CN104219967A - 含有高量铜的酵母萃取物及其制造方法以及食品及蔬菜的绿色保持复元剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种含有高量铜的酵母萃取物的制造方法及高量铜的酵母萃取物以及食品及蔬菜的绿色保持复元剂，其特征在于，该制造方法包含萃取工序，该萃取工序为使含有铜的酵母悬浮于含有羧酸及羧酸盐的至少任一种的溶液中，将所获得的悬浮液的固体成分和液体成分分离。
Description
技术领域
本发明涉及含有高量铜的酵母萃取物及其制造方法以及具有含有高量铜的酵母萃取物的食品及蔬菜的绿色保持复元剂，含有高量铜的酵母萃取物含有来自天然物的高浓度铜，对水的溶解性优异，可改善缺铜所致的贫血、心脏疾病等，适合作为流质食品等经口经管营养组合物、食品材料等。
背景技术
根据近来日本厚生劳动省发表的数据，铜被认为成人男性的每1天的推定平均必要量为约0.7mg(成人女性为约0.6mg)，在活体内缺乏时，可能引起贫血或心脏疾病等(参照非专利文献1)。因此，需要进行能够高效地使活体内摄取或吸收铜，可改善铜欠缺所致的贫血、心脏疾病等的流质食品和饮料等的安全食品材料的开发。
另一方面，酵母自古以来被人类用作食品材料，例如，啤酒酵母也可以作为食物纤维、维生素或矿物质的供给源使用。尤其是菌体内摄取了铜的酵母(含铜酵母)或其萃取物认为可被作为补充铜的安全食品材料利用。
但是，在现有的含铜酵母中，由于未能充分减少酵母臭味中的独特的臭味及酵母味道等独特味道，在作为食品的用途中不能充分满足。另外，现有的含铜酵母因不溶于水，所以添加于食品时会产生混浊或沉淀，存在无法在作为尤其是清凉饮料水等的用途加以利用的问题。
为了解决上述问题，考虑作成由上述含铜酵母萃取的含铜酵母萃取物。迄今为止，来自含有铜等矿物质的酵母的萃取使用(l)热水萃取法、(2)自体消化法、(3)酵素分解法等(参照非专利文献2)。但是，上述(1)～(3)的方法中，存在矿物质的回收率(铜萃取效率)低的问题。此外，上述(2)及(3)的方法中，酵母萃取物中会残留特有的酵母臭味及萃取味道，上述(3)的方法中，存在高成本，萃取物中残留使用的酵素的问题。
再者，作为铜等金属的用途，认为有复元植物的绿色的显色的用途，但并不知道铜可特别地长期间保持绿色的显色。特别是在食品加工业，蔬菜的绿色保持和食材及其加工品的保存期限有关，要求长时间保持蔬菜的绿色。但是，迄今为止，可添加于食品中含金属的安全材料尚未知悉，长时间保持蔬菜的绿色尚未达成。
因此，酵母臭味等独特的臭味及酵母味道等独特的味道被充分减少的、适合作为安全食品材料的含有高量铜的酵母萃取物及其有效的制造方法以及使用该含有高量铜的酵母萃取物的流质食品、饮料等食品及具有长时间的绿色保持效果的蔬菜的绿色保持复元剂的开发被期望。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献l：“日本人的饮食摄取基准2010年版”，厚生劳动省“日本人的饮食摄取基准”策定检讨会报告书，第一出版株式会社，R231-233，附录XLIX(2010年)
非专利文献2：杉本洋，“酵母萃取制造法的变迁(I)-由国内的专利申请的趋势看-”，New Food Industry，1994，Vol.36，No.10，P41-48
发明内容
发明所要解决的课题
本发明根据这样的期待，打破现状、解决现有的诸多问题，以实现以下目的为课题。即，本发明的目的在于，提供含有高量铜的酵母萃取物及其制造方法以及食品及具有长时间的绿色保持效果的蔬菜的绿色保持复元剂，该含有高量铜的酵母萃取物含有高浓度的来自天然物的铜，对水的溶解性优异，添加于食品时不会损及外观，可适合作为流质食品、饮料等经口经管营养组合物、食品材料等，而且也不会损及添加的食品的风味等。
用于解决课题的手段
作为用于解决上述课题的发明，如下。即：
＜1＞一种含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其特征在于，包含萃取工序，该萃取工序为使含有铜的酵母悬浮于含有羧酸及羧酸盐的至少任一种的溶液中，将获得的悬浮液的固体成分和液体成分分离。
＜2＞根据上述＜1＞所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，羧酸为二价以上的羧酸，羧酸盐为二价以上的羧酸盐。
＜3＞根据上述＜1＞～＜2＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，羧酸为三价羧酸，羧酸盐为三价羧酸盐。
＜4＞根据上述＜1＞～＜3＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，悬浮液的pH值为2.0～10.0。
＜5＞根据上述＜1＞～＜4＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，羧酸及羧酸盐的总量相对于酵母中的铜1摩尔为2摩尔以上。
＜6＞根据上述＜1＞～＜5＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，包含热水处理工序，该热水处理工序为在萃取工序之前，使酵母悬浮于60℃～120℃的热水中，将获得的悬浮液的固体成分和液体成分分离。
＜7＞根据上述＜6＞所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，在热水处理工序中，在热水中添加磷酸盐。
＜8＞根据上述＜1＞～＜7＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，通过过滤进行萃取工序中的悬浮液的固体成分和液体成分的分离。
＜9＞根据上述＜6＞～＜8＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，通过过滤进行热水处理工序中的悬浮液的固体成分和液体成分的分离。
＜10＞一种含有高量铜的酵母萃取物，含有0.2质量％以上的来自酵母菌体的铜，其特征在于，就使含有高量铜的酵母萃取物1g溶解或分散于水100mL时的浊度而言，波长660nm的吸光度(O.D.660)为0.1以下。
＜11＞根据上述＜10＞所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，通过上述＜1＞～＜9＞中任一项所述的制造方法制造。
＜12＞根据上述＜l0＞～＜11＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，酵母为食用酵母。
＜13＞根据上述＜12＞所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，食用酵母为选自面包酵母、啤酒酵母、酒酵母、清酒酵母及豆酱酱油酵母的至少一种。
＜14＞根据上述＜12＞所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，食用酵母为酿酒酵母。
＜15＞根据上述＜10＞～＜14＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，被添加在食品中使用。
＜16＞根据上述＜13＞所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，食品为流质食品及清凉饮料中的任一种。
＜17＞一种食品，其特征在于，含有上述＜10＞～＜16＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物。
＜18＞一种绿色保持复元剂，其特征在于，含有上述＜10＞～＜14＞中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物。
发明效果
根据本发明，可提供含有高量铜的酵母萃取物及其制造方法、食品及具有长时间的绿色保持效果的蔬菜的绿色保持复元剂，含有高量铜的酵母萃取物可解决现有的问题，含有高浓度的来自天然物的铜，对水的溶解性优异，添加于食品时不会损及外观，可适合作为流质食品、饮料等经口经管营养组合物、食品材料等，而且也不会损及添加的食品的风味等。
附图说明
图1是表示实施例1及比较例1中的纯水、氯化钠及各羧酸盐的铜溶出率的图。
图2是表示实施例2中的羧酸或羧酸盐对铜溶出率的效果的图。
图3是表示悬浮液的pH值对实施例3中的铜溶出率的影响的图。
图4是表示实施例4及比较例2中的羧酸缓冲液的浓度和铜溶出率的关系的图。
图5是表示实施例5中的溶出时间和铜溶出率的关系的图。
图6A是表示实施例6-1、比较例3-1及比较例3-2中的含有高量铜的酵母萃取物等对水的溶解性的照片的一例。
图6B是将图6A的水溶液以3，000rpm离心5分钟后的照片。
图6C是表示实施例6-2、比较例3-3及比较例3-4中的含有高量铜的酵母萃取物等对苹果果汁溶液的溶解性的照片的一例。
图6D是将第6C图的苹果果汁溶液以3，000rpm离心5分钟后的照片。
图7A是表示实施例8-1的试验结果的照片。
图7B是表示实施例8-2的试验结果的照片。
图7C是表示实施例8-3的试验结果的照片。
图7D是表示实施例8-4的试验结果的照片。
图7E是表示实施例8-5的试验结果的照片。
具体实施方式
(含有高量铜的酵母萃取物的制造方法)
本发明的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法包含萃取工序，进而根据需要而包含热水处理工序、干燥工序等其它工序。
＜萃取工序＞
上述萃取工序是使含有铜的酵母悬浮于含有羧酸及羧酸盐的至少任一种的溶液，并将所获得的悬浮液的固体成分和液体成分分离的工序。通过上述萃取工序，可以获得含有高量铜的液体成分(萃取物)。
＜＜酵母＞＞
上述酵母只要在菌体内含有铜，就没有任何限制，可根据目的适宜选择。作为上述酵母中的铜含量，在将含有高量铜的酵母萃取物作为铜强化食品材料等使用的情况下，铜含量越多越好，但从酵母中铜的摄取极限及有效率制造含有高量铜的酵母萃取物的观点出发，铜含量优选为每干燥菌体质量的0.01质量％～2质量％，更优选为0.5质量％～2质量％。
在此，上述铜含量是指酵母菌体内的铜含量，例如，优选为即使是以水等清洗的菌体，清洗后也能够高地维持铜含量。这样的酵母即使进行清洗，也不会去除该铜而仍保持于菌体内部，因此，来自菌体的铜的安全性高，在进行用以减少酵母特有的臭味或味道的热水处理(清洗)的情况下，不会损及添加的食品的风味等，而且因含有高浓度上述铜，所以适合作为食品材料等。
另外，上述酵母中的铜含量可通过众所周知的方法测定，例如可通过原子吸光法来测定。
上述含有铜的酵母可以通过在培养液中添加铜来培养酵母，由此使酵母菌体内摄取铜而制作，也可以使用巿售品。作为市售品，例如，可举出矿物质酵母Cu1、酵母菌矿物质铜(以上为オリエンタル酵母工业株式会社制)等。作为添加于培养液的铜的量，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但优选以良好的水平兼得铜利用率(铜的菌体内摄取率)和对糖产率(增殖率)。
另外，添加的铜的种类、培养基的种类、培养条件等没有特别限制，可根据目的适宜选择。
上述含有铜的酵母也可以进一步破碎。即使在上述酵母为破碎物的情况下，铜含量也优选越高越好，将破碎物用水等清洗的沉淀区分中的每干燥菌体质量的铜含量优选为进行破碎之前的菌体中的每干燥菌体质量的铜含量的70质量％以上，更优选为80质量％以上，特别优选为90质量％以上。
另外，作为上述破碎的方法，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，可以为物理的破碎处理，也可以为化学的破碎处理，具体而言，适宜举出使用将0.5mm直径的小珠在圆筒中填充50体积％的戴诺珠磨机的方法等。
另外，作为上述含有铜的酵母的方式，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，可举出湿菌体的方式、粉末的方式等。
上述酵母除铜以外，可进一步含有其它矿物质成分，作为该矿物质成分，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出铁、镁、锰、锌等。这些矿物质成分在酵母中可以单独含有一种，也可以含有二种以上，另外，作为所含的浓度，根据目的而异，无法一概而论地规定，但通常优选为高浓度。
作为上述酵母，在将该萃取物作为食品材料等使用的情况下，特别优选为食用酵母。
作为上述食用酵母，没有特别限制，可选自众周知的酵母，例如可举出面包酵母、啤酒酵母、酒酵母、清酒酵母、豆酱酱油酵母等。其中特别优选面包酵母。
作为上述食用酵母的菌株，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出：酵母菌属(Saccharomyces)、圆酵母属(Torulopsis)、假丝酵母属(Mycotorula)、有孢圆酵母属(Torulaspora)、念珠菌属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、毕赤酵母菌属(Pichia)等。
作为上述食用酵母的菌株的具体例，可举出酿酒酵母、卡尔酵母、葡萄汁酵母、鲁氏酵母、食用圆酵母、白球圆酵母、日本假丝酵母、溶脂念珠菌、戴氏有孢圆酵母、发酵有孢圆酵母、清酒念珠菌、热带念珠菌、产蛋白念珠菌、异常汉逊氏酵母、果香汉逊氏酵母、扣囊复膜抱酵母、溶脂酵母、深红酵母、粉状毕赤酵母等。
其中，优选为酿酒酵母、卡尔酵母，更优选为酿酒酵母。
＜＜羧酸及羧酸盐＞＞
作为上述羧酸，没有特别限制，可根据目的适宜选择，可为一元的羧酸，也可以为二价以上的多元羧酸，但从铜的萃取效率(铜溶出率)的观点来看，优选为二价以上的羧酸，更优选为三价以上的羧酸。
作为上述一元羧酸，例如可举出甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、丙酮酸、葡糖酸等。
作为上述二价羧酸，例如可举出草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、酒石酸、草酰乙酸、α-酮戊二酸等。
作为上述三价羧酸，例如可举出柠檬酸、异柠檬酸、乌头酸、草酰琥珀酸等。
其中，从食品添加及铜溶出率的观点来看，优选柠檬酸、琥珀酸、酒石酸，更优选为柠檬酸。
它们可单独使用一种，也可以并用二种以上。
作为上述羧酸盐，没有特别限制，可根据目的适宜选择，可以是一元羧酸盐，也可以为二价以上的多元羧酸盐，但从铜的萃取效率的观点来看，优选二价以上的羧酸盐，从铜的萃取效率更好这一点来看，更优选三价以上的羧酸盐。作为这些羧酸盐，例如可举出上述羧酸的具体例的盐等。它们之中，优选柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐，更优选为柠檬酸盐。
它们可单独使用一种，也可以并用二种以上。
作为上述盐的种类，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出钠、钾等碱金属盐、镁、钙等碱土类金属盐等。它们可单独使用一种，也可以并用二种以上。
上述羧酸及羧酸盐可使用其中任一种，也可以使用两种。
作为上述羧酸或上述羧酸盐的量，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但羧酸及羧酸盐的总量相对于酵母中的铜1摩尔，优选为2摩尔以上，从铜的萃取效率的观点来看，更优选为10摩尔以上。上述总量低于2摩尔时，铜的溶出率恶化。
作为含有上述羧酸及上述羧酸盐的至少任一种的溶液(以下也称为“羧酸缓冲液”)所使用的溶剂，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但通常为水，也可以是水和醇等有机溶剂的混合溶液。
作为上述羧酸缓冲液的浓度，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但从铜的萃取效率的观点来看，越高越好，优选为20毫摩尔/L以上，更优选为50毫摩尔/L以上，进一步优选为150毫摩尔/L以上。
作为上述羧酸缓冲液的pH值，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但优选为1.5～9，从铜的萃取效率的观点来看，更优选为3.5～8.5。又，上述pH值可通过变更上述羧酸及上述羧酸盐的量的比例来调整。
作为上述萃取工序中的悬浮液的pH值，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但优选为2.0～10.0，从铜的萃取效率的观点来看，优选为4.0～7.0。
作为上述萃取工序中的萃取时间，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但从铜溶出率的观点来看，优选为5小时以上，更优选为10小时以上，进一步优选为15小时以上。
作为上述萃取工序中的悬浮液的温度，没有特别限制，可根据目的适宜选择。
作为上述萃取工序中的铜溶出率(以下，也称为“萃取率”)，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但越高越好，优选为20％以上，更优选为30％以上，特别优选为60％以上。
上述铜溶出率可通过下述式求得。
铜溶出率(％)＝{萃取物中的铜全量(质量)/萃取所使用的酵母中所含的铜全量(质量)}×100
＜＜悬浮＞＞
作为将上述酵母悬浮于含有上述羧酸及羧酸盐的至少任一种的溶液(羧酸缓冲液)的方法，没有特别限制，可使用众所周知的搅拌方法或震荡方法。
另外，在上述萃取工序中，也可以进一步震荡上述悬浮液。作为上述震荡条件，没有特别限制，可根据目的适宜选择。
＜＜固体成分及液体成分的分离＞＞
作为分离上述悬浮液的固体成分和液体成分的方法，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出过滤的分离、离心的分离等。
作为上述过滤的方法，没有特别限制，可适当选择众所周知的过滤装置来进行，例如，可使用压滤器、管线过滤器等。另外，也可以并用这些过滤装置。
作为上述离心分离的方法，没有特别限制，可适当选择众所周知的离心装置来进行。另外，作为上述离心条件，也没有特别限制，可根据上述悬浮液的量适宜选择，例如，可举出在上述悬浮液的量为5mL的情况下，以3，000rpm离心5分钟的条件。
由于在上述含铜酵母萃取物中会残留羧酸作为上述羧酸缓冲液的萃取的痕迹，所以是否通过上述羧酸缓冲液来进行萃取，可分析上述含铜酵母萃取物中的羧酸来判断。作为上述分析的方法，没有特别限制，例如，可通过HPLC(高速液体层析)测定柠檬酸等的羧酸量来进行。
＜其它工序＞
作为上述其它工序，只要不损及本发明的效果，就没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，可举出热水处理工序、干燥工序、浓缩工序、稀释工序等。它们中，优选含有热水处理。
＜＜热水处理工序＞＞
上述热水处理工序是在上述萃取工序之前，使含有铜的上述酵母悬浮于60℃～120℃的热水中，将所获得的悬浮液的固体成分和液体成分进行分离的工序。在上述萃取工序之前，通过进行上述热水处理工序，可减少酵母特有的臭味及味道(酵母臭味、酵母味道)，在将所获得的含有高量铜的酵母萃取物添加于食品时，不会损害食品等的风味，在这一点上优选。
另外，作为热水的温度，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但温度越高则酵母臭味及酵母味道的降低效果越高，优选为80℃～120℃，更优选为95℃～120℃。
另外，作为将酵母悬浮的方法以及分离所获得的悬浮液的固体成分和液体成分的方法，没有特别限制，可举出与上述萃取工序相同的方法。
在上述热水处理工序中，为了使酵母特有的臭味及味道减少，优选在热水中添加促进酵母臭味或酵母味道的萃取(除去)的萃取促进剂。作为上述萃取促进剂，只要对接着的萃取工序中的铜的溶出率无不良影响，就没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，可举出羧酸盐以外的盐。它们中，从萃取酵母臭味的效果高、在热水工序中铜难以被萃取的观点来看，优选添加磷酸盐。
作为上述萃取促进剂的添加量，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但对于每干燥酵母菌体质量，优选5质量％～50质量％，更优选为20质量％～50质量％。
＜＜干燥工序、浓缩工序、稀释工序＞＞
上述干燥工序是使上述含有高量铜的酵母萃取物干燥的工序。
作为上述干燥的方法，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，可使用喷雾干燥器L-8(大川原化工机株式会社制)进行。由此，可获得含有高量铜的酵母萃取固形物(粉体)，可用于后述各种用途。另外，在作成上述固形物时，也可以适宜添加糊精等赋形剂。
上述浓缩工序是浓缩上述含有高量铜的酵母萃取物的工序，上述稀释工序是稀释上述含有高量铜的酵母萃取物的工序。
作为上述浓缩及稀释的方法，没有特别限制，可使用现有众所周知的方法。
(含有高量铜的酵母萃取物)
本发明的含有高量铜的酵母萃取物是含有0.2质量％以上的来自酵母菌体的铜的含有高量铜的酵母萃取物，就使含有高量铜的酵母萃取物1g溶解或分散于水100mL时的浊度而言，波长660nm中的吸光度(O.D.660)为0.l以下。
作为上述含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但可通过上述本发明的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法适当制造。即，优选含有铜的酵母用含有羧酸及羧酸盐的至少任一种的溶液萃取而制造。
＜铜含量＞
作为上述含有高量铜的酵母萃取物中的铜含量，从将含有高量铜的酵母萃取物作为铜强化食品材料等使用的观点出发，铜含量越高越好。在本发明中，“含有高量铜”是指含有0.2质量％以上的来自酵母菌体的铜，优选含有0.5质量％以上，更优选含有0.8质量％以上。
这样，由于含有高浓度的铜，从而可适合使用作为流质食品、饮料等经口经管营养组合物、食品材料等。
另外，上述铜含量可通过众所周知的方法来测定，例如，可通过原子吸光法、ICP发光分光分析法等来测定。
＜浊度＞
本发明的含有高量铜的酵母萃取物因对水的溶解性高，所以为水溶液的情况的透明度高，就使含有高量铜的酵母萃取物1g溶解或分散于水100mL时的浊度而言，波长660nm中的吸光度(O.D.660)为0.10以下，优选为0.05以下，更优选为0.01以下。上述浊度超过0.1时，添加到食品等中时会发生混浊，往往发生变色，会损及食品等的外观。另外，因对水的溶解性不充分且会沉淀，所以尤其是用于作为清凉饮料水等要求透明性的食品的用途时会产生问题。
在此，作为上述含有高量铜的酵母萃取物的形态，没有特别限制，可根据目的适宜选择，可以为通过上述萃取工序所获得的液体(滤液、上清液等萃取液)，也可以为粉末(powder)、粒子状、片状等固形物，也可以为凝胶状、浆液状等半固形物。但是，测定上述浊度时的“含有高量铜的酵母萃取物1g”是干燥了的固形物，是指上述固形物的水分含量为7质量％以下的物质。作为上述干燥的方法，没有特别限制，可使用上述的方法，但其条件等没有特别限制。
另外，上述浊度可使用分光光度计，测定波长660nm中的吸光度(O.D.660)，作为上述分光光度计，例如可举出U-2000型(株式会社日立制作所制)等。
＜用途＞
作为本发明的含有高量铜的酵母萃取物的用途，没有特别限制，可根据目的适宜选择，但优选作为添加于食品中使用的食品材料、饲料、饵料等的用途，更优选作为上述食品材料的用途。在上述食品材料中，在本发明的含有高量铜的酵母萃取物的溶解性优异这一点上，优选流质食物、清凉饮料水的用途。作为其它用途，优选作为食品发酵培养基、蔬菜的绿色保持复元剂的用途。通过使用本发明的含有高量铜的酵母萃取物，可获得含有高量铜的食品、含有高量铜的饲料、含有高量铜的饵料等。
作为上述含有高量铜的酵母萃取物的使用形态，没有特别限制，可根据用途而适宜选择，可使用干燥了的粉末的状态(例如，萃取物通过喷雾干燥器而干燥者的状态)，也可以在溶解于溶剂的溶液的状态下使用，也可以在半固形物的状态(例如，凝胶状、乳膏状的状态等)下使用。另外，作为用于上述使用方式的含有高量铜的萃取物的制备方法，没有特别限制，可通过使用众所周知的装置等，以众所周知的方法来进行。
(食品)
本发明的食品包含本发明的含有高量铜的酵母萃取物，进而根据需要含有其它成分。
在此，上述食品是指对人类健康增加危害的可能性少，且在通常的社会生活中通过经口或消化道投与而摄取的物质，不限制于行政区分上的食品、医药品、准药物等的区分，例如，是指包含广范围的经口摄取的一般食品、健康食品、保健功能食品、准药物、医药品等。
作为上述食品的种类，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，优选流质食物、面包、饼干、薄脆饼干等甜食、水产加工品、食肉加工品、面类、豆酱等调味料、加工蔬菜制品、果汁等饮料、冰淇淋等冰点、健康食品等，特别优选流质食物、饮料。
作为上述食品中的上述含有高量铜的酵母萃取物的添加量，没有特别限制，可根据用途、目的等适宜选择。
作为上述其它成分，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出在制造食品时通常使用的辅助原料或添加物等。
作为上述辅助原料或添加物，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、山梨糖醇、甜菊糖、甜茶苷、玉米糖浆、乳糖、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、L-抗坏血酸、dl-α-生育酚、异抗坏血酸钠、甘油、丙二醇、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨糖酯、阿拉伯胶、角叉菜胶、酪蛋白(casein)、明胶、果胶、琼脂、维生素B类、烟酰胺、泛酸钙、胺基酸类、钙盐类、色素、香料、保存剂等。
作为上述其它成分的含量，并未特别限制，可根据目的适宜选择。
(蔬菜的绿色保持复元剂)
本发明的蔬菜的绿色保持复元剂包含本发明的含有高量铜的酵母萃取物，进而根据需要含有其它成分。
就作为上述绿色保持复元剂的对象的蔬菜而言，只要为食用的绿色植物，就没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如，可保持绿色蔬菜、茶叶、抹茶等绿色植物的绿色，又可复元冷冻或冷藏的绿色蔬菜、盐渍后绿色蔬菜、巿售渍物等的退色的绿色。
作为上述蔬菜的绿色保持复元剂中的上述含有高量铜的酵母萃取物的添加量，没有特别限制，可根据用途、目的等适宜选择。
另外，作为上述其它成分，没有特别限制，可根据目的适宜选择，例如可举出上述食品中的辅助原料或添加物等。
实施例
下面，说明本发明的实施例等，但本发明不受这些实施例等任何限制。
(实施例l及比较例1：羧酸盐进行的铜的溶出)
在干物质量5g的含有高量铜的酵母粉末(矿物质酵母Cu1、铜含量：11，200质量ppm、オリエンタル酵母工业株式会社制)中添加表1所示的200毫摩尔/L的各羧酸钠水溶液50mL并搅拌，稀释搅拌至l00mL。另外，上述各羧酸盐的量相对于萃取的酵母中的铜1摩尔，为11.4摩尔。作为对照，使用水或200毫摩尔/L的氯化钠(食盐)水溶液，进行以下相同的试验。通过pH值测定计MP230(METTLER TOREDO社制)测定在此获得的各悬浮液的pH值。
将上述悬浮液一边利用搅拌器搅拌，一边取5mL到试验管中，在沸腾水中加热10分钟。将该悬浮液于3，000rpm离心分离5分钟，仅取上清液到试验管，获得酵母萃取物，测定其质量。
就上述铜的溶出率而言，使用ICP发光分光分析装置(Optima2100DV，パーキンエルマー社制)，通过ICP发光分光分析法测定酵母萃取物中的铜含量，计算向萃取液溶出的铜的比例。表1及图1表示结果。
另外，上述萃取物中的干燥粉末的铜含量(质量％)如下测定。即，在铜萃取后的萃取液中添加糊精，将固形物含量调整至10质量％后，使用喷雾干燥器L-8(大川原化工机株式会社制)使其干燥，使用ICP发光分光分析装置(Optima2100DV，パーキンエルマー社制)，通过ICP发光分光分析法定量铜来进行。表1表示结果。
[表1]
自表1及图1的结果可知，就铜溶出率及萃取物中的铜含量而言，由于使用羧酸盐，从而铜溶出率变高，可获得含有高量铜的萃取物。另外，就其效果而言，为三价羧酸盐的柠檬酸盐为最高，其次为二价羧酸盐的琥珀酸盐、酒石酸盐。
(实施例2：由羧酸或羧酸盐的铜溶出率)
将矿物质酵母Cu1(オリエンタル酵母工业株式会社制)的粉末悬浮于300mL的水中，使其成为40质量％的乳膏。将获得的乳膏在沸腾水中加热10分钟后，进行清洗，并将其沉淀稀释搅拌至300mL。在获得的乳膏10mL中添加含有柠檬酸及柠檬酸三钠的至少任一种的下述表2记载的各水溶液(柠檬酸缓冲液)10mL并使其悬浮。另外，上述柠檬酸缓冲液的浓度在全部的液体中为200毫摩尔/L，上述柠檬酸缓冲液的pH值通过适当变更柠檬酸和柠檬酸三钠的量的比例来调整。
悬浮于各柠檬酸缓冲液之后2小时后，进行离心分离，对获得的上清液(酵母萃取物)，与实施例1同样地测定铜溶出率。另外，与实施例1同样地获得萃取物的干燥粉末并测定萃取物中的铜含量。结果示于下述表2及图2。
[表2]
自表2及图2表明，即使萃取溶剂仅含有羧酸的情况，或仅含有羧酸盐的情况，另外含有羧酸和羧酸盐的情况，均能够以高的比率进行铜的溶出。
(实施例3：pH值对铜溶出率的影响)
除了在实施例2中使用下述表3记载的各水溶液(柠檬酸缓冲液；浓度为300毫摩尔/L)之外，与实施例2同样地制备悬浮液。另外，上述柠檬酸缓冲液的pH值通过适当变更柠檬酸和柠檬酸三钠的量的比来调整。
悬浮于各柠檬酸缓冲液之后2小时后，进行离心分离，对获得的上清液(酵母萃取物)，与实施例1同样地测定铜溶出率及萃取物中的每干燥粉末质量的铜含量。结果示于下述表3及图3。
[表3]
自表3及图3表明，虽然发现用于萃取的溶剂(羧酸缓冲液)的pH值越高，铜溶出率越高的趋势，但在悬浮液的pH值的广范围内，显示50％以上的高的铜溶出率，可知获得含有高量铜的酵母萃取物。
(实施例4及比较例2：羧酸相对于酵母萃取物中所含的铜的摩尔比和铜溶出率的关系)
使用作为原料的矿物质酵母Cu1(オリエンタル酵母工业株式会社制)，试验羧酸缓冲液浓度和铜的萃取效率的关系。作为萃取溶剂中所含的羧酸盐，使用柠檬酸三钠，准备下述表4所示的浓度的柠檬酸三钠水溶液。
除使用下述表4所示的浓度的各柠檬酸三钠水溶液之外，与实施例2同样地获得酵母萃取物，并测定铜溶出率，与实施例1同样地获得萃取物的干燥粉末，并测定每干燥粉末质量的铜含量。结果示于下述表4及图4。
[表4]
自表4及图4可知，铜溶出率取决于铜和羧酸及其盐的摩尔比，在羧酸及羧酸盐的总量相对于萃取的酵母中的铜1摩尔，为2摩尔～25摩尔的情况下，铜溶出率高，且萃取物(干燥粉末)中的铜含量高。
(实施例5：溶出时间对于铜溶出率的影响)
将矿物质酵母Cul(オリエンタル酵母工业株式会社制)的粉末悬浮于300mL的水中，使之成为40质量％的乳膏。将获得的乳膏在沸腾水中加热10分钟后，进行清洗，并将其沉淀稀释搅拌至300mL。将获得的乳膏l0mL中添加200毫摩尔/L的柠檬酸三钠水溶液10mL使其悬浮。
使悬浮之后至离心分离(取样)的时间(溶出时间)为1小时、2小时、18小时、21小时及24小时，进行离心分离，对获得的上清液(酵母萃取物)，与实施例1同样地测定铜溶出率，与实施例1同样地获得萃取物的干燥粉末，测定萃取物中的铜含量。结果示于下述表5及图5。
[表5]
从表5和图5可知，溶出时间越长，铜溶出率越高，如果溶出时间超过15小时，则可得到75％左右的铜溶出率。
(实施例6及比较例3：溶解性的评价)
以实施例4～6中获得的含有高量铜的酵母萃取物的含量成为0.5质量％的方式与糊精混合而制备含有高量铜的酵母萃取物的粉末。将制备的含有高量铜的酵母萃取物的粉末1g以水或苹果果汁(放入10体积％苹果果汁的饮料、朝日饮料株式会社制)稀释搅拌至100mL，制作铜酵母萃取物的1％(质量/体积)溶液。上述溶液的浊度使用分光光度计测定波长660nm下的吸光度(O.D.660)。作为上述分光光度计，使用U-2000型(日立制作所株式会社制)。进而以3，000rpm将上述溶液离心5分钟后，观察有无沉淀。
另外，作为对照，对于传统物品的含有高量铜的酵母萃取物(SolubleCopper Yeast、Grow社制)及不进行萃取的矿物质酵母Cu1(オリエンタル酵母工业株式会社制)，也使铜含量相同，测定溶液的浊度，进行有无沉淀的评价。结果示于表6及图6A～图6D。
[表6]
实施例6-1的水溶液的浊度与比较例3-1的水溶液的浊度相比，显示明显较低的值。另外，从图6A来看，实施例6的水溶液，即使目视，与比较例3-1的水溶液相比，其清澄性也明显较高。另外，从图6B来看，将水溶液以3,000rpm离心5分钟后，在实施例6-1中未确认有沉淀物，为清澄性高的溶液，与之相对，比较例3-l中确认有沉淀物。
该结果在使用苹果果汁替代水的实施例6-2、比较例3-2及3-3中也相同。
因此，本发明的含有高量铜的酵母萃取物因相比传统物品的溶解性高，所以也可以添加到流质食品或饮料等中来使用，另外，由于未发生混浊或变色，所以可知可添加到透明度特别高的清凉饮料等来使用。
(实施例7及比较例4：臭味及味道的评价)
准备以实施例4-6中获得的含有高量铜的酵母萃取物的含量成为0.5质量％的方式与糊精混合制备的含有高量铜的酵母萃取物的粉末、该粉末的1％(质量/体积)水溶液、使该粉末以成为1％(质量/体积)的方式溶解于苹果果汁中的1％溶液、使以上述粉末成为1％(质量/质量)的方式调整成奶粉(チルミル、森永乳业株式会社制)14g溶解或悬浮于水100mL的水溶液而溶解的物质(以下，称为“牛奶”)、以使上述粉末成为1％(质量/质量)的方式添加于营养调整食品(メイバランス(优格味)，株式会社明治制)的物质(以下，称为“流质食品”)。
＜评价方法＞
对于上述含有高量铜的酵母萃取物、1％水溶液、1％溶液(苹果果汁)、牛奶及流质食品，以6位评价者评价酵母或酵母萃取物中特有的臭味(酵母臭味、萃取物臭味等)及味道(酵母味道、萃取物味道等)。
就评价而言，将以含有高量铜的酵母萃取物中的各评价项目的评价为3的情况下的各试料的评价根据下述基准取6位评价者的数值的平均。此外，作为对照，以铜含量为相同的方式添加了传统物品(Soluble CopperYeast，Grow社制)及萃取前的含有高量铜的酵母(矿物质酵母Cul(オリエンタル酵母工业株式会社制)的物质也同样地进行评价。结果示于表7。
-臭味的评价基准-
5：非常强
4：强
3：相同
2：弱
1：非常弱
-味道的评价基准-
5：非常浓
4：浓
3：相同
2：淡
1：非常淡
[表7]
自表7表明，实施例7的含有高量铜的酵母萃取物被评价为在粉末、1％水溶液及l％溶液(苹果果汁)中，与比较例4-1(传统物品)相比较，酵母臭味或萃取物臭味等的臭味明显地降低。另外，评价为在牛奶及流质食品中，酵母味道及萃取物味道也明显降低。因此，可知本发明的含有高量铜的酵母萃取物，酵母或酵母萃取物中特有的臭味及味道减少，不会损及添加的食品的风味。
(实施例8-l：青椒的绿色保持复元效果的评价)
将以实施例4-6中获得的含有高量铜的酵母萃取物的含量为0.5质量％的方式与糊精混合而制备的含有高量铜的酵母萃取物的粉末作为受测物质。
将市售的青椒切片，投入含有l体积％的酿造醋(株式会社ミツカン制)的水溶液中后，在65℃～70℃下沸腾30分钟，进行青椒的退色处理。其次，向以上述受测物质的浓度为2质量％的方式制备的浸渍液中移入上述退色的青椒，并使其浸渍一晚(16小时)。取出上述浸渍的青椒，使上述浸渍液沸腾后，再度投入上述青椒。投入后沸腾15分钟后，用笼沥除热水并用流水冷却。
对上述冷却的青椒，以温度10℃、光强度800勒克斯的条件实施光照射试验，观察光照射开始时，光照射开始后第5天及光照射开始后第10天的青椒的绿色。将各自的时点的青椒的状态示于图7A，将色差计(コニカミノルタセンシング株式会社制色彩色差计CR-400)的测定结果示于表8。
另外，作为对照，在不进行退色处理且未添加受测物质的情况(以下，称为“无处理”)、仅进行通过上述酿造醋的处理(仅退色处理)的情况(以下，称为“仅醋”)的情况下，均同样地进行试验。另外，“仅醋”的情况下的观察在光照射开始时及光照射开始后第5天进行。
[表8]
此外，在色差计的测定中，显示“L＊”的值越大越明亮、越小越暗的趋势。「a＊」的值大时显示红色，值小时显示绿色。「b＊」的值大时显示黄色，值小时显示蓝色。
从图7A及表8的结果可确认，使用本发明的含有高量铜的酵母萃取物的实施例8-1中，即使光照射开始后第10天，a＊值也几乎没有变化，即，绿色未退色，具有优异的绿色保持复元效果。另一方面，在无处理的情况下，光照射开始后第5天，a＊值变大。
(实施例8-2：绿茶糊的绿色保持复元效果的评价)
将实施例8-1中的供光照射试验的试验体变更为如下制备的抹茶糊，除此之外，与实施例8-1同样地进行光照射试验。结果示于图7B及表9。
＜抹茶糊的制备＞
将巿售的抹茶粉末(S-朝比奈4号、株式会社铭叶制)10.4g、受测物质0.8g、柠檬酸0.5g及水88.3mL混合后，以121℃加热杀菌60分钟而制备抹茶糊。
另外，作为对照，对于未进行加热杀菌处理且未添加受测物质的情况(以下，称为“未加热”)，进行加热杀菌处理且未添加受测物质的情况(以下，称为“有加热”)，也同样地进行试验。
[表9]
由图7B及表9的结果可确认，使用本发明的含有高量铜的酵母萃取物的实施例8-2中，即使在光照射开始后第10天，a＊值也几乎无变化，即，绿色未退色，而具有优异的绿色保持复元效果。另一方面，在未加热的情况下，光照射开始后第5天，a＊值变大。
(实施例8-3：青花菜的绿色保持复元效果的评价)
将以实施例4-6中获得的含有高量铜的酵母萃取物的含量为0.5质量％的方式与糊精混合而制备的物质作为受测物质。
向以上述受测物质的浓度成为4.0质量％的方式制备的浸渍液中投入市售的冷冻青花菜(青花菜、ライフフーズ株式会社制)，在4℃下浸渍一晚(16小时)。取出上述浸渍的青花菜，使上述浸渍液沸腾后，再度投入上述青花菜。投入后15分钟沸腾之后，用笼沥除热水并用流水冷却。
上述冷却的青花菜以温度10℃、光强度800勒克斯的条件实施光照射试验，观察光照射开始时、光照射开始后第5天及光照射开始后第10天的青花菜的绿色。将各自的时点的青椒的状态示于图7C，将色差计(コニカミノルタセンシング株式会社制色彩色差计CR-400)的测定结果示于表l0。
另外，作为对照，对于未添加受测物质的情况(以下，称为“无添加”)也同样地进行试验。
[表10]
自图7C及表10的结果可确认，使用本发明的含有高量铜的酵母萃取物的实施例8-3中，即使光照射开始后第10天，a＊值也几乎无变化，即，绿色未退色，具有优异的绿色保持复元效果。另一方面，在无添加的情况下，光照射开始后第5天，a＊值变大。
(实施例8-4：豌豆的绿色保持复元效果的评价)
将实施例8-3中的冷冻青花菜变更为冷冻豌豆(豌豆，株式会社交洋制)，并将浸渍液中的受测物质的含量变更为5.0质量％，除此之外，与实施例8-3同样地进行试验，评价绿色的保持复元效果。结果示于图7D及表11。
[表11]
自图7D及表11的结果可确认，使用本发明的含有高量铜的酵母萃取物的实施例8-4中，即使光照射开始后第10天，a＊值也几乎无变化，即，线色未退色，具有优异的绿色保持复元效果。另一方面，在无添加的情况下，光照射开始后第5天，a＊值变大。
(实施例8-5：四季豆的绿色保持复元效果的评价)
将实施例8-3中的冷冻青花菜变更为冷冻四季豆(四季豆，株式会社ニチレイフーズ制)，将浸渍液中的受测物质的含量变更为5.0质量％，除此之外，与实施例8-3同样地进行试验，评价绿色的保持复元效果。结果示于图7E及表12。
[表12]
自图7E及表12的结果可确认，使用本发明的含有高量铜的酵母萃取物的实施例8-5中，即使光照射开始后第10天，a＊值也几乎无变化，即，绿色未退色，具有优异的绿色保持复元效果。另一方面，在无添加的情况下，光照射开始后第5天，a＊值变大。
自实施例8-1～8-5的结果可知，本发明的含有高量铜的酵母萃取物对各种绿色植物产生绿色保持复元效果。
产业上的可利用性
本发明的含有高量铜的酵母萃取物含有高浓度的来自天然物的铜，对水的溶解性优异、而且不损及添加的食品的风味等，因此，可适合作为流质食品、饮料等经口经管营养组合物、食品材料、蔬菜的绿色保持复元剂等各种食品添加剂、食品发酵培养基等。
在本发明的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，自含有铜的酵母的铜溶出率高，可有效率地制造含有高量铜的酵母萃取物。
Claims (10)
1.一种含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其特征在于，包含萃取工序，所述萃取工序为使含有铜的酵母悬浮于含有羧酸及羧酸盐的至少任一种的溶液中，将获得的悬浮液的固体成分和液体成分分离。
2.根据权利要求1所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，羧酸为二价以上的羧酸，羧酸盐为二价以上的羧酸盐。
3.根据权利要求1～2中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，羧酸为三价羧酸，羧酸盐为三价羧酸盐。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，悬浮液的pH值为2.0～10.0。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，羧酸及羧酸盐的总量相对于酵母中的铜1摩尔为2摩尔以上。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物的制造方法，其中，包含热水处理工序，所述热水处理工序为在萃取工序之前，使酵母悬浮于60℃～120℃的热水中，将获得的悬浮液的固体成分和液体成分分离。
7.一种含有高量铜的酵母萃取物，其含有0.2质量％以上的来自酵母菌体的铜，其特征在于，就使含有高量铜的酵母萃取物1g溶解或分散于水100mL时的浊度而言，波长660nm的吸光度(O.D.660)为0.1以下。
8.根据权利要求7所述的含有高量铜的酵母萃取物，其中，通过权利要求1～6中任一项所述的制造方法制造。
9.一种食品，其特征在于，含有权利要求7～8中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物。
10.一种蔬菜的绿色保持复元剂，其特征在于，含有权利要求7～8中任一项所述的含有高量铜的酵母萃取物。
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