CN104095896A - 一种蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，有效解决高血糖的治疗用药问题，蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，该提取物是，将蒲公英粉碎成粗粉，用石油醚回流提取脱脂，弃去石油醚液；蒲公英药渣挥干石油醚，加乙醇，用闪式提取器提取，提取液抽滤，滤液旋蒸浓缩至无醇味，用水混悬，调整溶液浓度为含生药量1g/ml的提取液，再加等体积乙醚萃取，除去乙醚，浓缩，干燥，粉碎，得蒲公英提取物，蒲公英提取物中蒲公英总黄酮质量含量65%以上，本发明具有降糖作用，可有效用于制备降糖药物，实现蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用。

Description

一种蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用。

背景技术

蒲公英(拉丁学名：Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)菊科，蒲公英属多年生草本植物。根圆锥状，表面棕褐色，皱缩，叶边缘有时具波状齿或羽状深裂，基部渐狭成叶柄，叶柄及主脉常带红紫色，花葶上部紫红色，密被蛛丝状白色长柔毛；头状花序，总苞钟状，瘦果暗褐色，长冠毛白色，花果期4-10月。

蒲公英别名黄花地丁、婆婆丁、华花郎等。菊科多年生草本植物。头状花序，种子上有白色冠毛结成的绒球，花开后随风飘到新的地方孕育新生命。

蒲公英植物体中含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分。性味甘，微苦，寒。归肝、胃经。有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效。治热毒、痈肿、疮疡、内痈、目赤肿痛、湿热、黄疸、小便淋沥涩痛、疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，牙痛，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛。治急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒疮肿，急性结膜炎，感冒发热，急性扁桃体炎，急性支气管炎，胃炎，肝炎，胆囊炎，尿路感染等。蒲公英可生吃、炒食、做汤，是药食兼用的植物。但至今未见有蒲公英在降糖方面的应用研究或用于制备降糖药物的公开报导。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，可有效解决高血糖的治疗用药问题。

本发明解决的技术方案是，蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，该提取物是，将蒲公英粉碎成粗粉，用石油醚回流提取脱脂，弃去石油醚液；蒲公英药渣挥干石油醚，加乙醇，用闪式提取器提取，提取液抽滤，滤液旋蒸浓缩至无醇味，用水混悬，调整溶液浓度为含生药量1g/ml的提取液，再加等体积乙醚萃取，除去乙醚，浓缩，干燥，粉碎，得蒲公英提取物，蒲公英提取物中蒲公英总黄酮质量含量65％以上。

本发明制备方法简单，原材料丰富，所制备的蒲公英提取物具有降糖作用，可有效用于制备降糖药物，实现蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，开拓了蒲公英在制备治疗高血糖引起的糖尿病药物中的新用途。

具体实施方式

以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，该提取物是，将蒲公英粉碎成过20-30目筛的粗粉，加8倍蒲公英重量的石油醚回流提取1h脱脂，弃去石油醚液；蒲公英药渣挥干石油醚，加10倍蒲公英重量质量浓度为85％的乙醇，用闪式提取器提取2次，每次3min，合并提取液，抽滤，滤液旋蒸浓缩至无醇味，用水混悬，调整溶液浓度为含生药量1g/ml的提取液，再加等体积乙醚萃取2次，除去乙醚，浓缩，干燥，粉碎，得蒲公英提取物，蒲公英提取物中蒲公英总黄酮质量含量65％以上。

本发明蒲公英提取物具有降糖作用，可有效用于制备降糖药物，实现蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，进而实现蒲公英提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用，并经试验得到了有效证明，有关试验资料如下。

1.实验材料

1.1实验试剂

本发明蒲公英提取物；盐酸二甲双胍片：市售；生理盐水，河南双鹤华利药业有限公司；甲醛：烟台市双双化工有限公司；水合氯醛：天津市光复精细化工研究所；冰乙酸：天津致远化学试剂有限公司；羧甲基纤维素钠：天津市恒兴化学试剂制造有限公司；链脲佐菌素：由sigma公司提供；葡萄糖测定试剂盒，由中生北控生物科技股份有限公司生产提供；柠檬酸：天津市致远化学试剂有限公司；柠檬酸钠：天津市致远化学试剂有限公司；糖化血清蛋白试剂盒：由南京建成生物工程研究所生产；胰岛素试剂盒：R&D公司生产；胰岛素抗体试剂盒：R&D公司生产；一氧化氮试剂盒：由南京建成生物工程研究所生产；一氧化氮合酶试剂盒：由南京建成生物工程研究所生产；胆固醇试剂盒：由中生北控生物科技股份有限公司生产提供；甘油三酯试剂盒：由中生北控生物科技股份有限公司生产提供；超氧化物歧化酶试剂盒：由南京建成生物工程研究所生产。

1.2实验仪器

AL204系列电子天平，梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司；VIS-7220N可见分光光度计，北京瑞利分析仪器有限公司；TGL-16G台式离心机：上海安亭科学仪器厂生产；HHS型电热恒温水浴锅，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；KDC-160HR高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司生产；酶标仪，美国BIO-RAD公司，型号680；可调式移液枪:上海雷勃分析仪器有限公司；4号注射针，上海埃斯埃医械塑料制品有限公司；TES-1380PH酸度计，泰仕电子工业股份有限公司；OLYMPUS BX61电动显微镜，日本OLYMPUS公司生产。

1.3实验动物

Wistar大鼠，雄性，体重180～220g，由山东鲁抗医药股份有限公司提供，合格证号：0016002；实验室合格证号SYXK(豫)2010-001。

2.实验方法

2.1造模与给药

取体重180g-220g的Wistar大鼠96只，雄性，适应饲养三天，第四天早上称重后随机选取12只作为空白组，其余大鼠麻醉后舌下静脉注射柠檬酸-柠檬酸钠配制的链脲佐菌素40mg/kg造模，空白组舌下静脉注射等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。于造模后第七天尾部取血，测血糖，选取16.7mmol/L<血糖值<21mmol/L,且明显具有多饮、多食、多尿症状的大鼠60只，按血糖值随机分为5组，分别是模型组，蒲公英提取物大、中、小剂量组，盐酸二甲双胍组，分别灌服蒲公英提取物大、中、小剂量组(200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg,用0.5％的CMC-Na配制，10ml/kg)，盐酸二甲双胍(250mg/kg,为临床剂量的10倍，用0.5％的CMC-Na配制，灌胃体积均为10ml/kg)，模型组与空白组给同体积的0.5％的CMC-Na(10ml/kg)。每天给药一次，连续给药30天，分别于给药后的第10、20、30天尾部取血，测血糖值，于第31天给药2小时后，摘眼球取血，测血清中胰岛素、胰岛素抗体、NO水平和NOS活力、甘油三酯、胆固醇、超氧化物歧化酶、糖基化血清蛋白。取血后处死大鼠，取胰腺、肾脏、肝做病理切片，观察其病理改变。

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的配制：分别称取500.4mg柠檬酸和501.2柠檬酸钠溶于50ml的容量瓶中，次溶液即为ph＝4.2的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。为确保其准确性可用PH计校正。临用前配制(由于链脲佐菌素不十分稳定，且对血管刺激较大，用缓冲液配制链脲佐菌素可减轻这些副面影响)

3.统计方法

数据分析用SPSS 13.0 for windows医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用最小显著差数(LSD)法，方差不齐者用Games-Howell法检验，等级资料采用Ridit检验。

4.实验结果与小结

表1蒲公英提取物对链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型血糖的影响

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可以看出：与空白组相比，模型组在第10、20、30天时的血糖值均显著性升高(P<0.01),说明模型复制成功。与模型组相比，二甲双胍组、蒲公英提取物大剂量组在第10天时可明显降低大鼠的血糖值(P<0.05)；二甲双胍组和蒲公英提取物各剂量组均可显著降低造模后第20、30天的血糖值(P<0.01)。

表2蒲公英提取物对对链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型胰岛素、胰岛素抗体及糖化血清蛋白的影响

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可知：与空白组相比，模型组均可显著性降低胰岛素水平(P<0.01)，可显著升高胰岛素抗体水平和糖化血清蛋白的含量(P<0.01)，说明模型复制成功。与模型组相比，二甲双胍组可显著降低胰岛素抗体水平和糖化血清蛋白含量(P<0.01)；蒲公英提取物各剂量组可显著升高胰岛素水平(P<0.01)，可显著降低胰岛素抗体水平(P<0.01)；蒲公英提取物大剂量组可显著降低糖化血清蛋白含量(P<0.01)，中剂量组可明显降低糖化血清蛋白含量(P<0.05)，小剂量对糖化血清蛋白仅有降低趋势。

表3蒲公英提取物对链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型NO、NOS及SOD的影响

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可知：与空白组相比，模型组可显著升高一氧化氮和一氧化氮合酶水平(P<0.01)，显著降低超氧化物歧化酶的含量(P<0.01)，说明模型出现抗氧化能力紊乱。与模型组相比，二甲双胍组和蒲公英提取物各组均可显著降低血清中NO和NOS水平(P<0.01)，可显著升高SOD水平(P<0.01)。

表4蒲公英提取物对链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型胆固醇、甘油三酯的影响

*表示与模型组比P<0.05，**表示与模型组比P<0.01

由上表可知：与空白组相比，模型组胆固醇、甘油三酯可显著升高(P<0.01)，说明糖尿病会引起脂代谢的紊乱。与模型组相比，二甲双胍组和大、中剂量蒲公英提取物组均可显著降低胆固醇、甘油三酯含量(P<0.01)，小剂量蒲公英提取物对胆固醇和甘油三酯仅有降低趋势。

各组胰脏组织形态光镜观察：空白对照组胰岛细胞边界清晰，细胞排列紧密，分部均匀，结构完整，细胞核松散，胰岛细胞浆丰富；模型组胰岛细胞数目明显减少，胞浆出现萎缩，甚至看不到胰岛细胞；；；二甲双胍组可使胰岛细胞胞浆丰富，对抗胰岛素的萎缩；大、中、剂量组蒲公英提取物组胰岛细胞胞浆较丰富，部分细胞核较密集；小剂量组蒲公英提取物部分胰岛细胞核密集，胰岛细胞胞浆较少。

表5蒲公英提取物对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型胰腺组织的影响

“-”：胰腺组织中胰岛在4个以上，胰岛细胞胞浆丰富，细胞核松散；“+”：胰腺组织中胰岛在4个以上，少数胰岛细胞胞浆萎缩，少数细胞核密集；“++”：胰腺组织中胰岛在2-3个，部分胰岛细胞胞浆萎缩，部分细胞核密集；“+++”：胰腺组织中胰岛在0-1个，全部胰岛细胞胞浆几乎消失，全部细胞核密集

从上表可看出，经Ridit检验，与空白对照组比，模型组胰脏出现显著病理变化(P<0.01)，造模型成功。与模型组比，大、中剂量蒲公英提取物组和二甲双胍组均可显著减轻胰脏病理变化(P<0.01)；小剂量蒲公英提取物组可明显减轻胰脏病理变化(P<0.05)。

各组肾脏组织形态光镜观察：空白组肾小球基本正常，肾小球间质无炎症细胞的浸润；模型组肾小球明显增生且有淋巴细胞浸润，小管上皮细胞水肿，管腔变窄；大、中、小剂量蒲公英提取物组和二甲双胍组均可显著促使肾小球细胞病变显著减轻。

表6蒲公英提取物对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型肾组织的影响

“-”：肾小球、肾小囊、肾小管基本均正常；“+”：肾小球细胞有所增生，肾小囊腔稍有变窄，肾小管上皮细胞稍水肿，管腔变窄；“++”：肾小球细胞明显增生，肾小囊腔部分变窄，肾小管上皮细胞水肿，管腔变窄；“+++”：肾小球细胞显著增生，肾小囊腔变窄或消失，肾小管上皮细胞明显水肿，管腔变窄或消失

由上表可知，经Ridit检验，与空白对照组比，模型组出现显著病理变化(P<0.01)，说明造模型成功。与模型组比，二甲双胍组肝细胞呈放射状排列，肝窦明显，大、中、小剂量蒲公英提取物组及二甲双胍组均可显著减轻肾脏组织形态的病理变化(P<0.01)。

各组肝脏组织形态光镜观察：空白组肝细胞细胞窦清晰可见，肝细胞呈放射状排列；模型组肝窦变窄，肝细胞水肿，中央静脉周围肝细胞排列较乱；二甲双胍组肝细胞呈放射状排列，肝窦明显；大剂量蒲公英提取物组肝细胞呈放射状排列，细胞有轻微的水肿；中、小剂量蒲公英提取物组肝细胞排列紊乱，且有炎症细胞浸润。

表5蒲公英提取物对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型肝脏组织的影响

“-”肝细胞、肝窦正常，无充血挤炎细胞侵润；“+”肝细胞、肝窦正常，有充血挤炎细胞侵润；“++”肝细胞轻度水肿，肝窦变窄，有充血挤炎细胞侵润；“+++”肝细胞水肿和嗜酸性变，肝窦变窄或消失，有充血挤和炎细胞侵润

由上表可看出，经Ridit检验，与空白对照组比，模型组出现显著肝脏病理变化(P<0.01)，说明造模型成功。与模型组比，大、中、小剂量蒲公英提取物组和二甲双胍组均可显著减轻肝脏病理变化(P<0.01)。

上述试验资料充分表明本发明的蒲公英提取物中总黄酮含量达65％以上，具有很好的降糖作用，有效用于制备降糖药物，实现蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，并开拓了糖尿病治疗用药的新途径，并实现蒲公英提取物在制备治疗糖尿病药物中的应用，因为糖尿病最突出的临床症状就是高血糖，因此，治疗糖尿病的关键在于降低血糖，而蒲公英提取物正具备降低血糖的功效，并且经临床对38例高血糖糖尿病患者按常规糖尿病患者服药办法进行服用，每天2次，早晚各1次，每次1.5g，连服15天，测定血糖，结果血糖均有不同程度的降低，在已使用患者中几乎100％有效，表明无论是经动物试验，还是经临床验证，都证明蒲公英提取物具有降糖之功效，开拓了蒲公英的新用途和药用价值，具有极大的实用价值，是中药上的一大创新。

Claims (1)

1.一种蒲公英提取物在制备降糖药物中的应用，该提取物是，将蒲公英粉碎成过20-30目筛的粗粉，加8倍蒲公英重量的石油醚回流提取1h脱脂，弃去石油醚液；蒲公英药渣挥干石油醚，加10倍蒲公英重量质量浓度为85%的乙醇，用闪式提取器提取2次，每次3min，合并提取液，抽滤，滤液旋蒸浓缩至无醇味，用水混悬，调整溶液浓度为含生药量1g/ml的提取液，再加等体积乙醚萃取2次，除去乙醚，浓缩，干燥，粉碎，得蒲公英提取物，蒲公英提取物中蒲公英总黄酮质量含量65%以上。