CN105147745A - 一种藏药饮片白狼毒制诃子的炮制工艺及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明的技术属于藏药制药领域，具体涉及一种藏药饮片白狼毒制诃子、炮制方法及其用途。炮制方法为：①原辅料前处理：原料，将诃子拣选除去杂质，50℃干燥，称量，备用；辅料，将白狼毒拣选除去杂质，50℃干燥，粉碎，过20-100目筛，称量、备用。②白狼毒水煎液制备：称取与诃子等质量的白狼毒粗粉，加入5-30倍水，煎煮，过滤，滤液保存。③浸泡、浓缩：将诃子加入上述白狼毒水煎液中，静置浸泡12-72小时后，取出诃子，剥开去核，将诃子肉放入上述白狼毒水煎液中，文火烧煮，煮至汁液全部渗入诃子而干涸。④干燥：将上述诃子置于温度40-80℃干燥20-40小时，粉碎，过20-100目筛即得产品。本品含多元酚以没食子酸计，不得少于5.5%。该饮片具有抗氧化的新用途。

Description

一种藏药饮片白狼毒制诃子的炮制工艺及其用途

技术领域

本发明涉及一种炮制工艺，属于藏药制药领域，具体涉及一种白狼毒制诃子的炮制工艺及其新用途。

背景技术

诃子为使君子科植物诃子TerminaliachebulaRetz.或绒毛诃子TerminaliachebulaRetz.Var.tomentellaKurt.的干燥成熟果实。其味苦、酸、涩，性平，有涩肠敛肺、降火利咽之功。临床中主治久泻，久痢脱肛，便血，肺虚喘咳，久咳音哑等症。诃子又叫诃黎勒，在藏、蒙等民族药中是常用药。在藏医组方中，诃子出现率居首位，高达38.26%，被称为“众药之王”。现代药理研究表明，诃子具有广泛药理活性，如抗氧化、抗菌、抗病毒、强心、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、保肝、止泻等。诃子果实中含大量鞣质，占干重的23.60%~37.36%，主要成分为三萜酸类、没食子酰葡萄糖、没食子酰的简单酯类化合物及蒽醌类等物质。但随着炮制方式的不同，鞣质总量、水浸物含量、没食子酸及番泻苷A、微量元素的含量均发生变化，同时其抗氧化性、抗菌活性也发生相应变化。目前对炮制产物的研究仅局限于清炒、沙炒、麦麸煨、面煨四种方法，而对藏医中特殊炮制方法(如草制白狼毒制等)并无研究报道。在《基础藏药炮制法》中对诃子的白狼毒炮制方法有简要记载：“首先诃子煮制法，诃子有干沟诃子、金色诃子等多种，依据入方来选用，重量相等白狼毒，煎汁挤压去渣滓，此液之中泡诃子，浸泡三天去掉核，勿焦煮至汁渗干。”该法所炮制诃子配伍清利方剂使用。长期以来，诃子的白狼毒炮制方法一直按照文献记载的方法和生产者个人的经验来炮制，缺乏可控的工艺参数，炮制的诃子饮片质量优劣不等，严重影响了含白狼毒制诃子藏药制剂的稳定性、安全性和有效性，阻碍了藏药白狼毒制诃子饮片及含白狼毒制诃子藏药制剂的开发和市场化进程。为了解决这一问题，发明人进行了大量的摸索和实验，制订出藏药白狼毒制饮片量化的工艺参数，采用该炮制方法生产出的藏药诃子饮片质量可控、安全有效，是目前独有的藏药白狼毒制诃子饮片的炮制技术。

发明内容

本发明应用现代设备和创新的方法，克服了传统白狼毒制诃子方法的不足，规范了传统的白狼毒制诃子的炮制方法，工艺稳定、质量可控、安全有效，大大提高了白狼毒制诃子饮片的质量和疗效。同时，提高了劳动生产率，降低了原料损耗率和对环境的污染。通过动物实验验证，发现藏药白狼毒制诃子具有优于原药的体内抗氧化作用。

1.新的炮制方法：

①原料预处理：将诃子拣选除去杂质，50℃干燥，称量，备用；

将白狼毒（EuphorbiafischerianaSteud）拣选除去杂质，50℃干燥，粉碎，过20-100目筛，称量、备用；

②白狼毒水煎液制备：称取与诃子等质量的白狼毒粗粉，加入5-30倍水，

煎煮，过滤，滤液保存；

③浸泡、浓缩：将诃子加入上述白狼毒水煎液中，静置浸泡12-72小时后，

取出诃子，剥开去核，将诃子肉放入上述白狼毒水煎液中，文火烧煮，煮至汁液全部渗入诃子而干涸；

④干燥：将上述诃子置于温度40-80℃干燥20-40小时，粉碎，过20-100

目筛即得本发明产品。

本发明还提供了所述的炮制方法制备的诃子炮制品。

该炮制品形状为深棕色颗粒，气微，味淡；本品含多元酚以没食子酸计，不得少于5.5%。

本方法诃子的炮制方法具有如下特点：

1.本炮制方法具有藏医文献依据，符合藏医基本理论，炮制效果好，实用性强。

2.明确了白狼毒制诃子的白狼毒水煎液用水量、浸泡时间、干燥温度、干燥时间，有利于规范操作。

3.经过工艺研究，有效缩短了炮制时间，浸泡时间优选12-72小时，优选48小时。

4.明确了以主要成分鞣质为质量控制指标，对炮制品质量进行科学控制。

5.通过对本方法炮制出来的十二批白狼毒制诃子样品进行了鞣质含量测定（以没食子酸计），结果没食子酸含量为5.89-9.81%，平均含量7.56%，故制定该炮制品没食子酸含量不得低于5.5%。

综上，采用本发明的方法能有效的缩短药材的炮制时间，增加经济效益并提高企业生产效率；通过本发明方法炮制所得的药材含量稳定，质量可控。

2.新的用途：

通过药效学和安全性评价实验，发现白狼毒制诃子饮片具有优于诃子原药的体内抗氧化的新用途。研究结论简述如下：

①白狼毒制诃子主要药效学研究结论：

白狼毒制诃子炮制品均能使小鼠血清中T-AOC、SOD的浓度显著升高，与空白组具有明显差异（P<0.05或P<0.01)，T-AOC浓度与生药诃子组相当，SOD浓度则优于生药诃子组且与阳性对照维生素E组效果相当；同时降低小鼠血清中MAO和MDA的浓度，与空白组具有比较显著的差异性（P<0.05或P<0.01)，MAO浓度与生药诃子组相当，MDA浓度优于生药诃子组和阳性对照维生素E组；也能使肝脏中的MAO、MDA和LF的含量显著降低（P<0.05或P<0.01)，且优于生药诃子组，其中LF含量还优于阳性对照维生素E组。以上结果提示白狼毒制诃子炮制品具有明显的体内抗氧化作用，效果明显优于诃子生药，某些指标能与维生素E媲美。

②白狼毒制诃子的急性毒性实验研究结论：

经预实验未找到0％和100％动物死亡剂量，所以进行了最大给药量的测定。其最大给药量为40g/kg，相当于临床常规药用剂量的500倍。给药后发现给药组活动减少，粪便颜色加深，未见其他明显的异常反应。连续观察7天，小鼠外观、行为、体重增长等与对照组无明显差异，有1-2只小鼠有轻度腹泻现象，停药后24h转为正常，未出现小鼠死亡情况，解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变，与对照组相比无明显差异。

综上，经本法制得的白狼毒制诃子炮制品具有体内抗氧化的新用途。至今为止，还没发现任何有关白狼毒制诃子的新炮制加工工艺和炮制品新用途发现的相关报道。

附图说明

图1没食子酸标准曲线

图2没食子酸高效液相色谱图

图3加样回收率表

图4白狼毒与水比例考察

图5浸泡时间考察

图6干燥温度考察

图7干燥时间考察

图8因素水平表

图9正交实验表

图10方差分析表

图11不同诃子炮制品的不同剂量对小鼠血清中T-AOC、SOD、MAO、MDA的影响

图12诃子不同炮制品的不同剂量对肝脏中MAO、MDA和LF含量的影响

图13空白对照组HE×200

图14维生素E胶丸组HE×200

图15诃子高剂量组HE×200

图16诃子中剂量组HE×200

图17诃子低剂量组HE×200

图18白狼毒制诃子高剂量组HE×200

图19白狼毒制诃子中剂量组HE×200

图20白狼毒制诃子低剂量组HE×200

具体实施方式

实施例1本发明白狼毒制诃子的炮制

取等质量的诃子和白狼毒药材，除去非药用部位和泥沙等杂质，50℃干燥除去水分。白狼毒粉碎过20-100目筛，加入5-30倍水，煎煮，过滤，滤液保存。将诃子加入上述白狼毒水煎液中，静置浸泡12-72小时后，取出诃子，剥开去核，将诃子肉放入上述白狼毒水煎液中，文火烧煮，煮至汁液全部渗入诃子而干涸，然后置于温度40-80℃干燥20-40小时，粉碎，过20-100目筛。

实施例2白狼毒制诃子炮制品的质量控制方法

参照《中国药典》（2015年版四部）通则2202鞣质含量测定方法进行测定。

没食子酸含量测定：

色谱条件色谱柱：KromasilC₁₈柱(150mm×4.6mm，5mm)；流动相：5mmol/L磷酸溶液-甲醇(98:2)；流速：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：270nm，进样量：10μL。

对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品5mg，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为50μg/mL的没食子酸对照品储备溶液。

供试品溶液的制备取供试品（白狼毒制诃子）粉末(过三号筛)约200mg，精密称定，加入甲醇40mL，回流提取2次，每次30分钟，滤过；合并滤液，置100ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取5ml，蒸干，加入10%盐酸5ml，沸水浴中加热水解4h，取出迅速冷却至室温，移至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，通过孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。

线性关系考察分别精密吸取1mL、2ml、4mL、8mL、10mL上述对照品溶液于10mL容量瓶中，用水定容得5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的没食子酸水溶液，按照上述色谱条件注入高效液相色谱仪测定其峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，没食子酸含量(X)为横坐标，经线性回归，得回归方程:y=14255x-6742.2,R2=0.9999，结果表明没食子酸在5μg/mL-50μg/mL浓度范围内峰面积与没食子酸含量呈良好的线性关系（具体参见见说明书附图1，说明书附图2）。

精密度试验精密吸取没食子酸对照品溶液(25μg/mL)10μl，在上述色谱条件下，重复进样5次，测定其峰面积，计算RSD值为0.23%，说明其精密度良好。

稳定性试验取同一供试品溶液，在0~24h内间隔进样，每次10μl，测定峰面积积分值，计算RSD值为1.89%(n=5)，表明样品在24h内稳定性良好，结果见表。

重复性考察取同一供试品，按供试品溶液的制备方法配制5份供试液，精密吸取10μl进样，测定其峰面积并计算没食子酸含量，RSD值为0.99%(n=5)，考察重复性。

加样回收试验取已知含量的供试品共5份，精密称定，分别加入一定量的对照品，按供试品溶液的制备方法和色谱条件测定，以平均峰面积按标准曲线法计算含量，计算平均加样回收率为98.56%，RSD为0.62%(n=5)，结果见图3。

取白狼毒制诃子不同炮制品，参照上述方法进行没食子酸含量测定，对各样品的测定结果见图9。

实施例3炮制工艺研究

从规模化生产需求出发，为找出生产周期短，节省资源，炮制简便易行，方法科学的工艺路线，对白狼毒制诃子法进行了工艺条件的优选研究。实验以总醇提物和没食子酸的含量变化为客观指标（按照综合评测法，各占50%权重），对影响因素进行了正交设计优选。以白狼毒与水的比例、浸泡时间、干燥温度、干燥时间为四个因素，每个因素先进行五个水平的单因素考察，确定最佳单因素水平，在选用正交表L₉(3⁴)做正交实验，以确定最佳炮制工艺方案。

单因素筛选

白狼毒与水的比例首先固定浸泡时间12h，干燥温度40℃，干燥时间25h，考察白狼毒与水比例（1:5,1:10,1:15,1:20,1:30），测定醇提物含量，没食子酸含量。按照综合评测法（各占50%权重）处理数据后，结果如下附图3：综合结果先随比例减小而升高，在比例为1:15时达到最高，在1:20结果降至最低，之后又随比例减小而升高。初步确定白狼毒与水最佳比例为1:15。

浸泡时间固定白狼毒与水比例1:15，干燥温度40℃，干燥时间25h，考察浸泡时间（12h，24h，36h，48h，72h），测定醇提物含量，没食子酸含量。按照综合评测法（各占50%权重）处理数据后，结果如下附图4：综合结果随浸泡时间的增加而升高，到48h达到最高后开始降低。可以初步确定最佳浸泡时间为48h。

干燥温度固定白狼毒与水比例1:15、浸泡时间48h、干燥时间25h，考察干燥温度（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃），测定醇提物含量，没食子酸含量。按照综合评测法（各占50%权重）处理数据后，结果如下附图5：综合结果先随着干燥温度的升高而升高，在干燥温度为60℃是达到最高，之后又随着温度升高反而降低。由此可以初步确定最佳干燥温度为60℃。

干燥时间固定白狼毒与水比例1:15、浸泡时间48h、干燥温度60℃，考察干燥时间（20h，25h，30h，35h，40h），测定醇提物含量，没食子酸含量。按照综合评测法（各占50%权重）处理数据后，结果如附图6：综合结果先随着干燥时间的增长而升高，到干燥时间为30h时达到最大，此后随着干燥时间的增加反而减小。由此可以初步确定最佳干燥时间为30h。

3.2正交实验

由以上单因素筛选出来的最优条件，设计正交实验考察因素水平，选用L₉(3⁴)正交表进行实验，正交因素水平见图8，正交实验结果见图9，方差分析见图10。

根据正交试验结果，由图10可见，白狼毒与水比例影响最大，浸泡时间、干燥温度、干燥时间影响依次减小。根据K₁K₂K₃值大小确定最佳工艺为：首先，取与诃子等重量的白狼毒，加水煎煮，其中水与白狼毒的比例为1:15，榨取汁液，保存。将诃子放入此液中淹没，浸泡48h，浸泡期间不要搅动，48h后取出诃子，剥开取出核，将诃子肉放入上述白狼毒液中，小火烧煮，煮至汁液全部渗入诃子而干涸，于60℃下干燥35h。

工艺优化验证性试验及结果

按照上诉实验条件与方法，对最佳提取炮制工艺结果进行验证。称取3份诃子，按照正交试验优化结果进行炮制。对炮制品测没食子酸含量，重试3次,结果依次为9.80％，9.79％，9.81％。取平均值没食子酸含量为9.80％，高于其他炮制条件测得的含量结果，在预测范围之内，说明了该工艺的合理性。

实施例4白狼毒制诃子体内抗氧化活性研究

实验动物昆明种SPF级小鼠160只，21日龄，体重18g-23g，雌雄各半，购自成都达硕科技有限公司（合格证号：SCXK（川）2008-24）

实验试剂总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒，批号：20140626；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒，批号：20140621；丙二醛（MDA）试剂盒，批号：20140626；单胺氧化酶（MAO）试剂盒，批号：20140627；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，批号：20140619；以上试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

实验方法

1）样品溶液制备取待测定样品(诃子生药、白狼毒制诃子)10g，加水200ml浸泡过夜，煎煮2h，过滤；滤渣加水200ml浸泡过夜，煎煮1h，过滤。合并两次滤液，浓缩至20ml（0.5g/ml），备用。

2）实验分组取昆明种的SPF级小鼠160只，雌雄各半，然后随机分为8组，每组20只，分别为空白对照组、维生素E胶丸组（约54mg/kg）、诃子生药高剂量组（4.0g生药/kg）、诃子生药中剂量组（2.0g生药/kg）、诃子生药低剂量组（1.0g生药/kg）、白狼毒制诃子高剂量组（4.0g生药/kg）、白狼毒制诃子中剂量组（2.0g生药/kg）、白狼毒制诃子低剂量组（1.0生药/kg）。各组分别按照上述制定的剂量以灌胃的方式给小鼠给药，空白对照组同样以灌胃的方式灌入等体积的生理盐水，每天定时灌胃1次，连续14d。

3）血清抗氧化指标测定末次给药后lh，各组取10只动物摘眼球采血1ml，分离血清，测定血清总抗氧化能力T-AOC、超氧化物歧化酶SOD、丙二醛MDA和单胺氧化酶MAO含量。

4）血清中T-AOC的测定根据T-AOC试剂盒附带的说明书去配置试验所必需的试剂，然后将每个样品的测定管和对照管按照试剂盒说明书上的步骤进行加液、混匀、水浴，最后用分光光度计（波长520nm,1cm光径），用双蒸水调零，测定各管的吸光度值。然后根据说明书所给的计算公式计算T-AOC的含量。

T-AOC计算公式：

5）血清中SOD的测定将血清用生理盐水稀释成不同浓度进行预实验，将在本体系中SOD的抑制率在50%左右的浓度作为血清的稀释浓度，然后将要测定的血清样本每个取50ul进行稀释，稀释到抑制率为50%的浓度，然后按照试剂盒上的操作步骤进行试验。根据试剂盒说明书上的计算方法对SOD的抑制率进行计算，然后带入抑制率，根据计算公式酸楚SOD的活性。

按公式算SOD的抑制率：

按公式计算SOD的活力：

6）血清中MDA的测定按照试剂盒所附带的说明书将实验需要的试剂按要求进行配置，按照说明书的要求依次向空白管、标准管、测定管和对照管中依次加入之前准备好的试剂，然后按照实验步骤的要求将实验的各组通过混匀、密封、扎洞、水浴、离心、取上清，再利用双蒸水作为标准液进行调零，然后依次测定实验各管的吸光度值。根据试剂盒附带的说明书上的计算公式计算出血清中MDA的含量。

血清中MDA的计算公式：

7）血清中MAO的测定根据试剂盒的使用说明配置好所需试剂，然后根据试剂说明书的要求测定管加入200ul血清，而空白管内则加入等体积的蒸馏水，然后按照操作步骤依次加入试剂一、试剂二，混匀，37℃水浴3h，再加入试剂三和试剂四，之后混匀，经过连续抽提后，进行离心，离心后取上清液，利用紫外分光光度计，在试剂盒说明书所规定的条件下，用空白管进行调零，测定实验各管的吸光度值。然后根据试剂盒的计算公式计算出血清中MAO的活力。

血清中MAO活力的计算公式：

8）肝脏抗氧化指标测定采血后将小鼠进行断颈处死，小鼠处死后取肝脏同一部位，然后准确称取所取得小鼠肝脏组织的重量，在冰浴的条件下将肝脏匀浆成10%肝脏匀浆液，然后进行离心，离心后取上清液对肝脏中的丙二醛MDA、单胺氧化酶MAO和脂褐素LF含量进行测定。

9）肝脏中蛋白定量测定去一小块肝脏准确称取肝脏的重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例加入9倍体积的生理盐水，在冰水浴的条件利用匀浆器将肝脏制成匀浆，然后按照试剂盒说明书上的要求进行离心,离心后用移液枪将上清液移入另一试管，再移入9倍的生理盐水稀释成1%组织匀浆。然后分别按照试剂盒的要求分别依次向试管中加入所需试剂，经过混匀，再静置后，再利用分光光度计在双蒸水调零的情况下，测各管光度值，再根据试剂盒要求算出肝脏中蛋白质的含量。

肝脏内蛋白含量计算公式：

10）肝脏中MAO的测定根据试剂盒的使用说明配置好所需试剂，然后向测定管加入200ul之前制好的肝脏匀浆上清液，然后再向空白管加入等量的蒸馏水，然后按照操作步骤依次加入试剂一、试剂二，混匀，37℃水浴3h，再加入试剂三和试剂四，之后混匀，经过连续抽提，在进行离心，取离心后试管中的上清液，利用紫外分光光度计，在试剂盒要求的条件，用空白管进行调零，再测定试验中各组的吸光度值。

根据试剂盒说明书上的计算公式进行计算，算出肝脏组织中MAO的含量。

肝脏组织中MAO的计算公式：

11）肝脏中MDA的测定根据试剂盒所附带的说明书将试验中要用到的试剂一一配好，根据说明书的要求分别向空白管、标准管、测定管和对照管中加入配好的试剂，然后按照实验步骤的要求将实验的各组通过混匀、密封、扎洞、水浴、离心、取上清，再利用双蒸水作为标准液进行调零，然后依次测定实验各管的吸光度值。最后根据吸光度值再计算出肝脏组织中MDA的含量。

肝脏组织中MDA含量计算公式：

12）肝脏脂褐素LF的测定取处死小鼠肝脏上的同一部位的肝脏组织，然后准确称取重量，然后同V_氯仿：V_甲醇为2:1的混合溶液，按照M_肝脏：V_混合液为1:9制成10%的肝脏组织匀浆。制成匀浆后后再向试管中加入等体积蒸馏水，利用漩涡振荡仪充分振荡3min，3000r/min，离心10min。吸出氯仿层，用荧光分光光度计测定氯仿层的荧光强度（激发光波长360nm,发射光波长420nm，夹缝为10nm），测定新配制的硫酸奎宁标准液（1ug/ml）的荧光强度，计算脂褐素含量。脂褐素的含量相当于标准荧光强度的荧光物质的微克数。

计算公式：

13）肝脏切片的制作和观察取剩余的肝脏组织，放入Bouin试剂中进行固定，然后经过冲洗，用梯度酒精进行脱水，然后经二甲苯透明，浸蜡，包埋，切片，苏木素-伊红染色，封片后烘干，并在光学显微镜下观察肝脏组织的形态学变化。

14）统计学处理实验数据均由SPSS15.0软件统计，结果用平均值（M）±标准差（SD）的方式表示，并用单因素方差分析试验组与对照组均数间差异的显著性，P<0.05时，表示有显著的差异性，P<0.01时，表示差异性极为显著。

实验结果

1）原药诃子与诃子的不同炮制品对小鼠血液中抗氧化指标的影响

对小鼠血清中的T-AOC、SOD、MAO、MDA的含量进行测定，实验结果（见图11）显示原药诃子与诃子的不同炮制品的不同剂量对小鼠血清中T-AOC、SOD、MAO、MDA的含量都有不同程度的影响。总体上看，白狼毒制诃子炮制品均能使小鼠血清中T-AOC、SOD的浓度显著升高，与空白组具有明显差异（P<0.05或P<0.01)，T-AOC浓度与生药诃子组相当，SOD浓度则优于生药诃子组且与阳性对照维生素E组效果相当。与空白对照组相比，生药诃子组（4g，2g，1g生药/kg）、白狼毒制诃子组（4g，2g，1g生药/kg）的小鼠血清中T-AOC和SOD含量均显著升高（P<0.01或P<0.05），而MDA含量明显降低（P<0.01）；同时，生药诃子组（4g，2g生药/kg）、狼毒制诃子组（4g，2g生药/kg）的小鼠血清中的MAO含量也明显降低。

2）原药诃子和诃子的不同炮制品对小鼠肝脏中MAO、MDA和LF的影响

图12可知，总体上看，，白狼毒制诃子炮制品均能使小鼠肝脏中MAO和MDA的浓度，与空白组具有比较显著的差异性（P<0.05或P<0.01)，MAO浓度与生药诃子组相当，MDA浓度优于生药诃子组和阳性对照维生素E组；也能使肝脏中的MAO、MDA和LF的含量显著降低（P<0.05或P<0.01)，且优于生药诃子组，其中LF含量还优于阳性对照维生素E组。各给药组与空白对照组相比，诃子组（4g，2g，1g生药/kg）、白狼毒制诃子组（4g，2g，1g生药/kg）的小鼠肝脏中的MAO和MDA的含量均明显降低（P<0.01或P<0.05）；与同等剂量的生药诃子组相比，小鼠肝脏中的MAO和MDA的含量均无明显变化。与空白对照相比，诃子组(4g生药/kg)、白狼毒制诃子（4g，2g生药/kg）的LF含量均显著降低（P<0.01），与同等剂量的诃子组相比，白狼毒制诃子组（2g生药/kg）LF含量明显降低（P<0.05）。

以上结果提示白狼毒制诃子炮制品具有明显的体内抗氧化作用，效果明显优于诃子生药，某些指标能与维生素E媲美。

3）肝脏切片的结果观察

空白对照组（附图13）：肝细胞以中央静脉为轴心，呈条索状向四周放射性排列，肝细胞未见肿胀，也并未出现任何变性现象。维生素E胶丸组（附图14）：肝索成放射状向四周排列，肝细胞未见任何变性和坏死。诃子高中低剂量组的肝脏细胞经过观察后发现这三个组的小鼠在经过两周的灌药之后，肝组织未见异常，肝细胞也未出现任何的变性和坏死（附图15、附图16、附图17）分别是诃子低剂量组、诃子中剂量组和诃子高剂量组）。白狼毒制诃子低剂量组的肝组织呈放射状排列，肝细胞排列整齐，且肝细胞未出现变性（附图18、附图19、附图20）分别为白狼毒制诃子高、中、低剂量组）。

实施例5白狼毒制诃子急性毒性试验

对照组取昆明种SPF级小鼠30只，按体重随机分为空白组、白狼毒制诃子组、诃子生药组。空白组灌胃蒸馏水，白狼毒制诃子组、诃子生药组均按最大给药浓度灌胃（1g/mL)的炮制品(40g/kg，相当于临床常规药用剂量的500倍)，生品组灌胃(1g/mL)生药(40g/kg)，均灌胃0.8mL，观察7天，详细记录动物反应情况。给药后发现给药组活动减少，粪便颜色加深，未见其他明显的异常反应。连续观察7天，小鼠外观、行为、体重增长等与对照组无明显差异，有1-2只小鼠有轻度腹泻现象，停药后24h转为正常，未出现小鼠死亡情况，解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变，与对照组相比无明显差异。故白狼毒制诃子最大给药剂量为临床用药量的500倍。

Claims (5)

1.一种藏药饮片白狼毒制诃子，其特征在于，所述白狼毒制诃子通过包括以下步骤的方法制备得到：

（1）原料预处理：将诃子拣选除去杂质，50℃干燥，称量，备用；

将白狼毒拣选除去杂质，50℃干燥，粉碎，过20-100目筛，称量、备用；

（2）白狼毒水煎液制备：称取与诃子等质量的白狼毒粗粉，加入5-30倍

水，煎煮，过滤，滤液保存；

（3）浸泡、浓缩：将诃子加入上述白狼毒水煎液中，静置浸泡12-72小时

后，取出诃子，剥开去核，将诃子肉放入上述白狼毒水煎液中，文火烧煮，煮至汁液全部渗入诃子而干涸；

（4）干燥：将上述诃子置于温度40-80℃干燥20-40小时，粉碎，过20-100

目筛即得产品。

2.根据权利要求1所述的一种白狼毒制诃子，其特征在于，所述步骤（2）中炮制工艺，水的倍数优选15倍。

3.根据权利要求1所述的一种白狼毒制诃子，其特征在于，所述步骤（3）中炮制工艺，浸泡时间优选48小时。

4.根据权利要求1所述的一种白狼毒制诃子，其特征在于，所述步骤（4）中炮制工艺，干燥温度优选60℃，干燥时间优选35小时。

5.权利要求1所述藏药饮片白狼毒制诃子在制备抗氧化药物中的用途。