CN104086471B - 从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法。将干燥的聚硒植物碎米荠原料粉碎后，通过加入盐酸提取硒代胱氨酸，加入氢氧化钠提取硒代蛋氨酸，滤液调节pH值到近中性后，采用高压制备柱进行分离，含硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的洗脱液分别用纤维素脂透析袋透去无机盐离子，再通过冷冻干燥得到硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品。该技术工艺简单，产品提取率高，生产的产品可作原料药生产注射液或食品添加剂，用途广泛，同时可以带动碎米荠种植产业的发展，使产业链得以延伸。
Description
技术领域
本发明涉及从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素之一，硒代胱氨酸是人体必需的第二十一种氨基酸，硒代蛋氨酸取代蛋氨酸在人体中合成蛋白质，人类40多种疾病与缺硒有关，然而由于硒属于稀散元素，在地球上得含量很少，致使全球约有72％的地区缺硒，在中国也有9亿多人需要补硒，每年硒的需求量约为1000吨，其中80％依赖进口，以前人和动物补硒最主要的方法是在食品中和饲料中添加亚硒酸钠，或给病人吃富硒酵母片，但亚硒酸钠对人体的危害也已为人们公认，发达国家早已不允许在饲料中添加亚硒酸钠，我国也规定了从2013年1月开始不允许再在食盐中添加亚硒酸钠，对硒的需求量又增加了200吨硒的缺口。
碎米荠是十字花科碎米荠属植物，因聚硒能力超强而引起科研工作者和企业的广泛关注，据报道，该植物含硒量最高可达8000mg/kg，且90％以上以硒代半胱氨酸形态存在。经恩施州硒研究院研究发现，碎米荠中不仅含有较高的硒代胱氨酸，也有一定量的硒代蛋氨酸，是一种利用价值很高的生物硒资源，虽然能够直接食用，但由于还没有通过食品认证，不能添加到食品中，造成资源巨大的浪费。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法。
本发明采用如下技术方案，一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，其特征在于具体步骤如下：
a.碎米荠原料预处理：将聚硒碎米荠植株晒干、粉碎，过40目筛；
b.硒代胱氨酸的提取和分离：粉碎的碎米荠用水或0.1-6mol/L的盐酸或0.1-6mol/L的NaOH溶液，在60℃-120℃下超声提取或震荡60min-180min提取，过滤，将残渣重复提取2次，合并滤液，将溶液pH值调节到6-8；
c.硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸分离条件的确定：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法HPLC-HG-AFS确定分离条件为阴离子交换柱或C18制备色谱柱，流动相为30mM-100mM的磷酸二氢氨水溶液pH值4-10，采用梯度洗脱，流速0.1-1.0mL/min，硒代胱氨酸保留时间为2.42±0.25min，硒代蛋氨酸保留时间为3.40±0.34min；
d.分离：水解液进样到25-45μm阴离子交换柱或C18制备色谱柱分离，用30mM-100mM的磷酸二氢氨水溶液pH值4-10为洗脱液，采用中试高压制备系统，按峰收集硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸对应洗脱液，合并洗脱液；
e.透析：将洗脱液装入截留分子量100-500的纤维素酯透析袋，放入超纯水中，透去无机盐离子，透析袋内为硒代胱氨酸或硒代蛋氨酸溶液；
f.冷冻干燥：将上步骤所得冷冻干燥，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品；
e.产品纯度检测：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法或高效液相-电感耦合等离子质谱法测定。
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，其特征在于步骤a中所述的原料聚硒碎米荠植株为其根、茎、叶。
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，其特征在于步骤f中所述的冷冻干燥为：先将透析得到的硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸溶液在冰箱冷冻室或冷冻干燥机的冷冻室内-20℃下冷冻成冰状，取出，放在真空干燥箱的干燥架的物料盘中，盖好有机玻璃罩，打开冷冻干燥箱的真空泵和冷阱，在-56℃、10Pa以下干燥24h以上，再将透析袋内粉末刮下，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品。
本发明采用化学方法，将天然碎米荠中硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸分离提取出来，作为生物硒添加到药品、注射液和食品、保健品中，可实现人类科学补硒；通过培植聚硒碎米荠原料——生产硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸原料药——生产硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸注射液、食品及保健品添加剂产业链，解决缺硒地区补硒的问题，为人类健康作贡献。
本发明的技术方案是：从碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸，包括以下步骤：
a碎米荠原料预处理：将聚硒碎米荠植株(包括根、茎、叶)晒干、粉碎；
b硒代胱氨酸的提取和分离：粉碎的碎米荠用水或0.1-6mol/L的盐酸或0.1-6mol/L的NaOH溶液，60℃-120℃超声提取或震荡60min-240min提取，过滤，将残渣反复提取2次，合并滤液，将溶液pH值调节到5-9；
c硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸分离条件的确定：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法(HPLC-HG-AFS)确定分离条件为阴离子交换柱或C18制备色谱柱，流动相为30mM-100mM的磷酸二氢氨水溶液(pH值4-10)，采用梯度洗脱，流速0.1-2.0mL/min，硒代胱氨酸保留时间为2.42±0.25min，硒代蛋氨酸保留时间为3.40±0.34min；
d分离：水解液进样到25-45μm阴离子交换柱或C18制备色谱柱分离，用30mM-100mM的磷酸二氢氨水溶液(pH值4-10)为洗脱液，采用中试高压制备系统，按峰收集硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸对应洗脱液，合并洗脱液；
e透析：将洗脱液装入截留分子量100-500的纤维素酯透析袋，放入超纯水中，透去无机盐离子，透析袋内为硒代胱氨酸或硒代蛋氨酸溶液。
f冷冻干燥，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品。
e产品纯度检测：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法或高效液相-电感耦合等离子质谱法测定。
本发明的有益效果是：将干燥的聚硒植物碎米荠原料粉碎后，通过加入盐酸提取硒代胱氨酸，加入氢氧化钠提取硒代蛋氨酸，滤液调节pH值到近中性后，采用高压制备柱进行分离，含硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的洗脱液分别用纤维素脂透析袋透去无机盐离子，再通过冷冻干燥得到硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品。该技术工艺简单，产品提取率高，生产的产品可作原料药生产注射液或食品添加剂，用途广泛，同时可以带动碎米荠种植产业的发展，使产业链得以延伸。
本发明的从碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸，其技术工艺简单，产品提取率高。
以NaOH为水解液提取碎米荠中硒代氨基酸的效果：分别用浓度为0、0.1、0.5mol/L的NaOH溶液,在常温、60℃、90℃下，进行超声、振荡和微波加热处理，处理时间为60min、90min，样品处理后用盐酸调节pH值到8～9，用高效液相色谱—原子荧光形态分析联用法对水解产物中的成分进行测定，以硒代胱氨酸(SeCys2)、硒代蛋氨酸(SeMet)、亚硒酸跟离子(Se(IV))、硒甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒酸根离子(Se(VI))5种标准溶液作为对照，以外标法定量，确定采用NaOH溶液提取碎米荠中硒代氨基酸的效果，结果见表1，其中t2.99min为尚未定性的未知成分。
表1NaOH提取碎米荠中硒形态效果(t2.99min为未知峰面积)
单位：mg/kg
从表1中的数据可以看出，对于SeCys2的提取，采用超纯水超声提取60min效果较好，用不同浓度的NaOH溶液相反较低，但温度升高，处理时间延长均有利于提取量的增加；SeMet的提取以0.5mol/LNaOH,90℃,振荡60min最好，MeSeCys提取以超纯水超声60min为好；对于t2.99min未知成分的提取，可采用0.1mol/LNaOH,60-90℃,振荡或超声提取。
以HCl提取碎米荠中硒代胱氨酸的效果：分别用浓度为0、0.1、0.5mol/L的HCl溶液,在常温、60℃、90℃下，进行超声、振荡和微波加热处理，处理时间为30min、60min、90min，样品处理后用NaOH调节pH值到6～7，用高效液相色谱—原子荧光形态分析联用法对水解产物中的成分进行测定，以硒代胱氨酸(SeCys2)标准溶液作为对照，以外标法定量，确定碎米荠在HCl溶液中的提取效果，结果见表2:
表2HCl提取碎米荠中硒代胱氨酸的效果
单位：mg/kg
| 编号 | 处理方法 | SeCys2 |
| 1 | 超纯水,超声60min | 952.25 |
| 2 | 0.1mol/L HCl,60℃,振荡90min | 747.00 |
| 3 | 0.1mol/L HCl,超声30min | 763.56 |
| 4 | 0.5N mol/L HCl,90C,振荡60min | 819.88 |
| 5 | 0.5mol/LHCl,超声90min | 1031.32 |
| 6 | 0.5N HCl,60℃，微波3min | 749.91 |
从表2可以看出，硒代胱氨酸以0.5mol/LHCl,超声90min提取效果最好，其次是采用超纯水超声60min。
硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸分离条件的确定：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法(HPLC-HG-AFS)确定分离条件为阴离子交换柱或C18制备色谱柱，流动相为30mM～100mM的磷酸二氢氨水溶液(pH值4～10)，磷酸二氢铵的浓度越高，各成分的洗脱速度越快，但要考虑多种成分的有效分离；采用梯度洗脱，流速在0.1～1.0mL/min之间可调，流速低于0.5mL/min，硒代胱氨酸(SeCys2)、硒代蛋氨酸(SeMet)、亚硒酸跟离子(Se(IV))、硒甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒酸根离子(Se(VI))等5种成分的分离时间延长到20min以上。以A流动相40mM、B流动相60mM(用甲酸调节pH值至6.0)，流速1.0mL/min，采用0min～3min：100％A；3min～4min：100％A→100％B；4min～10min：100％B；10min～12.5min：100％A的梯度洗脱，硒代胱氨酸保留时间为2.42±0.25min，硒代蛋氨酸保留时间为3.40±0.34min，可以完全分离，满足制备的要求。
透析和干燥：硒代胱氨酸Se2(CH2CH(NH2)COOH)2)2的分子量为334，硒代蛋氨酸(CH3SeCH2CH2(NH2)CHCOOH),分子量为196，L-硒-甲基硒代半胱氨酸(CH3SeCH2CH(NH2)COOH)的分子量为182，而洗脱液中NH4 +、HPO4 2-、Na+、Cl-等杂质离子分子量均在100以下，因此可将洗脱液装入截留分子量100-500的纤维素酯透析袋，放入超纯水中，透去无机盐离子，透析袋内为硒代胱氨酸或硒代蛋氨酸溶液。将透析袋内产品通过冷冻干燥或真空干燥除去水分，既得硒代胱氨酸或硒代蛋氨酸纯品，含量在98％以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：
a.碎米荠原料预处理：将聚硒碎米荠植株晒干、粉碎，过40目筛；
b.硒代胱氨酸的提取和分离：粉碎的碎米荠用水或0.1-6mol/L的盐酸或0.1-6mol/L的NaOH溶液，在60℃-120℃下超声提取或震荡60min-180min提取，过滤，将残渣重复提取2次，合并滤液，将溶液pH值调节到6-8；
c.硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸分离条件的确定：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法HPLC-HG-AFS确定分离条件为阴离子交换柱或C18制备色谱柱，流动相为30mM-100mM的磷酸二氢氨水溶液pH值4-10，采用梯度洗脱，流速0.1-1.0mL/min，硒代胱氨酸保留时间为2.42±0.25min，硒代蛋氨酸保留时间为3.40±0.34min；
d.分离：水解液进样到25-45μm阴离子交换柱或C18制备色谱柱分离，用30mM-100mM的磷酸二氢氨水溶液pH值4-10为洗脱液，采用中试高压制备系统，按峰收集硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸对应洗脱液，合并洗脱液；
e.透析：将洗脱液装入截留分子量100-500的纤维素酯透析袋，放入超纯水中，透去无机盐离子，透析袋内为硒代胱氨酸或硒代蛋氨酸溶液；
f.冷冻干燥：将上步骤所得冷冻干燥，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品；
e.产品纯度检测：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法或高效液相-电感耦合等离子质谱法测定。
步骤a中所述的原料聚硒碎米荠植株为其根、茎、叶。
步骤f中所述的冷冻干燥为：先将透析得到的硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸溶液在冰箱冷冻室或冷冻干燥机的冷冻室内-20℃下冷冻成冰状，取出，放在真空干燥箱的干燥架的物料盘中，盖好有机玻璃罩，打开冷冻干燥箱的真空泵和冷阱，在-56℃、10Pa以下干燥24h以上，再将透析袋内粉末刮下，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品。
实施例1：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,用加入50mL超纯水，超声60min,过滤，滤渣再用水提取2次，洗涤残渣，合并滤液，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，色谱条件为：阴离子交换柱，A流动相40mM、B流动相60mM(用甲酸调节pH值至6.0)，流速1.0mL/min，采用0min～3min：100％A；3min～4min：100％A→100％B；4min～10min：100％B；10min～12.5min：100％A的梯度洗脱，硒代胱氨酸保留时间为2.42±0.25min，提取液中硒代胱氨酸含量为952.25mg/kg，；采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，收集2.10～2.70min之间的溶液，将洗脱液装入截留分子量100～500的纤维素酯透析袋，放入超纯水中，透去无机盐离子，连同透析袋放入冷冻干燥箱进行干燥，刮下称重，为7.34mg，通过HPLC-HG-AGS检测，硒代胱氨酸纯度为98.5％。
实施例2：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL0.1mol/LHCl溶液在60℃下振荡90min，滤渣再用水提取2次，洗涤残渣，合并滤液，用NaOH溶液调节pH值至6～7，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为747.00mg/kg，硒代蛋氨酸含量为216.34mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集2.10～2.70min之间的硒代胱氨酸溶液和3.10～3.70min之间的硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别5.35mg和1.88mg,纯度分别为98.4％和98.8％。
实施例3：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL1mol/LHCl，超声提取60min，滤渣再提取2次，洗涤残渣，合并滤液，用NaOH溶液调节pH值至6～7，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为763.56mg/kg，硒代蛋氨酸含量为223.16mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为6.18mg和1.95mg,纯度分别为98.5％和98.6％。
实施例4：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL6mol/L的HCl,90C下振荡提取60min，滤渣再提取2次，洗涤残渣，合并滤液，用NaOH溶液调节pH值至6～7，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为1410.88mg/kg，硒代蛋氨酸含量为374.18mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为12.32mg和3.35mg,纯度分别为98.6％和98.4％。
实施例5：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL0.1mol/LNaOH,在60℃下振荡90min，滤渣再提取2次，洗涤残渣，合并滤液，用HCl溶液调节pH值至7～8，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为262.58mg/kg，硒代蛋氨酸含量为178.69mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为2.32mg和1.53mg,纯度分别为98.7％和98.8％。
实施例6：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL1mol/LNaOH,超声30min，滤渣再提取2次，洗涤残渣，合并滤液，用HCl溶液调节pH值至7～8，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为809.37mg/kg，硒代蛋氨酸含量为627.55mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为7.78mg和5.65mg,纯度分别为98.9％和98.8％。
实施例7：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL6mol/LNaOH,超声90min，滤渣再提取2次，洗涤残渣，合并滤液，用HCl溶液调节pH值至7～8，定容至200mL,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为918.21mg/kg，硒代蛋氨酸含量为683.51mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为7.91mg和5.84mg,纯度分别为98.1％和98.6％。
实施例8：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL1mol/LHCl,微波加热3min(已近干)，滤渣用水溶解，用NaOH溶液调节pH值至6～7，转入100mL容量瓶，定容,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为197.45g/kg，硒代蛋氨酸含量为144.44mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为1.46mg和0.93mg,纯度分别为98.2％和98.4％。
实施例9：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL1mol/LNaOH,微波加热3min(已近干)，滤渣用水溶解，用HCl溶液调节pH值至7～8，转入100mL容量瓶，定容,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为171.00mg/kg，硒代蛋氨酸含量为104.23mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为1.32mg和0.85mg,纯度分别为98.3％和98.6％。
实施例10：
本发明一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，具体步骤如下：称取含硒量2158.97mg/kg的碎米荠样品10g,加入50mL超纯水,微波加热3min(已近干)，滤渣用水溶解，转入100mL容量瓶，定容,经HPLC-HG-AGS检测，提取液中硒代胱氨酸含量为131.45mg/kg，硒代蛋氨酸含量为94.34mg/kg，采用高压制备系统分离，条件与上述色谱相同，分段收集硒代胱氨酸溶液和硒代蛋氨酸溶液，透析、冷冻干燥后称重，分别为1.09mg和0.88mg,纯度分别为98.1％和98.3％。
Claims (3)
1.一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，其特征在于具体步骤如下：
a.碎米荠原料预处理：将聚硒碎米荠植株晒干、粉碎，过40目筛；
b.硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的提取：粉碎的碎米荠用0.1-1mol/L的NaOH溶液，在60℃-90℃下超声提取或震荡60min-180min提取，过滤，将残渣重复提取2次，合并滤液，将溶液pH值调节到6-8；
c.硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸分离条件的确定：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法HPLC-HG-AFS确定分离条件为C18制备色谱柱，流动相为30mM-100mM的磷酸二氢铵水溶液pH值4-10，采用梯度洗脱，流速0.1-1.0mL/min，硒代胱氨酸保留时间为2.42±0.25min，硒代蛋氨酸保留时间为3.40±0.34min；
d.分离：水解液进样到25-45μmC18制备色谱柱分离，用30mM-100mM的磷酸二氢铵水溶液pH值4-10为洗脱液，采用中试高压制备系统，按峰收集硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸对应洗脱液，合并洗脱液；
e.透析：将洗脱液装入截留分子量100-500的纤维素酯透析袋，放入超纯水中，透去无机盐离子，透析袋内为硒代胱氨酸或硒代蛋氨酸溶液；
f.冷冻干燥：将上步骤所得冷冻干燥，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品；
g.产品纯度检测：以DL-硒代胱氨酸和DL-硒代蛋氨酸为对照品，用高效液相色谱-原子荧光联用法或高效液相-电感耦合等离子质谱法测定。
2.按照权利要求1所述的一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，其特征在于步骤a中所述的原料聚硒碎米荠植株为其根、茎、叶。
3.按照权利要求1所述的一种从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法，其特征在于步骤f中所述的冷冻干燥为：先将透析得到的硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸溶液在冰箱冷冻室或冷冻干燥机的冷冻室内-20℃下冷冻成冰状，取出，放在真空干燥箱的干燥架的物料盘中，盖好有机玻璃罩，打开冷冻干燥箱的真空泵和冷阱，在-56℃、10Pa以下干燥24h以上，再将透析袋内粉末刮下，得硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸精品。
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