CN104083436A

CN104083436A - 冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用

Info

Publication number: CN104083436A
Application number: CN201410355714.4A
Authority: CN
Inventors: 苗明三; 苗艳艳; 王灿
Original assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Current assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority date: 2014-07-24
Filing date: 2014-07-24
Publication date: 2014-10-08

Abstract

本发明涉及冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，有效解决高血糖的治疗用药问题，冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，所述的提取物为，冬凌草粉碎成粗粉，用石油醚回流提取，弃去石油醚液，冬凌草药渣挥干石油醚，再用乙醇浸泡，回流提取，得滤液，滤液减压回收乙醇至无醇味，浓缩成浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散得含生药量0.1g/ml的分散液；分散液上AB-8型大孔吸附树脂柱，用蒸馏水洗脱，弃去水液，继用乙醇洗脱，弃去乙醇液，再用乙醇洗脱，乙醇洗脱液减压回收乙醇，干燥，即得，本发明具有降糖作用，有效用于制备降糖药物，实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用。

Description

冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用。

背景技术

冬凌草又名冰凌草，为唇形科香茶属多年生草本或亚灌木，小灌木，系唇形科香茶菜属植物碎米桠变种，因其植株凝结薄如蝉翼、形态各异的蝶状冰凌片而得名。全株结满银白色冰片，风吹不落，随风摇曳，日出后闪闪发光，展现出神奇的自然景观，具有独到的观赏作用。具有清热解毒、消炎止痛、健胃活血之效。药用部位是全株。现虽有关于冬凌草的多方面研究，但至今未见有冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，可有效解决高血糖的治疗用药问题。

本发明解决的技术方案是，冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，所述的提取物为，冬凌草粉碎成粗粉，用石油醚回流提取，弃去石油醚液，冬凌草药渣挥干石油醚，再用乙醇浸泡，回流提取，得滤液，滤液减压回收乙醇至无醇味，浓缩成浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散得含生药量0.1g/ml的分散液；分散液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱，弃去水液，继用质量浓度为10％的乙醇洗脱，弃去质量浓度为10％的乙醇液，再用质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥，得冬凌草提取物，冬凌草提取物中总黄酮含量58％以上。

本发明制备方法简单，原材料丰富，所制备的冬凌草提取物具有降糖作用，可有效用于制备降糖药物，实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，开拓了冬凌草在制备治疗高血糖引起的糖尿病药物中的新用途。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，是由以下方式实现。

冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，所述的冬凌草提取物是，冬凌草粉碎为过20-30目筛的粗粉，加冬凌草10倍重量的石油醚回流提取2次，每次1h，弃去石油醚液，冬凌草药渣挥干石油醚，冬凌草药渣再加冬凌草10倍重量质量浓度为50％的乙醇浸泡0.5h，回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃时相对密度为1.10～1.20的浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散得含生药量0.1g/ml的分散液；分散液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液，继用4倍柱体积的质量浓度为10％的乙醇洗脱，弃去质量浓度为10％的乙醇液，再用8倍柱体积的质量浓度为50％的乙醇洗脱，收集质量浓度为50％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，50℃干燥粉碎，得冬凌草提取物，冬凌草提取物中总黄酮质量含量58％以上。

本发明冬凌草提取物具有降糖作用，可有效用于制备降糖药物，实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，进而实现冬凌草提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用，并经试验得到了有效证明，有关试验资料如下。

1.实验材料

1.1实验试剂

本发明冬凌草提取物(冬凌草总黄酮质量含量58％以上)；盐酸二甲双胍片：市售；生理盐水：河南双鹤华利药业有限公司；羧甲基纤维素钠：天津市恒兴化学试剂制造有限公司；链脲佐菌素：sigma公司提供；柠檬酸：天津市致远化学试剂有限公司；柠檬酸钠：天津市致远化学试剂有限公司；葡萄糖测定试剂盒：由中生北控生物科技股份有限公司生产提供；肝糖原测定试剂盒：由南京建成生物工程研究所生产；胰岛素：R&D公司生产；糖化血清蛋白：由南京建成生物工程研究所生产；甲醛：烟台市双双化工有限公司；浓硫酸：上海振企化学试剂有限公司。

1.2实验仪器

AL204系列电子天平，梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司；VIS-7220N可见分光光度计，北京瑞利分析仪器有限公司；TGL-16G台式离心机，上海安亭科学仪器厂生产；HHS型电热恒温水浴锅，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；KDC-160HR高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司生产；TES-1380PH酸度计，泰仕电子工业股份有限公司；酶标仪，美国BIO-RAD公司，型号680；可调式移液枪，上海雷勃分析仪器有限公司；OLYMPUS BX61电动显微镜，日本OLYMPUS公司生产；TES-1380PH酸度计，泰仕电子工业股份有限公司。

1.3实验动物

昆明种小鼠，雄性，体重18～22g，由山东鲁抗医药股份有限公司提供，合格证号：0017170；实验室合格证号SYXK(豫)2010-001。

2.实验方法

2.1造模与给药

取体重18-22g的昆明种小鼠108只，雄性，适应性饲养后，根据体重随机挑选12只作为空白组，其余为造模组，造模组于实验开始前称重后尾静脉注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液配制成的链脲佐菌素80mg/kg,7天后，尾部采血，测定血糖，选取16.7mmol/L<血糖值<21mmol/L，并明显具有多饮多食多尿症状的小鼠60只。随机分为5组，分别为模型组、二甲双胍组，冬凌草提取物大、中、小剂量组，每组12只。根据组别分别灌服相应药物，空白组和模型组灌服同体积的0.5％CMC-Na(0.1ml/10g)，盐酸二甲双胍片组(375mg/kg,为临床剂量的15倍，用0.5％的CMC-Na配制，0.1ml/10g)，冬凌草提取物大、中、小剂量组(400、200、100mg/kg,用0.5％的CMC-Na配制，0.1ml/10g),每天一次，连续给药30天，分别于给药后的第10、20、30天时尾部采血，测定血糖值。于第31天，灌胃后2h，取血，分离血清，测血清中胰岛素、糖基化血清蛋白的含量，取肝脏适量,测肝糖原含量；取胰脏、肾脏甲醛固定，做组织病理切片，观察病理组织变化。

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的配制：分别称取500.4mg柠檬酸和501.2柠檬酸钠溶于50ml的容量瓶中，此溶液即为ph＝4.2的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。为确保其准确性可用PH计校正。临用前配制(由于链脲佐菌素不十分稳定，且对血管刺激较大，用缓冲液配制链脲佐菌素可减轻这些负面影响

3.统计方法

数据分析用SPSS 17.0 for windows医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用最小显著差数(LSD)法，方差不齐者用Games-Howell法检验，等级资料采用Ridit检验。

4.实验结果与小结

表1 冬凌草提取物对链脲佐菌素致小鼠糖尿病模型血糖的影响

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

从上表可以看出，与空白组相比，模型组在第10、20、30天时的血糖均显著性升高(P<0.01),说明模型复制成功。与模型组相比，二甲双胍组可显著降低(P<0.01)小鼠第10、20、30天的血糖值，冬凌草提取物大、中、小剂量组可显著降低(P<0.01)小鼠第20、30天的血糖值。说明冬凌草提取物可有效的降低模型的血糖值。

表2 冬凌草提取物对糖尿病模型肝糖原、胰岛素、糖化血清蛋白的影响

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可以看出：与空白组相比，模型组肝糖原含量和胰岛素水平均显著降低(P<0.01)，糖化血清蛋白含量显著升高(P<0.01),说明模型复制成功。与模型组相比，二甲双胍组可显著升高显著升高(P<0.01)肝糖原含量，显著降低(P<0.01)糖化血清蛋白的含量；冬凌草提取物大、中剂量组均可显著升高(P<0.01)肝糖原含量以及胰岛素水平，显著降低(P<0.01)糖化血清蛋白的含量。

各组胰脏组织形态光镜观察：空白组小鼠胰岛细胞比较松散，边界清晰，细胞浆较为丰富；模型组小鼠胰岛细胞减少，细胞浆萎缩，有些甚至完全萎缩；二甲双胍组胰岛细胞胞浆得到显著改善；大、中、小冬凌草提取物组均可减轻胰岛细胞的萎缩以及细胞核密集的病理变化。

表3 冬凌草提取物对链脲佐菌素所致小鼠糖尿病模型胰腺组织的影响

“-”：胰腺组织中胰岛在4个以上，胰岛细胞胞浆丰富，细胞核松散；“+”：胰腺组织中胰岛在4个以上，少数胰岛细胞胞浆萎缩，少数细胞核密集；“++”：胰腺组织中胰岛在2-3个，部分胰岛细胞胞浆萎缩，部分细胞核密集；“+++”：胰腺组织中胰岛在0-1个，全部胰岛细胞胞浆几乎消失，全部细胞核密集。

由上表可以看出，经Ridit检验，与空白组比，模型组出现胰岛细胞减少，细胞浆萎缩，有些甚至完全萎缩，出现显著的病理变化(P<0.01)，说明造模型成功。与模型组相比，大、中、小剂量冬凌草提取物组和二甲双胍组均可显著减轻胰脏的病理变化(P<0.01)。

从各组肾脏组织形态光镜观察：空白组肾小球、肾小管均正常；模型组小鼠的肾小管上皮细胞水肿以及间质有不同程度的炎细胞浸润；(见照片9)、大、中、小剂量冬凌草提取物组和二甲双胍组肾小球稍有萎缩，肾小管上皮细胞炎症减轻，中剂量组个别大鼠肾脏充血较为严重。

表4 冬凌草提取物对链脲佐菌素所致小鼠糖尿病模型肾组织的影响

“-”肾小球细胞正常，肾小囊正常；“+”肾小球细胞稍萎缩，肾小囊稍有扩张；“++”肾小球细胞萎缩，肾小囊腔扩张；“+++”肾小球细胞明显萎缩，肾小囊腔明显扩张

从上表可以看出，经Ridit检验，与空白组比，模型组出现显著的肾脏病理变化(P<0.01)，说明出现显著的肾脏病变。与模型组相比，大、中、小剂量组冬凌草提取物组和二甲双胍组肾脏病理变化均显著减轻(P<0.01)。

上述试验资料充分表明本发明的冬凌草提取物中总黄酮含量达58％以上，具有很好的降糖作用，有效用于制备降糖药物，实现冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，并开拓了糖尿病治疗用药的新途径，并实现冬凌草提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用，因为糖尿病最突出的临床症状就是高血糖，因此，治疗糖尿病的关键在于降低血糖，而冬凌草提取物正具备降低血糖的功效，并且经临床对58例高血糖糖尿病患者按常规糖尿病患者服药办法进行服用，每天3次，每次1.5-2.0g，连服10天，测定血糖，结果血糖均有不同程度的降低，表明无论是经动物试验，还是经临床验证，都证明冬凌草提取物具有降糖之功效，开拓了冬凌草的新用途和药用价值，具有极大的实用价值，是中药上的一大创新。

Claims

1.一种冬凌草提取物在制备降糖药物中的应用，所述的冬凌草提取物是，冬凌草粉碎为过20-30目筛的粗粉，加冬凌草10倍重量的石油醚回流提取2次，每次1h，弃去石油醚液，冬凌草药渣挥干石油醚，冬凌草药渣再加冬凌草10倍重量质量浓度为50%的乙醇浸泡0.5h，回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，并浓缩至50℃时相对密度为1.10～1.20的浓缩液，浓缩液加蒸馏水分散得含生药量0.1g/ml的分散液；分散液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积蒸馏水洗脱，弃去水液，继用4倍柱体积的质量浓度为10%的乙醇洗脱，弃去质量浓度为10%的乙醇液，再用8倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇洗脱，收集质量浓度为50%的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，50℃干燥粉碎，得冬凌草提取物，冬凌草提取物中总黄酮质量含量58%以上。