CN104231074A - 兔血中白蛋白的纯化制备方法 - Google Patents

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葛安山
刘晓明
荆荣燕
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QINGDAO ZHONGCHUANG BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
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Abstract

本发明公开了一种兔血中白蛋白的纯化制备方法，主要包括如下工艺步骤：(1)兔血前处理；(2)滤出液脱盐；(3)兔血白蛋白的分离；(4)层析；(5)超滤。该方法操作简单，提取的白蛋白纯度高，提取白蛋白纯度可达99%，与传统方法比较，提取效率可提高25%。

Description

兔血中白蛋白的纯化制备方法
技术领域
本发明属于生物蛋白技术领域，具体涉及兔血中白蛋白的纯化制备方法。 
背景技术
兔血含有很高的营养价值，可加工成多种产品，供食用、药用，或作为畜禽的动物性饲料。兔血可提取多种生物药物和生化试剂，如医用血清、血清抗原、凝血酶、亮氨酸、蛋白胨等，兔血医用价值高，但目前兔血提取技术仅限于实验室应用，无法达到纯化提取，且不能产业化提取和生产，对兔血的应用存在一定的局限性。目前，应用最广泛的是牛血清白蛋白，用于细胞培养、WB封闭剂、代谢反应、生化测定、抗体稀释等，兔血清白蛋白在用于封闭剂、抗体稀释、生化测定等方面要优于牛血清白蛋白。常用的方法为盐析法和DEAE柱层析法，且在兔血方面主要是在实验室的小批量处理，本方法在处理量和纯度方面较之传统方法都有极大的提升。 
发明内容
为了克服现有技术存在的技术缺陷，本发明提供一种兔血中白蛋白的纯化制备方法，该方法操作简单，提取的白蛋白纯度高。 
兔血中白蛋白的纯化制备方法，主要包括如下工艺步骤： 
(1) 兔血前处理
a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠（柠檬酸钠）溶液中，并搅匀；
b. 连续流离心机离心，离心力约为400g，离心上清为血浆，沉淀物为血球等细胞，收集上清；
c. 将收集的上清通过深层滤器，收集滤出液；
(2) 滤出液脱盐
采用G25脱盐层析，将20L的滤出液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，当紫外检测器检测到蛋白流出时，切换至收集管路，直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10，切换至废液，直至紫外检测器信号为平，重复上样；
(3) 兔血白蛋白的分离
a. 冷沉淀：将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜，其会析出大量的沉淀物，该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物；
b. 离心：将冷沉淀的溶液在4℃的条件下，离心约30min，收集上清液；
(4) 层析
a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集穿透液。
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料。Buffer A：15mM HAc-NaAc，pH为 5.2；Buffer B：25mM NaAc ，pH为 4.5。 
b. 将a中收集的穿透液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集二次穿透液。 
所述层析柱为450*200，填料为CM，装填高度为15cm，约需要22L填料。Buffer A：25mM HAc-NaAc，pH 为4.5；Buffer B：25mM NaAc + 0.25M NaCl ，pH为 5.5。 
(5) 超滤 
在进液口放入兔血白蛋白洗脱液中(pH为7.0)，待兔血白蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时，关闭超滤系统，收集进液管路和回流管路中的兔血白蛋白洗脱液。
将膜包用0.1M NaOH冲洗30min，再用水冲洗直至pH约为7，将膜包取出并置于保存液中，提取白蛋白纯度可达99%，与传统方法比较，提取效率可提高25%。 
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进行详细的描述。 
兔血中白蛋白的纯化制备方法，主要包括如下工艺步骤： 
(1) 兔血前处理
a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠（柠檬酸钠）溶液中，并搅匀；
b. 连续流离心机离心，离心力约为400g，离心上清为血浆，沉淀物为血球等细胞，收集上清；
c. 将收集的上清通过深层滤器，收集滤出液；
(2) 滤出液脱盐
采用G25脱盐层析，将20L的滤出液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，当紫外检测器检测到蛋白流出时，切换至收集管路，直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10，切换至废液，直至紫外检测器信号为平，重复上样；
(3) 兔血白蛋白的分离
a. 冷沉淀：将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜，其会析出大量的沉淀物，该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物；
b. 离心：将冷沉淀的溶液在4℃的条件下，离心约30min，收集上清液；
(4) 层析
a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集穿透液。
层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料，Buffer A：15mM HAc-NaAc，pH为 5.2；Buffer B：25mM NaAc ，pH为 4.5。 
b. 将a中收集的穿透液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集二次穿透液。 
层析柱为450*200，填料为CM，装填高度为15cm，约需要22L填料。Buffer A：25mM HAc-NaAc，pH 为4.5；Buffer B：25mM NaAc + 0.25M NaCl ，pH为 5.5。 
(5) 超滤 
在进液口放入兔血白蛋白洗脱液中(pH为7.0)，待兔血白蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时，关闭超滤系统，收集进液管路和回流管路中的兔血白蛋白洗脱液。
将膜包用0.1M NaOH冲洗30min，再用水冲洗直至pH约为7，将膜包取出并置于保存液中。 
此外，本发明并不局限于上述实施方式，基于相同手段所达到的技术效果，都属于本发明的保护范围。  

Claims (1)

1.兔血中白蛋白的纯化制备方法，其特征在于：主要包括如下工艺步骤：
(1) 兔血前处理
a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠（柠檬酸钠）溶液中，并搅匀；
b. 连续流离心机离心，离心力约为400g，离心上清为血浆，沉淀物为血球等细胞，收集上清；
c. 将收集的上清通过深层滤器，收集滤出液；
(2) 滤出液脱盐
采用G25脱盐层析，将20L的滤出液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，当紫外检测器检测到蛋白流出时，切换至收集管路，直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10，切换至废液，直至紫外检测器信号为平，重复上样；
(3) 兔血白蛋白的分离
a. 冷沉淀：将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜，其会析出大量的沉淀物，该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物；
b. 离心：将冷沉淀的溶液在4℃的条件下，离心约30min，收集上清液；
(4) 层析
a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集穿透液；
所述层析柱为450*200，填料为DEAE 6FF，装填高度为15cm，约需要22L填料；Buffer A：15mM HAc-NaAc，pH为 5.2；Buffer B：25mM NaAc ，pH为 4.5；
b. 将a中收集的穿透液通过上样管路上样，待上样完成后切至进液管路，收集二次穿透液；
所述层析柱为450*200，填料为CM，装填高度为15cm，约需要22L填料；Buffer A：25mM HAc-NaAc，pH 为4.5；Buffer B：25mM NaAc + 0.25M NaCl ，pH为 5.5；
(5) 超滤
在进液口放入兔血白蛋白洗脱液中(pH为7.0)，待兔血白蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时，关闭超滤系统，收集进液管路和回流管路中的兔血白蛋白洗脱液；
将膜包用0.1M NaOH冲洗30min，再用水冲洗直至pH约为7，将膜包取出并置于保存液中。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109734796A (zh) * 2019-02-01 2019-05-10 广州蕊特生物科技有限公司 一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1544470A (zh) * 2003-11-17 2004-11-10 孙福森 牛血清白蛋白热乙醇法提取工艺
CN101402671A (zh) * 2008-10-21 2009-04-08 浙江大学 从畜禽血液中同时分离纤维蛋白原和免疫球蛋白的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1544470A (zh) * 2003-11-17 2004-11-10 孙福森 牛血清白蛋白热乙醇法提取工艺
CN101402671A (zh) * 2008-10-21 2009-04-08 浙江大学 从畜禽血液中同时分离纤维蛋白原和免疫球蛋白的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
丛峰松 主编: "《生物化学实验》", 30 June 2005 *
路秀玲 等: "人血清白蛋白纯化技术研究进展", 《生物工程学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109734796A (zh) * 2019-02-01 2019-05-10 广州蕊特生物科技有限公司 一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺
CN109734796B (zh) * 2019-02-01 2022-04-15 广州蕊特生物科技有限公司 一种从溶血血清中分离白蛋白的工艺

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