CN104127394A - α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中一种以上在制备人血管内皮细胞损伤药物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用。本发明可以有效提高内皮细胞存活率，从而具有制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的新用途。
Description
技术领域
本发明涉及α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用，属于制药领域。
背景技术
心血管系统疾病（cardiovascular disease, CVD）如高血压、糖尿病导致的心血管系统损伤，动脉粥样硬化，心肌梗死，心绞痛，风湿性心脏病等是心血管疾病的常见疾病，已成为严重危害人类健康、引起死亡的主要疾病，同时也是老年人认知功能障碍和情感障碍的重要原因之一。我国为CVD 高发国家，CVD年发病率为( 185～ 219) /10万, 估计每年有200万新发CVD 病例, 有150万人死于CVD, 有CVD存活者700 万人。CVD是我国人口死亡的第一位原因，2 /3的CVD患者死亡或遗留不同程度的残疾, 给国家和家庭造成巨大的经济负担。据估计每年CVD的治疗费用约150 亿元人民币。
内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）作为人体最大的器官，在维持血管稳态功能中起重要作用。整个血管的内表面由一层内皮细胞所覆盖，是构成血管通透性的主要屏障，并能合成和分泌调节凝血-纤溶系统的物质、调节血管张力的因子以及细胞因子等，在血管张力、血管形成及炎症反应中起有重要作用。血管内皮细胞层不仅是血液与组织间的屏障，而且是十分活跃的代谢及内分泌器官，血管内皮细胞结构和功能的改变在心血管疾病的发生发展中起十分重要的作用。据文献报道，心血管疾病的发生与炎性反应的产生有着密切的联系。炎性反应细胞因子包括TNF-α、IL、TXA2、AngⅡ、IFNγ、细胞集落因子等，血管内皮细胞炎症反应是各种心血管疾病发生、发展过程中的一个关键组成部分，是其共同的病理生理学基础。当血管内皮细胞受到损伤时，除了引起血管壁的损伤外，更重要的是内分泌功能的失调，使其分泌的多种活性物质及相关因子之间的平衡被打破，从而导致心血管系统功能的障碍。控制炎性反应的机制十分复杂，体外亦具有诸多的影响因素，其作用过程包含许多环节。因此，开展血管内皮细胞损伤保护作用的研究，对降低心血管系统的危险因素及心脑血管系统疾病的预防、治疗和愈后具有非常重要的意义，目前已成为心脑血管疾病研究的新热点。
研究表明，机体组织NO含量的变化直接影响内皮功能，从而导致原发性高血压、冠状动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤、充血性心力衰竭等许多心血管疾病。NO是由一氧化氮合酶(NOS)从L-精氨酸合成的自由基，是一种高反应的小分子。NO执行重要的生物功能，包括扩张血管、抗血小板聚集、抑制平滑肌细胞增殖等。内皮细胞存在有两种一氧化氮合酶，即iNOS和eNOS。一氧化氮合酶是NO产生过程中的限速酶，因此NOS的酶活性及其表达量直接影响到NO的产量。在正常人血管内皮细胞中eNOS表达较多，iNOS表达较少，而病理情况下则相反。核转录因子NF-κB在体内存在于胞浆中，被激活后进入细胞核与TNF-α等促炎细胞因子、iNOS等基因的位点结合，启动多种炎性基因的转录和翻译过程，导致持续或放大的炎症反应。从而导致内皮功能炎性损伤，诱发包括高血压、冠心病、慢性肾衰、外周血管疾病、糖尿病及慢性肾衰等一系列心脑血管疾病。基于上述理想，如何发明一种制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物应用，成为了业界亟待解决的课题。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用。本发明可以有效提高内皮细胞存活率，从而具有制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的新用途。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用。
上述的α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用，是在制备治疗人血管内皮细胞损伤导致的高血压、冠心病、慢性肾衰、外周血管疾病、糖尿病或慢性肾衰的药物的应用。
与现有技术相比，本发明可以有效提高内皮细胞存活率，具有制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的新用途。
1、以下为本发明的药效研究实验：
1.1 LPS的配制
将0.1gLPS粉末溶于20ml 0.9%的氯化钠注射液中，配成终浓度为5mg/ml的母液，过滤除菌后-20℃冰箱中保存，临用时用氯化钠注射液稀释成所需浓度。
1.2 α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇和莰烯标准品均可从市场购得。
1.3 α-蒎烯试液的配制
取标准品10μl，加DMSO定容至10ml，配成浓度为0.98mg/ml的母液，过滤除菌常温避光保存，临用时用无血清的DMEM培养基稀释成所需浓度（0.371μg/L）。
1.4 β-蒎烯试液的配制
取标准品10μl，加DMSO定容至10ml，配成浓度为0.98mg/ml的母液，过滤除菌常温避光保存，临用时用无血清的DMEM培养基稀释成所需浓度（0.202μg/L）。
1.5 1,8-桉叶油醇试液的配制
取标准品10μl，加DMSO定容至10ml，配成浓度为0.99mg/ml的母液，过滤除菌常温避光保存，临用时用无血清的DMEM培养基稀释成所需浓度（0.438μg/L）。
1.6 莰烯试液的配制
称取标准品0.1g，加DMSO溶解并定容至10ml，配成浓度为10mg/ml，过滤除菌常温避光保存，临用时用无血清的DMEM培养基稀释成所需浓度（0.405μg/L）。
2 实验方法
2.1 HUVECs的复苏
HUVECs购于美国SCIENCELL公司，北京裕恒丰国内代理公司。从超低温冰箱中取出冻存的HUVECs，立即放入37℃水浴中迅速解冻。显微镜下进行细胞计数（1×105个/ml）后，以1:3的比例将细胞悬液转入3个25cm2细胞培养瓶，每瓶加2.5ml ECM，平晃使其均匀铺满瓶底。放入37℃，饱和湿度，5%CO2的培养箱中培养，次日换液一次。
2.2 HUVECs的传代
待细胞生长融合成单层细胞后，弃掉培养液，用无菌PBS缓冲液洗涤两次，每次3ml。加入1ml 0.25%胰蛋白酶，置倒置显微镜下观察，当细胞回缩变圆后，迅速加入1.2ml中和液终止消化，用吸管吹打制成细胞悬液，常温1500r/min离心5-6min.弃上清，加入6mlECM按1:3比例将细胞悬液接种于培养瓶，置37℃，饱和湿度，5%CO2培养箱中培养。
2.3 HUVECs的冻存
待细胞长满后，胰酶消化法收集第3代对数生长期细胞，显微镜下细胞计数（1×105个/ml）后，1500r/min离心5-6min。弃上清，每管加入1.5ml冻存液，混匀后转移至冻存管内，采取梯度冷冻先置于4℃ 30 min、再-20℃1h、后置于-80℃长期保存。
2.4药效研究实验
2.4.1 实验分组
实验分成六个组：空白组（Control Dose，Contr.）、LPS模型组（Model Dose，LPS）、α-蒎烯组、β-蒎烯组、1,8-桉叶油醇组和莰烯组。
2.4.2苏木素-伊红染色（HE染色）
将形态完好的细胞接种到6孔板内，长满后按上述分组加药，LPS孵育12h后，取出PBS浸洗3次，每次5分钟，加4%的多聚甲醛固定15min，弃去多聚甲醛，PBS浸洗3次，每次5分钟，待孔内干燥后，加苏木精染液染色15-20 min，PBS浸洗3次，每次5分钟，HCL-乙醇（75%乙醇配制1%HCL）分化30秒，PBS浸洗3次，每次5分钟，95%乙醇润洗5秒，伊红染液染色（5-10）分钟，70%乙醇洗2次。镜检着色满意后观察细胞，拍照。
2.4.3四氮唑盐法（MTT）分析细胞存活率
取生长良好的传代培养的HUVECs，制成细胞悬液，以每孔1×104个接种于96孔培养板（每孔100μl），培养至细胞基本融合，换成无血清的DMEM培养液继续培养24h，使细胞同步化。每孔分别加入上述配置好的各种药物，继续培养12h，再加入MTT（5mg/ml）20μl，继续孵育4h，终止培养。小心吸去孔内培养液，每孔加入150μl二甲基亚砜，低速震荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm波长处测量各孔吸光值，结果以OD值表示。细胞存活率＝实验组OD值/对照组OD值×100%。
2.4.4 乳酸脱氢酶（LDH）的测定
将HUVECs经过上述分组给药处理后，收集24孔板培养液，吸出培养液，-20℃冰箱保存，备测。
(1)分析原理：LDH能够催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应在碱性环境下形成棕红色苯腙化合物，在440nm波长测定，通过比色求出酶的活力。
(2)分析方法：根据试剂盒说明书完成。取样：
混匀，室温放置3分钟，440nm蒸馏水调零 1cm光径测各管吸光度，根据公式计算LDH活力。
计算公式：
2.4.5 NO的测定
将内皮细胞经过上述分组给药处理后，用规格为1.5ml的无菌管收集96孔板培养液，吸出培养液，于-20℃冰箱冷冻保存，备测。
(1)分析原理：NO化学性质活泼，在体内很快代谢成NO2 －和NO3 －，而NO2 －又进一步转化成NO3 －，本法利用硝酸还原酶特异性将NO3 －还原成NO2，通过显色深浅测定其浓度的高低。
(2)分析方法：根据试剂盒说明书完成。
显色剂的配制：试剂三:试剂四:试剂五=2.5:1:1
前处理：取96孔板内上清液（100μl）+试剂一（200μl）混匀。然后加入试剂二（100μl），漩涡混匀，静置10min。3500-4000r/min,离心15min，取上清液160μl进行以下操作。
取样：
| 空白组 | 标准管 | 测定管 | |
| 双蒸水（ml） | 0.16 | ||
| 20μmol/LNaNO2标准液（ml） | 0.16 | ||
| 上清液（ml） | 0.16 | ||
| 显色剂（ml） | 0.08 | 0.08 | 0.08 |
混匀，室温静置10分钟，蒸馏水调零，550nm，1cm光径，测各管吸光值。
计算公式：
2.5 单成分基础研究实验
2.5.1 单成分分析实验
取生长良好的传代培养的HUVECs，制成细胞悬液，以每孔1×104个接种于96孔培养板（每孔100μl），培养至细胞基本融合，换成无血清的DMEM培养液继续培养24h，使细胞同步化。实验按照表1分成7个组，除模型组外，其余各组给予相应药液作用1h后，再用LPS复制HUVECs炎性损伤细胞模型。加入MTT（5mg/ml）20μl，继续孵育4h，终止培养。小心吸去孔内培养液，每孔加入150μl二甲基亚砜，低速震荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm波长处测量各孔吸光值，结果以OD值表示。
表1 单成分分析实验分组
Tab.1 The group of Single component analysis experiment
| 空白组 | 模型组 | 1,8-桉叶油醇 | 莰烯 | β-蒎烯 | α-蒎烯 |
| -------- | 15μg/ml | 0.438μg/L | 0.405μg/L | 0.202μg/L | 0.371μg/L |
2.5.2正交试验
为筛选主要活性物质, 对4个主要因素: α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯采用2.4.4 项下实验方法进行了L8(27)正交试验，见表2。
表2 正交试验因素水平
Tab.2 Factor and level of Orthogonal test
| 水平 | α-蒎烯 | β-蒎烯 | 1,8-桉叶油醇 | 莰烯 |
| 1 | 有 | 有 | 有 | 有 |
| 2 | 无 | 无 | 无 | 无 |
2.5.2 单成分不同浓度MTT实验
将α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯含量配成2倍、10倍、50倍浓度，然后根据2.4.4 项下实验方法测定OD值，2.4.6 项下实验法测定培养上清NO含量。
表3 四种成分不同倍数浓度
Tab.3 Different concentrations of 4 Single components
| 药物 | 2倍浓度 | 10倍浓度 | 50倍浓度 |
| α-蒎烯 | 0.742μg/L | 3.71μg/L | 18.55μg/L |
| β-蒎烯 | 0.404μg/L | 2.02μg/L | 10.1μg/L |
| 1,8-桉叶油醇 | 0.876μg/L | 4.38μg/L | 21.9μg/L |
| 莰烯 | 0.81μg/L | 4.05μg/L | 20.25μg/L |
2.6 实验数据的统计处理
所有数据用SPSS20.0软件进行统计学处理，数据以均数标准差表示。采用Student T检验（T-test），P<0.05，表示具有差异,P<0.01，表示具有显著性差异。
结论：
1、 HUVECs的形态学观察
HUVECs传代后，倒置相差显微镜下观察，起初呈圆形或椭圆形，多呈小团存在。2h后细胞开始贴壁，之后很快生长成为多数单层小多角型集落，4h后大部分细胞贴壁。48-72h生长最快，逐渐生长成梭形，有些细胞呈鱼贯状相连，间有漩涡状排列。核清晰，呈圆形或椭圆形，核分裂相多见1-2个核仁，胞浆丰富，内含小颗粒。于2-3d后融合，4-6d胞体呈多角形，相互嵌合为单层呈铺路石状排列。
传代HUVECs约0.5h后部分即开始贴壁生长，1-2d即可长满，2-3d相互融合，生长旺盛,可见多核细胞。传代培养的血管内皮细胞体积增大，胞浆丰满，呈梭形或多角形，细胞排列稍稀疏，随着传代次数的增多，可见多个双核细胞，表明细胞分裂旺盛。结果见图1。
2、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯按对LPS诱导的HUVECs损伤具有保护作用的试验结果：
（1）苏木精-伊红染色（HE）
HE染色后，HUVECs胞核染成蓝紫色，胞质染成粉红色。空白组细胞呈明显的铺路石形状，细胞之间排列紧密，形态比较均一；LPS组细胞间隙增宽，周围模糊，细胞数量减少，形态异于正常；α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组的HUVECs形态明显较LPS组规则，细胞间隙变小，接近于正常形态，可见α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组对LPS诱导的HUVECs损伤具有保护作用。结果见图2。
（2） MTT分析细胞存活率
检测结果如表4所示，与Contr.组比较，LPS组对HUVECs的炎症损伤作用明显，具有显著性差异（P＜0.01）；与LPS组比较α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组与LPS组均都具有显著性差异（P＜0.01），均可提高由LPS诱导损伤的HUVECs的存活率。
表4 MTT分析各组对LPS诱导HUVECs损伤的保护作用(,n=6)：
| Group | Concentration | OD490 |
| Contr. | N·S +Free-serumDMEM | 0.443±0.009 |
| LPS | LPS 15μg/ml +Free-serumDMEM | 0.258±0.016## |
| α-蒎烯 | LPS 15μg/ml +α-蒎烯0.371μg/L | 0.282±0.008* |
| β-蒎烯 | LPS 15μg/ml +β-蒎烯0.202μg/L | 0.2895±0.011* |
| 1,8-桉叶油醇 | LPS 15μg/ml +1,8-桉叶油醇0.438μg/L | 0.303±0.020* |
| 莰烯 | LPS 15μg/ml + 莰烯0.405μg/L | 0.306±0.015* |
（3） LDH外漏检测
表5所示：与Contr.组比较，LPS组LDH的漏出量明显升高，具有显著性差异（P＜0.01），提示LPS导致HUVECs损伤，LDH外漏；与LPS组比较，α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组的LDH外漏明显降低，且有显著性差异（P＜0.01）；提示α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组可以减轻LPS诱导的HUVECs损伤。
表5 各组对LPS诱导HUVECs损伤LDH外漏的影响(.n=6)
| Group | Concentration | LDH（U/L) |
| Contr. | N·S +Free-serumDMEM | 1.252±0.017 |
| LPS | LPS 15μg/ml +Free-serumDMEM | 2.029±0.023## |
| α-蒎烯 | LPS 15μg/ml +α-蒎烯4μg/L | 1.677±0.039** |
| β-蒎烯 | LPS 15μg/ml +β-蒎烯4μg/L | 1.600±0.039** |
| 1,8-桉叶油醇 | LPS 15μg/ml + 1,8-桉叶油醇4μg/L | 1.692±0.022** |
| 莰烯 | LPS 15μg/ml +莰烯4μg/L | 1.812±0.056** |
（4） NO的测定
表6所示：与Contr.组比较，LPS 组NO的释放量明显降低，具有一定差异（P＜0.05），提示LPS导致HUVECs损伤；与LPS组比较，α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组NO释放量明显升高，具有显著性差异（P＜0.01）；提示α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组可使NO的释放增加，减少LPS诱导HUVECs的损伤。
表6 各组对LPS诱导HUVECs损伤NO的影响(.n=6)：
| Group | Concentration | NO(μmol/L) |
| Contr. | N·S +Free-serumDMEM | 208.738±29.906 |
| LPS | LPS 15μg/ml +Free-serumDMEM | 135.797±5.300## |
| α-蒎烯 | LPS 15μg/ml +α-蒎烯0.371μg/L | 189.278±7.179** |
| β-蒎烯 | LPS 15μg/ml +β-蒎烯0.202μg/L | 185.557±12.392** |
| 1,8-桉叶油醇 | LPS 15μg/ml +1,8-桉叶油醇0.438μg/L | 172.934±10.342** |
| 莰烯 | LPS 15μg/ml + 莰烯0.405μg/L | 154.890±3.298** |
（5）正交试验
表8 正交试验结果：
由表8可知不同浓度的α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯2种或2种以上组合使用，可以减轻LPS诱导的HUVECs损伤。经方差分析, 表明α-蒎烯、崁烯两因素具有显著性影响, 各因素作用主次为: 莰烯> 1,8-桉叶油醇 > α-蒎烯> β-蒎烯。上述正交试验中试验号2-7都是直接代表了2种活性成分混合的实验例，它的原理是4种化合物不同的两两及以上混合的考察，从正交试验的原理上来说可以体现2中以上不同的混合方式。
（6）单成分不同浓度实验
表9单成分不同浓度实验结果：
| Group | Concentration | OD490 | NO570 |
| Contr. | N·S +Free-serumDMEM | 0.153±0.016 | 189.471±26.318 |
| LPS | LPS 15μg/ml +Free-serumDMEM | 0.128±0.009# | 115.577±30.450## |
| α-蒎烯 | LPS 15μg/ml +α-蒎烯0.742μg/L | 0.1454±0.002* | 119.045±24.237 |
| LPS 15μg/ml +α-蒎烯 3.71μg/L | 0.1475±0.008* | 130.734±28.641* | |
| LPS 15μg/ml +α-蒎烯18.55μg/L | 0.154±0.0003* | 139.830±26.407** | |
| β-蒎烯 | LPS 15μg/ml +β-蒎烯0.404μg/L | 0.1495±0.009* | 117.472±26.481 |
| LPS 15μg/ml +β-蒎烯2.02μg/L | 0.1518±0.0041 | 123.156±24.178* | |
| LPS 15μg/ml +β-蒎烯10.1μg/L | 0.154±0.0114 | 125.240±23.478* | |
| 1,8-桉叶油醇 | LPS 15μg/ml +1,8-桉叶油醇0.876μg/L | 0.171±0.0049* | 139.284±25.413 |
| LPS 15μg/ml +1,8-桉叶油醇 4.38μg/L | 0.1775±0.0089* | 153.954±27.563* | |
| LPS 15μg/ml +1,8-桉叶油醇21.9μg/L | 0.181±0.009* | 155.010±28.423* | |
| 莰烯 | LPS 15μg/ml +莰烯0.81μg/L | 0.179±0.010* | 143.777±28.451* |
| LPS 15μg/ml +莰烯4.05μg/L | 0.1797±0.008* | 150.517±23.423* | |
| LPS 15μg/ml +莰烯20.25μg/L | 0.183±0.005 | 175.229±29.45** |
由表9可知不同浓度的α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按各组可以减轻LPS诱导的HUVECs损伤。
附图说明
图1是HUVECs倒置显微镜（10×10）观察图；
图2是α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇或莰烯按对LPS诱导HUVECs损伤的保护作用(HEstaining)图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但是所列实施例并非用于限制本发明。
实施例1：本发明所涉及-蒎烯片剂的制备：
取20克化合物-蒎烯，用β-环糊精制备包合物，再加入制备片剂的常规辅料淀粉、硬脂酸、滑石粉等180克，混匀，常规压片机制成 1000 片，口服，每天3次，一次1-4片。
实施例 2 ：本发明所涉及β-蒎烯胶囊剂的制备：
取20克化合物β-蒎烯，用β-环糊精制备包合物，再加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉、糊精、糖粉等180克，混匀，制粒，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-4粒。
实施例3：本发明所涉及1,8-桉叶油醇片剂的制备：
取2克化合物1,8-桉叶油醇，用β-环糊精制备包合物，再加入制备片剂的常规辅料淀粉、硬脂酸、滑石粉等180克，混匀，常规压片机制成 2000 片，口服，每天2次，一次1片。
实施例 4 ：本发明所涉及莰烯胶囊剂的制备：
取2克化合物莰烯，加入制备胶囊剂的常规辅料如糊精180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例 5：本发明所涉及-蒎烯滴丸剂的制备：
取20克化合物-蒎烯，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例6：本发明所涉及1,8-桉叶油醇软胶囊剂的制备：
取20克化合物1,8-桉叶油醇，用明胶做胶囊壳，滴制法或压制法，制成软胶囊剂 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例7：取10克化合物-蒎烯，10克化合物β-蒎烯，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例8：取15克化合物-蒎烯，5克化合物β-蒎烯，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例9：取5克化合物-蒎烯，15克化合物β-蒎烯，再加入制备片剂的常规辅料淀粉、硬脂酸、滑石粉等180克，混匀，常规压片机制成 1000 片，口服，每天3次，一次1-4片。
实施例10：取15克化合物-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，再加入制备片剂的常规辅料淀粉、硬脂酸、滑石粉等180克，混匀，常规压片机制成 1000 片，口服，每天3次，一次1-4片。
实施例11：取15克化合物β-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，再加入制备片剂的常规辅料淀粉、硬脂酸、滑石粉等180克，混匀，常规压片机制成 1000 片，口服，每天3次，一次1-4片。
实施例12：取15克化合物β-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1粒。
实施例13：取5克-蒎烯，5克β-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1粒。
实施例14：取5克-蒎烯，5克化合物β-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，1克莰烯，再加入制备片剂的常规辅料淀粉、硬脂酸、滑石粉等180克，混匀，常规压片机制成 1000 片，口服，每天3次，一次1-4片。
实施例 15：取10克化合物-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，1克莰烯，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例 16：取5克-蒎烯，5克化合物β-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，1克莰烯，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
实施例 17：取5克化合物β-蒎烯，5克1,8-桉叶油醇，1克莰烯，加入制备滴丸剂的常规辅料如聚乙二醇6000、聚乙二醇4000 、硬脂酸180克，混匀，装胶囊制成 1000 粒，口服，每天3次，一次1-3粒。
Claims (2)
1.α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用。
2.根据权利要求1所述的α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶油醇、莰烯中的一种或一种以上在制备治疗人血管内皮细胞损伤的药物的应用，其特征在于：是在制备治疗人血管内皮细胞损伤导致的高血压、冠心病、慢性肾衰、外周血管疾病、糖尿病或慢性肾衰的药物的应用。
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