuestos de Fórmula (XXXI), Fórmula (XXXII) y (XXXIII):
Acetil-GVRAK(cabazitaxel)AGVRNMFK(cabazitaxel)SESY (XXXI)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 14 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo;
Acetil-GVRAK(cabazitaxel)AGVRN(Nle)FK(cabazitaxel)SESY (XXXII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo; y
Acetil-YK(cabazitaxel)SLRRK(cabazitaxel)APRWDAPLRDPALRQLL (XXXIII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 16 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo.
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXXI).
En una modalidad, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXXII).
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXXIII).
Otros agentes terapéuticos que pueden usarse incluyen los fitoquímicos.
Por ejemplo, el fitoquímico es la curcumina.
Por ejemplo, el compuesto conjugado está representado por la Fórmula (XXXIV):
GVRAK(curcumina)AGVRN(Nle)FK(curcumina)SESY (XXXIV) que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 10 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de curcumina conectada al mismo.
Por ejemplo, el compuesto conjugado puede estar representado por la Fórmula (XXXV):
Acetil-GVRAK(curcumina)AGVRN(Nle)FK(curcumina)SESY (XXXV)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de curcumina conectada al mismo.
Por ejemplo, B, el al menos un agente terapéutico, está conectado a A, el compuesto peptídico, en dicha amina libre de dicho residuo de lisina de dicho compuesto peptídico, mediante un enlazador.
Por ejemplo, B, el al menos un agente terapéutico, está conectado a A, el compuesto peptídico, en dicha posición N-terminal de dicho compuesto peptídico, mediante un enlazador.
Por ejemplo, el enlazador se selecciona del enlazador de ácido succínico y ácido dimetilglutárico.
Por ejemplo, el enlazador es un enlazador escindible.
Por ejemplo, el enlazador es un enlazador no escindible.
Como se muestra en el Ejemplo 2, el compuesto conjugado puede comprender un enlazador escindible conectado el al menos un agente terapéutico al compuesto peptídico. Por ejemplo, el al menos un agente terapéutico puede liberarse del compuesto peptídico mediante la acción de esterasas sobre el enlace éster.
Por ejemplo, como se muestra en el Ejemplo 2 y en la Figura 4, puede conjugarse un agente terapéutico con el compuesto peptídico en las aminas libres disponibles en el péptido, en la lisina o en el extremo amino, formando un enlace tal como un enlace peptídico.
Por ejemplo, el compuesto conjugado comprende 1 molécula del agente terapéutico conectado al compuesto peptídico.
Por ejemplo, el compuesto conjugado comprende 2 moléculas del agente terapéutico conectadas al compuesto peptídico.
Por ejemplo, el compuesto conjugado comprende 3 moléculas del agente terapéutico conectadas al compuesto peptídico.
Por ejemplo, el compuesto conjugado comprende 4 moléculas del agente terapéutico conectadas al compuesto peptídico.
Por ejemplo, la conjugación de un agente terapéutico a un compuesto peptídico, formando de esta manera un compuesto conjugado, no altera la potencia del agente terapéutico.
Por ejemplo, como se muestra en la Tabla 4, los valores del IC50 del conjugado docetaxel-péptido Katana son similares a los valores del IC50 del docetaxel sin conjugar en células cancerosas de ovario, mama y piel.
Los compuestos conjugados descritos en la presente descripción también pueden usarse para transportar los agentes terapéuticos al interior de la célula ya que no son un sustrato de las bombas de salida tal como la bomba transportadora de membrana de glicoproteína P que bombea otros agentes terapéuticos desde células farmacológicas multirresistentes.
Por ejemplo, como se muestra en la Figura 6, la captación del docetaxel conjugado en células MDCK-MDR, células epiteliales de riñón transfectadas con el gen MDR1 multirresistente humano, es más rápida y se acumula a concentraciones más altas en comparación con docetaxel sin conjugar.
También se describe en la presente descripción un proceso para preparar el compuesto conjugado descrito en la presente descripción, el proceso que comprende:
hacer reaccionar un enlazador junto con dicho agente terapéutico para obtener un intermediario; purificar opcionalmente dicho intermediario;
hacer reaccionar dicho intermediario junto con dicho compuesto peptídico para obtener dicho compuesto conjugado; y
purificar opcionalmente dicho compuesto conjugado;
en donde el agente terapéutico está conectado al compuesto peptídico en una amina libre de un residuo de lisina o un N-terminal; y en donde el compuesto peptídico comprende 1, 2, 3 o 4 moléculas de agente terapéutico conectadas al mismo.
Por ejemplo, el compuesto peptídico comprende 1 molécula de agente terapéutico conectada al mismo. Por ejemplo, el compuesto peptídico comprende 2 moléculas de agente terapéutico conectadas al mismo. Por ejemplo, el compuesto peptídico comprende 3 moléculas de agente terapéutico conectadas al mismo. Por ejemplo, el compuesto peptídico comprende 4 moléculas de agente terapéutico conectadas al mismo.
Por ejemplo, el enlazador es ácido succínico.
Por ejemplo, el enlazador es un enlazador de ácido dimetilglutárico.
Por ejemplo, el compuesto peptídico se protege en dicho N-terminal antes de reaccionar con dicho intermediario. En los Ejemplos 11 y 12 se muestran los ejemplos de síntesis de los compuestos conjugados.
Por ejemplo, puede adicionarse un grupo protector tal como FMOC como grupo protector a una amina libre en el agente terapéutico antes de la incorporación con un enlazador. Después de su síntesis, el compuesto conjugado puede sufrir desprotección del grupo protector. Por ejemplo, el compuesto conjugado que comprende el agente protector FMOC puede desprotegerse mediante el uso de piperidina. El experto en la técnica comprenderá fácilmente que pueden usarse otros reactivos químicos conocidos para la desprotección de los compuestos conjugados.
Por ejemplo, el N-terminal del agente terapéutico y/o el compuesto peptídico puede bloquearse mediante su acetilación, proporcionando de esta manera un grupo protector no reversible en el N-terminal.
Por ejemplo, el intermediario se activa antes de reaccionar con dicho compuesto peptídico.
Por ejemplo, el intermediario se activa antes de reaccionar con dicho compuesto con un agente de acoplamiento, opcionalmente seleccionado de N,N,N',N'-tetrametil-O-(benzotriazol-1-il)tetrafluoroborato de uronio (TBTU), (2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-hexafluorofosfato de tetrametiluronio) (HBTU) y (1-[Bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]hexafluorofosfato de 3-óxido de piridinio) (HATU).
Por ejemplo, el intermediario que comprende un agente terapéutico conectado a un enlazador puede activarse con TBTU, un reactivo de acoplamiento de péptidos, antes de la conjugación con el compuesto peptídico.
Por ejemplo, el compuesto conjugado se purifica después de su síntesis.
Los compuestos descritos en la presente descripción también pueden usarse en el contexto de proteínas de fusión. Por ejemplo, una proteína de fusión puede modificarse por ingeniería genética al fusionar un compuesto descrito en la presente descripción, por ejemplo, un compuesto peptídico, a una o más proteínas, o partes de las mismas, tales como dominios funcionales. Las proteínas de fusión pueden modificarse por ingeniería genética, por ejemplo, mediante tecnología de ADN recombinante y expresarse mediante el uso de un sistema de expresión de proteínas tal como un sistema de expresión de proteínas bacterianas o de mamíferos. En algunos ejemplos, se adicionan enlazadores peptídicos entre las proteínas. En otro ejemplo, las proteínas de fusión no comprenden enlazadores que conectan las proteínas.
Los sistemas de expresión de proteínas comúnmente usados incluyen los derivados de bacterias, levaduras, baculovirus/insectos, plantas y células de mamíferos y, más recientemente, hongos filamentosos tal como el termófilo Myceliophthora.
Además, en algunos ejemplos, el compuesto que en la presente descripción se describe puede asociarse, enlazarse o conectarse a uno o más de otros compuestos para formar un multímero tal como un dímero, un trímero o un tetrámero, así como también péptidos ramificados. Tales compuestos pueden conectarse entre sí, por ejemplo, mediante un enlace covalente, un átomo o un enlazador. Por ejemplo, el multímero comprende más de un compuesto peptídico y/o más de un compuesto conjugado. Los métodos para preparar las formas multiméricas (por ejemplo, diméricas, triméricas) de los compuestos se describen en la patente de Estados Unidos núm. 9,161,988. Otro aspecto de la descripción incluye un método para tratar una enfermedad que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite.
Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para tratar un cáncer que implica la expresión de la sortilina que comprende poner en contacto al menos una célula cancerosa que expresa la sortilina con al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para tratar una enfermedad que implica la expresión de la sortilina que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para tratar un cáncer que implica la expresión de al menos un receptor elegido de la familia de receptores de la proteína de clasificación vacuolar 10 (Vps10) que comprende poner en contacto al menos una célula cancerosa que expresa el al menos un receptor con al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para tratar una enfermedad que implica la expresión de al menos un receptor elegido de la familia de receptores de la proteína de clasificación vacuolar 10 (Vps10) que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
Por ejemplo, el al menos un receptor se selecciona de la sortilina, SorL1, SorCS1, SorCS2 y SorCS3.
Por ejemplo, el al menos un receptor desempeña funciones pleiotrópicas en el tráfico de proteínas y la señalización intracelular e intercelular en células neuronales y no neuronales.
Por ejemplo, en un método de tratamiento médico que implica un agente terapéutico, la mejora en donde el método comprende aumentar la tolerabilidad del agente terapéutico administrado a un sujeto que lo necesita al administrar el agente terapéutico con al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
Por ejemplo, en un método de tratamiento médico que implica un agente terapéutico, la mejora en donde el método comprende aumentar la tolerabilidad del agente terapéutico administrado a un sujeto que lo necesita al administrar el agente terapéutico conjugado con al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la tolerabilidad de un agente terapéutico, que comprende:
obtener el compuesto conjugado descrito en la presente descripción, en donde el compuesto conjugado comprende el agente terapéutico, y
administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto conjugado a un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la tolerabilidad de un agente terapéutico, que comprende:
conjugar el agente terapéutico con el compuesto peptídico descrito en la presente descripción para obtener un compuesto conjugado, y
administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto conjugado a un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la actividad de antiproliferación de un agente terapéutico, que comprende:
obtener el compuesto conjugado descrito en la presente descripción, en donde el compuesto conjugado comprende el agente terapéutico, y
administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto conjugado a un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la actividad de antiproliferación de un agente terapéutico, que comprende:
conjugar el agente terapéutico con el compuesto peptídico descrito en la presente descripción para obtener un compuesto conjugado, y
administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto conjugado a un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, la actividad de antiproliferación aumenta al menos 10 veces, al menos 20 veces, al menos 30 veces, al menos 40 veces, al menos 50 veces, al menos 60 veces, al menos 70 veces, al menos 80 veces, al menos 90 veces o al menos 100 veces en comparación con un agente terapéutico sin conjugar.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de ovario, cáncer de cerebro, cáncer de mama, melanoma, cáncer colorrectal, glioblastoma, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de cabeza, cáncer gástrico, cáncer de riñón, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, cáncer urotelial, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, linfoma de Hodgkin, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de tejidos blandos, sarcoma óseo, cáncer de tiroides, cáncer de vejiga de células transicionales, tumor de Wilm, glioma, cáncer de páncreas o cáncer de bazo.
Por ejemplo, el cáncer es un cáncer que implica la expresión de la sortilina.
Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la internalización celular de un agente terapéutico, que comprende:
obtener el compuesto conjugado descrito en la presente descripción, en donde el compuesto conjugado comprende el agente terapéutico, y
administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto conjugado a un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la internalización celular de un agente terapéutico, que comprende:
conjugar el agente terapéutico con el compuesto peptídico descrito en la presente descripción para obtener un compuesto conjugado, y
administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto conjugado a un sujeto que lo necesite. Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un método para aumentar la internalización celular de un agente terapéutico, que comprende:
conjugar el agente terapéutico con el compuesto peptídico descrito en la presente descripción para obtener un compuesto conjugado, y
poner en contacto al menos una célula con el compuesto conjugado.
Otro aspecto de la descripción incluye el uso de al menos un compuesto descrito en la presente descripción para tratar una enfermedad.
Un aspecto adicional descrito en la presente descripción incluye uno o más compuestos descritos en la presente descripción para tratar una enfermedad.
En particular, la presente invención se refiere a los compuestos de la invención para su uso como se define en las reivindicaciones.
En una modalidad la enfermedad es un cáncer.
Otro aspecto descrito en la presente descripción es un método para tratar un cáncer que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un compuesto descrito en la presente descripción a un sujeto que lo necesite.
Otro aspecto descrito en la presente descripción incluye el uso de al menos un compuesto descrito en la presente descripción para tratar un cáncer.
Otro aspecto adicional descrito en la presente descripción incluye uno o más compuestos descritos en la presente descripción para tratar un cáncer.
Por ejemplo, el compuesto es un compuesto conjugado descrito en la presente descripción.
Los cánceres que pueden tratarse mediante el uso de los compuestos descritos en la presente descripción incluyen, pero no se limitan a, cánceres hematológicos y cánceres sólidos, que incluyen, por ejemplo, tumores de ovario, endometrio, piel, cerebro, columna, mama, colon, intestino delgado, hígado, pulmón, próstata, cabeza, cuello, estómago, huesos, tiroides, vejiga, riñón, páncreas y bazo.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de ovario.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de mama.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de cerebro.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de pulmón.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de piel.
Por ejemplo, el cáncer es un cáncer hematológico.
Por ejemplo, el cáncer hematológico es una leucemia tal como la leucemia mieloide aguda (AML), la leucemia linfocítica aguda (ALL), la leucemia linfocítica crónica (CLL) y la leucemia mielógena crónica (CML). En otro ejemplo, el cáncer hematológico es un mieloma. En un ejemplo, el cáncer hematológico es un linfoma tal como el linfoma no Hodgkin y el linfoma de Hodgkin.
Por ejemplo, el cáncer es un cáncer de cerebro. En un ejemplo, el cáncer de cerebro es un glioblastoma.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de hígado. En un ejemplo, el cáncer de hígado es adenocarcinoma hepatocelular. Por ejemplo, el cáncer es cáncer de pulmón. En un ejemplo, el cáncer de pulmón, el cáncer de pulmón es de células no pequeñas.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de riñón. En un ejemplo, el cáncer de riñón es tumor de Wilm.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de vejiga. En un ejemplo, el cáncer de vejiga es cáncer de vejiga de células transicionales.
Por ejemplo, el cáncer se selecciona de cáncer de mama, melanomas, cáncer colorrectal, glioblastoma y adenocarcinoma hepatocelular.
Por ejemplo, el compuesto conjugado induce la apoptosis en las células cancerosas.
Por ejemplo, los conjugados Katana-fármaco inducen apoptosis en células cancerosas tales como, por ejemplo, células cancerosas de ovario, células cancerosas de melanoma y células cancerosas de mama.
Como se muestra en la Figura 10, los conjugados con docetaxel y los conjugados con cabazitaxel son más potentes que el docetaxel y el cabazitaxel sin conjugar para inducir la apoptosis en las células cancerosas. De manera similar, como se muestra en la Figura 30, la curcumina conjugada induce una mayor apoptosis en las células cancerosas en comparación con la curcumina sin conjugar.
Por ejemplo, los conjugados Katana-fármaco también son más potentes que el agente terapéutico sin conjugar para inducir la supresión tumoral.
Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción pueden usarse para tratar el cáncer, por ejemplo, en el cáncer resistente a múltiples fármacos.
Como se muestra en la Figura 6, los compuestos conjugados se acumularon en las células transfectadas con MDCK con el gen MDR1 multirresistente humano a una velocidad más rápida y en concentraciones más altas en conjugados con docetaxel en comparación con docetaxel sin conjugar.
Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción también disminuyen la capacidad migratoria de las células cancerosas.
Por ejemplo, como se muestra en la Figura 16, se evaluó la migración celular en células cancerosas incubadas con compuestos conjugados. Los resultados muestran que los conjugados Katana-fármaco disminuyeron fuertemente la capacidad de las células cancerosas para migrar.
Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción pueden usarse para reducir el crecimiento tumoral. Como se demuestra en el ejemplo 4, los conjugados Katana fármaco son más efectivos que los compuestos sin conjugar para reducir el crecimiento tumoral, medido mediante la cuantificación de la luminiscencia del tumor en un modelo de tumor de xenoinjerto de ratón.
Los compuestos descritos en la presente descripción pueden usarse para tratar las enfermedades donde se expresan y/o participan receptores de la sortilina/sindecano.
Por ejemplo, los compuestos descritos en la presente descripción pueden usarse para tratar enfermedades inflamatorias (Mortensen, 2014), trastornos lisosomales (Coutinho, 2012, Prabakaran, 2012) y enfermedades cardiovasculares (Kjolby, 2015).
Por ejemplo, se proporciona un uso de un compuesto conjugado descrito en la presente descripción para aumentar la internalización celular del al menos un agente terapéutico.
Por ejemplo, se proporciona el uso de al menos un compuesto descrito en la presente descripción para tratar una enfermedad que implica la expresión de la sortilina.
Por ejemplo, el uso es para tratar una enfermedad que implica la expresión de al menos un receptor que se selecciona de la proteína de clasificación vacuolar 10 (Vps10).
Por ejemplo, el al menos un receptor se selecciona de la sortilina, SorL1, SorCS1, SorCS2 y SorCS3.
Por ejemplo, el al menos un receptor desempeña funciones pleiotrópicas en el tráfico de proteínas y la señalización intracelular e intercelular en células neuronales y no neuronales.
Por ejemplo, se proporciona el uso de al menos un compuesto descrito en la presente descripción para tratar un cáncer.
Por ejemplo, se proporciona el uso de un compuesto descrito en la presente descripción en la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer.
Por ejemplo, el cáncer es un cáncer que implica la expresión de la sortilina.
Por ejemplo, el cáncer es cáncer de ovario, cáncer de cerebro, cáncer de mama, melanoma, cáncer colorrectal, glioblastoma, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de cuello uterino, cáncer de cabeza, cáncer gástrico, cáncer de riñón, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, cáncer urotelial, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, linfoma de Hodgkin, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de tejidos blandos, sarcoma óseo, cáncer de tiroides, cáncer de vejiga de células transicionales, tumor de Wilm, glioma, cáncer de páncreas o cáncer de bazo.
Por ejemplo, se proporciona el uso de un compuesto descrito en la presente descripción para dirigirse selectivamente a las células que expresan sortilina.
Se conoce bien que ciertos agentes anticancerosos son efectivos, sin embargo, están asociados con efectos adversos. La doxorrubicina, por ejemplo, se asocia con cardiotoxicidad de una manera dependiente de la dosis. En humanos, la dosis máxima acumulativa de doxorrubicina es 550 mg/m2. Una dosis acumulativa que exceda este umbral está relacionada con una mayor tasa de cardiotoxicidad. Como se menciona en la presente descripción, los compuestos descritos en la presente descripción se dirigen selectivamente a las células que expresan sortilina. Como tal, ofrecen la liberación selectiva de agentes anticancerosos a las células cancerosas que expresan sortilina, disminuyendo de esta manera la toxicidad celular general causada por agentes anticancerosos, tal como la doxorrubicina.
Por ejemplo, se proporciona el uso de un compuesto descrito en la presente descripción, en un sistema de suministro de fármacos.
Por ejemplo, se proporciona un uso de un compuesto descrito en la presente descripción, en el contexto de una proteína de fusión, en donde opcionalmente la proteína de fusión se modifica por ingeniería genética mediante el uso de un sistema de expresión, opcionalmente un sistema de expresión derivado de bacterias, levaduras, baculovirus/insectos, células de plantas, células de mamífero y hongos filamentosos, opcionalmente hongos Myceliophthora thermophila.
Por ejemplo, se proporciona un uso de un compuesto descrito en la presente descripción, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad que implica la expresión de la sortilina.
Por ejemplo, se proporciona el uso de un compuesto descrito en la presente descripción para aumentar la tolerabilidad de un agente terapéutico.
Por ejemplo, se proporciona el uso de un compuesto descrito en la presente descripción para aumentar la tolerabilidad de un agente terapéutico.
Por ejemplo, se proporciona el uso de un compuesto descrito en la presente descripción para aumentar la actividad de antiproliferación de un agente terapéutico.
Otro aspecto descrito en la presente descripción es una biblioteca que comprende al menos dos de los compuestos descritos en la presente descripción.
Otro aspecto adicional descrito en la presente descripción es el uso de una biblioteca que en la presente descripción se describe para identificar los compuestos que modulan una diana biológica.
Como se mencionó anteriormente, los compuestos descritos en la presente descripción pueden usarse en el contexto de sistemas de suministro de fármacos. Por ejemplo, los compuestos pueden estar conectados, enlazados, mezclados, adsorbidos a la superficie de nanopartículas, liposomas, partículas de grafeno cargadas con un agente terapéutico. Por ejemplo, los compuestos también pueden conectarse a la superficie mediante un enlazador, un átomo o un enlace.
Un aspecto descrito en la presente descripción es un liposoma, grafeno o nanopartícula que comprende al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
También se describe un liposoma, grafeno o nanopartícula recubiertos con al menos un compuesto descrito en la presente descripción.
También se describe un liposoma, grafeno o nanopartícula cargada con al menos un agente terapéutico, gen o ARNip; y el liposoma o nanopartícula se recubre con al menos un compuesto definido en la presente descripción. Por ejemplo, el al menos un compuesto puede conectarse a la superficie del liposoma o nanopartícula.
Por ejemplo, el al menos un compuesto es un compuesto peptídico descrito en la presente descripción. En un ejemplo, el al menos un compuesto es un compuesto conjugado descrito en la presente descripción.
El experto en la técnica puede contemplar diferentes ejemplos de liposomas o nanopartículas. Por ejemplo, el liposoma o nanopartícula puede comprender al menos un compuesto peptídico descrito en la presente descripción recubierto sobre la superficie del liposoma o nanopartícula y un agente terapéutico, por ejemplo, un agente anticanceroso, dentro del liposoma o nanopartícula. Por ejemplo, el liposoma o nanopartícula puede comprender al menos un compuesto conjugado descrito en la presente descripción recubierto en la superficie del liposoma o nanopartícula y un agente terapéutico, por ejemplo, un agente anticanceroso, dentro del liposoma o nanopartícula. Por ejemplo, se proporciona en la presente descripción un multímero que comprende dos o más compuestos descritos en la presente descripción.
Por ejemplo, los dos o más compuestos descritos en la presente descripción están conectados entre sí directa o indirectamente.
Por ejemplo, los dos o más compuestos están conectados directamente mediante un enlace covalente.
Por ejemplo, los dos o más compuestos están conectados indirectamente mediante un enlazador.
Por ejemplo, el multímero es un dímero, un trímero o un tetrámero.
Se describirán ahora más ejemplos de la presente descripción con referencia a los siguientes ejemplos. Se apreciará que estos ejemplos tienen el propósito de ilustrar la presente descripción y no limitan el alcance de la descripción. Ejemplo 1
Generación del compuesto peptídico de la invención y de compuestos peptídicos para ilustración
Uno de los principales objetivos es determinar si la plataforma mediada por el receptor Katana podría ser eficaz contra las células cancerosas mediante el uso de un conjugado de péptido-fármaco dirigido a los receptores expresados en estas células. La primera familia de péptidos Katana se deriva de la proteína penetrante de células bacterianas, mientras que la segunda familia se basa en los ligandos de la sortilina, progranulina y neurotensina (Tabla 1).
Tabla. 1. Secuencias de aminoácidos de péptidos Katana de los péptidos de unión a sortilina derivados de una proteína bacteriana (familia 1) y de progranulina y neurotensina, dos ligandos de la sortilina (familia 2)
Familia 1 del péptido Katana Biopharma (KBP):
Secuencia de aminoácidos Longitud de aminoácidos
KBP-101: IKLSGGVQAKAGVINMDKSESM (SEQ ID NO: 5) 22
KBP-102: Succinil-IKLSGGVQAKAGVINMFKSESY 22
(que comprende la SEQ ID NO: 6 con un grupo succinilo unido en el extremo N-terminal) KBP-103: IKLSGGVQAKAGVINMFKSESYK(Biotina) 23
(que comprende la SEQ ID NO: 7 con la biotina conectada al mismo en el extremo C-terminal)
KBP-104: GVQAKAGVINMFKSESY (SEQ ID NO: 8) 17
KBP-105: Acetil-GVRAKAGVRNMFKSESY (SEC ID NO: 14) 17
KBP-106 Acetil-GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (SEQ ID NO: 15) 17
Familia 2 del péptido Katana Biopharma (KBP):
KBP-201: YKSLRRKAPRWDAPLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 11) 24
KBP-202: YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRQLL (SEQ ID NO: 12) 24
KBP-203:______ YKSLRRKAPRWDAYLRDPALRPLL (SEQ ID NO: 13)_____________ 24___________
La resonancia superficial de plasmones (SPR) se usó por primera vez para investigar si estos péptidos podían ser reconocidos por la sortilina. Para este enfoque, se adicionó biotina en el extremo C-terminal del péptido Katana-Biopharma durante la síntesis del péptido. A continuación, el péptido biotinilado (KBP-103) se inmovilizó en un chip sensor de estreptavidina mediante el uso de los procedimientos recomendados por el fabricante. A continuación, se inyectaron concentraciones crecientes de una forma soluble de la sortilina sobre el chip sensor. A continuación, se monitorearon en tiempo real las interacciones entre el KBP-103 inmovilizado y el receptor de la sortilina. En la Figura 1 se muestra una curva de interacción representativa y, a partir de las curvas del sensorgrama, se determinaron la constante de afinidad, así como también la Ka y Kd, que se indican en la Tabla 2. Las constantes de afinidad (Kd, Kay Kd) se extrajeron de varias inyecciones mediante el uso del software de evaluación BIA. La constante de afinidad (Kd) del péptido Katana para la sortilina está en el intervalo de bajo nM, lo que indica que el péptido tiene una alta afinidad por este receptor.
Tabla 2: Constantes de afinidad Kd, Ka y Kd
KD K K
2,55 *10 '8 M 6,829 ‘ lO S M -’ S '1 0,0174 s-1
También se investigó la expresión de la sortilina en varias células cancerosas mediante transferencias Western. Los resultados muestran que la sortilina puede detectarse en la mayoría de las células cancerosas analizadas. En algunos casos, los niveles de expresión de este receptor fueron muy elevados. Se encontró una alta expresión en muchas células cancerosas de mama, melanomas, colorrectal, glioblastoma y adenocarcinoma hepatocelular (Figura 3). Esto está de acuerdo con la literatura, ya que se ha informado que la sortilina se expresa en diferentes tumores sólidos, que incluyen los cánceres de mama, colorrectal, pulmón, próstata y ovario (Roseli, 2015; Ghaemimanesh, 2014; Hammati, 2009).
Ejemplo 2
Generación de conjugados de fármaco Katana-péptido de la invención y de conjugados para ilustración.
El docetaxel y la doxorrubicina se seleccionaron primero para la prueba de principio de los agentes anticancerosos, mientras que la curcumina se seleccionó entre los fitoquímicos. El docetaxel es un análogo semisintético del paclitaxel, un extracto de la corteza del tejo del Pacífico, Taxus brevifolia. Este fármaco ha sido aprobado por la FDA (Instituto Nacional del Cáncer) para el tratamiento del cáncer de mama localmente avanzado o metastásico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer gástrico, cáncer de próstata resistente a hormonas y cáncer de pulmón de células no pequeñas. El docetaxel puede usarse como agente único o en combinación con otros fármacos quimioterapéuticos, en dependencia del tipo y estadio específicos del cáncer. El cabazitaxel (anteriormente XRP-6258, nombre comercial Jevtana™) es un derivado semisintético de un taxoide natural. Es un inhibidor de microtúbulos desarrollado por Sanofi-Aventis. Fue aprobado por la FDA de los EE. UU. para el tratamiento del cáncer de próstata resistente a las hormonas el 17 de junio de 2010. La doxorrubicina es un antibiótico antitumoral de antraciclina (nota: en este contexto, esto no significa que se usa para tratar infecciones bacterianas) estrechamente relacionado con el producto natural Daunomicina y, como todas las antraciclinas, actúa intercalando el ADN, siendo el efecto adverso más grave el daño cardíaco potencialmente mortal (Instituto Nacional del Cáncer). Está aprobado para usarse solo o con otros fármacos para tratar: leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), cáncer de mama, cáncer gástrico (estómago), linfoma de Hodgkin, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de ovario, cáncer de pulmón de células pequeñas, sarcomas de tejidos blandos y huesos, cáncer de tiroides, cáncer de vejiga de células transicionales y tumor de Wilm. La curcumina (diferuloilmetano) es un pigmento amarillo presente en la especia cúrcuma (Curcuma longa) que se ha asociado con actividades antioxidantes, antiinflamatorias, anticancerosas, antivirales y antibacterianas, como lo indican más de 6000 citas (Hosseini, 2015).
Los agentes anticancerosos (por ejemplo, docetaxel, cabazitaxel, doxorrubicina) o los fitoquímicos (por ejemplo, curcumina) pueden conjugarse en el péptido mediante el uso de las estrategias de conjugación con amina. Brevemente, el docetaxel puede conjugarse con el o los péptidos Katana en las aminas libres disponibles en el péptido (lisina o amino-terminal) formando un enlace peptídico (enlace amida) con el docetaxel activado. En el KBP-101, 4 aminas libres están disponibles para la conjugación, el N-terminal y 3 lisinas. Por tanto, pueden generarse diferentes conjugados mediante la adición de 1, 2, 3 y 4 docetaxel al péptido. Pueden usarse estrategias de conjugación similares con doxorrubicina y curcumina (Figura 4 y 5).
Por ejemplo, se ha usado la siguiente estrategia para la conjugación del fármaco con el péptido de Katana. El N-terminal se bloqueó y los otros 3 sitios de conjugación se saturaron con docetaxel, formando de esta manera un conjugado de péptido fármaco de 3 moléculas de docetaxel por molécula de péptido. La conjugación completa se analizó mediante HPLC y los conjugados se confirmaron mediante espectros de masas (MALDI-TOF). El docetaxel podría liberarse mediante la escisión del enlace éster por las esterasas.
Los agentes anticancerosos (por ejemplo, docetaxel, doxorrubicina) y los fitoquímicos (por ejemplo, curcumina) se conjugaron mediante el uso de un enlazador escindible. A continuación, el fármaco nativo podría liberarse del vector mediante la acción de las esterasas sobre el enlace éster. En la Figura 5 se presentan los ejemplos de estructuras de 2 conjugados Katana-agente anticanceroso (A y B) y un conjugado fitoquímico-fármaco Katana (C).
Se han generado diferentes conjugados entre docetaxel, doxorrubicina, curcumina, cabazitaxel y péptidos Katana. Estos conjugados se resumen en la Tabla 3 más abajo.
Tabla 3
Productos Secuencias de aminoácidos
Conjugados con docetaxel
KBA102 (3:1) Succinil-IK(Doce)LSGGVQAK(Doce)AGVINMFK(Doce)SESY KBA104 (2:1) GVQAK(Doce)AGVINMFK(Doce)SESY KBA105 (2:1) Acetil-GVRAK(Doce)AGVRNMFK(Doce)SESY KBA106 (2:1) Acetil-GVRAK(Doce)AGVRN(Nle)FK(Doce)SESY KBA201 (2:1) Acetil-YK(Doce)SLRRK(Doce)APRWDAPLRDPALRQLL Conjugados con doxorrubicina
KBB104 (2:1) GVQAK(Doxo)AGVINMFK(Doxo)SESY KBB106 (2:1) Acetil-GVRAK(Doxo)AGVRN(Nle)FK(Doxo)SESY KBB201 (2:1) Acetil-YK(Doxo)SLRRK(Doxo)APRWDAPLRDPALRQLL Conjugados con curcumina
KBC106 (2:1) Acetil-GVRAK(Cur)AGVRN(Nle)FK(Cur)SESY Conjugados con cabazitaxel
KBD105 (2:1) Acetil-GVRAK(Cab)AGVRNMFK(Cab)SESY KBD106 (2:1) Acetil-GVRAK(Cab)AGVRN(Nle)FK(Cab)SESY KBD201 (2:1) Acetil-YK(Cab)SLRRK(Cab)APRWDAPLRDPALRQLL
Ejemplo 3
Efectos in vitro de los compuestos conjugados de la invención y de los compuestos conjugados para ilustración Se evaluó el efecto del conjugado docetaxel-péptido Katana sobre las proliferaciones de varias líneas celulares y se comparó el con docetaxel sin conjugar (Tabla 4). Los valores de IC50 obtenidos para el conjugado docetaxel-péptido Katana fueron muy similares a los de docetaxel en las células cancerosas analizadas. En general, estos resultados muestran que la potencia del conjugado docetaxel-péptido Katana para bloquear la proliferación celular in vitro es similar al docetaxel sin conjugar, lo que indica que la potencia de los agentes anticancerosos permanece inalterada tras su conjugación.
Tabla 4. Efecto de los conjugados Katana-fármaco sobre la proliferación celular mediante el uso del ensayo de incorporación de [3H]-timidina. Se presentan las IC50 (nM) obtenidas a partir de las curvas de antiproliferación.
Figure imgf000044_0001
Para determinar si los conjugados fármaco anticanceroso-péptido Katana también podrían ser sustratos de P-gp, se usaron células MDR1 humanas transfectadas con MDCK (MDCK-MDR1). Como se muestra en la Figura 6, la acumulación del sustrato de P-gp [3H]-Docetaxel aumentó 2 veces en presencia de la ciclosporina A (CsA), un inhibidor competitivo de la P-gp. Sin embargo, la falta de efecto de CsA sobre la acumulación del conjugado [125I]-Docetaxel-péptido Katana indica que, tras su conjugación con el KBP, la P-gp ya no reconoce el resto del fármaco. Los últimos resultados confirman que los conjugados Katana evitan eficazmente la acción de salida de la P-gp. Además, se comparó la captación del conjugado [125I]-Katana (KBA-105) radiomarcado con el [3H]-Docetaxel radiomarcado sin conjugar en las células cancerosas de ovario SKOV3 y en células cancerosas de melanoma SKMEL-28 en la Figura 7. Los resultados demuestran que la captación del conjugado en SKOV3 (Figura 7A) así como también en las células SKMEL-28 (Figura 7B) es más rápida y se acumula a concentraciones más altas que el docetaxel sin conjugar.
La captación del conjugado con Katana aumenta en las células que expresan el receptor de la sortilina. Como se muestra en la Figura 8, la captación del conjugado de Katana doxorrubicina (KBB106) se redujo en las células donde se redujo la expresión de la sortilina. Por ejemplo, la Figura 8A muestra una captación reducida de KBB106 en células cancerosas de ovario transfectadas con el ARNip de la sortilina y la Figura 8B muestra una captación reducida de KBB106 en células cancerosas de ovario debido a la inhibición farmacológica con los ligandos de la sortilina, específicamente el péptido Katana y la progranulina.
El efecto de docetaxel y el docetaxel conjugado sobre el péptido KB sobre la muerte de células cancerosas de ovario también se evaluó mediante análisis de citometría de flujo mediante el uso de tinción con Anexina V/PI (Figura 9). Los resultados indican que el docetaxel conjugado indujo una muerte celular mayor y sostenida en comparación con el fármaco libre (Figura 9A). Para inducir una muerte celular similar, se requiere la adición del inhibidor de la P-gp, ciclosporina A (CsA) (Figura 9B). Estos resultados muestran que el conjugado KBP-Docetaxel es más potente, en parte debido a su capacidad para evitar la bomba de salida de P-gp.
También se evaluó el efecto del aumento de la concentración del conjugado docetaxel-péptido Katana (KBA-105) o la concentración de docetaxel sobre la apoptosis de las células cancerosas de ovario SKOV3 (Figura 9) después de 5 horas de exposición a los fármacos. Los resultados muestran que el conjugado KBA-105 induce la apoptosis de estas células cancerosas después de un tiempo de incubación relativamente corto.
Este ensayo de apoptosis se usó para seleccionar los conjugados en varias células cancerosas (Figura 10). Los resultados indican que después de 5 horas, todos los conjugados Katana-fármaco inducen la apoptosis de los modelos de células cancerosas probados. La mayoría de ellos también son más potentes que los fármacos originales sin conjugar, docetaxel o cabazitaxel.
Para determinar si la apoptosis inducida por los conjugados Katana-fármaco estaba asociada a la endocitosis mediada por receptor, el ensayo se realizó en ausencia o presencia de un exceso de péptido libre y dos ligandos de la sortilina, neurotensina (NT) o progranulina (Figura 11). La adición del péptido libre invirtió la apoptosis de SKOV3 (Figura 11A) y SK-MEL28 (Figura 11B) inducida por el conjugado, lo que indica que la inducción de estas células por KBA-105 está mediada por el receptor. Además, los dos ligandos de la sortilina, neurotensina y progranulina también inhiben la apoptosis inducida por el conjugado Katana-fármaco, lo que sugiere que sortilina está implicada en esta inducción de apoptosis mediada por el receptor.
El impacto de los productos KBP en la migración de células cancerosas de ovario SKOV3. Estas células cancerosas se incubaron durante 2 horas con docetaxel libre o un conjugado de Katana-docetaxel y luego se midió la migración celular en tiempo real en función del tiempo mediante el uso del sistema biosensor xCELLigence. Este ensayo refleja los efectos celulares de estas moléculas sobre las funciones de las células cancerosas de ovario SKOV3. Como se muestra en la Figura 12, el conjugado Katana-docetaxel tiene un efecto más fuerte sobre las células SKOV3, lo que resulta en una inhibición más fuerte de su migración en comparación con el docetaxel libre. Una inhibición más fuerte de la migración de células cancerosas por el docetaxel conjugado es una indicación de que la invasión o el potencial metastásico de estas células cancerosas se verán más afectados por el conjugado que por docetaxel sin conjugar.
Curiosamente, la adición de un exceso de péptido Katana libre (Figura 13A) o neurotensina (Figura 13B) revirtió fuertemente el efecto migratorio del conjugado Katana-docetaxel. La reducción en la migración de células cancerosas por el docetaxel libre no se vio afectada ni por el péptido Katana libre ni por la neurotensina. Además, se encontró que el silenciamiento del gen de la sortilina con el ARNip específico de la sortilina invirtió el efecto del conjugado Katana-docetaxel sobre la migración de células cancerosas (Figura 13C). Estos resultados apoyan el concepto de que el conjugado Katana-docetaxel tiene un mecanismo de acción distinto, diferente al del fármaco libre. El hecho de que el ligando de la sortilina, neurotensina, invirtiera significativamente el efecto celular del conjugado, apoya aún más la implicación de un miembro receptor de la familia de la sortilina en la internalización o mecanismo de acción del conjugado.
Se evaluó el efecto del docetaxel y el KBP-docetaxel sobre la migración celular después del silenciamiento génico de la sortilina mediante el uso de un ARNip específico o una secuencia de ARNip mezclada. En las condiciones experimentales usadas, la expresión del gen de la sortilina se redujo en aproximadamente un 80 %. Los resultados de la Figura 14 muestran claramente que el efecto del docetaxel libre sobre la migración de células SKOV3 no se vio afectado por la reducción de la expresión de la sortilina. Por el contrario, el efecto del docetaxel conjugado se reduce considerablemente cuando la expresión de la sortilina es baja. La reducción de la expresión de la sortilina mediante el uso de ARNip específicos revirtió los efectos citotóxicos del docetaxel conjugado, pero no los del docetaxel libre en las células cancerosas de ovario.
Este segundo ensayo celular también se usó para seleccionar los diferentes conjugados Katana-fármaco (Figura 15). Como se muestra en la Figura 15A, las células cancerosas de ovario (SKOV3 y ES-2) se incubaron durante 2 horas con doxorrubicina o doxorrubicina conjugada (KBB106) (2 gM), se lavaron y luego se realizó la migración celular. Los resultados muestran que los conjugados Katana-fármaco afectaron fuertemente la capacidad de estas células cancerosas para migrar. Por ejemplo, KBA-106 abolió casi por completo la capacidad celular de estas células para migrar, lo que indica que los conjugados Katana-fármaco ejercen un fuerte efecto contra la invasión del cáncer o la dispersión de metástasis. Sin embargo, como se muestra en la Figura 15B y 15C, cuando las células cancerosas se incubaron con la doxorrubicina conjugada (KBB106) en presencia de un ligando de la sortilina (neurotensina, péptido Katana o progranulina), se invirtió el efecto migratorio de la doxorrubicina conjugada.
Los resultados de la resonancia superficial de plasmones, la apoptosis y la migración proporcionaron evidencias de que el péptido Katana y el conjugado interactúan con el receptor de la sortilina o lo requieren. Curiosamente, se ha informado que el receptor de la sortilina se sobreexpresa en los cánceres de ovario en comparación con el tejido ovárico normal (Figura 16A) (Hemmati 2009, Ghaemimanesh 2014). También se demostró que la sortilina se expresa en varios tumores sólidos humanos tales como el colon, la próstata, el páncreas y el pulmón. Además, la expresión de la sortilina se ha asociado con la agresividad del cáncer de mama (Roseli, 2015). Aquí, también se observó que este receptor se expresa en varios tumores cerebrales humanos de grado I a grado IV (Figura 16B) y en varios cánceres de ovario humanos de grado I a grado IV (Figura 16C). En general, dado que la sortilina está implicada en el transporte del péptido Katana, estos resultados indican que los conjugados docetaxel-péptido Katana podrían dirigirse a tumores que expresan el receptor de la sortilina.
Además de estos resultados sobre la expresión de la sortilina en tumores de ovario y cerebro, se han informado niveles altos de la sortilina en varios cánceres humanos en el "Atlas de proteínas humanas". La Figura 17, tomada del sitio web http://www.proteinatlas.org/ demuestra claramente que se ha detectado una alta expresión de la sortilina en biopsias de cánceres humanos, que incluyen melanoma, cáncer de mama, cáncer de endometrio y pulmón.
Ejemplo 4
Efectos in vivo de los compuestos conjugados de la invención y de los compuestos conjugados para ilustración
La sortilina se sobreexpresa en el tejido canceroso, pero es casi indetectable en el tejido sano. Como se demuestra en la Figura 18A y 18B, la expresión de la sortilina en los tejidos aumenta en función del fenotipo del tejido maligno. En particular, la expresión de la sortilina es mayor en las metástasis ováricas.
a) Docetaxel
Para evaluar el impacto de la conjugación del fármaco con el péptido Katana Biopharma sobre la farmacocinética del fármaco y la distribución tisular, los ratones se inyectaron con el conjugado [125I]-Docetaxel-péptido Katana. Se colectó el plasma en diferentes momentos (Figura 19A). Se cuantificó la radioactividad asociada con el plasma y se determinaron los parámetros farmacocinéticos. Como se indica en la Figura 19, la vida media del docetaxel conjugado es de 6 horas. Esta vida media plasmática es significativamente mayor que la vida media de 1 hora informada en la bibliografía para el docetaxel libre (Informe de evaluación para docetaxel Teva de la Agencia Europea de Medicamentos). En la Figura 20, la concentración plasmática del conjugado docetaxel-péptido Katana se comparó con la de docetaxel sin conjugar después de la inyección en bolo iv. Los resultados indican un área bajo la curva mucho mayor para el conjugado docetaxel-péptido Katana en comparación con la del docetaxel sin conjugar.
Para la distribución tisular, se administraron el conjugado Katana-fármaco radiomarcado (KBA-105) y el docetaxel mediante inyecciones en bolo iv a una dosis equivalente de docetaxel (Figura 21). En los tiempos indicados (1, 6 y 24 horas), se realizó la perfusión de todo el cuerpo durante 8 min con solución salina a un régimen de flujo de 8 ml/min después de 2, 6 y 24 horas de inyecciones en bolo iv. A continuación, se colectaron los tejidos y se cuantificó la radioactividad y se cuantificaron los niveles del conjugado radiomarcado (KBA-105). Los resultados muestran una alta acumulación del conjugado en los tejidos de pulmón, hígado, bazo y riñón. Además, los niveles medidos de KBA-105 fueron más altos que los de docetaxel en la mayoría de los tejidos. Para caracterizar aún más la diferencia en los niveles de ambos compuestos radiomarcados, se calcularon los valores de AUC1-24 para los diferentes tejidos y se compararon en la Tabla 5. La relación AUC1-24 entre KBA-105 y el docetaxel indica que los conjugados Katana-fármaco podrían acumularse en niveles más altos que el docetaxel sin conjugar.
Tabla 5. Área bajo la curva (AUC1-24) para el docetaxel radiomarcado y el conjugado de Katana-fármaco (KBA-105) de los resultados de distribución de tejido de la Figura 21.
Tejido Docetaxel KBA105 Docetaxel Relación Relación (Docetaxel (ng-h/ml) (ng-h/ml) estimado (ng- KBA105/Docetaxel estimado/Docetaxel) h/ml)
Cerebro 34 1643 723 48,3 21,3 Hígado 652 39058 17186 60 26,4 Pulmón 614 309075 135993 500 221
Ovario 1523 2431 1070 1,6 0,7 Corazón 656 6754 2972 10,3 4,5 Mamario 823 2719 1196 3,3 1,5
Riñón 1072 12911 5681 12,0 5,3
Bazo 457 25911 11401 24,9 25,0
Para evaluar más a fondo la eficacia in vivo del conjugado Katana-fármaco, se implantaron células cancerosas SKOV3 que expresan luciferasa en el flanco del ratón. Los ratones con tumores similares se trataron con docetaxel o con el conjugado de fármaco Katana KBA-105 a una dosis equivalente de docetaxel (10 mg/kg/semana). Los ratones tratados con docetaxel recibieron 3 tratamientos y los ratones tratados con KBA-105 recibieron 5 tratamientos. La formación de imágenes del tumor se realizó en diferentes días al inyectar el sustrato de la luciferasa, luciferina y mediante el uso del sistema de obtención de imágenes Xtreme de Carestream.
Los resultados de la formación de imágenes en la Figura 22 muestran una luminiscencia mucho menor en diferentes días para el ratón tratado con KBA-105 en comparación con el tratado con docetaxel. A continuación, se cuantificó la luminiscencia y se representó gráficamente en función de los días posteriores a la implantación (Figura 23). Estos resultados de luminiscencia cuantificada temprana sugieren que KBA-105 podría ser más eficaz que el docetaxel sin conjugar para reducir el crecimiento tumoral en este modelo de tumor ovárico animal. Los ratones tratados con docetaxel tuvieron una pérdida de peso corporal cercana al 20 % (Figura 22A) mientras que el peso corporal de los ratones tratados con KBA-105 todavía no se vio afectado por los tratamientos a 20 mg/kg/semana (Figura 22B). Además, el peso corporal de los ratones tratados después de 5 tratamientos con KBA-105 no se vio afectado (Figura 24) mientras que los ratones tratados con una dosis equivalente de docetaxel se vieron fuertemente afectados después de sólo 3 tratamientos.
b) Doxorrubicina
También se evaluó el efecto de la doxorrubicina conjugada y sin conjugar en tumores subcutáneos de ovario. A los ratones se les implantaron células cancerosas de ovario ES-2. El crecimiento tumoral se midió mediante el uso de un calibre. Cuando los tumores alcanzaron un volumen tumoral de aproximadamente 150 mm3, los ratones fueron tratados con doxorrubicina o el conjugado Katana-doxorrubicina KBB106 a una dosis equivalente de doxorrubicina (6 mg/kg/semana). Los resultados muestran que en los ratones tratados con KBB106, el volumen tumoral permaneció aproximadamente igual después del primer tratamiento, sin embargo, en los ratones tratados con doxorrubicina, el volumen tumoral aumentó después del primer tratamiento (Figura 25A). De manera similar, como se demuestra en la Figura 25B, el volumen tumoral disminuyó en un 97 % en los ratones tratados con KBB106 en comparación con el grupo de vehículo en comparación con una disminución del 43 % en los ratones tratados con doxorrubicina en comparación con el grupo de vehículo. La progresión de los tumores de xenoinjerto SKOV3 en ratones tratados con KBB106 también disminuyó significativamente en comparación con el grupo control (Figura 26A).
La supresión del tamaño del tumor no solo fue más efectiva con la doxorrubicina conjugada, sino que la tolerabilidad de la doxorrubicina conjugada también fue superior a la de la doxorrubicina sin conjugar. En la Figura 25C, se muestra que el tratamiento con KBB106 se continuó hasta el día 66 posterior al tratamiento. Además, el tratamiento con KBB106 tuvo poco efecto sobre el peso corporal de los ratones (Figura 26B), lo que indica que el tratamiento con la doxorrubicina conjugada se toleró bien.
La carga tumoral residual se evaluó en ratones tratados con docetaxel y con docetaxel conjugado (Figura 27). A los ratones se les implantaron en el flanco células cancerosas de mama MDA-MB231 que expresan luciferasa. El crecimiento tumoral por luminiscencia se visualizó mediante el uso de un sistema de obtención de imágenes in vivo de Carestream. Los ratones se trataron con el vehículo, docetaxel (15 mg/kg/semana) o KBA106 (50 mg/kg/semana). Después de 74 días posteriores al tratamiento, no se detectó luminiscencia en los ratones tratados con el docetaxel conjugado (Figuras 27B y 27C), lo que sugiere que no hay tumores residuales en los ratones. c) Curcumina
La curcumina fitoquímica, sin conjugar y conjugada, también se probó en la proliferación de células cancerosas (Figura 28). Se incubaron células cancerosas de mama (MDA-MB231) con concentraciones crecientes de KBC106 o curcumina. Después de 72 horas, se realizó un ensayo de incorporación de timidina para evaluar las propiedades antiproliferativas de ambas moléculas. Los valores de IC50 se extrajeron de las curvas antiproliferativas. Como se muestra en la Figura 28A, KBC106 tuvo una actividad antiproliferación más fuerte (aproximadamente 100 veces) contra estas células cancerosas de mama en comparación con la curcumina sin conjugar. También se realizó un ensayo de proliferación mediante el uso de diferentes tipos de células cancerosas (células cancerosas de ovario, mama, piel y colorrectal). Los valores de IC50 se calcularon a partir de las curvas de antiproliferación. En todos los casos, la curcumina conjugada (KBC106) tuvo una actividad antiproliferativa más fuerte (9-100 veces) que la curcumina sin conjugar, como se muestra en la Tabla 6 más abajo.
Tabla 6: Valores de IC50 antiproliferativos de la curcumina conjugada y sin conjugar
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Como se demuestra en la presente descripción, la captación celular de la curcumina conjugada (KBC106) es dependiente de la sortilina. Como se muestra en la Figura 29A, se evaluó la captación de las células cancerosas incubadas con la curcumina conjugada o sin conjugar para ambas moléculas mediante el uso de imágenes fluorescentes en vivo. Se encontró que las células habían aumentado la internalización celular de la curcumina conjugada en contraposición a la curcumina sin conjugar. Además, se demostró que los ligandos de la sortilina (neurotensina, progranulina y péptido Katana libre) inhiben la actualización celular de la curcumina conjugada (Figura 29B y 29C).
En la Figura 30, se evaluó adicionalmente si la curcumina conjugada (KBC106) induce la apoptosis de las células cancerosas. Las células cancerosas se incubaron con KBC106 y curcumina. En la primera columna, la captación de ambas moléculas puede monitorearse mediante microscopía fluorescente. Se detectó una mayor acumulación de fluorescencia para KBC1006, lo que indica una mejor internalización celular para el conjugado. La acumulación de curcumina era apenas visible en estas células cancerosas. En la segunda columna, se detectó alfa-tubulina por fluorescencia e imágenes que indican que KBC106 afecta fuertemente a los microtúbulos de las células cancerosas, mientras que la curcumina sola tiene poco efecto sobre ellos. En la tercera columna, el núcleo celular se marcó con el colorante fluorescente DAPI. A diferencia de la curcumina sin conjugar, el KBC106 indujo claramente las fragmentaciones del núcleo mostrando que el conjugado induce la apoptosis de las células cancerosas, mientras que la curcumina sola no lo hace. La última columna (Combinación) muestra que la fluorescencia de KBC106 se localizó conjuntamente con la detección de la alfa-tubulina.
También se demostró que la curcumina conjugada (KBC106) tiene un efecto inhibidor sobre el crecimiento del cáncer de endometrio (Figura 31). A los ratones se les implantaron en el flanco células cancerosas de endometrio (MES). El crecimiento tumoral se midió mediante el uso de un calibre. Cuando los tumores alcanzaron un volumen de alrededor de 150 mm3, los ratones se trataron con KBC106 a 60 mg/kg/dos veces por semana. Los resultados en el día 28 posterior al tratamiento muestran que KBC1006 inhibe el crecimiento tumoral en aproximadamente un 62 % en comparación con el grupo de vehículo, como se muestra en la Tabla 7.
Tabla 7: Efecto inhibidor de KBC106 sobre el crecimiento tumoral endometrial en el día 28
____________________________________ Al día 28______________
Volumen (mm3) Inhibición (%)
Control 1258 -
KBC106 473 62
En conclusión, los resultados describen nuevas aplicaciones para los conjugados fármaco-péptido Katana, que incluyen los fármacos anticancerosos (moléculas pequeñas, productos biológicos tales como mAb) y fitoquímicos. Estos conjugados de fármacos contra el cáncer permanecen activos in vitro como se evidencia con la inhibición eficiente de la proliferación celular y la inducción de la toxicidad celular. Es importante destacar que los datos obtenidos con los conjugados de péptido Katana indican que la conjugación de fármacos anticancerosos con el péptido Katana les permite escapar de la acción de la P-gp. Además, estos resultados sugieren que la conjugación de fármacos anticancerosos o fitoquímicos con péptidos Katana aumenta su eficiencia in vivo por: 1) dirigirse a receptores expresados o sobreexpresados en células cancerosas tal como la sortilina y, por lo tanto, reducirá potencialmente los efectos secundarios de los fármacos conjugados, 2) evitar la bomba de salida de P-gp y/o 3) modificar la farmacocinética o biodisponibilidad del fármaco terapéutico. De hecho, por ejemplo, la conjugación del fármaco contra el cáncer docetaxel con el péptido Katana aumenta la vida media del fármaco libre de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 6 horas. Además, al dirigirse específicamente a los receptores, los conjugados Katana-fármaco se toleran mejor en comparación con los fármacos sin conjugar en una dosis equivalente como se observa en el estudio in vivo con KBA-105 y KBB106. Tomados en conjunto, los datos descritos en la presente descripción sugieren que los fármacos anticancerosos y los fitoquímicos conjugados con péptidos Katana pueden usarse contra tumores primarios tales como cánceres de ovario, mama, pulmón y piel. En particular, estos conjugados pueden usarse contra cánceres que implican la expresión o sobreexpresión de la sortilina. Además, debido a que la bomba de salida de P-gp puede limitar la acumulación de fármacos potencialmente efectivos en otras enfermedades, la conjugación con el péptido Katana puede potencialmente usarse en indicaciones fuera de la oncología. Además, los péptidos Katana pueden conjugarse con otros tipos de moléculas que incluyen los péptidos contra el cáncer, productos biológicos más grandes (por ejemplo, anticuerpos monoclonales), ARNip, así como también sistemas de suministro de fármacos tales como nanopartículas y liposomas.
Ejemplo 5
Ensayo de proliferación celular
Las células cancerosas se cultivaron en placas blancas de 96 pocillos (Perkin Elmer). Se sincronizaron durante 24 horas en medio privado de suero. Después de la incubación de las células con los fármacos sin conjugar (docetaxel, cabazitaxel, doxorrubicina) o con los conjugados fármaco-péptido Katana durante 2 o 3 días, se aspiraron todos los medios y las células se marcaron con pulsos durante 4 horas a 37 °C/95 %O2/5 % CO2 con medios que contienen 2,5 |jCi/ml de [metil-3H] timidina (Perkin Elmer). Las células se lavaron, fijaron y secaron antes de la adición de fluido de centelleo (Microscint 0, Perkin Elmer). Después de 24 horas, se cuantificó el tritio asociado a células mediante el conteo en un lector de placas (TopCount, Perkin Elmer). Se representó gráficamente la [3H] timidina incorporada para cada concentración de fármaco.
Ejemplo 6
Ensayo de migración celular mediante el sistema biosensor xCELLigence
Los experimentos se llevaron a cabo mediante el uso del instrumento Anal-Time Cell Analyzer (RTCA) de doble placa (DP), el sistema xCELLigence (Roche Diagnostics, QC). Este sistema se usó de acuerdo con las instrucciones del proveedor. A continuación, se sembraron células (25000 células/pocillo) en medio sin suero en CIM-Plates 16 (Roche diagnostics). Estas placas son similares a las Transwells convencionales (tamaño de los poros de 8 jm ) con matrices de electrodos de oro en la parte inferior de la membrana, que proporcionan una medición en tiempo real de la migración celular. Antes de la siembra celular, la parte inferior de los pocillos de la cámara superior se revistió con 25 j l de gelatina al 0,15 % en PBS y se incubó durante 1 ha 37 °C. La cámara inferior se llenó con medio sin suero. La cámara superior de cada pocillo se llenó con 100 j l de células SKOV3-luciferasa (2,5 * 105células/ml) previamente tratadas durante 2 horas con o sin docetaxel conjugado (2 jM ) o docetaxel libre (2 jM). Después de 30 min de adhesión, se monitoreó la migración celular cada 5 min durante 8 h. El valor de impedancia se midió con el instrumento RTCA DP y se expresó como una unidad arbitraria denominada índice celular, que refleja la cantidad de células activas en migración. Cada experimento se realizó en pocillos por duplicado.
Ejemplo 7
Yodación del conjugado
Los péptidos se yodaron con procedimientos estándar mediante el uso de las perlas de yodo de Sigma. Los péptidos Katana se diluyeron en tampón fosfato 0,1 M, pH 6,5 (PB). Se usaron dos perlas de yodo para cada proteína. Estas perlas se lavaron dos veces con 3 ml de PB en un filtro Whatman y se resuspendieron en 60 gl de PB. Se adicionó 125I (1 mCi) de Amersham-Pharmacia biotech a la suspensión de perlas durante 5 min a temperatura ambiente. La yodación de cada péptido se inició mediante la adición de 100 gg (80-100 gl). Después de una incubación de 10 min a temperatura ambiente, el yodo libre se eliminó por HPLC.
Ejemplo 8
Acumulación de fármaco en MDCK-MDR1
Se midió la captación celular de [3 H]-Docetaxel y del conjugado [125I]-Docetaxel-péptido Katana en las células MDCK-MDR1 que sobreexpresan P-gp, cultivadas en placas de 24 pocillos. Las células se lavaron tres veces con PBS y se preincubaron durante 30 min a 37 °C en medio de cultivo sin suero con o sin el inhibidor de P-gp ciclosporina A (10 gM). A continuación, se adicionaron las moléculas radiomarcadas (50 nM) durante 60 min. Las células se lavaron rápidamente tres veces con PBS enfriado con hielo y luego se lisaron en 500 gl de NaOH 0,1 M. La cantidad de moléculas radiomarcadas retenidas en las células se contó mediante recuento de centelleo p (Packard modelo 1900 TR). Se usó una alícuota de lisado celular en paralelo para determinar la concentración de proteína celular.
Ejemplo 9
Modelo de xenoinjerto de tumor
Las células cancerosas SKOV3 (2,5 x 106células) que expresan luciferasa se implantaron en el flanco derecho de los ratones. El crecimiento tumoral se monitoreó mediante el uso de un sistema de obtención de imágenes de infrarrojo cercano (NiR) de Carestream inyectando el sustrato de luciferasa luciferina. Los ratones se trataron con docetaxel y un conjugado Katana-fármaco (KBA-105) a una dosis equivalente de docetaxel (10 mg/kg/semana). El tratamiento con docetaxel se interrumpió después de 3 inyecciones debido a la pérdida de peso corporal (alrededor del -20 %). El tratamiento con KBA-105 se toleró mejor ya que el peso corporal de los ratones tratados con una dosis equivalente no se vio afectado incluso después de 5 tratamientos. La luminiscencia asociada con el crecimiento tumoral de células cancerosas SKOV3/Luc se cuantificó en función de los días posteriores al tratamiento con el software del instrumento.
Ejemplo 10
Farmacocinética y distribución tisular
El conjugado docetaxel-péptido Katana se radiomarcó con [125I]- mediante el uso de yodoperlas. Después del radiomarcado, se eliminó el yodo libre. A los ratones se les inyectó el conjugado docetaxel-[125I]-péptido Katana a 5 mg/kg. El plasma se colectó en los tiempos indicados. Después de 1, 2 y 24 horas, algunos ratones se perfundieron con solución salina, se sacrificaron y se colectaron los tejidos. La radioactividad en el plasma y los tejidos se midió en un contador de radiactividad y los resultados se calcularon y expresaron en términos de gl/ml para el plasma o ng/g de tejidos.
Ejemplo 11
Síntesis del conjugado de docetaxel-péptido Katana (KBA-106)
DoceSuOH
Se adicionó gota a gota DIEA (0,21 ml, 1,2 mmol) a una suspensión de docetaxel (0,81 g, 1,0 mmol) y anhídrido succínico (105 mg, 1,05 mmol) en DMSO (5 ml) con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente y se monitoreó mediante UPLC-MS. Después de 2 h, se completó la reacción. Se eliminó el solvente y el residuo resultante se disolvió en DCM y se cargó en una columna de sílice Biotage para su purificación. Se obtuvo DoceSuOH como un polvo blanco después de la liofilización, pureza UPLC-MS > 95 %.
KBP106-(SuDoce)2
Se adicionó gota a gota DIEA (0,234 mmol) a una solución de DoceSuOH (213 mg, 0,234 mmol) y TBTU (75 mg, 0,234 mmol) en DMSO (3-4 ml) para activar previamente el DoceSuOH. La finalización de la activación previa se monitoreó mediante UPLC-MS, luego se adicionó una solución de KBP106 (120 mg, 0,062 mmol) en DMSO (0,2 ml).
La mezcla se agitó a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó por UPLC-MS hasta su finalización. La mezcla de reacción se purificó mediante el uso de una columna de resina 30RPC y un sistema purificador AKTA (10 % a 80 % de ACN) para dar KBP106-(SuDoce)2 (145 mg) como un polvo blanco después de la liofilización, pureza UPLC-MS > 95 %.
Ejemplo 12
Síntesis del conjugado de doxorrubicina-péptido Katana (KBA-106)
DoxurribicinaFmoc-DmgOH
Para incorporar el enlazador Dmg en la doxorrubicina, la amina primaria libre en el azúcar de la Doxo necesita primero ser protegida por un grupo Fmoc. Este intermediario DoxoFmoc se purificó en el sistema Biotage. Luego se adicionó gota a gota DIEA (0,21 ml, 1,2 mmol) a una suspensión de DoxoFmoc (0,81 g, 1,0 mmol) y anhídrido dimetilglutárico (Dmg) (105 mg, 1,05 mmol) en DMSO (x ml) con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente y la reacción se monitoreó mediante UPLC-MS. Una vez completado, se eliminó el solvente y el residuo resultante se disolvió en DCM y se cargó en una columna de sílice Biotage para su purificación. Se obtuvo el DoxoFmoc-DmgOH como un polvo rojizo después de la liofilización, pureza UPLC-MS-MS > 95 %.
Conjugado de KBB106-(Dmg-FmocDoxo)2
Se adicionó gota a gota DIEA (0,234 mmol) a una solución de DmgOH-FmocDoxo (27,3 mg, 0,03 mmol) y TBTU (9,6 mg, 0,03 mmol) en DMSO (3-4 ml) para activar previamente el DmgOH-FmocDoxo. La finalización de la activación previa se monitoreó mediante UPLC-MS, luego se adicionó una solución de KBP106 (16 mg, 0,008 mmol) en DMSO (0,2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó por UPLC-MS hasta su finalización. La mezcla de reacción se purificó mediante el uso de una columna de resina 30RPC y un sistema purificador de AKTA (10 % a 80 % de Ac N; 0,1 ácido fórmico) para dar KBP106-(DmgOH-FmocDoxo)2.
Desprotección del Fmoc de KBP106-Dmg-FmocDoxo
Se disolvió el Dmg-FmocDoxo (50 mg) en 1,5 ml de DMSO y se adicionó 10 gl de piperidina. La mezcla se volvió violeta instantáneamente y la eliminación del grupo Fmoc del resto Doxo se monitoreó mediante UPLC-MS. La desprotección se completó en aproximadamente 10 minutos. Para eliminar el grupo Fmoc libre y la piperidina, la mezcla se cargó luego directamente en una columna de resina 30RPC para su purificación mediante el uso de un sistema purificador AKTA con un gradiente de 10-80 % de ACN; 0,1 de ácido fórmico). El KBP106-Dmg-Doxo se obtuvo como un polvo rojizo, pureza UPLC-MS > 95 %.
Ejemplo 13
Síntesis del conjugado de curcumina-péptido Katana (KBA-106)
Se adicionó Dmg (1,5 equivalentes) a una solución de curcumina (0,5 g) en piridina (4 ml). La mezcla se agitó a reflujo a 65 °C y la reacción se monitoreó mediante UPLC-MS. Después de la incorporación de Dmg, se eliminó el solvente y el residuo resultante se disolvió en DCM y se cargó en una columna de sílice Biotage para su purificación. Se obtuvo el Cur-DmgOH como un polvo amarillo después de la liofilización, pureza UPLC-MS > 95 %.
Adición del enlazador NHS a DmgOH
En esta segunda etapa, se adicionó el enlazador NHS a DmgOH-Cur. Brevemente, se adicionó un exceso de 5 veces de NHS (224 mg; 1,95 mmol) y EDC (373 mg; 1,95 mmol) a DmgOH-Cur (200 mg; 0,39 mmol) en DMSO. Después de completar la incorporación de NHS, la mezcla se cargó directamente en resina 30RPC para su purificación en un sistema de purificación AKTA (10-80 % de ACN; 0,1 % de gradiente de FA).
KBP106-(DmgCur)2
La conjugación se realizó en DMSO al 80 % (pH 9,8) mediante la adición de una solución de KBP106 (50 mg; 0,026 mmol) a NHS-DmgCur (38 mg; 0,062 mmol) disuelto en DMSO. La mezcla se agitó a temperatura ambiente y la conjugación se monitoreó mediante UPLC-MS. La mezcla de reacción se purificó mediante el uso de una columna de resina 30RPC y un sistema purificador de AKTA (10 % a 80 % de ACN; 0,1 de ácido fórmico) para dar el KBP106-(DmgCur)2 como un polvo amarillo después de la liofilización, pureza UPLC-MS > 95 %.
Ejemplo 14
Síntesis del conjugado de Cabazitaxel-péptido Katana (KBA-106)
Cabazitaxel-SuOH
Se adicionó gota a gota DIEA (0,21 ml, 1,2 mmol) a una suspensión de Cabazitaxel (0,81 g, 1,0 mmol) y anhídrido succínico (105 mg, 1,05 mmol) en DMSO (x ml) con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente y se monitoreó mediante UPLC-MS. Después de 2 h, se completó la reacción. Se eliminó el solvente y el residuo resultante se disolvió en DCM y se cargó en una columna de sílice Biotage para su purificación. Se obtuvo cabazitaxel-SuOH como un polvo blanco después de la liofilización, pureza UPLC-MS-MS > 95 %.
KBP106-(SuCabazitaxel)2
Se adicionó DIEA (0,234 mmol) gota a gota a una solución de CabazitaxelSuOH (219 mg, 0,234 mmol) y TBTU (75 mg, 0,234 mmol) en DMSO (3-4 ml) para activar previamente el CabazitaxelSuOH. La finalización de la activación previa se monitoreó mediante UPLC-MS, luego se adicionó una solución de KBP106 (120 mg, 0,062 mmol) en DMSO (0,2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó por UPLC-MS hasta su finalización. La mezcla de reacción se purificó mediante el uso de una columna de resina 30RPC y un sistema purificador AKTA (10 % a 80 % de ACN) para dar el KBP106-(SuCabazitaxel)2 (150 mg) como un polvo blanco después de la liofilización, pureza UPLC-MS-MS > 95 %.
Ejemplo 15
Síntesis del conjugado de Docetaxel-péptido Katana (KBA-105)
Un proceso de 2 etapas:
1. Adición del enlazador en el docetaxel
- Adición de ácido succínico (durante la noche)
- Purificación en Biotage (1 hora)
- Evaporación de los solventes (30 min)
2. Conjugación
- Activación del docetaxel con TBTU (5-10 min)
- Adición del péptido
- Reacción en DMF (no es necesario seguir el pH)
- Tiempo de reacción 30 min
- Purificación en 30 RPC seguida de liofilización a -80 °C
Rendimientos generales alrededor del 75 %
Pureza > 95 %.
Ejemplo 16
Síntesis de conjugado de doxorrubicina-péptido Katana (KBB-106)
Un proceso de 4 etapas:
1. Adición de Fmoc en la amina libre de la doxorrubicina
2. Incorporación del enlazador en el intermediario de Doxorrubicina-Fmoc
- Enlazador ácido dimetilglutárico (DMG)
- Purificación de doxorrubicina(Fmoc)-DMG en Akta seguida de liofilización
3. Conjugación
- Activación de la doxorrubicina-DMG con TBTU (5-10 min)
- Adición del péptido
- Reacción en DMSO (no es necesario seguir el pH)
- Tiempo de reacción 30 min
- Purificación en AKTA (resina 30 RPC) seguida de liofilización
4. La desprotección del grupo Fmoc con piperidina (5-10 min) seguida de la purificación Rendimiento total alrededor del 42 % Pureza> 95 %.
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Claims (16)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto peptídico que tiene al menos un 80 % de identidad de secuencia con un compuesto de Fórmula (X):
GVRAKAGVRN(Nle)FKSESY (X) (SEQ ID NO: 10)
en donde al menos un grupo protector y/o al menos un agente de marcaje está opcionalmente conectado a dicho compuesto peptídico en un extremo N y/o C-terminal.
2. El compuesto peptídico de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto peptídico tiene al menos un 85 % de identidad de secuencia con el compuesto de Fórmula (X).
3. El compuesto peptídico de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto peptídico tiene al menos un 90 % de identidad de secuencia con el compuesto de Fórmula (X).
4. El compuesto peptídico de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto peptídico comprende el compuesto de Fórmula (X).
5. El compuesto peptídico de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto peptídico está representado por la Fórmula (X) y consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 10.
6. Un compuesto conjugado que tiene la fórmula A-(B)n,
en donde
n es 1, 2, 3 o 4;
A es un compuesto peptídico como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicho compuesto peptídico está opcionalmente protegido por un grupo protector; y
B es al menos un agente terapéutico, en donde B está conectado a A, opcionalmente en una amina libre de dicho compuesto peptídico, en una posición N-terminal de dicho compuesto peptídico, en un -SH libre de dicho compuesto peptídico, o en un carboxilo de dicho compuesto peptídico.
7. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en donde B está conectado a A mediante un enlazador, opcionalmente un enlazador escindible o un enlazador no escindible.
8. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en donde el al menos un agente terapéutico es un agente anticanceroso.
9. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el agente anticanceroso es docetaxel, cabazitaxel, paclitaxel, doxorrubicina o daunomicina.
10. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho compuesto conjugado es un compuesto de Fórmula (XXI):
Acetil-GVRAK(docetaxel)AGVRN(Nle)FK(docetaxel)SESY (XXI)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de docetaxel conectada al mismo.
11. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho compuesto conjugado es un compuesto de Fórmula (XXVI):
Acetil-GVRAK(doxorrubicina)AGVRN(Nle)FK(doxorrubicina)SESY (XXVI)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de doxorrubicina conectada al mismo
12. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho compuesto conjugado es un compuesto de Fórmula (XXXII):
Acetil-GVRAK(cabazitaxel)AGVRN(Nle)FK(cabazitaxel)SESY (XXXII)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de cabazitaxel conectada al mismo.
13. El compuesto conjugado de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho compuesto conjugado es un compuesto de Fórmula (XXXV):
Acetil-GVRAK(curcumina)AGVRN(Nle)FK(curcumina)SESY (XXXV)
que comprende el compuesto peptídico que tiene la SEQ ID NO: 15 en donde cada residuo de lisina tiene una molécula de curcumina conectada al mismo.
14. El compuesto como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, para su uso como un medicamento.
15. El compuesto como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, para su uso en el tratamiento de una enfermedad que implica la expresión de la sortilina, en donde la enfermedad se selecciona de cáncer, enfermedad inflamatoria, trastornos lisosomales y enfermedad cardiovascular.
16. El compuesto como se definió en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, para su uso en el tratamiento de una enfermedad que implica la expresión de al menos un receptor que se selecciona de la familia de receptores de clasificación vacuolar 10 (Vsp10), en donde la enfermedad se selecciona de cáncer, enfermedad inflamatoria, trastornos lisosomales y enfermedad cardiovascular y, opcionalmente, en donde dicho al menos un receptor se selecciona de sortilina, SorL1, SorCS1, SorCS2 y SorCS3.
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