CN1041799C - 制备血栓溶解组合物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种血栓溶解组合物,含有组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物,并组合有阴离子聚合物或其盐和胺类化合物或其盐,或组合有阴离子聚合物或其盐、胺类化合物以及酸或其盐。该组合物是水质溶液或冻干制剂,可溶解成高或低含盐量、pH近中性的药物溶液并且稳定。可在近中性pH条件制成临床使用的输液或注射溶液。
Description
本发明涉及含有组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂(t-PA)或其衍生物作为主要活性成分的血栓溶解组合物。
t-PA作为药物用途中的新颖血纤维蛋白溶酶原活化剂而成为受注意的目标。因为t-PA与常规已知的尿激酶不同,前者对血纤维蛋白有很强亲和性和很高溶解血栓活性,特别是单链的t-PA引起的副作用更小。近年来,由于研究成功应用细胞培养技术和基因重组技术大量生产t-PA的方法,可以将t-PA作为血栓溶解剂应用于医务实践中。
然而,t-PA是等电点在6-8范围的蛋白质,在接近该等电点的pH条件下很不容易溶解,所以迫切需要解决t-PA的溶解度问题,以便将t-PA配制成药物制剂。为此目的,人们开展了t-PA制剂的多方面研究,目的是提高t-PA的溶解度,所以这方面有许多资料。
一般,已知的提高蛋白质溶解度的方法有(1)在远离该蛋白质等电点的酸性或碱性pH条件下将蛋白质溶解;(2)在含盐浓度高或离子强度高的溶液中,在接近等电点的pH条件下溶解该蛋白质;(3)借助于专用于该蛋白质的溶解助剂将该蛋白质溶解。
为制备t-PA药物制剂而提高t-PA溶解度和稳定性的已知方法的特征在于(1)采用远离t-PA等电点的酸性pH条件(例如,JPLO 36332/1987和26234/1987);(2)将蛋白质稀释于带有t-PA专用稳定剂的溶液中,其中未加入具体的溶解助剂并采用较高的盐浓度(例如JPLO 292729/1987);(3)加入一种溶解助剂,例如碱性氨基酸(如精氨酸)(例如JPLO 31326/1987,120321/1987,164632/1987)。
上述的制备t-PA药物制剂的方法以不同方式提高了t-PA的溶解度,但从药物观点来讲是有缺点的。
具体来讲,(1)本来希望的是制备接近血液pH值(pH7.4)的注射剂,而酸性溶液会引起溶血现象,所以接近中性pH的制剂更为理想;(2)含盐浓度高的溶液由于其渗透压力高对于注射而言是不理想的;此外,在制取冻干制剂之前加有多量盐的制剂,在其后把冻干制剂用一般稀释用的生理盐水稀释后,其渗透压大幅度增高;再者,在应用t-PA作为药物时,不希望同时给以大剂量的钠离子;(3)迄今已知的用作t-PA溶解助剂的化合物有以下缺点:ⅰ)当单独使用时,所有这些助剂溶解t-PA的程度都不能达到要求,所以需将盐浓度提高至某一程度;ⅱ)当把冻干的制剂再配制并用低盐量稀释剂稀释至超过某一稀释程度时,其中的溶解助剂也被稀释,某些情况下使t-PA发生沉淀。所以就有这样的不方便情况,t-PA制剂可以顺利地溶解于生理盐水中,从而成为高盐浓度的输液注射液;但是要制成低盐浓度的输液注射液而溶于5%葡萄糖溶液时,就几乎不能溶解。t-PA多数是用于急症的情况,在此情况下,对于把冻干的t-PA制剂再配制或进行稀释以供输液之用,找一个替代方式通常是受到局限的。因此,亟需研制一种适用于注射的药物制剂,该制剂应当易溶于生理盐水和5%葡萄糖溶液中并可得到广范围的t-PA浓度,同时提供适当的盐浓度和渗透压。此外,在本说明书中提到关于盐浓度中的“盐”主要指氯化物;但也包括其他盐类,例如医务可用的盐形式的氨基酸或其他化合物。
本发明的目的之一是提供一种溶解血栓的组合物,该组合物使t-PA在低和高盐浓度溶液中提高溶解度并可实现广的t-PA浓度范围。本发明另一目的是提供一种血栓溶解组合物,该组合物使t-PA在接近中性pH的溶解度得到提高。本发明另一目的是提供一种高溶解度的t-PA制剂。
为了解决上述问题,本发明者发现,当t-PA与一种阴离子聚合物混合后,则该t-PA可在低及高盐浓度溶液中溶解,所述阴离子聚合物即指一种阴离子聚合物或其盐以及一种胺类化合物或其盐,或指一种阴离子聚合物或其盐、一种胺类化合物以及一种酸或其盐。
本发明所提供的血栓溶解组合物包含t-PA或其衍生物并组合有一种阴离子聚合物或其盐以及一种胺类化合物或其盐;或是组合有一种阴离子聚合物或其盐以及一种胺类化合物以及一种酸或其盐。
按本发明可以制备按常规技术所不能得到的含高浓度t-PA的药物溶液,其中的t-PA在t-PA等电点的近中性pH条件下,并在适于非肠道给药的低和高盐浓度的稀释剂中易于溶解,所述非肠道给药剂型例如溶于注射用蒸馏水、注射或输液用生理盐水等使用方便的稀释剂中。其稀释倍数几乎是无限的,并且冻干的及溶解形态的t-PA都是稳定的。
因此,本发明特别适用于t-PA药用制剂,特别是近中性pH的制剂。
图1表示t-PA溶液稀释至不同t-PA浓度时的浑浊度(散射光强度),该溶液中加有肝素钠、精氨酸以及硫酸,溶液pH值调节至7.5(见实例7)。
图2表示t-PA溶液稀释至不同浓度时的浑浊度,该溶液中加有硫酸软骨素钠和乙醇胺氯化物,溶液pH值调节至7.5(见实例8)。
图3表示pH值对于t-PA溶解度的影响,该溶液中含有硫酸软骨素钠和单乙醇胺(实例9)。图中所示pH值是将t-PA在生理盐水或5%葡萄糖溶液中稀释至0.2毫克/毫升时的实测值。
图4表示盐浓度对于t-PA溶解度的影响,该等溶液中分别加有肝素钠或单乙醇胺氯化物(见实例1)。此图中所示NaCl浓度是当测量散射光强度时测定的。
按本发明所用的t-PA或其衍生物并不受局限,包括具有t-PA活性的蛋白质,并且与其生产的方式无关。所述t-PA及其衍生物的实例包括从人体或动物细胞提取并经纯化所得的t-PA;通过对人体或动物组织所得细胞的培养并提取该等细胞或细胞培养物从而纯化t-PA所得;应用重组体DNA技术所得的t-PA或其衍生物,即培养载有加入的t-PA基因的核苷酸顺序、或是应用已知重组体DNA技术修饰的t-PA基因的核苷酸顺序、从而在表达后产生t-PA活性的细胞,并通过提取该细胞或细胞培养物从而纯化t-PA;以及经纯化的t-PA或其衍生物经化学修饰的t-PA衍生物。对于t-PA或其衍生物的核苷酸顺序密码修饰的实例包括突变法,其中将部分的氨基酸或多肽删除或取代,并且用其他蛋白质杂化(例如,L.Hansen et al,J.Biol.Chem.263,15713-15719,1988)。所述该等细胞,即加入了该t-PA基因的核苷酸顺序、或应用已知重组体DNA技术修饰的该t-PA基因的核苷酸顺序、从而在表达后产生t-PA活性的细胞,例如包括微生物,如埃希氏大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌的菌株,或者动物细胞,如中国仓鼠、小鼠以及人类的细胞。
用于本发明的t-PA可以是单链t-PA、双链t-PA或者两者的混合物。
除另有指明者外,本发明所用的t-PA是指单链或双链t-PA以及其衍生物,或它们的混合物。
在本发明中,当血栓溶解组合物是一种水质溶液时,其pH值为弱酸性、中性、弱碱性或碱性,较好是在5-9范围,更好是在6-8范围。然而,该溶液的pH范围取决于所用的具体阴离子聚合物、胺化合物及其盐,因此本发明的范围并不由该溶液的pH所规限。
用于本发明的阴离子聚合物的阴离子残基包括羧基、羧甲基、硫酸根以及磷酸根。另方面,阴离子聚合物的聚合物主链例如包括糖类,如糖醇、纤维素、直链淀粉、氨基酸以及核酸的碱类,其分子量以1000-1000000为优选。
含有这些阴离子残基和聚合物主链的组合的实例有羧甲基离子交换物质,如羧甲基直链淀粉和羧甲基纤维素,酸性多糖如藻酸,硫酸单糖如硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、硫酸软骨素A、硫酸软骨素B、硫酸软骨素C、硫酸软骨素D、硫酸软骨素E,肝素,硫酸角质,硫酸角质素以及硫酸类肝素,多氨基酸如多L-谷氨酸以及核酸。此外,这些阴离子聚合物的盐例如包括其钠、钾、钙盐或类似的盐。
这些阴离子聚合物或其盐是使用其本身,或是两种或多种组合使用。
阴离子聚合物或其盐的用量优选为每1毫克要溶解的t-PA使用25微克或更多,更好是100微克或更多,阴离子聚合物的用量上限优选为每1毫克要溶解的t-PA使用100毫克。若此用量太少,t-PA的溶解量未必能达到要求;相反,若用量过多,可能发生阴离子聚合物本身溶解困难。
在用胺类化合物时,使用其盐的形式要比其非盐形式更为方便。但是如下所述,非盐形式的胺是与一种酸或其盐组合使用。
用于本发明的胺类化合物例如包括乙醇胺类如单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺,碱性氨基酸如精氨酸、赖氨酸及组氨酸,胺类聚合物如聚乙烯亚胺,以及三羟甲基氨基甲烷。此外,这些胺类化合物的盐例如包括氯化物、硫酸盐以及磷酸盐。
这些胺类化合物或其盐可以使用其本身,或是两种或多种的组合物。
从市场供应来讲这些胺类化合物的盐类是优选的,除非是操作与处理困难的情况。但是,对于这些盐类,如碱性氨基酸的磷酸盐或硫酸盐、聚乙烯亚胺或三羟甲基氨基甲烷等等它们不易从市场购得或由于其吸水性而难于管理,则最好使用如下述的酸类或其盐以及非盐形式的胺类化合物。
胺类化合物或其盐的用量一般是每1毫升要溶解的t-PA用20微摩尔至10毫摩尔,优选为50至500微摩尔。若用量太少,t-PA的溶解性未必能达到要求;另方面,若用量太多,这样多量的胺类化合物可能带来不利的生理作用,例如毒性,于是不能用作药物制剂。
与非盐形式的胺类化合物同用的酸类,其中特别有效的例如有草酸、盐酸、硫酸、磷酸、焦磷酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、葡糖醛酸、戊二酸、乳酸、己二酸以及抗坏血酸。这些酸的适用盐类有钠盐、钾盐、钙盐等等。
最好用多价酸或其盐,特别是硫酸、磷酸、焦磷酸、柠檬酸以及它们的盐。
该等酸或其盐的用量通常为每1毫克要溶解的t-PA使用20微摩尔至10毫摩尔,优选为50至500微摩尔。若用量太少,则t-PA在低浓度盐溶液中的溶解度不足;若用量太多,则阴离子聚合物对t-PA溶解度的提高不足,并且,作为注射用药物制剂,盐浓度和渗透压都太高。
还可以存在有盐类本身如NaCl等等,盐形式的添加剂如盐形式的氨基酸或如下述的EDTA,或如下述用于调节pH的酸的盐类或者碱类。
在本发明中,除去阴离子聚合物及其盐、氨基化合物及其盐、酸及其盐之外,盐的使用量在考虑到t-PA给药时的盐浓度和渗透压比值,例如优选为每1毫克t-PA用200微摩尔或更少,更好是10微摩尔或更少。但此用量没有特定的限制。
关于本发明的血栓溶解组合物水质溶液的制备,例如可采取这样的方式;用阴离子聚合物或其盐以及胺类化合物或其盐,或者由胺类化合物以及一种酸或其盐来配制成溶液,然后将溶液的pH值调节至接近中性,然后把此溶液加入到于pH值远离该t-PA的等电点的条件下将t-PA溶解而成的溶液中。还可以将固体状阴离子聚合物或其盐以及该胺类化合物或其盐连同一种酸或其盐溶解于上述的t-PA溶液中,然后按需要加入酸如盐酸或加入氢氧化钠,把所得溶液的pH值再调节,从而制成t-PA的水质溶液。还可以将除t-PA之外的其他成分溶解成为溶液,调节所得溶液的pH值,然后按需要的浓度将t-PA加入到此溶液中,得到t-PA的水质溶液。
t-PA在水质t-PA溶液中的浓度并无特别限制,并且t-PA可以稳定地溶解成为0.001至10毫克/毫升(或从600至6000000 IU/毫升)的溶液。作为输液注射或类似用途,优选浓度一般为0.01至5毫克/毫升(或600至3000000 IU/毫升)。应用这种t-PA水质溶液,在临床使用中,包括以高盐浓度例如在生理盐水中使用,或是以低盐浓度例如在5%葡萄糖溶液中使用,不同的t-PA浓度均可满意地保持其溶解性。应用这种t-PA水质溶液,很容易配制按所要t-PA浓度的适当渗透压的药物制剂,而与其盐浓度无关。
为得到t-PA的冻干制剂,例如可将上述任一方法所制的t-PA水质溶液用过滤器过滤,将细胞除掉,然后将滤液分装入可密封的小瓶或安瓿中,准备去冻干。
冻干制剂中的t-PA含量可以是0.1至10%(重量)。冻干的制剂可以同上述水质溶液以相同方式使用,在使用时用适当的非肠道载体或稀释剂进行再配制。
此外,若需要防止t-PA分子聚合或t-PA粘附到器壁上,可以加入表面活性剂如吐温80(Tween 80)、螯合剂如EDTA以消除金属离子对蛋白质的影响、蛋白质如白蛋白和明胶和糖类如葡聚糖作为稳定剂、以及赋形剂如甘露糖醇和乳糖(当使用冻干制剂时起作用),它们可单独或组合使用。
按本发明,水质溶液形式或冻干制剂形式均可配制成在pH5-9范围稳定的药物溶液而与盐的浓度无关,因此适于临床使用。
由以下实例进一步阐述本发明,但不言而喻,这些实例并非对本发明的限定。
实例中所用的t-PA是单链或双链t-PA或两者的混合物,它们的制备是应用重组体DNA技术将t-PA的结构基因表达在一种细胞培养物中,并从培养液中纯化得到t-PA。单链t-PA和双链t-PA分别得自对培养液的特殊纯化;混合物则得自纯化该培养液而不从双链t-PA中分离出单链t-PA。
溶液的浑浊度主要靠肉眼观察;测量溶液的散射光强度来得到浑浊度定量值。一般,当在所用测定条件下散射光强度为500或更小时,认为该溶液是清澈透明的。
测定溶解于溶液中的蛋白质浓度而简单地估算t-PA回收率。在此测定中,在将样品离心分离后,采用Lowry法或紫外线吸收法定量测定上清液的蛋白质浓度。除另有说明者外,t-PA回收率均按此测定结果。
溶于溶液中的t-PA的活性是利用凝块-溶解时间来测定,将要测定的样品离心分离,将上清液进行测定。测定方法按Gaffney and Curtis所述(P.J.Gaffney and A.D.Curtis,1985,Thromb.Haemastas.53,134,1985),使用标准t-PA作内标物,该t-PA是参照WHO t-PA为标准制备的。
参考实例1
向单链t-PA的弱酸性溶液中加入0.5毫克肝素钠或19.5毫克单乙醇胺氯化物以及不同量的氯化钠,然后将每一溶液的pH值调节到接近中性范围(pH 6.5至7.5)。然后用5%葡萄糖溶液稀释该溶液,将t-PA浓度调节至0.2毫克/升。
结果如图4所示,在加有肝素钠的样品中,没有氯化钠而使t-PA完全溶解,但随着增大盐的浓度,观察到浑浊度增高,表示溶解度下降。在加有单乙醇胺氯化物的样品则与此相反,没有氯化钠的情况下t-PA几乎不溶解,但随着提高盐的浓度,观察到浑浊度下降,表明溶解度提高。此外,在含单乙醇胺氯化物的样品中,为使t-PA完全溶解,所加入的氯化钠量要达到接近生理盐水浓度(0.9%或150mM)。
此外,在分别单独加入其他阴离子聚合物或其盐或者胺类化合物或其盐时,也观察到类似的上述对t-PA溶解度的抑制和促进效应。当该t-PA是单链或双链t-PA时,都分别观察到这些效果。
从这些结果发现,要制备含t-PA的组合物,要求能在盐浓度低的例如5%葡萄糖稀释剂或输液注射液中溶解,又能在盐浓度高的例如生理盐水稀释剂或输液注射液中溶解,并且单独加入阴离子聚合物或其盐或者胺类化合物或其盐以求在接近t-PA等电点的近中性pH条件来溶解t-PA,是难以作到的。
参考实例2至5和实例1至4
向含有单链t-PA和双链t-PA为15∶85比例的弱酸性溶液中,单独地加入阴离子聚合物的盐、肝素钠或硫酸葡聚糖钠以及胺类化合物的盐、赖氨酸氯化物或单乙醇胺氯化物,或以组合方式加入上述阴离子聚合物的盐和胺类化合物的盐,然后将所得溶液的pH值调节至近于中性(pH6.5至7.5),并将t-PA浓度调节至4毫克/毫升。然后,将此溶液用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释至t-PA浓度为0.2毫克/毫升。
结果如表1所示,正如上述参考实例1所观察到的,可以肯定:(1)当单独加入阴离子聚合物的盐时,t-PA可溶于5%葡萄糖溶液,但不溶于生理盐水中(参考实例2和3);(2)当单独加入胺类化合物的盐时,t-PA可溶于生理盐水中,但不溶于5%葡萄糖溶液中(参考实例4和5)。但是,当组合加入阴离子聚合物的盐和胺类化合物的盐时,t-PA在生理盐水和5%葡萄糖溶液中都可溶解(实例1至4)。
由这些研究可以肯定,借助于充分发挥使用阴离子聚合物的盐(它只能对盐浓度较低的溶液提高t-PA溶解度)和使用胺类化合物(它只能对盐浓度较高的溶液提高t-PA溶解度)两者的优点,就可以把胺类化合物在盐浓度低时和阴离子聚合物在盐浓度高时的缺点都克服掉。
这些结果反映出,借助于用一种阴离子聚合物的盐起到在低盐浓度条件下帮助t-PA溶解的作用,并且用一种胺类化合物的盐起到在高盐浓度条件下帮助t-PA溶解的作用,把两者结合起来,就可以制备出在高盐浓度的生理盐水中和在无盐的葡萄糖溶液中都能溶解的t-PA水质溶液形式的t-PA制剂。
此外,一种阴离子聚合物或胺类化合物的非盐类组合物显然也会产生类似的效果。
实例5
向弱酸性的单链t-PA溶液加入硫酸软骨素钠和单乙醇胺氯化物,或者加入硫酸软骨素钠和精氨酸以及硫酸,并将所成溶液的pH值调节至6.0、7.5或9.0之后,再将t-PA浓度调节至4毫克/毫升。然后将该溶液用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释,使t-PA浓度为0.2毫克/毫升。
结果示于表2,t-PA浓度为4毫克/毫升的溶液以及t-PA浓度为0.2毫克/毫升的稀释溶液都是清澈透明的,在所调至的所有pH条件下,浑浊度都很低。经过离心分离后,上清液中的蛋白质回收率基本上为100%。
从这些结果反映出,借助于加入一种阴离子聚合物的盐和一种胺类化合物的盐,或者是加入一种阴离子聚合物的盐和一种胺类化合物以及一种酸来溶解t-PA所制成的t-PA水质溶液能够:(1)在较高盐浓度条件下使用t-PA溶液;(2)在弱酸性至弱碱性pH条件下使用该溶液。
此外,一种阴离子聚合物或胺类化合物的非盐类组合物显然也会产生类似的效果。
实例6
按实例5的相同方式制备4毫克/毫升的t-PA水质溶液,将之冻干,然后用生理盐水或5%葡萄糖溶液再配制,t-PA的浓度成为0.2毫克/毫升。结果也得到实例5在表2中所示的类似结果。
由此而反映出,借助于加入一种阴离子聚合物的盐和一种胺类化合物的盐,或是加入一种阴离子聚合物的盐、一种胺类化合物以及一种酸所得到的t-PA组合物,则不仅其溶液形式的t-PA具有足够溶解度,并且其冻干制剂再配制后亦是如此。
实例7和8
向单链t-PA与双链t-PA比率为15∶85的弱酸性溶液中,按每毫克t-PA加入5毫克肝素钠,26.1毫克精氨酸和14.7毫克硫酸(实例7);或是按每毫克t-PA加入5毫克硫酸软骨素钠和19.5毫克乙醇胺氯化物(实例8);并将溶液的t-PA浓度调节至4毫克/毫升,pH值调节至7.5。然后用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释至t-PA浓度为5微克/毫升至2.0毫克/毫升。
结果示于图1(实例7)和图2(实例8),无论t-PA浓度为何,在各种添加离组合情况下溶液都是清澈透明,浑浊度都够低。此外,离心分离后上清液中的t-PA回收率都达到95%或更高。
由这些结果反映出,借助于将t-PA与一种阴离子聚合物的盐、一种胺类化合物以及一种酸混合,或是与一种阴离子聚合物的盐以及一种胺类化合物的盐混合而得的组合物,在从5微克/毫升到至少4毫克/毫升的很宽t-PA浓度范围内、在5%葡萄糖溶液中或生理盐水中的溶解性都很好,并且在稀释成临床实用的t-PA浓度后,也能很好溶解。
实例9
为了找到溶解t-PA的最适宜pH值,向单链t-PA的弱酸性溶液中加入5毫克硫酸软骨素钠以及19.5毫克单乙醇胺氯化物,再用盐酸或氢氧化钠调节溶液的pH值,再将t-PA浓度调节至4毫克/毫升。再用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释至t-PA浓度0.2毫克/毫升。
结果如图3所示,在pH6至8范围内,使用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释时,t-PA都完全溶解,离心分离后上清液中t-PA回收率都接近100%。但已观察到,当pH为5.5或更低时,t-PA的溶解度比pH6至8的情况下低得多。
由此结果和表2所示可知,在t-PA与一种阴离子聚合物的盐以及一种胺类化合物的盐混合后,组合物溶解的最适宜pH范围是6至8。
如果t-PA不与阴离子聚合物或其盐混合而是只与胺类化合物或其盐混合,或者只与胺类化物合物及一种酸混合,则当盐浓度低时,即用5%葡萄糖溶液时,并且稀释倍数高的情况下,t-PA溶解度不佳。为了估测阴离子聚合物的必需量,将9.1毫克t-PA(5000000 IU)与287.4毫克精氨酸、165.1毫克硫酸、1毫克Tween 80以及不同量的硫酸软骨素钠混合,混合物溶液的pH用氢氧化钠和磷酸钠调节至7.0,将所得溶液冻干成为药物制剂。此制剂用5%葡萄糖溶液再配制和稀释。用肉眼观察稀释后的溶液,考核硫酸软骨素钠对t-PA溶解度的影响。
结果如表3所示,对于不含硫酸软骨素钠的制剂而言,当t-PA浓度稀释到低于50000 IU/毫升,溶液变浑浊。然而,当硫酸软骨素钠加入量为每1毫克t-PA为0.022毫克,其浑浊度消失而变透明,按每1毫克t-PA进一步加入0.11毫克硫酸软骨素钠,甚至到更低浓度亦能保持良好溶解度。
实例11
考核向t-PA中加入阴离子聚合物的盐以及胺类化合物对于t-PA物理性质的影响。向含有单链t-PA的弱酸性溶液中组合加入硫酸软骨素钠和精氨酸氯化物或单乙醇胺氯化物,调节所得溶液的pH值,然后按表4所示浓度用生理盐水或5%葡萄糖溶液稀释。
结果,由受试样品与未加添加剂的对照样品相比,未观察到t-PA物化性质的差异,所述物化性质诸如由凝块溶解时间法所测的单位蛋白质的纤维蛋白溶解活性(见表4);用或不用血纤维蛋白溶酶处理t-PA以分解为两个链的分解合成底物(例如S-2288和S-2366)的活性;用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳测定的降解产物或聚合物的单链含量比率。这些结果表明,当将阴离子聚合物的盐和胺类化合物的盐一起加入时,这些添加剂对于t-PA的物化性质没有影响。很明显,使用非盐的阴离子聚合物和(或)胺类化合物也能得到类似的结果。
实例12
按实例5的相同方式制备2毫克/毫升的溶液,于37℃将该溶液放置24小时。放置之后,在溶液浑浊度、溶液离心分离后上清液中t-PA的回收率,以及实例11中所列的物化性质等方面均未观察到变化。
结果,通过将t-PA与阴离子聚合物的盐以及胺类化合物的盐混合所得的组合物,以及与阴离子聚合物的盐、胺类化合物以及一种酸混合所得的组合物在比临床实用更苛刻的实验条件下具足够稳定性,并且t-PA在溶液中的溶解度没有变化。
实例13
t-PA 50000000 IU
肝素钠 500毫克
单乙醇胺氯化物 1950毫克
Tween 80 25毫克
乳糖 500毫克
将上述后四种成分溶解于注射用蒸馏水中,并加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.6。向此溶液中加入t-PA,然后加入注射用蒸馏水,达到总体积25毫升,无菌过滤后,将溶液分装入小瓶中,每瓶2.5毫升,然后冻干成为血栓溶解组合物。
实例14
t-PA 50000000 IU
肝素钠 500毫克
赖氨酸氯化物 910毫克
Tween 80 25毫克
乳糖 500毫克
将上列后4种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.2。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例15
t-PA 50000000 IU
肝素钠 500毫克
精氨酸氯化物 1050毫克
Tween 80 25毫克
乳糖 500毫克
将上列后4种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.4。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例16
t-PA 50000000 IU
硫酸软骨素钠 500毫克
精氨酸氯化物 1050毫克
Tween 80 25毫克
甘露糖醇 500毫克
将上列后4种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.0。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例17
t-PA 50000000 IU
硫酸软骨素钠 200毫克
精氨酸 2874毫克
Tween 80 10毫克
纯化明胶 100毫克
硫酸 1618毫克
将上列后5种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.0。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例18
t-PA 50000000 IU
硫酸软骨素钠 200毫克
赖氨酸氯化物 1593毫克
Tween 80 10毫克
纯化明胶 100毫克
硫酸钠 710毫克
将上列后5种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氨氧化钠将溶液的pH值调节至6.0。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例19
t-PA 50000000 IU
硫酸软骨素钠 200毫克
单乙醇胺氯化物 1950毫克
Tween 80 25毫克
甘露糖醇 500毫克
将上列后4种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.2。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例20
t-PA 50000000 IU
硫酸葡聚糖钠 25毫克
单乙醇胺氯化物 1950毫克
Tween 80 25毫克
甘露糖醇 500毫克
将上列后4种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.2。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例21
t-PA 50000000 IU
硫酸葡聚糖钠 25毫克
赖氨酸氯化物 910毫克
Tween 80 25毫克
甘露糖醇 500毫克
将上列后4种成分溶解于注射用蒸馏水中,加入氢氧化钠将溶液的pH值调节至7.0。然后向此溶液中加入t-PA,加入注射用蒸馏水至25毫升。无菌过滤后,将溶液分装入小瓶,每瓶2.5毫升,然后冻干,得到血栓溶解制剂。
实例13至21所得的制剂都是冻干的白色细粉末制剂,它们容易溶解于5%葡萄糖溶液或生理盐水,溶液的pH值为中性即7左右,当再配制成t-PA浓度为500000 IU/毫升的溶液后,其渗透压约为2,是适于用作注射药剂的。
此外,将t-PA的浓度分步稀释至300000 IU/毫升、100000 IU/毫升、20000 IU/毫升和2500 IU/毫升。t-PA在所有上述浓度情况下溶解度都符合要求,溶液也是稳定的,在室温将溶液放置至少6小时,其溶解度、t-PA活性和表观分子量都没有变化。甚致将冻干的制剂在40℃贮存3个月以后,它们也是稳定的,其外观、再配制时的溶解度、t-PA活性及表观分子置都没有变化。
正如上述参考实例和实例所示,若没有本发明,要想制成在高和低盐浓度条件下能够溶解的t-PA制剂是难以作到的。与此相反,按本发明即可在t-PA的等电点即接近中性pH值并且不增高盐浓度的条件下将t-PA溶解,并可进一步在高盐浓度溶液中溶解t-PA。因此,本发明克服了常规技术中存在的局限性。
表1
添加剂 浓度* 稀释剂 溶解情况 t-PA
回收率,%参考实 肝素钠 0.01% S 浑浊 <20例2 G 透明 100参考实 硫酸葡聚 0.005% S 浑浊 <20例3 糖-Na G 透明 100参考实 赖氨酸- 20mM S 透明 100例4 HCl G 浑浊 <20参考实 单乙醇胺 40mM S 透明 100例5 -HCl G 浑浊 <20实例1 肝素钠及 0.01% S 透明 97
赖氨酸-HCl 20mM G 透明 101实例2 肝素钠及 0.01% S 透明 96
单乙醇胺-HCl40mM G 透明 96实例3 硫酸葡聚 S 透明 98
糖-Na及 0.005% G 透明 100
赖氨酸-HCl 20mM实例4 硫酸葡聚糖 S 透明 96
-Na及单乙 0.005% G 透明 102
醇胺-HCl 20mM
*当t-PA稀释至0.2毫克/毫升时的浓度。
S:生理盐水;G:葡萄糖溶液,5%;下同。
表2
t-PA浓度
4毫克/毫升 0.2毫克/毫升添加剂 pH 溶解情况 稀释剂pH 溶解情况 DLS* 上清液蛋
白质毫克
/毫升NaPi, 4.2 透明 NaPi4.19 透明 25 0.2160mM硫酸软骨 6.0 透明 S 6.23 透明 150 0.19素Na,0.01% G 6.27 透明 318 0.19及单乙醇 7.5 透明 S 8.01 透明 75 0.20胺氯化物, G 7.84 透明 196 0.2040mM 9.0 透明 S 8.67 透明 47 0.19
G 8.50 透明 145 0.19硫酸软骨 6.0 透明 S 6.53 透明 298 0.20素Na,0.01% G 6.66 透明 128 0.20及精氨酸, 7.5 透明 S 8.09 透明 102 0.2030mM及 G 7.98 透明 161 0.20硫酸, 9.0 透明 S 9.05 透明 55 0.1930mM G 8.98 透明 120 0.21注:
添加剂浓度是当t-PA稀释至0.2毫克/毫升的情况。
添加剂NaPi(60mM的磷酸钠)用作为对照,其中在无添加剂情况下应用pH值远离t-PA等电点的溶液将t-PA溶液稀释,并且t-PA将充分溶解。
当上清液中蛋白质浓度为0.2毫克/毫升,估测t-PA回收率为100%。
*DLS=散射光强度。
表3稀释 t-PA 硫酸软骨素钠加入量倍数* IU/毫升 (毫克/毫克t-PA)
0 0.022 0.055 0.11 0.22 0.55 1.11.67 300000 C C C C C C C5 100000 C C C C C C C10 50000 T T T C C C C25 20000 T ST C C C C C50 10000 T ST C C C C C100 5000 T C C C C C C200 2500 ST C C C C C C
C=透明;T=浑浊;ST=稍浑浊。
*再配制之后。
表4t-PA CS 乙醇胺- Arg- 稀释剂 pH 比活性毫克/毫升 % HCl, HCl, ×104
mM mM IU/毫克0.2 - - - G 约4.5 43.10.2 0.01 40 - G 6.7 46.20.2 0.01 40 - S 6.7 45.80.2 0.1 40 - G 6.7 50.80.2 0.1 40 - S 6.7 53.30.6 0.3 120 - G 6.7 56.50.6 0.3 120 - S 6.7 56.41.0 0.5 200 - G 6.7 48.91.0 0.5 200 - S 6.7 53.50.2 0.01 - 10 G 7.0 55.00.2 0.01 - 10 S 7.0 41.60.2 0.1 - 10 G 7.0 55.50.2 0.1 - 10 S 7.0 48.10.6 0.3 - 30 G 7.0 53.00.6 0.3 - 30 S 7.0 43.81.0 0.5 - 50 G 7.0 55.61.0 0.5 - 50 S 7.0 56.9
CS=硫酸软骨素钠
Arg-HCl=精氨酸-HCl
Claims (18)
1.一种制造血栓溶解组合物的方法,该方法包括将其中包含组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物和一种阴离子聚合物或其盐以及一种胺类化合物或其盐相混合。
2.一种制造血栓溶解组合物的方法,该方法包括将组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物和一种阴离子聚合物或其盐,一种胺类化合物以及一种酸或其盐相混合。
3.按权利要求1的方法,其中所应用的阴离子聚合物是一种盐,并且所述胺类化合物是一种盐。
4.按权利要求2的方法,其中所应用的阴离子聚合物是一种盐。
5.按权利要求1或2的方法,其中所应用的阴离子聚合物或其盐以每1毫克组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物含有25微克或更多的浓度来进行混合。
6.按权利要求1或2的方法,其中所应用的胺类化合物或其盐以每1毫克组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物含有20微摩尔至10毫摩尔的浓度来进行混合。
7.按权利要求2的方法,其中所应用的酸或其盐以每1毫克组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物含有20微摩尔至10毫摩尔的浓度来进行混合。
8.按权利要求1或2的方法,其中所应用的阴离子聚合物的阴离子残基是选自羧基、羧甲基、硫酸根以及磷酸根之中的一种或多种。
9.按权利要求1或2的方法,其中所应用的胺类化合物或其盐是选自单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、聚乙烯亚胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸以及它们的盐的一种或多种。
10.按权利要求2的方法,其中所应用的酸或其盐是选自草酸、盐酸、硫酸、磷酸、焦磷酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、葡糖醛酸、戊二酸、乳酸、己二酸、抗坏血酸以及它们的盐中的至少一种。
11.按权利要求1至4中任一项权利要求的方法,其中所应用的血栓溶解组合物是一种水溶液。
12.按权利要求1至4中任一项的权利要求的方法,其中所应用的血栓溶解组合物是一种冻干的制剂。
13.按权利要求11的方法,其中所应用的水质溶液中组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂的浓度为0.001至10毫克/毫升。
14.按权利要求13的方法,其中所应用的水溶液的pH值为5至9。
15.按权利要求12的方法,其中在所应用的冻干制剂中组织型血纤维蛋白溶酶原活化剂的含量为0.1至10%(重量)。
16.按权利要求11或12的方法,其中的组合物是被溶解于生理盐水中。
17.按权利要求11或12所述的方法,其中的组合物是被溶解于5%葡萄糖溶液或用于注射用蒸馏水中。
18.一种制备血栓溶解组合物的方法,该方法包括使组织型纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物、阴离子聚合物或其盐以及一种胺类化合物或其盐相互混合;或者使组织型纤维蛋白溶酶原活化剂或其衍生物、阴离子聚合物或其盐、胺化合物和酸、或它们的盐相互混合;使这些物质相互混合的步骤包括溶解所述各组份以形成一种溶液,以及随后任意选择地冷冻干燥该组合物。
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Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6207151B1 (en) * | 1989-09-21 | 2001-03-27 | Mitsui Chemicals Inc. | Aqueous solution of t-PA |
US5272076A (en) * | 1991-06-13 | 1993-12-21 | Eli Lilly And Company | Compounds and methods for treatment of thromboembolic disorders using an adduct of t-PA |
US6527979B2 (en) * | 1999-08-27 | 2003-03-04 | Corazon Technologies, Inc. | Catheter systems and methods for their use in the treatment of calcified vascular occlusions |
EP2604697B1 (en) * | 2006-03-27 | 2015-07-01 | Tokyo University of Agriculture and Technology TLO | Triprenyl phenol compounds, process for their production and use as thrombolysis enhancer |
EP3524235A1 (en) * | 2012-06-11 | 2019-08-14 | The Cleveland Clinic Foundation | Treatment and prevention of cardiovascular disease and thrombosis |
CN103191054B (zh) * | 2013-04-19 | 2015-05-27 | 范克 | 一种肝素钠封管注射液及其制备方法 |
Family Cites Families (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2310133A2 (fr) * | 1975-05-05 | 1976-12-03 | Fabre Sa Pierre | Nouveau medicament comportant un activateur du plasminogene perfectionne |
JPS52145591A (en) * | 1976-05-28 | 1977-12-03 | Kanebo Ltd | Stabilization of urokinase |
JPS5467089A (en) * | 1977-11-07 | 1979-05-30 | Dainippon Pharmaceut Co Ltd | Urokinase composition |
JPS5568290A (en) * | 1978-11-16 | 1980-05-22 | Kanebo Ltd | Stabilization of urokinase |
JPS59196824A (ja) * | 1983-04-21 | 1984-11-08 | Kowa Co | 吸着防止剤 |
JPS60158116A (ja) * | 1984-01-30 | 1985-08-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 |
JPS60158117A (ja) * | 1984-01-30 | 1985-08-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 新規なプラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−およびその製法ならびにこれを含有する薬剤 |
JPS60181028A (ja) * | 1984-02-29 | 1985-09-14 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 組織プラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−の溶解補助法 |
JPS60184026A (ja) * | 1984-03-01 | 1985-09-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 組織プラスミノ−ゲン・アクチベ−タ−の溶解補助方法 |
GR860624B (en) * | 1985-03-06 | 1986-07-08 | Survival Technology | T-pa composition and method of getting into blood steam |
DE3512908A1 (de) * | 1985-04-11 | 1986-10-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebe-plasminogenaktivator (t-pa) enthaltendes mittel |
DE3512910A1 (de) * | 1985-04-11 | 1986-10-16 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur reinigung von plasminogenaktivatoren |
DE3512909A1 (de) * | 1985-04-11 | 1986-10-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur bestimmung von plasminogenaktivatoren (pa) |
JPH0669960B2 (ja) * | 1985-11-22 | 1994-09-07 | エーザイ株式会社 | 水溶性を増加したtPA含有医薬組成物 |
DE3687255T2 (de) * | 1985-09-10 | 1993-05-06 | Eisai Co Ltd | Einen gewebe-plasminogen-aktivator enthaltende zusammensetzung. |
JPH0672105B2 (ja) * | 1985-10-02 | 1994-09-14 | 持田製薬株式会社 | 血栓溶解剤及びその製法 |
JPS62120321A (ja) * | 1985-11-20 | 1987-06-01 | Eisai Co Ltd | tPA含有医薬組成物 |
US4777043A (en) * | 1985-12-17 | 1988-10-11 | Genentech, Inc. | Stabilized human tissue plasminogen activator compositions |
JPH0678241B2 (ja) * | 1986-04-02 | 1994-10-05 | エーザイ株式会社 | tPA医薬組成物 |
JPS62292729A (ja) * | 1986-06-12 | 1987-12-19 | Toyobo Co Ltd | ヒト子宮組織由来プラスミノ−ゲン活性化因子製剤 |
US4857320A (en) * | 1987-02-19 | 1989-08-15 | Monsanto Company | Method of enhancing the solubility of tissue plasminogen activator |
DE3718889A1 (de) * | 1987-06-05 | 1988-12-22 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung einer loesung hoher spezifischer volumenaktivitaet von einem protein mit gewebe-plasminogenaktivator (t-pa)-aktivitaet, loesung, enthaltend protein mit t-pa-aktivitaet und verwendung der loesung in der human- und veterinaermedizin |
JP2708749B2 (ja) * | 1987-08-10 | 1998-02-04 | エーザイ株式会社 | 修飾型tPA含有注射用組成物 |
US4898826A (en) * | 1987-12-10 | 1990-02-06 | Invitron Corporation | Method to solubilize tissue plasminogen activator |
US4980165A (en) * | 1989-01-27 | 1990-12-25 | Genetics Institute, Inc. | Pharmaceutical formulations of plasminogen activator proteins |
JPH06226234A (ja) * | 1993-02-01 | 1994-08-16 | Shojiro Takeuchi | 産業廃棄物の炭化処理方法 |
JPH06236332A (ja) * | 1993-02-09 | 1994-08-23 | Oki Electric Ind Co Ltd | プログラムローディング装置 |
JPH06259221A (ja) * | 1993-03-05 | 1994-09-16 | Tokyo Electric Co Ltd | 画面表示器を備えた情報処理装置 |
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