CN104130300A - 一种从槐米中提取芦丁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种新的从槐米中提取芦丁的方法，包括以下步骤：将槐米粉碎后采用超临界CO2法进行灭酶，用60%～70%的乙醇在一定条件下进行超声波辅助提取得提取液，将提取液静置结晶，抽滤得芦丁粗品，将芦丁粗品通过正丁醇进行精制，之后经130℃烘干后得纯度为97%以上的芦丁产品，收率达22%以上。本发明所述方法操作简便，提取效率高，适用于生产实际。
Description
技术领域
本申请涉及一种从槐米中提取芦丁的方法。
背景技术
槐米为豆科植物槐树的干燥花及花蕾，入药已有2000多年的历史，《神农本草经》将其列为上品。槐米中含有的芦丁约8%～28%（根据槐米产地及收取时间的不同而有所差异）。芦丁又称芸香苷、紫槲皮苷，属于黄酮苷类化合物，具有凉血止血，清肝泻火的功效，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，还具有抗炎、抗过敏、利尿、镇咳、降血脂的等作用。芦丁在临床上已用作高血压病的辅助治疗、防止因芦丁缺乏导致的其他出血症，以及预防和治疗糖尿病及合并高血脂症。另外，芦丁作为天然的抗氧化剂和使用黄色素，也被广泛使用在保健食品和化妆品种。
现有技术中常见的芦丁提取纯化方法有沸水煎煮、碱提酸沉、乙醇浸提、连续回流、超声提取、微波提取、酶法提取、超临界CO2萃取等。芦丁在槐米晾晒、洗涤、粉碎、提取过程中，易受到共存于槐米中的芸香酶作用而发生水解，因此，提取前或提取过程中灭酶或降低酶的活性十分重要。现有技术中采用的灭酶方法主要有干蒸、紫外线照射、60Co照射、微波灭酶等，其中干蒸温度高，在灭酶的同时即会造成芦丁的水解和氧化，亦会导致部分芦丁溶于热水而流失；而紫外线照射虽可有效灭酶，但用时较长，成本也高，使生产效率降低。
发明内容
本申请旨在提供一种新的从槐米中提取芦丁的方法，以克服现有技术中的上述缺陷。
本发明所述方法包括以下步骤：
(1) 灭酶：将干燥槐米粉碎至20～80目，加入温度为30～40℃，pH＝4～5的酸水后，置入超临界CO2萃取装置中，在压力为30MPa、温度为30～40℃下处理20～40min，之后使用温度为0～5℃，pH＝4～5的酸水洗涤两次后甩干；
(2) 提取：甩干后的槐米颗粒加入槐米质量1～5%的硼砂、1～5%的Na2SO3和15～30倍的60～70%乙醇中，使用碳酸氢钠调节pH至9～10，在20～30kHz，30～50℃的条件下避光超声波提取20～30min，之后过滤，滤液在30～50℃下避光备用；滤渣再次以上述同样的条件提取一次，得到的滤液与之前滤液合并，向合并后的滤液中加入5%活性炭，30～50℃下避光搅拌10～15min，将过滤除炭后的滤液酸化至pH=4～5，采用20～30kHz的超声在0～5℃下避光处理20～40min，静置结晶，抽滤得芦丁粗品；
(3) 精制：将芦丁粗品置于烘箱中，40℃下烘干至无醇味，再逐渐升温至130℃烘干，将得到的干燥芦丁加入正丁醇中加热至溶解，过滤，向滤液中加入去离子水，采用20～30kHz的超声在0～5℃下避光处理20～30min，静置结晶，在130℃下烘干，得到纯度97%以上的芦丁，收率达22%以上。
进一步地，本发明所述步骤(1)中，灭酶处理的时间优选40min；所述酸水可以为盐酸水溶液。
进一步地，本发明所述步骤(2)中，优选加入4%的硼砂和1%的Na2SO3；超声波提取的条件优选在30kHz、40℃下提取30min。
进一步地，本发明所述步骤(3)中，加入正丁醇的体积与槐米原料质量之比为20～30mL/g；加入去离子水的体积与槐米原料质量之比为2～3mL/g；超声波处理的条件优选在30 kHz下处理20～30min。
本发明采用超临界CO2法进行灭酶，温度低，用时短，且芦丁在超临界CO2条件下不易溶解，故不会导致芦丁的水解、氧化和流失，最大限度地保留了芦丁的有效成分含量；采用超声波辅助提取，使提取时间缩短，降低了芦丁在提取过程中的氧化流失，使收率增加；采用正丁醇对芦丁进行精制，可以有效去除胶质、脂肪酸等杂质，提高芦丁的纯度。综合本发明所述的各个步骤来看，本发明所述方法操作简便，提取效率高，适用于生产实际。
附图说明
图1为芦丁标准品HPLC谱图。
图2为实施例1中芦丁终产物HPLC谱图。
具体实施方式
实施例1
将20g槐米粉碎至30目，加入温度为35℃、pH＝4～5的酸水，搅拌后，放入超临界CO2萃取装置中，在30MPa、30～40℃下处理40min，之后使用0～5℃、pH＝4～5的酸水洗涤两次后甩干；将甩干后的槐米颗粒加入4%的硼砂、1%的Na2SO3和25倍的60%乙醇中，加入碳酸氢钠调节pH=9～10，在30kHz、40℃的条件下避光超声波提取30min，之后过滤，滤液在30～50℃下避光备用；滤渣再以同样的条件超声波提取一次，合并两次提取得到的滤液，向其中加入5%活性炭，40℃下避光搅拌10min，将过滤除炭后的滤液酸化至pH=4～5，采用30kHz的超声在0～5℃下避光处理30min，静置结晶，抽滤得芦丁粗品；将芦丁粗品置于烘箱中，40℃下烘干至无醇味，再逐渐升温至130℃烘干，将得到的干燥芦丁加入到500mL正丁醇中加热至溶解，过滤，向滤液中加入50mL去离子水，采用30kHz的超声在0～5℃下避光处理30min，静置结晶并在130℃下烘干，得到纯度98.6%的芦丁4.55g，收率22.76%。
实施例2
将30g槐米粉碎至50目，加入温度为40℃、pH＝4～5的酸水，搅拌后，放入超临界CO2萃取装置中，在30MPa、30～40℃下处理40min，之后使用0～5℃、pH＝4～5的酸水洗涤两次后甩干；将甩干后的槐米颗粒加入3%的硼砂、2%的Na2SO3和20倍的60%乙醇中，用碳酸氢钠调节pH=9～10，在25kHz、35℃的条件下避光超声波提取30min，之后过滤，滤液在30～50℃下避光备用；滤渣再以上述同样条件提取一次，合并两次提取得到的滤液，向其中加入5%活性炭，40℃下避光搅拌15min，将过滤除炭后的滤液酸化至pH=4～5，采用20～30kHz的超声在0～5℃下避光处理30min，静置结晶，抽滤得芦丁粗品；将芦丁粗品置于烘箱中，40℃下烘干至无醇味，再逐渐升温至130℃烘干，将得到的干燥芦丁加入到750mL正丁醇中加热至溶解，过滤，向滤液中加入75mL去离子水，采用30kHz的超声在0～5℃下避光处理25min，静置结晶，滤出后在130℃下烘干，得到纯度97.9%的芦丁6.76g，收率22.52%。
实施例3
将50g槐米粉碎至20目，加入温度为35℃、pH＝4～5的酸水，搅拌后，放入超临界CO2萃取装置中，在30MPa、30～40℃下处理40min，之后使用5℃、pH＝4～5的酸水洗涤两次后甩干；将甩干后的槐米颗粒加入4%的硼砂、1%的Na2SO3和30倍的70%乙醇中，用碳酸氢钠调节pH=9～10，在30kHz、40℃的条件下避光超声波提取30min，之后过滤，滤液在30～50℃下避光备用；滤渣再以同样的条件超声波提取一次，合并两次提取得到的滤液，向其中加入5%活性炭，40℃下避光搅拌15min，将过滤除炭后的滤液酸化至pH=4～5，采用20～30kHz的超声在0～5℃下避光处理30min，静置结晶，抽滤得芦丁粗品；将芦丁粗品置于烘箱中，40℃下烘干至无醇味，再逐渐升温至130℃烘干，将得到的干燥芦丁加入到1250mL正丁醇中加热至溶解，过滤，向滤液中加入125mL去离子水，采用30kHz的超声在0～5℃下避光处理30min，静置结晶，130℃下烘干，得到纯度98.7%的芦丁11.61g，收率23.21%。
实施例4
本实施例将对比本发明采用的超临界CO2灭酶法与本领域经常使用的干蒸灭酶法对提取芦丁效果的影响。取20g槐米，干蒸灭酶法进行灭酶处理，具体操作为：在密闭容器内，以65℃的温度，对晾晒过的槐米干蒸灭酶处理10min，之后粉碎为30目。采用干蒸灭酶处理后，以实施例1中所述的步骤进行芦丁提取和精制，得到的芦丁产品与实施例1的结果进行对比。
表1 干蒸灭酶法与超临界CO2灭酶法对提取结果的影响对比表
Claims (5)
1.一种从槐米中提取芦丁的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1) 灭酶：将干燥槐米粉碎至20～80目，加入温度为30～40℃，pH＝4～5的酸水后，置入超临界CO2萃取装置中，在压力为30MPa、温度为30～40℃下处理20～40min，之后使用温度为0～5℃，pH＝4～5的酸水洗涤两次后甩干；
(2) 提取：甩干后的槐米颗粒加入槐米质量1～5%的硼砂、1～5%的Na2SO3和15～30倍的60～70%乙醇中，使用碳酸氢钠调节pH至9～10，在20～30kHz，30～50℃的条件下避光超声波提取20～30min，之后过滤，滤液在30～50℃下避光备用；滤渣再次以上述同样的条件提取一次，得到的滤液与之前滤液合并，向合并后的滤液中加入5%活性炭，30～50℃下避光搅拌10～15min，将过滤除炭后的滤液酸化至pH=4～5，采用20～30kHz的超声在0～5℃下避光处理20～40min，静置结晶，抽滤得芦丁粗品；
(3) 精制：将芦丁粗品置于烘箱中，40℃下烘干至无醇味，再逐渐升温至130℃烘干，将得到的干燥芦丁加入正丁醇中加热至溶解，过滤，向滤液中加入去离子水，采用20～30kHz的超声在0～5℃下避光处理20～30min，静置结晶，在130℃下烘干，得到纯度97%以上的芦丁，收率达22%以上。
2.如权利要求1所述的芦丁提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中，灭酶处理的时间为40min；所述酸水可以为盐酸水溶液。
3.如权利要求1或2所述的芦丁提取方法，其特征在于：所述步骤(2)中，加入4%的硼砂和1%的Na2SO3；在30kHz、40℃条件下超声波提取30min。
4.如权利要求1或2所述的芦丁提取方法，其特征在于：所述步骤(3)中，加入正丁醇的体积与槐米原料质量之比为20～30mL/g；加入去离子水的体积与槐米原料质量之比为2～3mL/g；在30 kHz条件下超声波处理20～30min。
5.如权利要求3所述的芦丁提取方法，其特征在于：所述步骤(3)中，加入正丁醇的体积与槐米原料质量之比为20～30mL/g；加入去离子水的体积与槐米原料质量之比为2～3mL/g；在30 kHz条件下超声波处理20～30min。
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