CN104231065A - 兔血中球蛋白的纯化制备方法 - Google Patents

兔血中球蛋白的纯化制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104231065A
CN104231065A CN201410454655.6A CN201410454655A CN104231065A CN 104231065 A CN104231065 A CN 104231065A CN 201410454655 A CN201410454655 A CN 201410454655A CN 104231065 A CN104231065 A CN 104231065A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rabbit
loading
buffer
centrifugal
blood
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410454655.6A
Other languages
English (en)
Inventor
葛安山
刘晓明
荆荣燕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
QINGDAO ZHONGCHUANG BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
KANGDA FOOD CO Ltd QINGDAO
Original Assignee
QINGDAO ZHONGCHUANG BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
KANGDA FOOD CO Ltd QINGDAO
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by QINGDAO ZHONGCHUANG BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd, KANGDA FOOD CO Ltd QINGDAO filed Critical QINGDAO ZHONGCHUANG BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201410454655.6A priority Critical patent/CN104231065A/zh
Publication of CN104231065A publication Critical patent/CN104231065A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4717—Plasma globulins, lactoglobulin

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

发明公开了一种兔血中球蛋白的纯化制备方法，主要包括如下工艺步骤：(1)兔血前处理；(2)滤出液脱盐；(3)兔血球蛋白的分离；(4)层析；(5)超滤。该方法操作简单，提取的球蛋白纯度高，所得兔血中球蛋白的纯度为98%。

Description

兔血中球蛋白的纯化制备方法
技术领域
本发明属于生物蛋白技术领域，具体涉及兔血中球蛋白的纯化制备方法。 
背景技术
兔血含有很高的营养价值，可加工成多种产品，供食用、药用，或作为畜禽的动物性饲料。兔血可提取多种生物药物和生化试剂，如医用血清、血清抗原、凝血酶、亮氨酸、蛋白胨等，兔血医用价值高，但目前兔血提取技术仅限于实验室应用，无法达到纯化提取，且不能产业化提取和生产，对兔血的应用存在一定的局限性。球蛋白可有效提高人或机体的免疫力，具有极高的医学应用价值，现在主要是硫酸铵沉淀法，然后反透析提取，提取率及纯度都不高，本发明应用DEAE柱层析系统，提高了兔血球蛋白提取的纯度与产率。 
发明内容
为了克服现有技术存在的技术缺陷，本发明提供一种兔血中球蛋白的纯化制备方法，该方法操作简单，提取的球蛋白纯度高。 
兔血中球蛋白的纯化制备方法，主要包括如下工艺步骤： 
(1) 兔血前处理
a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠（柠檬酸钠）溶液中，并搅匀；
b. 连续流离心机离心，离心力约为400g，离心上清为血浆，沉淀物为血球等细胞，收集上清；
c. 将收集的上清通过深层滤器，收集滤出液；
(2) 滤出液脱盐
采用G25脱盐层析，将20L的滤出液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，当紫外检测器检测到蛋白流出时，切换至收集管路，直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10，切换至废液，直至紫外检测器信号为平，重复上样；
(3) 兔血球蛋白的分离
a. 冷沉淀：将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜，其会析出大量的沉淀物，该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物；
b. 离心：将冷沉淀的溶液在4℃的条件下，离心约30min，收集上清液；
(4) 层析
a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集穿透液。
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料，Buffer A：15mM HAc-NaAc，pH为 5.2；Buffer B：25mM NaAc ，pH为 4.5。 
b. 将a中收集的穿透液用稀NaOH调节pH至7.0，通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集二次穿透液。 
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料，Buffer A：15mM PB，pH 为7.0；Buffer B：Buffer A +500mM NaCl 
(5) 超滤
将进液口放入兔血球蛋白洗脱液中，待兔血球蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时，关闭超滤系统，并尽量将进液管路和回流管路中的兔血球蛋白洗脱液收集。
将膜包用0.1M NaOH冲洗30min后用水冲洗直至pH约为7，将膜包取出，置于保存液中。 
通过本发明工艺步骤所得兔血中球蛋白的纯度为98%。 
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行详细的描述。 
兔血中球蛋白的纯化制备方法，主要包括如下工艺步骤： 
(1) 兔血前处理
a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠（柠檬酸钠）溶液中，并搅匀；
b. 连续流离心机离心，离心力约为400g，离心上清为血浆，沉淀物为血球等细胞，收集上清；
c. 将收集的上清通过深层滤器，收集滤出液；
(2) 滤出液脱盐
采用G25脱盐层析，将20L的滤出液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，当紫外检测器检测到蛋白流出时，切换至收集管路，直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10，切换至废液，直至紫外检测器信号为平，重复上样；
(3) 兔血球蛋白的分离
a. 冷沉淀：将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜，其会析出大量的沉淀物，该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物；
b. 离心：将冷沉淀的溶液在4℃的条件下，离心约30min，收集上清液；
(4) 层析
a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集穿透液。
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料。Buffer A：15mM HAc-NaAc，pH为 5.2；Buffer B：25mM NaAc ，pH为 4.5。 
b. 将a中收集的穿透液用稀NaOH调节pH至7.0，通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集二次穿透液。 
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料。Buffer A：15mM PB，pH 为7.0；Buffer B：Buffer A +500mM NaCl 
(5) 超滤
将进液口放入兔血球蛋白洗脱液中，待兔血球蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时，关闭超滤系统，并尽量将进液管路和回流管路中的兔血球蛋白洗脱液收集。
将膜包用0.1M NaOH冲洗30min后用水冲洗直至pH约为7，将膜包取出，置于保存液中。 
此外，本发明并不局限于上述实施方式，基于相同手段所达到的技术效果，都属于本发明的保护范围。  

Claims (1)

1.兔血中球蛋白的纯化制备方法，其特征在于：主要包括如下工艺步骤：
 (1) 兔血前处理
a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠（柠檬酸钠）溶液中，并搅匀；
b. 连续流离心机离心，离心力约为400g，离心上清为血浆，沉淀物为血球等细胞，收集上清；
c. 将收集的上清通过深层滤器，收集滤出液；
(2) 滤出液脱盐
采用G25脱盐层析，将20L的滤出液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，当紫外检测器检测到蛋白流出时，切换至收集管路，直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10，切换至废液，直至紫外检测器信号为平，重复上样；
(3) 兔血球蛋白的分离
a. 冷沉淀：将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜，其会析出大量的沉淀物，该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物；
b. 离心：将冷沉淀的溶液在4℃的条件下，离心约30min，收集上清液；
(4) 层析
a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集穿透液；
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料，Buffer A：15mM HAc-NaAc，pH为5.2；Buffer B：25mM NaAc ，pH为 4.5；
b. 将a中收集的穿透液用稀NaOH调节pH至7.0，通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集二次穿透液；
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料，Buffer A：15mM PB，pH 为7.0；Buffer B：Buffer A +500mM NaCl
(5) 超滤
将进液口放入兔血球蛋白洗脱液中，待兔血球蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时，关闭超滤系统，并尽量将进液管路和回流管路中的兔血球蛋白洗脱液收集；
将膜包用0.1M NaOH冲洗30min后用水冲洗直至pH约为7，将膜包取出，置于保存液中。
CN201410454655.6A 2014-09-09 2014-09-09 兔血中球蛋白的纯化制备方法 Pending CN104231065A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410454655.6A CN104231065A (zh) 2014-09-09 2014-09-09 兔血中球蛋白的纯化制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410454655.6A CN104231065A (zh) 2014-09-09 2014-09-09 兔血中球蛋白的纯化制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104231065A true CN104231065A (zh) 2014-12-24

Family

ID=52220051

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410454655.6A Pending CN104231065A (zh) 2014-09-09 2014-09-09 兔血中球蛋白的纯化制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104231065A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107136304A (zh) * 2016-12-28 2017-09-08 青岛康大食品有限公司 一种添加兔血球蛋白的宠物食品及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1419566A (zh) * 2000-03-30 2003-05-21 阿默森生物科学有限公司 生产lgG的方法
CN102268090A (zh) * 2011-07-13 2011-12-07 北京洪源澳达生物技术发展有限公司 一种暹罗鳄血液提取物及其提取方法和用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1419566A (zh) * 2000-03-30 2003-05-21 阿默森生物科学有限公司 生产lgG的方法
CN102268090A (zh) * 2011-07-13 2011-12-07 北京洪源澳达生物技术发展有限公司 一种暹罗鳄血液提取物及其提取方法和用途

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘燕: "《体外循环技术》", 31 July 2012, 北京大学医学出版社 *
王憬惺: "《血液制品学》", 30 June 1998, 人民卫生出版社 *
赵彦鼎: "层析工艺在血浆蛋白纯化中的应用", 《WWW.DOCIN.COM/P-656360767》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107136304A (zh) * 2016-12-28 2017-09-08 青岛康大食品有限公司 一种添加兔血球蛋白的宠物食品及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101870722B (zh) 两级泡沫分离法浓缩大豆蛋白废水中蛋白质工艺
KR20190139814A (ko) 정제 공정의 용량을 증가시키는 방법
CN104327171B (zh) 一种层析纯化法生产破伤风类毒素原液的方法
CN103113459B (zh) 从大豆乳清水中连续化生产大豆乳清蛋白的方法
CN101735648B (zh) 双水相萃取体系分离纯化甜菜红色素的方法
CN202124582U (zh) 一种从猫豆中提取左旋多巴的膜处理系统
CN101497574B (zh) 膜分离与工业色谱分离联用提取分离l-异亮氨酸的方法
CN101503366B (zh) 膜分离与工业色谱分离联用提取分离l-缬氨酸的方法
CN104450639B (zh) 一种采用超滤法辅助双水相萃取技术提取乳过氧化物酶的方法
CN104450656A (zh) 兔血中凝血酶的纯化制备方法
CN103130664A (zh) 一种膜分离技术提取γ-氨基丁酸的工艺方法
CN104119229A (zh) 一种制取纯品绿原酸的工艺
CN104231065A (zh) 兔血中球蛋白的纯化制备方法
CN104404094A (zh) 基于蛤利用酶转化法提取牛磺酸的方法
CN202226858U (zh) 一种病毒液纯化、浓缩装置
CN106518700A (zh) 一种谷氨酸膜法生产工艺
CN108101980B (zh) 一种高纯度藻蓝色素的制备方法
CN104231074A (zh) 兔血中白蛋白的纯化制备方法
CN104004091B (zh) 一种人免疫球蛋白的制备工艺
CN102187935B (zh) 一种制备酪蛋白磷酸肽与ace抑制肽的方法
CN211595333U (zh) 一种处理含甲醇高盐废水的系统
CN203467599U (zh) 一种高性能的猪血蛋白粉制备装置
CN104761593B (zh) 一种基于膜分离技术从发酵液中提取α-熊果苷的方法
CN102746174A (zh) 一种利用膜分离与电渗析组合技术从发酵液中提取分离l-缬氨酸的方法
CN207628222U (zh) 废弃溶剂体系处理系统

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20141224

RJ01 Rejection of invention patent application after publication