CN104000006B - 一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种固态白酒酒糟三阶段固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法。第一阶段发酵，采用丢糟为底物，A组芽孢杆菌组合种子液进行60℃高温发酵，成酒糟醅料。经过第一阶段发酵的酒糟醅料加入槐树叶粉、杨树叶粉、麸皮等辅料，接入白地霉、酵母、木霉的种子液调配成发酵醅料，进行第二阶段发酵，第二阶段发酵的终产物，接入B组芽孢杆菌组合种子液进行第三阶段发酵，发酵终产物为新鲜酒糟蛋白饲料或进行烘干粉碎、造粒、包装成颗粒酒糟蛋白饲料。采用本发明所述的方法制备的酒糟蛋白饲料，粗蛋白含量平均值为29～32%，与干酒糟粗蛋白对比，本发明制备的酒糟蛋白饲料的粗蛋白含量提高了58～74%。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域。具体涉及一种固态白酒酒糟三阶段固态发
酵制备酒糟蛋白饲料的方法。
背景技术
固态白酒糟是固态白酒酿造行业的副产品，据统计，我国每年产白酒酒糟达到2100万吨，数量大而且集中。若未及时加以处理，酒糟容易腐败变质，这不仅造成资源大量浪费，还会严重污染周围环境。因此，酒糟的综合利用对我国的资源开发和环境保护都具有非常重要的意义。
目前我国在酒糟综合利用方面研究已经取得了一定的成绩，主要开发成饲料和农肥。在酒糟饲料加工方面，国内多数企业采用直接利用固态白酒酒糟作畜禽饲料或酒糟烘干制成颗粒状饲料出售，但由于酒糟中粗蛋白含量、消化能、代谢能均较低，造成这种饲料附加值不高，且其中的高纤维素含量直接影响禽畜对营养成分的有效利用，所以寻求更加有效的途径开发酒糟资源生产饲料十分必要。研究表明，利用现代微生物发酵技术将多菌种组合接入酒糟中进行混菌固态发酵，有益微生物群在适宜条件下能够大量繁殖，分泌多种酶从而将纤维素等大分子营养物质进行部分降解、转化，并积累大量营养丰富的微生物菌体和有益代谢产物。采用现代生物技术的方法将酒糟转化为蛋白饲料，是酒糟饲料加工的发展趋势，它能实现经济效益、社会效益、环保效益三者的同步增长，带动酿酒业、饲料业和养殖业进入良性循环健康发展。
本专利技术采用三阶段混菌固态发酵新工艺。利用酱香型固态白酒的丢糟分别采用多菌种组合接入酒糟中，进行三阶段混菌固态发酵生产酒糟蛋白饲料。固态白酒酒糟通过多菌种组合微生物发酵及其所产酶类来消除饲料原料中的抗营养因子，积累大量营养丰富的微生物菌体和有益代谢产物，提高酒糟蛋白质的含量、降低纤维素含量和改善饲料适口性，提高营养物质利用率和营养价值。三阶段混菌固态发酵生产酒糟蛋白饲料不仅含有营养物质，而且还含有其他微生物代谢的产物如多种酶类和未知生长因子等，对动物促进生长和提高饲料消化率，改善畜产品品质等方面均是有益的。
发明内容
本发明利用酱香型固态白酒的丢糟固态发酵生产蛋白饲料，是采用三阶段混菌固态发酵新工艺。第一阶段发酵（初发酵），采用丢糟为底物，A组芽孢杆菌组合种子液进行60℃高温发酵，成酒糟醅料。经过第一阶段发酵的酒糟醅料加入槐树叶粉、杨树叶粉、麸皮等辅料，接入白地霉、酵母、木霉的种子液调配成发酵醅料，进行第二阶段发酵（中间发酵），第二阶段发酵的终产物，接入B组芽孢杆菌组合种子液进行第三阶段发酵（终发酵），发酵终产物为新鲜酒糟蛋白饲料或进行烘干粉碎、造粒、包装成颗粒酒糟蛋白饲料。
（一）种子菌液、种子培养基、酒糟降解液、辅料的制备：
1、A组芽孢杆菌组合种子菌液：
地衣芽孢杆菌20166二级种子菌液制备
（1）从斜面试管中挑出地衣芽孢杆菌20166，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到地衣芽孢杆菌20166一级种子菌液。
（2）将地衣芽孢杆菌20166一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到地衣芽孢杆菌20166二级种子菌液。
短小芽孢杆菌10440二级种子菌液制备
（1）从斜面试管中挑出短小芽孢杆菌10440，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到短小芽孢杆菌10440一级种子菌液。
（2）将短小芽孢杆菌10440一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到短小芽孢杆菌10440二级种子菌液。
将地衣芽孢杆菌20166二级种子菌液与短小芽孢杆菌10440二级种子菌液按照重量份3：1的比例配成A组芽孢杆菌组合种子菌液备用。
2、B组芽孢杆菌组合种子菌液：
枯草芽孢杆菌枯草亚种20872一级种子菌液的制备
（1）斜面试管中挑出枯草芽孢杆菌枯草亚种20872，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到枯草芽孢杆菌枯草亚种20872一级种子菌液。
（2）将枯草芽孢杆菌枯草亚种20872一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到枯草芽孢杆菌枯草亚种20872二级种子菌液。
枯草芽孢杆菌22974一级种子菌液的制备
（1）斜面试管中挑出枯草芽孢杆菌22974，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到枯草芽孢杆菌22974一级种子菌液。
枯草芽孢杆菌22974二级种子菌液的制备
（2）将枯枯草芽孢杆菌22974一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到枯草芽孢杆菌22974二级种子菌液。
将枯草芽孢杆菌枯草亚种20872二级种子菌液与枯草芽孢杆菌22974二级种子菌液按照重量份1：4的比例配成B组芽孢杆菌组合种子菌液备用。
3、热带假丝酵母二级种子菌液：
（1）斜面试管中挑出热带假丝酵母1254，接入热带假丝酵母种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到热带假丝酵母1254一级种子菌液。
（2）将热带假丝酵母1254一级种子菌液接入热带假丝酵母种子培养基，接种量为热带假丝酵母种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到热带假丝酵母1254二级种子菌液。
4、白地霉二级种子菌液：
（1）斜面试管中挑出白地霉1315，接入白地霉种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到白地霉1315一级种子菌液。
（2）将白地霉1315一级种子菌液接入白地霉种子培养基，接种量为白地霉种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到白地霉1315二级种子菌液。
5、康宁木霉13037种子菌液：
（1）从茄子瓶中刮下康宁木霉13037孢子粉，接入康宁木霉种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到康宁木霉13037一级种子菌液。
（2）将康宁木霉13037一级种子菌液接入康宁木霉种子培养基，接种量为康宁木霉种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到康宁木霉13037二级种子菌液。
本发明所述的芽孢杆菌种子培养基：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.21%，蛋白胨2.67%和酵母浸粉1.55%；调节初始pH值为7.0。
本发明所述的热带假丝酵母种子培养基：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77%；调节初始pH值为6.0。
本发明所述的白地霉种子培养基：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.33%，蛋白胨2.50%和酵母浸粉0.71%；调节初始pH值为4.5。
本发明所述的康宁木霉种子培养基：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77%；调节初始pH值为6.0。
本发明所述的酒糟降解液：取100重量份刚出窖的丢糟装入搅拌罐，加丢糟50%的重量份的50℃热水，加入由20％淀粉酶、20％糖化酶、40％蛋白酶、20％纤维素酶组分混合而成的复合酶，搅拌混合，酶解最适条件为：复合酶用量0.60g／lOOg丢糟，温度50℃，pH6.0。维持品温经过4小时降解，沉淀4～6小时，取上清液待用成酒糟降解液。40％蛋白酶由由枯草杆菌制备得到。
6、辅料：
（1）槐树叶粉：取晒干的槐树叶，经过饲料粉碎机粉碎过筛40目成槐树叶粉；
（2）杨树叶粉：取晒干的杨树叶，经过饲料粉碎机粉碎过筛40目成杨树叶粉；
（3）麸皮：市售。
（二）三阶段混菌固态发酵酒糟生产蛋白饲料
（1）第一阶段混菌固态发酵：以100重量份新鲜丢糟为底物，石灰调节pH值6.5，接入10%A组芽孢杆菌组合种子菌液，混匀装入麻袋，堆积发酵自然升温到60～65℃后，倒出麻袋平摊生产场地降温到45℃，再堆积发酵升温到60℃，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度在55～60℃之间，经2～3d发酵后，得到酒糟醅料。
（2）第二阶段混菌固态发酵：在第一阶段发酵结束的100重量份酒糟醅料中分别加入15～18%重量份槐树叶粉、10～12%重量份杨树叶粉、10～12%重量份麸皮、0.15%重量份磷酸氢二钾，0.1%重量份硫酸镁，2%重量份硫酸铵，同时在接入6%重量份白地霉二级种子菌液、6%重量份热带假丝酵母二级种子菌液、6%重量份康宁木霉的二级种子菌液，加水调节为含水量60～65%，混匀、扬散后制成发酵醅料。将发酵醅料直接在生产场地堆积发酵，发酵温度控制在32℃～34℃之间，堆积发酵时间6d，发酵过程采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度32℃～34℃之间。
（3）第三阶段混菌固态发酵：在第二阶段混菌固态发酵得到的100重量份发酵醅料中，分别接入12～18%B组芽孢杆菌组合种子菌液，在生产场地堆积发酵自然升温到60℃后，平摊降温至45～50℃，再堆积发酵，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度50～60℃之间。堆积发酵时间2d，得到新鲜酒糟蛋白饲料。该新鲜酒糟蛋白饲料具有特有酒香及酵母香味。
继续将新鲜酒糟蛋白饲料以55～65℃通风烘干、粉碎后，输送到造粒机制备成颗粒酒糟蛋白饲料。
采用本发明所述的方法制备的酒糟固态发酵制备的酒糟蛋白饲料，粗蛋白含量平均值为29～32%，与干酒糟粗蛋白含量18.35%对比，本发明制备的酒糟蛋白饲料的粗蛋白含量提高了58～74%。
本发明制备过程使用的菌种，均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（ChinaCenterofIndustrialCultureCollection,CICC），具体为：
1、短小芽孢杆菌（Bacilluspumilus）10440；
2、地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）20166；
3、枯草芽孢杆菌枯草亚种（Bacillussubtilissubsp.subtilis）20872；
4、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）22974；
5、热带假丝酵母（Candidatropicalis）1254；
6、白地霉（Geotrichumcandidum）1315；
7、康宁木霉（Trichodermakoningii）13037。
附图说明
图1是本发明所述的的酒糟三阶段固态发酵生产酒糟蛋白饲料制备过程流程图。
具体实施方式
实施例中涉及的A组芽孢杆菌组合种子菌液、B组芽孢杆菌组合种子菌液、枯草芽孢杆菌22974二级种子菌液、热带假丝酵母二级种子菌液、白地霉二级种子菌液、康宁木霉13037种子菌液以及辅料，均采用发明内容技术方案所描述的方法制备。
实施例中涉及的芽孢杆菌种子培养基、热带假丝酵母种子培养基、白地霉种子培养基、康宁木霉种子培养基、酒糟降解液均采用发明内容技术方案所描述的方法制备。
实施例中涉及的菌种，均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
实施例1
（1）第一阶段混菌固态发酵：以100kg新鲜丢糟为底物，石灰调节PH值6.5，接入10kgA组芽孢杆菌组合种子菌液，混匀装入麻袋，堆积发酵自然升温到63℃后，倒出麻袋平摊生产场地降温到45℃，再堆积发酵升温到60℃，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度55～60℃之间，发酵时间2d，产物为酒糟醅料。
（2）第二阶段混菌固态发酵：在第一阶段发酵结束后得到的110kg酒糟醅料中分别加入16kg槐树叶粉、11.1kg重量份杨树叶粉、11kg麸皮、0.16kg磷酸氢二钾，0.11kg硫酸镁，2.2kg硫酸铵，同时在接入6.6kg白地霉二级种子菌液、6.6kg热带假丝酵母二级种子菌液、6.6kg康宁木霉的二级种子菌液，加水调节为含水量60-65%，混匀、扬散后为发酵醅料。发酵醅料的在生产场地堆积发酵，发酵温度控制在32℃～34℃之间，堆积发酵时间6d，发酵过程采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度32℃～34℃之间。
（3）第三阶段混菌固态发酵：在第二阶段混菌固态发酵结束后得到的含水量60-65%的发酵醅料约为180kg，以此为基数，分别接入22kgB组芽孢杆菌组合种子菌液，在生产场地堆积发酵自然升温到60℃后，平摊降温至47℃，再堆积发酵，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度50～60℃之间。堆积发酵时间2d，得到200kg新鲜酒糟蛋白饲料。该新鲜酒糟蛋白饲料具有特有酒香及酵母香味。
（4）烘干、粉碎、造粒：将第三阶段混菌固态发酵得到的新鲜酒糟蛋白饲料或以55～65℃通风烘干、粉碎后，输送到造粒机制备成颗粒酒糟蛋白饲料。
采用本发明所述的方法制备的酒糟固态发酵生产酒糟蛋白饲料，粗蛋白含量平均值为29.64%。
实施例2
（1）第一阶段混菌固态发酵：以100kg新鲜丢糟为底物，石灰调节PH值6.5，接入10kgA组芽孢杆菌组合种子菌液，混匀装入麻袋，堆积发酵自然升温到65℃后，倒出麻袋平摊生产场地降温45℃，再堆积发酵升温60℃，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度55～60℃之间，发酵时间3d，产物为酒糟醅料。
（2）第二阶段混菌固态发酵：称取第一阶段发酵结束的100kg酒糟醅料中分别加入18kg槐树叶粉、10kg杨树叶粉、12kg麸皮、0.15kg磷酸氢二钾，0.1kg硫酸镁，2kg硫酸铵，同时在接入6kg白地霉二级种子菌液、6kg热带假丝酵母二级种子菌液、6kg康宁木霉的二级种子菌液，加水调节为含水量60-65%，混匀、扬散后为发酵醅料。发酵醅料的在生产场地堆积发酵，发酵温度控制在32℃～34℃之间，堆积发酵时间6d，发酵过程采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度32℃～34℃之间。
（3）第三阶段混菌固态发酵：称取第二阶段混菌固态发酵发酵结束的100kg酒糟醅料中，分别接入18kgB组芽孢杆菌组合种子菌液，在生产场地堆积发酵自然升温到60℃后，平摊降温至45～50℃，再堆积发酵，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度50～60℃之间。堆积发酵时间2d，得到新鲜酒糟蛋白饲料。该新鲜酒糟蛋白饲料具有特有酒香及酵母香味为酒糟蛋白饲料。
（4）烘干、粉碎、造粒：经第三阶段混菌固态发酵得到的新鲜酒糟蛋白饲料或新鲜酒糟蛋白饲料以55～65℃通风烘干、粉碎后，输送到造粒机制备成颗粒酒糟蛋白饲料。
采用本发明所述的方法制备的酒糟固态发酵生产蛋白饲料，粗蛋白含量平均值为31.27%。
Claims (13)
1.一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是：
（1）第一阶段混菌固态发酵
以100重量份新鲜丢糟为底物，石灰调节pH值6.5，接入10%A组芽孢杆菌组合种子菌液，混匀装入麻袋，堆积发酵自然升温到60～65℃后，倒出麻袋平摊生产场地降温到45℃，再堆积发酵升温到60℃，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度在55～60℃之间，经2～3d发酵后，得到酒糟醅料；
（2）第二阶段混菌固态发酵
在第一阶段发酵结束的100重量份酒糟醅料中分别加入15～18%重量份槐树叶粉、10～12%重量份杨树叶粉、10～12%重量份麸皮、0.15%重量份磷酸氢二钾、0.1%重量份硫酸镁和2%重量份硫酸铵，同时再接入6%重量份白地霉二级种子菌液、6%重量份热带假丝酵母二级种子菌液、6%重量份康宁木霉的二级种子菌液，加水调节为含水量60～65%，混匀、扬散后制成发酵醅料；
将发酵醅料直接在生产场地堆积发酵，发酵温度控制在32℃～34℃之间，堆积发酵时间6d，发酵过程采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度32℃～34℃之间；
（3）第三阶段混菌固态发酵
在第二阶段混菌固态发酵得到的100重量份发酵醅料中，分别接入12～18%B组芽孢杆菌组合种子菌液，在生产场地堆积发酵自然升温到60℃后，平摊降温至45～50℃，再堆积发酵，采用翻堆、堆积、平摊方式维持发酵温度50～60℃之间，堆积发酵时间2d，得到新鲜酒糟蛋白饲料；
经第三阶段混菌固态发酵得到新鲜酒糟蛋白饲料，以55～65℃通风烘干、粉碎后，输送到造粒机制备成颗粒酒糟蛋白饲料。
2.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的A组芽孢杆菌组合种子菌液，其制备过程如下：
（1）从斜面试管中挑出地衣芽孢杆菌20166，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到地衣芽孢杆菌20166一级种子菌液；
（2）将地衣芽孢杆菌20166一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到地衣芽孢杆菌20166二级种子菌液；
（3）从斜面试管中挑出短小芽孢杆菌10440，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到短小芽孢杆菌10440一级种子菌液；
（4）将短小芽孢杆菌10440一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到短小芽孢杆菌10440二级种子菌液；
将地衣芽孢杆菌20166二级种子菌液与短小芽孢杆菌10440二级种子菌液按照重量份3：1的比例配成A组芽孢杆菌组合种子菌液。
3.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的B组芽孢杆菌组合种子菌液，其制备过程如下：
（1）斜面试管中挑出枯草芽孢杆菌枯草亚种20872，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到枯草芽孢杆菌枯草亚种20872一级种子菌液；
（2）将枯草芽孢杆菌枯草亚种20872一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到枯草芽孢杆菌枯草亚种20872二级种子菌液；
（3）斜面试管中挑出枯草芽孢杆菌22974，接入芽孢杆菌种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到枯草芽孢杆菌22974一级种子菌液；
（4）将枯草芽孢杆菌22974一级种子菌液接入芽孢杆菌种子培养基，接种量为芽孢杆菌种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到枯草芽孢杆菌22974二级种子菌液；
将枯草芽孢杆菌枯草亚种20872二级种子菌液与枯草芽孢杆菌22974二级种子菌液按照重量份1：4的比例配成B组芽孢杆菌组合种子菌液。
4.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的热带假丝酵母二级种子菌液，其制备过程如下：
（1）斜面试管中挑出热带假丝酵母1254，接入热带假丝酵母种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到热带假丝酵母1254一级种子菌液；
（2）将热带假丝酵母1254一级种子菌液接入热带假丝酵母种子培养基，接种量为热带假丝酵母种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到热带假丝酵母1254二级种子菌液。
5.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的白地霉二级种子菌液，其制备过程如下：
（1）斜面试管中挑出白地霉1315，接入白地霉种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到白地霉1315一级种子菌液；
（2）将白地霉1315一级种子菌液接入白地霉种子培养基，接种量为白地霉种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到白地霉1315二级种子菌液。
6.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的康宁木霉的二级种子菌液，其制备过程如下：
（1）从茄子瓶中刮下康宁木霉13037孢子粉，接入康宁木霉种子培养基，调节pH值为6.8，培养温度34℃，摇瓶转速为200r／min，培养时间36h，得到康宁木霉13037一级种子菌液；
（2）将康宁木霉13037一级种子菌液接入康宁木霉种子培养基，接种量为康宁木霉种子培养基重量的10%，调节pH值为6.0，培养温度34℃，通气量0.05～0.1m3/（m3·min），培养时间96h，得到康宁木霉的二级种子菌液。
7.根据权利要求2或3所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的芽孢杆菌种子培养基，其制备过程如下：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.21%，蛋白胨2.67%和酵母浸粉1.55%；调节初始pH值为7.0。
8.根据权利要求4所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的热带假丝酵母种子培养基，其制备过程如下：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77%；调节初始pH值为6.0。
9.根据权利要求5所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的白地霉种子培养基：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.33%，蛋白胨2.50%和酵母浸粉0.71%；调节初始pH值为4.5。
10.根据权利要求6所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的康宁木霉种子培养基：以酒糟降解液100重量份为基础，添加葡萄糖1.56%，蛋白胨1.88%和酵母浸粉0.77%；调节初始pH值为6.0。
11.根据权利要求7所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的酒糟降解液：取100重量份刚出窖的丢糟装入搅拌罐，加丢糟50%的重量份的50℃热水，加入由20％淀粉酶、20％糖化酶、40％蛋白酶、20％纤维素酶组分混合而成的复合酶，搅拌混合，酶解最适条件为：复合酶用量0.60g／l00g丢糟，温度50℃，pH6.0，维持品温经过4小时降解，沉淀4～6小时，取上清液待用成酒糟降解液。
12.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的槐树叶粉，其制备过程如下：取晒干的槐树叶，经过饲料粉碎机粉碎过筛40目成槐树叶粉。
13.根据权利要求1所述的一种三阶段混菌固态发酵制备酒糟蛋白饲料的方法，其特征是所述的杨树叶粉，其制备过程如下：取晒干的杨树叶，经过饲料粉碎机粉碎过筛40目成杨树叶粉。
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