CN106173204B - 一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲料的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料经混合菌种发酵制备高蛋白饲料的方法。以柠檬酸发酵产生的玉米淀粉渣和菌丝渣作为固态培养基，添加复合酶制剂和混合菌种进行固态发酵，发酵后的产品经烘干、粉碎制成高蛋白饲料产品。本发明利用生物发酵技术对柠檬酸生产中的玉米淀粉渣和菌丝渣进行高效利用，提高了柠檬酸发酵渣料的利用价值，使其成为具有高附加值的新型蛋白饲料。发酵后的高蛋白饲料富含大量菌体蛋白、有机酸、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素、生物酶类及增强动物免疫力的多肽、小肽等物质，具有很高的营养价值，兼具营养、诱食及益生等多种功能，利于动物消化吸收，改善动物消化机能，增强动物免疫力。

Description

一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲 料的方法

技术领域

本发明涉及柠檬酸料渣发酵领域，尤其涉及一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲料的方法。

背景技术

我国是柠檬酸生产大国，柠檬酸产量位居世界第一，目前柠檬酸工业生产常用的原料主要是玉米，以玉米作为原料生产柠檬酸，具有低能耗、低污染、高效益等优点，越来越受到柠檬酸生产企业的青睐，而玉米发酵废渣产量也呈急剧上升之势，以玉米发酵制备柠檬酸产生的主要副产物是玉米淀粉渣和菌丝渣。玉米淀粉渣为玉米经液化后过滤得到的渣料，水分含量为50-60％，由于液化过程仅消耗了玉米淀粉，玉米淀粉渣中含有多种营养成分如粗蛋白、多糖、脂肪、粗纤维、氨基酸、维生素等；菌丝渣则是柠檬酸发酵液经压榨过滤后得到的渣料，水分含量为60-70％，由于经过微生物发酵，菌丝渣中含有大量的黑曲霉菌丝体以及菌体蛋白，并含有糖类、脂肪、无机盐、维生素等以及1-3％的柠檬酸。柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣富含多种营养物质，但是可被动物有效吸收利用的成分有限，目前柠檬酸生产企业一般将玉米淀粉渣和菌丝渣按照一定比例混合、烘干作为饲料原料直接出售给饲料厂，经混合后的柠檬酸废渣中含总糖约30-36％，粗纤维10-15％，粗蛋白20-26％，粗脂肪11-16％，灰分2.5-3.5％。因未对各种营养成分进行提取分离，柠檬酸渣料蛋白质含量有限，粗纤维含量高，动物食用后不易吸收和利用，一般需与其他动物饲料搭配使用且在饲料中添加量有限，在饲料行业中未能得到充分利用，售价一直较低。

如何能够实现上述两种废料的更好再生利用，创造更高的附加值，成为现有技术亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明针对现有技术的上述情况，提供了一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料经混合菌种发酵制备高蛋白饲料的方法。以柠檬酸发酵产生的玉米淀粉渣和菌丝渣作为固态培养基，添加复合酶制剂和混合菌种进行固态发酵，发酵后的产品经烘干、粉碎制成高蛋白饲料产品。本发明利用生物发酵技术对柠檬酸生产中的玉米淀粉渣和菌丝渣进行高效利用，提高了柠檬酸发酵渣料的利用价值，使其成为具有高附加值的新型蛋白饲料。发酵后的高蛋白饲料富含大量菌体蛋白、有机酸、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素、生物酶类及增强动物免疫力的多肽、小肽等物质，具有很高的营养价值，兼具营养、诱食及益生等多种功能，利于动物消化吸收，改善动物消化机能，增强动物免疫力。

本发明所采用的技术方案如下：

一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲料的方法，其具体步骤为：

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于30-35℃条件下培养24-32小时；

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为30-35℃，培养36-48小时，摇床转速为150-250rpm，得到各菌种的菌液，各菌液中活菌数为2-6×10⁹cfu/mL；

(3)配制固态发酵培养基：将柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1：1.5-4混合并搅拌均匀，湿度控制在55-65％；用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为4.8-5.5，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：上述固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶5-10mg，纤维素酶6-8mg，淀粉酶6-12mg，蛋白酶10-15mg；在33-38℃保温发酵3-5小时；

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态培养基中，添加量按照步骤(3)中固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.4-0.8％，米曲霉菌1.5-2.0％；搅拌均匀，在温度为28-35℃的条件下，培养48-60小时，获得一段发酵培养液；

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照步骤(3)中固态发酵培养基重量计为0.6-1.2％；搅拌均匀，在温度为28-35℃的条件下，培养60-72小时；

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，粉碎成粉末状，即可得到高蛋白饲料。

上述获得的饲料中蛋白质含量可达到45-60％，纤维素含量降低到2.5-4.0％。

为了更好的适应微生物菌种的生长，可在步骤(3)配制固态发酵培养基时，按柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣混合物质量加入1-1.5％硫酸铵、0.4-0.6％磷酸二氢钾，0.1-0.2％硫酸镁。

本发明采用混合菌种协同发酵，经前期进行菌种优化筛选，采用的混合菌种包括产阮假丝酵母、枯草芽孢杆菌和米曲霉，上述产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉均购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体可选择为米曲霉(菌种保藏号CGMCC3.4437)、枯草芽孢杆菌(菌种保藏号CGMCC1.831)、产阮假丝酵母(菌种保藏号CGMCC2.2066)，除上述备选菌种除上述备选外，还可采用其他备选的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌种；

产阮假丝酵母中蛋白质和维生素B的含量均较高，可利用各种工业废液进行发酵生产出动物可利用的蛋白质。米曲霉是一类产复合酶的菌株，可产蛋白酶、淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等。在淀粉酶、糖化酶、纤维素酶的作用下，可将原料中的直链、支链淀粉、纤维素降解为糊精及各种小分子糖类，酵母菌以这些糖类为营养生长繁殖，将其转化为菌体蛋白，不断增加产物中蛋白质含量；在蛋白酶的作用下，可将渣料中不易消化的大分子蛋白降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可使原料中的粗纤维、植酸等难吸收的物质降解，提高渣料的营养价值、保健功效和消化率。枯草芽孢杆菌可产纤维素酶，降解纤维素，且在生长过程中可产生枯草菌素、制霉菌素、短杆菌肽等多种对致病菌有明显抑制作用的活性物质，菌体中含有不易致死的芽孢，饲喂时以活菌状态进入动物的消化系统，可抑制肠道中有害菌的生长。

为提高微生物发酵效率、增强发酵效果，在利用混合菌种进行发酵之前，本发明在固态培养基中添加了复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、中温淀粉酶、蛋白酶以初步分解渣料中的淀粉、纤维素、果胶及粗蛋白等物质。同时采用两段式固态发酵，在固态培养基上首先接入枯草芽孢杆菌和米曲霉，将培养基中的淀粉、纤维素、果胶等物质进一步分解为小分子糖类，然后接入产阮假丝酵母可直接利用已产生的小分子糖类进行繁殖生长，产生大量的菌体蛋白。

柠檬酸玉米淀粉渣为玉米经液化后的产物，仅消耗了玉米中的淀粉，其他营养成分不仅未减少，反而相对增加，其与菌丝渣混合经产阮假丝酵母发酵产生大量菌体蛋白，菌体蛋白氨基酸齐全，配比组成合理，是一种营养价值高的优质蛋白，可促进动物新陈代谢，提高动物生长速度和繁殖能力。且微生物产生的各种酶类及活性因子能够抑制肠道中有害菌的生长、促进动物体内有益菌体的繁殖，从而提高动物的免疫力和抗病能力。

本发明在固态发酵过程中添加多种益生菌和酶制剂，可产生大量菌体蛋白、多种有机酸、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素、生物酶类及增强动物免疫力的多肽、小肽等物质，使得饲料不仅含有丰富的活性蛋白质及各类易消化吸收的营养成分，还含有足量的益生菌，大大提高了柠檬酸渣料的营养水平和消化利用率。且在发酵过程中会产生一定的香气成分，可增加动物的适口性，促进消化液的分泌，刺激动物食欲。经本发明混合菌种发酵制备的饲料具有营养、诱食及益生等多种功能，经测定蛋白质含量可提高到45-60％，纤维素降低到2.5-4.0％，且饲料中含有多种利于吸收的营养成分及益生菌类。

本发明的有益效果为：

从发酵原料来看，本发明利用柠檬酸企业的副产品玉米淀粉渣和菌丝渣作为原料进行微生物发酵，原料价格低廉且易于获取，制备获得的饲料营养丰富、易于吸收，提高了柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣的利用附加值。

从饲料品质来看，经微生物发酵后，柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣中难以被消化利用的淀粉、纤维素、果胶等物质分解转化为单糖或多糖以进一步被利用；无机蛋白质则分解转化为多肽、小肽、氨基酸。本发明利用混合菌种进行发酵，并加入复合酶制剂进行协同发酵分解，可获得良好的生物转化效率；玉米淀粉渣和菌丝渣经发酵分解后含有多种有益微生物活菌、菌体蛋白以及消化酶和小分子类营养物质，能够被动物充分吸收利用。混合菌种发酵还可提高饲料的安全性，能够发酵脱毒。

从经济和社会效益来看，本发明经济价值高，对柠檬酸发酵产生的玉米淀粉渣和菌丝渣进行微生物发酵，方法安全高效绿色，从根本上改变了玉米淀粉渣和菌丝渣营养价值有限、利用价值低的缺点，投放市场后能有很高的经济回报；利用本发明生产的高蛋白饲料，所用原料易于获取，且价格低廉，制备工艺简单，适于规模化工业生产。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明，应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

培养枯草芽孢杆菌、产阮假丝酵母和米曲霉的斜面培养基为马铃薯琼脂培养基，其配制方法按照行业内常用的方法进行，将马铃薯洗净去皮切成薄片，称取200g加蒸馏水煮沸，保持微沸30min，用四层纱布过滤，滤液中加入35-40g葡萄糖，20g琼脂，补水至1000ml，分装至试管中，121℃灭菌20min，冷却后备用。

用于菌种扩大培养的为马铃薯液体培养基，也按照行业内常用方法进行，将马铃薯洗净去皮切成薄片，称取200g加蒸馏水煮沸，保持微沸30min，用四层纱布过滤，滤液中加入20g葡萄糖，补水至1000ml，用三角瓶分装，121℃灭菌20min，冷却后备用。

本发明所用菌种购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；本实施中选自米曲霉(菌种保藏号CGMCC3.4437)、枯草芽孢杆菌(菌种保藏号CGMCC1.831)、产阮假丝酵母(菌种保藏号CGMCC2.2066)，但不局限于上述选择。

下面结合实施例对本发明的技术特征作进一步的说明。

实施例1：

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于33℃条件下培养28小时。

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为33℃，培养42小时，摇床转速为200rpm，得到各菌种的菌液，其中产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌液中活菌数分别为3.5×10⁹cfu/mL、5.9×10⁹cfu/mL、2.6×10⁹cfu/mL。

(3)配制固态发酵培养基：取柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1:2.5进行混合并搅拌均匀，添加少量水分使料渣湿度为60％；按柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣混合物质量加入1.2％硫酸铵、0.5％磷酸二氢钾，0.15％硫酸镁；用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为5.2，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶8mg，纤维素酶7mg，淀粉酶10mg，蛋白酶12mg，在35℃保温发酵4小时。

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态发酵培养基中，添加量按照固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.7％，米曲霉菌1.8％，搅拌均匀，在温度为30℃的条件下，培养52小时，获得一段发酵培养液。

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照固态发酵培养基重量计为1.1％，搅拌均匀，在温度为30℃的条件下，培养66小时。

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态发酵培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，并粉碎成粉末状，得到高蛋白饲料，其中蛋白质含量可达到58％，纤维素含量降低到2.1％。

实施例2：

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于33℃条件下培养28小时。

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为33℃，培养42小时，摇床转速为200rpm，得到各菌种的菌液，其中产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌液中活菌数分别为3.6×10⁹cfu/mL、5.5×10⁹cfu/mL、2.8×10⁹cfu/mL。

(3)配制固态发酵培养基：取柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1:2.5进行混合并搅拌均匀，添加少量水分使料渣湿度为60％；用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为4.9，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温。

(4)添加复合酶制剂：固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶8mg，纤维素酶7mg，淀粉酶10mg，蛋白酶12mg。在35℃保温发酵4小时。

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态发酵培养基中，添加量按照固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.6％，米曲霉菌1.8％。搅拌均匀，在温度为30℃的条件下，培养52小时，获得一段发酵培养液。

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照固态发酵培养基重量计为1.0％。搅拌均匀，在温度为30℃的条件下，培养66小时。

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态发酵培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，并粉碎成粉末状，得到高蛋白饲料，其中蛋白质含量可达到52％，纤维素含量降低到2.9％。

实施例3

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于30℃培养32小时。

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为30℃，培养48小时，摇床转速为250rpm，得到各菌种的菌液，其中产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌液中活菌数分别为3.0×10⁹cfu/mL、5.8×10⁹cfu/mL、2.3×10⁹cfu/mL。

(3)配制固态发酵培养基：取柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1:4进行混合并搅拌均匀，添加少量水分使料渣湿度为65％。用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为5.0，，并加入1.5％硫酸铵、0.6％磷酸二氢钾，0.2％硫酸镁，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶10mg，纤维素酶8mg，淀粉酶12mg，蛋白酶15mg。在38℃保温发酵3小时。

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态发酵培养基中，添加量按照固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.4％，米曲霉1.5％。搅拌均匀，在温度为35℃的条件下，培养48小时，获得一段发酵培养液；

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照固态发酵培养基重量计为0.6％。搅拌均匀，在温度为35℃的条件下，培养60小时；

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态发酵培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，并粉碎成粉末状，得到高蛋白饲料，其中蛋白质含量可达到51％，纤维素含量降低到3.3％。

实施例4

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于35℃培养24小时；

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为35℃，培养36小时，摇床转速为150rpm，得到各菌种的菌液，其中产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌液中活菌数分别为4.2×10⁹cfu/mL、5.8×10⁹cfu/mL、2.5×10⁹cfu/mL；

(3)配制固态发酵培养基：取柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1:1.5进行混合并搅拌均匀，使料渣湿度为55％。用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为4.8，并加入1.0％硫酸铵、0.4％磷酸二氢钾，0.1％硫酸镁，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶5mg，纤维素酶6mg，淀粉酶6mg，蛋白酶10mg。在33℃保温发酵5小时。

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态发酵培养基中，添加量按照固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.8％，米曲霉菌2.0％。搅拌均匀，在温度为28℃的条件下，培养60小时，获得一段发酵培养液；

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照固态发酵培养基重量计为1.2％。搅拌均匀，在温度为28℃的条件下，培养72小时；

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态发酵培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，并粉碎成粉末状，得到高蛋白饲料，其中蛋白质含量可达到55％，纤维素含量降低到3.1％。

实施例5

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于30℃培养32小时。

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为30℃，培养48小时，摇床转速为250rpm，得到各菌种的菌液，其中产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌液中活菌数分别为3.0×10⁹cfu/mL、5.8×10⁹cfu/mL、2.3×10⁹cfu/mL。

(3)配制固态发酵培养基：取柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1:4进行混合并搅拌均匀，添加少量水分使料渣湿度为65％；用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为5.5，并加入1.5％硫酸铵、0.6％磷酸二氢钾，0.2％硫酸镁，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶10mg，纤维素酶8mg，淀粉酶12mg，蛋白酶15mg。在38℃保温发酵3小时。

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态发酵培养基中，添加量按照固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.4％，米曲霉1.5％。搅拌均匀，在温度为35℃的条件下，培养48小时，获得一段发酵培养液；

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照固态发酵培养基重量计为0.6％。搅拌均匀，在温度为35℃的条件下，培养60小时；

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态发酵培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，并粉碎成粉末状，得到高蛋白饲料，其中蛋白质含量可达到51％，纤维素含量降低到3.3％。

实施例6

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于35℃培养24小时；

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为35℃，培养36小时，摇床转速为150rpm，得到各菌种的菌液，其中产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉菌液中活菌数分别为4.2×10⁹cfu/mL、5.8×10⁹cfu/mL、2.5×10⁹cfu/mL；

(3)配制固态发酵培养基：取柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1:1.5进行混合并搅拌均匀，使料渣湿度为55％。用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为4.8，并加入1.0％硫酸铵、0.4％磷酸二氢钾，0.1％硫酸镁，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶5mg，纤维素酶6mg，淀粉酶6mg，蛋白酶10mg。在33℃保温发酵5小时。

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态发酵培养基中，添加量按照固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.8％，米曲霉菌2.0％。搅拌均匀，在温度为28℃的条件下，培养60小时，获得一段发酵培养液；

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照固态发酵培养基重量计为1.2％。搅拌均匀，在温度为28℃的条件下，培养72小时；

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态发酵培养基进行烘干，至水分含量为10％左右，并粉碎成粉末状，得到高蛋白饲料，其中蛋白质含量可达到49％，纤维素含量降低到3.4％。

本发明的上述实施例仅仅是为说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可作出其他不同形式的变化和变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍属于本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲料的方法，其特征在于：其具体步骤为：

(1)菌种活化：将低温保藏的产阮假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉分别接种到马铃薯琼脂斜面培养基上，于30-35℃条件下培养24-32小时；

(2)菌种扩大培养：将活化的菌种分别接种到装有马铃薯液体培养基的三角瓶中进行摇床扩大培养，培养温度为30-35℃，培养36-48小时，摇床转速为150-250rpm，得到各菌种的菌液，各菌液中活菌数分别为：产阮假丝酵母菌3.0-4.2×10⁹cfu/mL，枯草芽孢杆菌5.5-5.9×10⁹cfu/mL，米曲霉2.3-2.8×10⁹cfu/mL；

(3)配制固态发酵培养基：将柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣按照质量比1：1.5-4混合并搅拌均匀，湿度控制在55-65％；用10wt％的氢氧化钠溶液将混合料的pH值调整为4.8-5.5，在121℃条件下，高温高压灭菌20min，自然冷却至室温；

(4)添加复合酶制剂：上述固态发酵培养基中添加复合酶制剂，包括糖化酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶，添加量按照每公斤料渣计分别为：糖化酶5-10mg，纤维素酶6-8mg，淀粉酶6-12mg，蛋白酶10-15mg；在33-38℃保温发酵3-5小时；

(5)一段固态发酵：将米曲霉和枯草芽孢杆菌菌液接种固态培养基中，添加量按照步骤(3)中固态发酵培养基重量计分别为：枯草芽孢杆菌0.4-0.8％，米曲霉1.5-2.0％；搅拌均匀，在温度为28-35℃的条件下，培养48-60小时，获得一段发酵培养液；

(6)二段固态发酵：将产阮假丝酵母菌菌液接种到一段固态发酵培养液中，菌种添加量按照步骤(3)中固态发酵培养基重量计为0.6-1.2％；搅拌均匀，在温度为28-35℃的条件下，培养60-72小时；

(7)烘干、粉碎：将发酵完成的固态培养基进行烘干，至水分含量为10％，粉碎成粉末状，即可得到高蛋白饲料；

步骤(3)配制固态发酵培养基时，按柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣混合物质量加入1-1.5％硫酸铵、0.4-0.6％磷酸二氢钾，0.1-0.2％硫酸镁；

所选用的米曲霉、枯草芽孢杆菌和产阮假丝酵母均购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体可选择为米曲霉：菌种保藏号CGMCC3.4437、枯草芽孢杆菌：菌种保藏号CGMCC1.831、产阮假丝酵母：菌种保藏号CGMCC2.2066。