CN104224951A - 各种成分比例稳定均一的大黄总蒽醌及其组合物用于治疗胆囊炎 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种大黄总蒽醌及其组合物在治疗胆囊炎方面的用途。本发明所述大黄总蒽醌包括：游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等或它们的混合物。

Description

各种成分比例稳定均一的大黄总蒽醌及其组合物用于治疗胆囊炎

技术领域：

本发明涉及一种中药提取物制剂的治疗用途，特别涉及一种各种成分比例稳定均一的大黄总蒽醌及其组合物用于治疗胆囊炎。

背景技术：

大黄为常用中药之一，系蓼科多年生草本植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根和根茎。

大黄味苦，性寒，具有泻下攻击，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经之功效。现代化学研究证明大黄的主要化学成分为蒽醌类化合物；大黄有效成分的提取分离方法主要有：煎煮法(水提法):煎煮法为大黄有效成分的传统提取方法，由于游离蒽醌类的极性小，故用煎煮法对游离蒽醌类成分的提取效果不佳；而其结合蒽醌苷类极性较其苷元较大，故可用水提取。醇提法:由于大黄中活性成分的极性分布很广，因此就总蒽醌类的提取而言，醇提法的效率要明显高于煎煮法。目前较常用的醇提法有乙醇回流法和渗漉法。

大黄化学成分复杂，化学结构已被阐明的至少已有136种，但其主要成分为蒽醌类化合物，总含量在2％～5％，其中游离的羟基蒽醌类化合物只占1/10～1/5，主要为大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚和大黄酸等，为大黄的主要抗菌成分。结合性蒽醌衍生物为游离蒽醌的葡萄糖苷(即大黄酚葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷、芦荟大黄素葡萄糖苷、大黄酸葡萄糖苷等)和双蒽酮苷类，系大黄的主要泻下成分，其中双蒽酮苷为:番泻苷A、B、C、D、E等。番泻苷A与番泻苷B互为异构体；番泻苷C与番泻苷D互为异构体。此外尚含有大黄素、芦荟大黄素和大黄酚的双葡萄糖苷。大黄亦含有鞣质类化合物约5％，其中有没食子酰葡萄糖、没食子酸、d-儿茶素及大黄四聚素等，为收敛止血有效成分。

大黄及大黄总蒽醌的药物作用在许多文献中有报道，主要的作用有：

(1)疖肿及口腔炎，(2)下腿溃疡(臁疮)，(3)肠胀气，(4)传染性湿疹样皮炎，(5)咳嗽(6)急性胃十二指肠出血，(7)慢性肾功能不全，(8)拔牙术后出血(9)烧伤，(10)急性坏死性小肠炎致肠麻痹，(11)胆道蛔虫，(12)急性黄疸型肝炎，(13)胃癌出血，(14)急性胰腺炎，(15)乳蛾(急性化脓性扁桃体炎)，(lS)流行性腮腺炎，(17)新生儿不吃奶，(18)慢性前列腺炎，(19)鼻出血，(20)慢性便秘，(21)小儿厌食症，(22)肝性脑病，(23)脑出血急性期，(24)胆道出血，(25)脑外伤性颅内出血，(26)高脂血症，(27)慢性肾功能衰竭，(28)急性胆囊炎，(29)急性肠梗阻，(30)阑尾脓肿，(31)张力性水疱，(32)腹膜后血肿，(33)带状疱疹，(34)排卵功能失调，(35)急性淋病，(36)银屑病，(37)急性软组织损伤，(38)甲沟炎，(39)淋巴结核，(40)老年单纯性肥胖症，(41)中风便秘，(42)癃闭，(43)预治大面积烧伤并发症，(44)重型肝炎，(45)流行性出血热消化道出血。

总之，大黄及其蒽醌提取物具有多种多样的药物作用，是近年来研究最多的中药之一。

用大黄制备的药物已经上市多年，现有的大黄制剂有新清宁片和新清宁胶囊，其主要成分是熟大黄。具有清热解毒。活血化瘀，缓下功效。用于内结实热，喉肿，牙痛，目赤，便秘，下痢，感染性炎症，发烧等证。

因大黄的主要活性成分为大黄总蒽醌，因此以大黄总蒽醌作为药物成分以及相应的提取分离方法多有报道，大黄总蒽醌提取自大黄的根茎，其颜色形状为棕黑色浸膏或棕色粉状结晶，是游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等混合物。

已经上市的大黄总蒽醌制剂有大黄总蒽醌胶囊，其主要成分为大黄提取物。【功能主治】用于治疗湿热型黄疸肝炎。

中国专利申请号：200810107381.8申请日：2008-11-13公开了一种治疗湿热型黄疸肝炎大黄总蒽醌胶囊的制备方法,其中大黄总蒽醌胶囊的主要成份为大黄活性成分组合物大黄总蒽醌，并按大黄总蒽醌18％-22％,淀粉78％-82％的配比进行制备

本发明人对大黄总蒽醌制剂的适应症进行了研究，意外的发现，本发明的大黄总蒽醌制剂可以用于胆囊炎的治疗，并取得了令人满意的效果。

发明内容：

本发明提供一种大黄总蒽醌制剂的新的治疗应用，本发明所述大黄总蒽醌包括任何一种方法制备的大黄蒽醌物质，包括游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等或它们的混合物。特别包括以下中国专利中提及的大黄总蒽醌、大黄蒽醌或大黄蒽醌类衍生物：

本发明所述大黄总蒽醌，最优选的是采用以下方法制备的大黄总蒽醌：

其制备方法如下：步骤1，

取大黄1000g，照中国药典2010年版一部附录I0流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每公斤药粉每分钟1～1.5ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液5000ml备用；继续渗漉，收集续漉液10000ml减压回收乙醇至60℃相对密度0.90～0.9,，放冷，静置，滤过，得析出物I，滤液l备用；

步骤2，

取初漉液加50％乙醇稀释至含醇量75％，用10％氢氧化钠的65％乙醇溶液碱化至漉液中无没食子酸斑点，静置12小时，取上清液用盐酸调节pH值至6.0～7.0，减压回收乙醇至60℃相对密度1.00～1.02，放冷，静置，滤过，得沉淀物l和滤液2，

步骤3，

滤液2与滤液l合并，减压浓缩至80℃相对密度1.40～1.45，加6倍稠膏重量的乙醇回流2次，每次0.5小时，滤过，滤液用10％氢氧化钠的65％乙醇溶液碱化至溶液中无没食子酸斑点，静置12小时，滤过，滤液调节pH值至6.0～7.0，减压回收乙醇，浓缩至80℃相对密度为1.45～1.48，并与上述沉淀物1合并，称定重量，加入10倍量0.5％氢氧化钠水溶液溶解，浓盐酸调节pH值至6.0～7.0，加入0.2倍合并物重量的明胶，加热，浓缩至80℃相对密度为1.40～1.45，趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀加入适量沸水，加热使溶解，使80℃相对密度为1.40～1.45，趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀再重复操作1次，合并3次滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度0.95～0.97，放冷，滤过，收集析出物II和滤液3，

步骤4，

滤液3检查鞣质至阴性，加4倍量乙醇沉淀除尽残留明胶，滤过，回收乙醇，蒸干，85℃，0.07MPa减压干燥，粉碎，加6倍干固物重量乙醇回流2次，每次0.5小时，合并乙醇液，减压回收乙醇，得残留物，

步骤5，

残留物与析出物I、析出物II合并，混匀，65℃以下减压干燥，即得本发明的大黄总蒽醌。

本发明的大黄总蒽醌，其检测方法如下：

其【性状】为褐黄色粉末，气微，味微苦。

其【鉴别】方法如下：取本发明的大黄总蒽醌0.1g，加三氯甲烷4Oml超声处理lO分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸对照品，加甲醇溶解，分别制成每1ml含0.2mg、0.1mg，0.1mg,0.1mg,0.2mg的溶液作为对照溶液，照薄层层析法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种供试品和对照品溶液各5～10μl分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶H薄层板上(新活化)，以石油醚(30～60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)10℃以下放置的上层溶液为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

其【检查】方法如下：

没食子酸的检查：取本发明的大黄总蒽醌细粉25mg，置5ml量瓶中，加甲醇4～5ml超声处理30分钟使溶解，冷却，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点颜色应不得深于对照品斑点的颜色。

土大黄苷的检查：取本发明的大黄总蒽醌0.2g，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10ul点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。

其【含量测定】方法如下：

(1)、总蒽醌

对照品溶液的制备

取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml置l0ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法：取本品约40mg，精密称定，置100ml园底烧瓶中，加8％盐酸溶液20ml，再加三氯甲烷20mL置沸水浴中加热回流1小时，冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器至无色，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次(20ml、15ml、10ml)，合并三氯甲烷提取液置100ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。精密量取0.4ml置10ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中总蒽醌的量，计算，即得。

本品按干燥品计算，含总蒽醌以大黄素(C_l5H_LoO₅计，应为50％-60％)。

(2)、游离蒽醌

对照品溶液的制备

取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml置lOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液lOml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法：取本品约40ml，精密称定，置100ml锥形瓶中，加三氯甲烷约60ml超声处理(功率250W，频率25KHz)40分钟，放冷，滤过，用三氯甲烷冲洗滤器及锥形瓶，并入滤液中，滤液转移至100ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。精密量取0.4ml置lOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液lOml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中游离蒽醌的量，计算，即得。

本品按干燥品计算，含游离蒽醌以大黄素(C_l5H_LoO₅)计，应为48％-58％。

(3)、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量：照高效液相色谱法(中国到典2010年版一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八炕基硅炕键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相:检测波长为440nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10μg、大黄素甲醚20μg、大黄酚50μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入甲醇适量，超声处理(功率250W，频率25KHz)30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml(剩余滤液备用)，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液20ml再加三氯甲烷20ml加热回流2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次10时，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含芦荟大黄素(C₁₅H₃₀O₅)、大黄酸(C₁₅H₈O₆)、大黄素(C₁₅H_lOO₅)、大黄酚(C₁₅H_lOO₄)、大黄素甲醚(C₁₆H₁₂O₅)的总量不得少于50％。

(4)游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚总量照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定。

照高效液相色谱法(中国到典2010年版一部附录VID)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八炕基硅炕键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相:检测波长为440nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10μg、大黄素甲醚20μg、大黄酚50μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入甲醇适量，超声处理(功率250W，频率25KHz)30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液的一部分作为供试品溶液。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含游离芦荟大黄素(C₁₅H₃₀O₅)、游离大黄酸(C₁₅H₈O₆)、游离大黄素(C₁₅H_lOO₅)、游离大黄酚(C₁₅H_lOO₄)、游离大黄素甲醚(C₁₆H₁₂O₅)的总量不得少于40％。

本发明的大黄总蒽醌，其中，

含总蒽醌以大黄素计，为50％-60％。

含游离蒽醌以大黄素计，为48％-58％。

按干燥品计算，含芦荟大黄素(C₁₅H₃₀O₅)、大黄酸(C₁₅H₈O₆)、大黄素(C₁₅H_lOO₅)、大黄酚(C₁₅H_lOO₄)、大黄素甲醚(C₁₆H₁₂O₅)的总量不少于50％。

按干燥品计算，含游离芦荟大黄素(C₁₅H₃₀O₅)、游离大黄酸(C₁₅H₈O₆)、游离大黄素(C₁₅H_lOO₅)、游离大黄酚(C₁₅H_lOO₄)、游离大黄素甲醚(C₁₆H₁₂O₅)的总量不少于40％。

本发明的大黄总蒽醌可以制备成片剂，胶囊等口服药物形式，也可以制备成外用和注射用药物形式，如含有以下重量比例的组分制备的片剂或胶囊剂：

制备方法如下：

1)大黄总蒽醌，微晶纤维素，混合均匀；

2)将聚维酮用95％(v/v)的乙醇溶解，制备成含有10％的聚维酮溶液(10份重量的聚维酮溶解到95％的乙醇中得到100份体积的聚维酮乙醇溶液)；

3)将10％的聚维酮溶液加入上述混合物中搅拌均匀，制软材，过18目筛制颗粒，干燥，颗粒干燥后加入硬脂酸镁混匀，装1000粒胶囊。或上压片机压1000片，再包衣即可。

本发明在研究大黄总蒽醌的过程中意外的发现其对胆囊炎具有治疗作用，为此本发明的核心在于，提供一种老药新用途，即用本发明的大黄总蒽醌制备一种用于治疗胆囊炎的药物。

以下通过实验数据说明本发明的新用途。

临床观察：

胆囊炎病例：

张女士，

38岁，清洁工。2012年8月9日初诊，主诉：右上腹部反复发作性疼痛1年。在医院诊为慢性胆囊炎，经西药治疗病情无减。服用大黄总蒽醌胶囊每日3次，每次2粒，一周后上腹疼痛减轻，继续服用1周，未再出现上腹部疼痛。

王先生，

吉林人，现年50岁。发病1天后求治，检查为慢性胆囊炎，现体征为右上腹部有压、触、叩痛，并伴肌卫征，诊断为慢性胆囊炎急性发作。治疗：采用大黄总蒽醌胶囊治疗，每次3粒，每天2次，三天后症状消失。

安徽省人民医院收治的30例胆系感染患者用大黄总蒽醌胶囊每日3-4次，5-7天为一疗程，一般为1-2疗程。治愈率为26.7％，总有效率为93.3％。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1

发明的大黄总蒽醌胶囊的制备方法如下：

1)大黄总蒽醌，微晶纤维素，混合均匀；

2)将聚维酮用95％(v/v)的乙醇溶解，制备成含有10％的聚维酮溶液(10份重量的聚维酮溶解到95％的乙醇中得到100份体积的聚维酮乙醇溶液)；

3)将10％的聚维酮溶液加入上述混合物中搅拌均匀，制软材，过18目筛制颗粒，干燥，颗粒干燥后加入硬脂酸镁混匀，装1000粒胶囊。

实施例2

配方为

制备方法如下：

1)大黄总蒽醌，微晶纤维素，混合均匀；

2)将聚维酮用95％(v/v)的乙醇溶解，制备成含有10％的聚维酮溶液(10份重量的聚维酮溶解到95％的乙醇中得到100份体积的聚维酮乙醇溶液)；

3)将10％的聚维酮溶液加入上述混合物中搅拌均匀，制软材，过18目筛制颗粒，干燥，颗粒干燥后加入硬脂酸镁混匀，压1000片。

实施例3

配方为

制备方法如下：

1)大黄总蒽醌，微晶纤维素，混合均匀；

2)将聚维酮用95％(v/v)的乙醇溶解，制备成含有10％的聚维酮溶液(10份重量的聚维酮溶解到95％的乙醇中得到100份体积的聚维酮乙醇溶液)；

3)将10％的聚维酮溶液加入上述混合物中搅拌均匀，制软材，过18目筛制颗粒，干燥，颗粒干燥后加入硬脂酸镁混匀，装1000粒胶囊。

Claims (6)

1.大黄总蒽醌及其组合物在制备治疗胆囊炎的药物中的应用。

2.权利要求1所述的应用，其中所述大黄总蒽醌包括任何一种方法制备的大黄蒽醌物质，包括游离蒽醌、结合蒽醌、蒽酮、糖、鞣质等或它们的混合物。

3.权利要求1所述的应用，其中所述大黄总蒽醌是采用以下方法制备的大黄总蒽醌：

步骤1，

取大黄1000g，照中国药典2010年版一部附录I0流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用乙醇作溶剂，浸渍48小时后，以每公斤药粉每分钟1～1.5ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液5000ml备用；继续渗漉，收集续漉液10000ml减压回收乙醇至60℃相对密度0.90～0.9,，放冷，静置，滤过，得析出物I，滤液l备用；

步骤2，

取初漉液加50％乙醇稀释至含醇量75％，用10％氢氧化钠的65％乙醇溶液碱化至漉液中无没食子酸斑点，静置12小时，取上清液用盐酸调节pH值至6.0～7.0，减压回收乙醇至60℃相对密度1.00～1.02，放冷，静置，滤过，得沉淀物l和滤液2，

步骤3，

滤液2与滤液l合并，减压浓缩至80℃相对密度1.40～1.45，加6倍稠膏重量的乙醇回流2次，每次0.5小时，滤过，滤液用10％氢氧化钠的65％乙醇溶液碱化至溶液中无没食子酸斑点，静置12小时，滤过，滤液调节pH值至6.0～7.0，减压回收乙醇，浓缩至80℃相对密度为1.45～1.48，并与上述沉淀物1合并，称定重量，加入10倍量0.5％氢氧化钠水溶液溶解，浓盐酸调节pH值至6.0～7.0，加入0.2倍合并物重量的明胶，加热，浓缩至80℃相对密度为1.40～1.45，趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀加入适量沸水，加热使溶解，使80℃相对密度为1.40～1.45，趁热缓缓加入4倍量乙醇，加热搅拌至明胶析出，滤过，收集沉淀和滤液，沉淀再重复操作1次，合并3次滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度0.95～0.97，放冷，滤过，收集析出物II和滤液3，

步骤4，

滤液3检查鞣质至阴性，加4倍量乙醇沉淀除尽残留明胶，滤过，回收乙醇，蒸干，85℃，0.07MPa减压干燥，粉碎，加6倍干固物重量乙醇回流2次，每次0.5小时，合并乙醇液，减压回收乙醇，得残留物，

步骤5，

残留物与析出物I、析出物II合并，混匀，65℃以下减压干燥，即得。

4.权利要求3所述的应用，其中所述大黄总蒽醌含总蒽醌以大黄素计，为50％-60％，含游离蒽醌以大黄素计，为48％-58％，按干燥品计算，含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的总量不少于50％，按干燥品计算，含游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚的总量不少于40％，

其【性状】为褐黄色粉末，气微，味微苦，

其【鉴别】方法如下：取本发明的大黄总蒽醌0.1g，加三氯甲烷4Oml超声处理lO分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸对照品，加甲醇溶解，分别制成每1ml含0.2mg、0.1mg，0.1mg,0.1mg,0.2mg的溶液作为对照溶液，照薄层层析法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种供试品和对照品溶液各5～10μl分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶H薄层板上(新活化)，以石油醚(30～60℃)一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)10℃以下放置的上层溶液为展开剂，在25℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，

其【检查】方法如下：

没食子酸的检查：取本发明的大黄总蒽醌细粉25mg，置5ml量瓶中，加甲醇4～5ml超声处理30分钟使溶解，冷却，加甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液，另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点颜色应不得深于对照品斑点的颜色，土大黄苷的检查：取本发明的大黄总蒽醌0.2g，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10ul点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光，

其【含量测定】方法如下：

(1)、总蒽醌

对照品溶液的制备

取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml置l0ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，

测定法：取本品约40mg，精密称定，置100ml园底烧瓶中，加8％盐酸溶液20ml，再加三氯甲烷20mL置沸水浴中加热回流1小时，冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器至无色，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次(20ml、15ml、10ml)，合并三氯甲烷提取液置100ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取0.4ml置10ml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液l0ml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中总蒽醌的量，计算，即得，

(2)、游离蒽醌

对照品溶液的制备

取大黄素对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml置lOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液lOml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，

测定法：取本品约40ml，精密称定，置100ml锥形瓶中，加三氯甲烷约60ml超声处理(功率250W，频率25KHz)40分钟，放冷，滤过，用三氯甲烷冲洗滤器及锥形瓶，并入滤液中，滤液转移至100ml量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，精密量取0.4ml置lOml具塞试管中，蒸发至干，残渣分别精密加入0.8％醋酸镁甲醇溶液lOml使溶解，摇匀，以第一份为空白，照紫外一可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录VA)，在510nm的波长处测定吸光度，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中游离蒽醌的量，计算，即得，

(3)、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量：照高效液相色谱法(中国到典2010年版一部附录VID)测定，

色谱条件与系统适用性试验以十八炕基硅炕键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相:检测波长为440nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000，

对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10μg、大黄素甲醚20μg、大黄酚50μg的混合溶液，即得，

供试品溶液的制备：取本品约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入甲醇适量，超声处理(功率250W，频率25KHz)30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml(剩余滤液备用)，置烧瓶中，挥去溶剂，加8％盐酸溶液20ml再加三氯甲烷20ml加热回流2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷振摇提取3次，每次10时，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得，

(4)游离芦荟大黄素、游离大黄酸、游离大黄素、游离大黄酚、游离大黄素甲醚总量照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定，

照高效液相色谱法(中国到典2010年版一部附录VID)测定，

色谱条件与系统适用性试验以十八炕基硅炕键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相:检测波长为440nm，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000，

对照品溶液的制备取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素各10μg、大黄素甲醚20μg、大黄酚50μg的混合溶液，即得，

供试品溶液的制备：取本品约15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入甲醇适量，超声处理(功率250W，频率25KHz)30分钟，使其溶解，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液的一部分作为供试品溶液，

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，测定，即得。

5.权利要求1所述的应用，其中所述大黄总蒽醌组合物为大黄总蒽醌的片剂，胶囊剂。

6.权利要求5所述的应用，其中所述大黄总蒽醌胶囊剂，其配方如下：

制备方法如下：

1)大黄总蒽醌，微晶纤维素，混合均匀；

2)将聚维酮用95％(v/v)的乙醇溶解，制备成含有10％的聚维酮溶液(10份重量的聚维酮溶解到95％的乙醇中得到100份体积的聚维酮乙醇溶液)；

3)将10％的聚维酮溶液加入上述混合物中搅拌均匀，制软材，过18目筛制颗粒，干燥，颗粒干燥后加入硬脂酸镁混匀，装1000粒胶囊，或上压片机压1000片，再包衣即可。