CN104004663A - 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法 - Google Patents

捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104004663A
CN104004663A CN201410227501.3A CN201410227501A CN104004663A CN 104004663 A CN104004663 A CN 104004663A CN 201410227501 A CN201410227501 A CN 201410227501A CN 104004663 A CN104004663 A CN 104004663A
Authority
CN
China
Prior art keywords
freeze
preparation
drying
chlamydospore
nematode
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410227501.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104004663B (zh
Inventor
杨晓野
王瑞
杨莲茹
张伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Inner Mongolia Agricultural University
Original Assignee
Inner Mongolia Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inner Mongolia Agricultural University filed Critical Inner Mongolia Agricultural University
Priority to CN201410227501.3A priority Critical patent/CN104004663B/zh
Publication of CN104004663A publication Critical patent/CN104004663A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104004663B publication Critical patent/CN104004663B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

本发明属于微生物学领域，提出一种捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法，即首先将实验室分离保存的捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans CIM1菌株在大麦粒培养基上进行厚壁孢子批量培养，然后用冻干保护剂洗脱并保护厚壁孢子，再进行分装灭菌、预冻、真空冷冻干燥后获得。本发明成功制备了具有捕食线虫功能的捕食线虫性真菌—Duddingtonia flagrans生物冻干制剂，实验结果表明该冻干制剂既可以保持菌株活性，又可以在常温下运输和保存，且使用方便，具有很好的应用开发前景。

Description

捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法
技术领域
本发明属于微生物学领域，具体涉及一种捕食线虫的真菌、由该真菌获得的制剂。
背景技术
动物寄生虫病是家畜的一大类严重疾病，给畜牧业造成严重危害。长期以来，对家畜寄生性线虫的防治主要依靠化学药物，并发挥了巨大的作用。但是随着化学驱虫药产生的抗药性、药物残留及环境污染等问题日益严重，已经引起人们的广泛认识，因此利用捕食线虫性真菌对线虫的生物拮抗作用来防治动物寄生线虫已备受关注。
捕食线虫性真菌是由孢子萌发生长出营养菌丝，然后形成捕食器官进而捕食线虫，并通过内寄生方式消解线虫和产生毒素毒杀线虫等方式获得生存的一类微生物。正是因为此类真菌的这个特点，所以在寄生性线虫防治方面，捕食线虫性真菌是一个国家极其重要的宝贵生物资源。因为捕食线虫性真菌在培养基中，菌种仍继续发育生长，这样就会不断消耗其自身营养，使得其捕食性能下降，而且在此过程中极易发生污染。所以目前在捕食线虫性真菌临床应用中所面临的重要问题是如何制备一种能应用于生产实际的捕食线虫性真菌生物制剂。
发明内容
针对本领域存在的问题，本发明的目的是提出一种捕食线虫性真菌冻干制剂的制备方法。
本发明的另一目的是提出含有捕食线虫性真菌菌株厚壁孢子的真菌生物冻干制剂。
实现本发明目的的技术方案为：
一种捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法，其特征在于，是将捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans CIM1菌株在大麦粒培养基上进行厚壁孢子的批量培养，然后用冻干保护剂洗脱并保护厚壁孢子，再分装灭菌、预冻、真空冷冻干燥后获得。
本发明提出的制备方法，可以制备含有任一种捕食线虫性真菌(Duddingtonia flagrans)菌株的冻干制剂。优选的，使用如下菌株：
一种捕食线虫性真菌(Duddingtonia flagrans)菌株，该菌株(菌株名称为CIM1)的保藏号为：CGMCC No.9201，保藏日期：2014年5月5日。
所述菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101，电话：(010)64807355。
所述捕食线虫性真菌(Duddingtonia flagrans)系发明人从内蒙古土壤中分离筛选后经纯化得到的。该菌株(菌株名称为CIM1)具有如下特性：Duddingtonia flagrans菌株生长温度范围为在15～35℃间均能生长，其中以35℃环境下生长率最高。Duddingtonia flagrans菌丝呈放射状地向周围生长，纵横交错，清晰可见，主干较粗，分支较细；菌丝无色分隔。外观白色至灰粉红色，生长后期有缠绕圈的形成，并可发现少数厚壁孢子着生于菌丝细胞之间。参见图1。
其中，所述大麦粒培养基的制备方法为：将大麦粒清洗干净，置干燥箱中烘干，按照大麦粒质量和蒸馏水体积1:1的比例加入蒸馏水，并将装有蒸馏水和大麦粒的容器于120～125℃灭菌20min后即得。所述的大麦粒是完整的大麦粒，或破碎的、部分破碎的大麦粒均可。
所述的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子批量培养可采用本领域公知的手段进行培养。优选的，Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子批量培养的条件为20～30℃，每天摇动1-3次，培养20～25天。
批量培养过程中，用手摇动即可，以防培养基板结。
其中，所述冻干保护剂由体积份的蒸馏水1000份和吐温-802份组成。
其中，所述预冻是在-80℃下预冻2小时。
所述真空冷冻干燥可采用常规的冷冻干燥方法进行。优选的，所述真空冷冻干燥的条件为：压强130×10-3mbar～135×10-3mbar，在-48℃至-55℃下，冻干18-25h。优选冻干20h。
本发明所述的制备方法制备得到的捕食线虫性真菌生物冻干制剂。
本发明的有益效果在于：
本发明提出的捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans菌株的菌丝受线虫幼虫蠕动刺激后，形成捕食器，对幼虫进行捕捉，随后菌丝侵入虫体内部，开始对线虫进行消解和吸收，最后导致线虫死亡。
本发明成功制备了具有捕食线虫功能的真菌生物冻干制剂—捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans生物冻干制剂，实验结果表明该冻干制剂既可以保持菌株活性，又可以在常温下运输和保存，且使用方便，具有很好的应用开发前景。
附图说明
图1为本发明Duddingtonia flagrans菌株生长情况显微照片。
图2为本发明真菌生物冻干制剂的产品照片。
具体实施方式
现以以下实施例来说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中使用的手段，如无特别说明，均使用本领域常规的手段。
冻干机，美国Thermo公司产品。
冻干保护剂：蒸馏水1000mL和吐温-802mL。
实施例1：Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子的批量培养
(1)大麦粒培养基的制备：将完整大麦粒清洗干净，置干燥箱中烘干，分装于250mL三角瓶中，每瓶70g，各加蒸馏水70mL。将装有蒸馏水和大麦粒的三角瓶于121℃灭菌20min。
(2)接种培养基：在无菌条件下，将实验室分离保存的捕食线虫性真菌-Duddingtonia flagrans CIM1菌株，制备成混悬液，接种于上述制备好的培养基中，并用灭菌玻璃棒搅拌，使混悬液均匀分布于培养基中，置25℃恒温箱中培养，每天摇晃培养基三次以防板结。
(3)用冻干保护剂洗脱并保护厚壁孢子：在厚壁孢子培养至第3周时，在无菌条件下取3g培养基，用冻干保护剂(蒸馏水1000份和吐温-802份配成)进行厚壁孢子的洗脱，收集孢子洗脱液混匀后，用白细胞计数板计数，得出培养基所含厚壁孢子数量为3.2×105个/g。
实施例2.Duddingtonia flagrans菌株冻干制剂的制备
用实施例1获得的厚壁孢子进行制备。
(1)准备冻干安瓿瓶：选用7mL冻干安瓿瓶20个，用10％HCl浸泡8～10h，再用自来水冲洗数次，最后用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后贴上标签，标上菌号及时间，和冻干安瓿瓶盖一起于121℃高压灭菌20min后备用。
(2)对实施例1获得的含有厚壁孢子的洗脱液进行离心浓缩，转速4000r/min，离心20min。
(3)分装灭菌：用移液器直接将离心好的厚壁孢子混悬液滴入冻干安瓿瓶底部，注意不要溅污上部瓶壁，每瓶分装量为2mL，分装时间尽量要短。分装时应注意在无菌条件下操作。
(4)预冻：将冻干安瓿瓶置于-80℃冰箱中预冻2h。
(5)真空冷冻干燥：完成预冻后，开动冻干机，打开“FRIGE”开关，此时温度显示屏为红灯，等待红灯逐渐上升变为绿色，此时温度为-50℃左右。将冻干玻璃瓶盖拔开一些，放入冻干箱内并确保冻干箱的密闭性。打开“PUMP”开关以及真空泵的阀门，等待气压显示屏指示灯变为绿色，此时压强为133×10-3mbar。冻干20h，待样品变为干燥粉末状时，关闭真空泵阀门，“FRIGE”，“PUMP”开关即可取出。将冻干玻璃瓶盖立即盖紧，置-20℃冰箱保存。
产品照片见图2。成品Duddingtonia flagrans生物冻干制剂保存在冻干安瓿瓶内，为黄色疏松多孔的海绵状物质，瓶内为真空状态，平均每瓶的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子数量为1.5×106个。
实施例3：Duddingtonia flagrans菌株冻干制剂的复苏效果观察
实验组：实施例1制备的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子冻干制剂。
对照组：自然状态下未经冻干的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子。
空白对照组：等量无菌注射用水。
(1)萌发率实验
0.4g/L玉米粉琼脂培养基(CMA)制备：取新鲜玉米粉40g，加蒸馏水1000mL，微火煮沸1h，补足水分至1000mL，450目纱网过滤。取滤液10mL，加蒸馏水990mL，调节PH值为6.0～6.2，再加20g琼脂粉，经121℃高压灭菌20min后，倾注于灭菌的培养皿中，4℃放置备用。
实验方法：在无菌条件下，用无菌注射用水稀释冻干后的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子，吸取20个厚壁孢子接种到直径为60mm的CMA固体培养基平皿中，共接种3个，作为实验组；将同一批培养洗脱的未冻干的厚壁孢子，以同样的方法接种另外3个培养基，作为对照组；同时设只加无菌注射用水的空白对照组。然后放于25℃恒温培养箱中，每天定时观察并记录各组孢子的平均萌发个数，计算萌发率。结果见表1。
表1Duddingtonia flagrans菌株冻干制剂萌发率的观察结果
(2)生长率试验
在无菌条件下，用无菌注射用水稀释冻干后的Duddingtoniaflagrans菌株厚壁孢子。然后用无菌注射用水，将稀释后的孢子悬液浓度调节至1×106个∕mL。混匀后用移液器取50μL，接种于在直径为90mm的CMA固体培养基平皿中心，共接种3个平皿，作为实验组，以厚壁孢子接种点为中心作十字形画线。如前，设未经冻干的厚壁孢子对照组和只加无菌注射用水的空白对照组。然后放于25℃恒温培养箱中，每天定时沿画线方向，在倒置显微镜下，测量各组菌丝生长长度，直到菌丝长满培养皿。计算菌丝平均生长率。结果见表2。
表2Duddingtonia flagrans菌株冻干制剂生长率的观察结果
实施例4Duddingtonia flagrans菌株杀虫率试验及实验室杀虫剂量的测定
(1)杀虫率试验
实验组：实施例1制备的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子冻干制剂。
对照组：自然状态下未经冻干的Duddingtonia flagrans菌株厚壁孢子。
空白对照组：等量无菌注射用水。
线虫第3期幼虫的培养和制备：收集3只自然感染线虫且未驱过虫的羊新鲜粪便，置于20cm×40cm搪瓷盘中，然后加入蒸馏水，放于30℃的恒温箱中进行培养，每天加适量水并进行搅拌，保持粪便环境的湿度和通气，10～15d后，用灭菌生理盐水洗涤搪瓷盘盖，将盖上的幼虫洗到烧杯中，再将烧杯中的幼虫洗涤4～5次，最后于4℃冰箱保存备用。
实验方法：待完成各组菌丝生长率测定之后，在无菌条件下，向每个培养皿中加入约100条绵羊线虫第3期幼虫，于25℃恒温培养箱中培养，每天定时记录各组的虫体捕食率。最后计算平均捕食率。
平均虫体捕食率＝平均捕食虫体条数/(空白对照组)×100％。
结果见表3。
表3Duddingtonia flagrans菌株冻干制剂杀虫率的观察结果
(2)实验室杀虫剂量的测定
实验组：不同剂量厚壁孢子混悬液。
对照组：等量无菌注射用水。
实验方法：用无菌注射用水稀释Duddingtonia flagrans菌株冻干生物制剂，随后用血细胞计数板计数厚壁孢子，再用无菌注射用水将厚壁孢子浓度分别调节至5×105个∕mL、10×105个∕mL、15×105个∕mL及20×105个∕mL。另用粪袋收集绵羊的粪便，将其充分碾碎混匀，放于90mm培养皿中，每个培养皿中10g，每组3个，共5组。其中第1组为空白对照组，即每个培养皿只加4mL无菌注射用水，2～5组依次分别加上述制备好的不同浓度的厚壁孢子混悬液4mL，即第2～5组粪便中冻干厚壁孢子剂量依次是2×105个∕g、4×105个∕g、6×105个∕g及8×105个∕g。然后将以上各组培养皿中的粪便与孢子悬液充分混匀，放于27℃恒温培养箱中，每天加适量蒸馏水并搅拌，以保持氧气与湿度，在粪便培养至第15d时，用贝尔曼幼虫分离法分离各组粪便中的幼虫并计数，得出每克粪便幼虫数(LPG)。
捕食性真菌冻干生物制剂杀虫率＝(空白对照组LPG-实验组LPG)∕(空白对照组LPG)×100％
结果见表4。
表4Duddingtonia flagrans菌株冻干制剂实验室杀虫剂量的测定结果
实验结果显示：实验组萌发率在第5天达到峰值，为78.3％；实验组菌丝生长速度在第6天达到最大为6.15mm，对照组菌丝生长速度在第7天达到最大为6.30mm，经SAS分析得出对照组与实验组平均生长率差异不显著(P>0.05)，可见捕食性真菌Duddingtonia flagransCIM1菌株冻干后仍保持较高的生物活性。
实验结果同时显示，在冻干制剂捕食虫体效力观察实验中，第4天实验组捕食率为92％，经SAS分析得出对照组与实验组捕食率差异不显著(P>0.05)。由实验室杀虫剂量测定结果显示，冻干制剂剂量为4×105个/克时，杀虫率可达95.2％。可见，菌株冻干后捕食虫体效力不受冻干过程的影响，冻干制剂在实验室条件下(动物体外)表现出较强的杀虫效果。
以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims (8)

1.一种捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法，其特征在于，将捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans菌株进行厚壁孢子(厚垣孢子)批量培养，然后用冻干保护剂洗脱并保护厚壁孢子，再分装灭菌、预冻、真空冷冻干燥后获得。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述Duddingtoniaflagrans菌株的保藏号为：CGMCC No.9201。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大麦粒培养基的制备方法为：将大麦粒清洗干净，置干燥箱中烘干，按照大麦粒质量和蒸馏水体积1:1的比例加入蒸馏水，将装有蒸馏水和大麦粒的容器于120～125℃灭菌20min后即可获得。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，Duddingtoniaflagrans菌株厚壁孢子批量培养的条件为：20～30℃温度下，每天摇动1-3次，培养20～25天。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂由体积份的蒸馏水1000份和吐温-802份组成。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预冻是在-80℃下预冻2小时。
7.根据权利要求1-6任一所述的制备方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥的条件为：压强130×10-3mbar～135×10-3mbar，在-48℃至-55℃下，冻干18-25h。
8.权利要求1-7任一所述的制备方法制备得到的捕食线虫性真菌生物冻干制剂。
CN201410227501.3A 2014-05-27 2014-05-27 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法 Active CN104004663B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410227501.3A CN104004663B (zh) 2014-05-27 2014-05-27 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410227501.3A CN104004663B (zh) 2014-05-27 2014-05-27 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104004663A true CN104004663A (zh) 2014-08-27
CN104004663B CN104004663B (zh) 2017-10-13

Family

ID=51365573

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410227501.3A Active CN104004663B (zh) 2014-05-27 2014-05-27 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104004663B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105343879A (zh) * 2015-07-01 2016-02-24 内蒙古农业大学 用于捕食线虫的真菌和驱虫药联合药剂盒及其应用
CN105362301A (zh) * 2015-11-11 2016-03-02 西北民族大学 一种食线虫性真菌颗粒制剂及其制备方法与应用
CN105394086A (zh) * 2015-11-11 2016-03-16 西北民族大学 一种捕食线虫性真菌冻干制剂及其制备方法与应用
CN112501035A (zh) * 2020-12-09 2021-03-16 云南大学 基于捕食线虫真菌细胞膜破裂和内体增多而产生捕食器官的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1476762A (zh) * 2003-06-03 2004-02-25 云南大学 一种防治植物寄生线虫的生防制剂
RU2253671C2 (ru) * 2003-05-13 2005-06-10 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор") Штамм гриба duddingtonia flagrans, проявляющий свойства против галловых нематод растений и паразитических нематод животных и стимулирующий рост и развитие растений
CN101210224A (zh) * 2006-12-28 2008-07-02 王治才 嗜线虫真菌培养的一种液体培养基及其厚垣孢子制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2253671C2 (ru) * 2003-05-13 2005-06-10 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор") Штамм гриба duddingtonia flagrans, проявляющий свойства против галловых нематод растений и паразитических нематод животных и стимулирующий рост и развитие растений
CN1476762A (zh) * 2003-06-03 2004-02-25 云南大学 一种防治植物寄生线虫的生防制剂
CN101210224A (zh) * 2006-12-28 2008-07-02 王治才 嗜线虫真菌培养的一种液体培养基及其厚垣孢子制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LARSEN, M.等: "Predacious activity of the nematode-trapping fungus Duddingtonia flagrans against cyathostome larvae in faeces after passage through the gastrointestinal tract of horses", 《VETERINARY PARASITOLOGY》, vol. 60, 31 December 1995 (1995-12-31), pages 315 - 320 *
侯琴等: "捕食线虫性真菌冻干制剂体外杀寄生性线虫研究", 《第七届内蒙古自治区自然科学学术年会》, 31 December 2012 (2012-12-31), pages 396 - 399 *
杨晓野等: "少孢节丛孢菌生物冻干制剂的制备及复苏效果观察", 《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集》, 31 December 2006 (2006-12-31) *
莫明和: "利用食线虫真菌防治植物寄生线虫的研究进展", 《中国植物病理学会年学术年会论文集》, 31 December 2009 (2009-12-31) *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105343879A (zh) * 2015-07-01 2016-02-24 内蒙古农业大学 用于捕食线虫的真菌和驱虫药联合药剂盒及其应用
CN105362301A (zh) * 2015-11-11 2016-03-02 西北民族大学 一种食线虫性真菌颗粒制剂及其制备方法与应用
CN105394086A (zh) * 2015-11-11 2016-03-16 西北民族大学 一种捕食线虫性真菌冻干制剂及其制备方法与应用
CN105394086B (zh) * 2015-11-11 2018-11-09 西北民族大学 一种捕食线虫性真菌冻干制剂及其制备方法与应用
CN112501035A (zh) * 2020-12-09 2021-03-16 云南大学 基于捕食线虫真菌细胞膜破裂和内体增多而产生捕食器官的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104004663B (zh) 2017-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10412941B2 (en) Artificial feeding method at low altitude for host insect ghost moth of ophiocordyceps sinensis
Gómez-Vidal et al. Endophytic colonization of date palm (Phoenix dactylifera L.) leaves by entomopathogenic fungi
CN105296381B (zh) 一株枯草芽孢杆菌cyy-25及其应用
CN101691540B (zh) Muscodor属植物内生真菌ZJLQ070及其用途和杀菌剂
CN104673716A (zh) 一种缺失sfp基因的生防菌及其发酵工艺和应用
CN104004663A (zh) 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法
KR20200076934A (ko) 동충하초의 대량 증식 종균 획득 방법과 이를 이용한 대량 배양방법
CN109370955A (zh) 一株死谷芽胞杆菌hsb-2及其应用
CN106359454A (zh) 一种短稳杆菌农药的制备方法
CN103773712A (zh) 一种抗真菌肽高产菌株及其制备抗菌肽的方法
CN105255746B (zh) 一株对柑橘木虱具强致病力的宛氏拟青霉菌株及其应用
El-Hindi Safe approach to the Biological Control of the Tomato Leafminer Tuta absoluta by entomopathogenic fungi Beauveria bassiana isolates from Gaza Strip
CN101691542B (zh) Muscodor属植物内生真菌及其用途和杀菌剂
Peterson et al. STUDIES ON THE RELATIONSHIPS BETWEEN NEMATODES AND OTHER SOIL MICROORGANISMS: IV. INCIDENCE OF NEMATODE-TRAPPING FUNGI IN THE VICINITY OF PLANT ROOTS
Bhattacharyya et al. Fungal endophytes associated with the ethnomedicinal plant Meyna spinosa Roxb
CN104472221A (zh) 一种由天然冬虫夏草子实体发酵菌丝的方法
CN105543141A (zh) 一种降胆固醇菌制剂及其制备方法和用途
CN108130278B (zh) 马齿苋菌核青霉及其在制备抗青枯菌药物中的应用
CN105695342A (zh) 拟康氏木霉菌tc-72及其在黄曲霉菌生物防治中的应用
CN103421703B (zh) 反式乌头酸产生菌及应用
CN105779303A (zh) 一种铁皮石斛菌根真菌节菱孢菌株zj11c12及其应用
CN108913618A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌jspb14及其应用
CN105112315B (zh) 一种烟草普通花叶病毒生防内生菌粪产碱菌菌株
Bhai Preservation and long-term storage of Trichoderma spp. by sodium alginate encapsulation
CN108060110B (zh) 一种节杆菌菌株及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant