CN103957997A - 含有顺序发酵或同时发酵的提取物的组合物 - Google Patents

含有顺序发酵或同时发酵的提取物的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN103957997A
CN103957997A CN201280052827.6A CN201280052827A CN103957997A CN 103957997 A CN103957997 A CN 103957997A CN 201280052827 A CN201280052827 A CN 201280052827A CN 103957997 A CN103957997 A CN 103957997A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pseudomonas
microorganism
belongs
compositions
pore fungi
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201280052827.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103957997B (zh
Inventor
詹姆斯·文森特·格鲁伯
史密瑟·拉奥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Arch Personal Care Products LP
Original Assignee
Arch Personal Care Products LP
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Arch Personal Care Products LP filed Critical Arch Personal Care Products LP
Publication of CN103957997A publication Critical patent/CN103957997A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103957997B publication Critical patent/CN103957997B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/02—Algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9706—Algae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P39/00—Processes involving microorganisms of different genera in the same process, simultaneously
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/524—Preservatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/59—Mixtures
    • A61K2800/592—Mixtures of compounds complementing their respective functions
    • A61K2800/5922—At least two compounds being classified in the same subclass of A61K8/18
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种含有来自同时发酵或顺序发酵的发酵提取物的局部用组合物。当局部涂敷皮肤时，本发明的组合物可有效刺激皮肤细胞中的透明质酸、CD44和半胱天冬酶14蛋白质的产生。

Description

含有顺序发酵或同时发酵的提取物的组合物
技术领域
本发明涉及适合用于个人护理和治疗应用的组合物，更具体地，本发明涉及含有双重发酵提取物的这种组合物。
背景技术
通过诸如酵母菌(Saccharomyces sp.)或乳酸杆菌(Lactobacillussp.)之类的单一微生物发酵得到的提取物是已知的并已经被用于局部用组合物。最近，美国专利申请公开第2010/0021532号表明来源于微生物与植物的多酚的发酵已经作为产生对皮肤具有有益效果的代谢物的方法公开。
已在食品工业范围内，特别是在酿酒工艺中探索了多种发酵剂培养物微生物的使用和共培养的多种微生物的构思(参见例如，Toro M.E等，World Journal of Microbiology and Biotechnology18:347–354.(2002)和HerreroM.等，Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology22:48–51(1999))。据建议，多种发酵剂酒的味道和生化概貌可优于单一培养接种的酒的味道和生化概貌，由于在多种发酵剂微生物酿酒过程中微生物的相互作用对增强的味道起关键的影响作用，Ciani M.等，International Journal of FoodMicrobiology108:239–245(2006)。然而，不建议将多种发酵剂培养物用于个人护理产品。
最近，酵母菌及其衍生物的使用在美容应用中越来越受欢迎。这由如下事实引起：作为真核生物的酵母菌具有与人体细胞相似的细胞生物学过程，并且已知其在应激下引发有益蛋白的产生。同时还有使用酵母菌衍生物及其在局部皮肤施用中提高摄氧量的益处的大量历史证据。例如，美国专利第4,540,571号公开了酵母菌衍生物促进皮肤呼吸作用。还报道了酵母细胞衍生物刺激皮肤细胞中的胶原和弹性蛋白的生成。
最近的研究表明酵母细胞提取物能够产生刺激伤口愈合的‘生长因子’。例如，美国专利第7,217,417号公开了将酵母细胞衍生物加入用于伤口愈合的基于凝胶的制剂的方法。
本领域还没有报道同时使用发酵提取物或按顺序使用发酵提取物获得新的活性物质。
发明内容
一方面，本发明提供含有从至少两种微生物的同时发酵或顺序发酵过程中取出的发酵提取物的局部用组合物。
另一方面，本发明提供一种含有从至少两种微生物的同时发酵或顺序发酵过程中取出的发酵提取物、足以对所述发酵提取物起灭菌或生物静态作用的防腐剂以及皮肤病学上可接受的载体的局部用组合物。
本发明提供的一种示例性局部用组合物含有第一微生物和第二微生物的双重发酵提取物，所述第一微生物为谢氏丙酸杆菌(Propionibacteriumshermanii)，所述第二微生物为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。
本发明提供的另一示例性局部用组合物含有第一微生物和第二微生物的双重发酵提取物，所述第一微生物为微藻，所述第二微生物为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。
本发明还提供一种含有以下加工步骤的制备发酵提取物的方法：使用通过化学方法定义的第一营养培养基使第一微生物生长至对数生长后期以生成含有第一微生物和由第一微生物表达的次级代谢产物的第二营养培养基；使第二营养培养基与第二微生物接触；使第一微生物和第二微生物在第二营养培养基中同时发酵以生成含有水溶性部分和水不溶性部分的发酵混合物；从发酵混合物中分离水不溶性部分，由此隔离水溶性部分并生成双重发酵提取物。
本发明的另一方面为通过对需要用含有双重发酵提取物的局部用组合物治疗的使用者的皮肤施用局部用组合物来刺激皮肤细胞中透明质酸和CD44的产生的方法。
本发明的另一方面为通过对需要用含有双重发酵提取物的局部用组合物治疗的使用者的皮肤施用局部用组合物来刺激皮肤细胞中透明质酸和半胱天冬酶-14的产生的方法。
在阅读本发明的具体描述时，本发明的上述这些方面和其它方面将会是显而易见的。
附图说明
图1是用于比较的乳杆菌科发酵提取物的GC-MS图谱。
图2是用于比较的丙酸杆菌科发酵提取物的GC-MS图谱。
图3是来自乳杆菌科和丙酸杆菌科同时发酵的双重发酵提取物的GC-MS谱。
图4表示用乳杆菌科发酵提取物、丙酸杆菌科发酵提取物和来自乳杆菌科和丙酸杆菌科同时发酵的双重发酵提取物处理的全层组织中的HAS1表达。
图5表示用乳杆菌科发酵提取物、丙酸杆菌科发酵提取物和来自乳杆菌科和丙酸杆菌科同时发酵的双重发酵提取物处理的全层组织中的CD44表达。
图6A、6B和6C分别表示未经处理的体外角质层破坏模型中的透明质酸表达。
图6B表示用视黄醇处理的体外角质层破坏模型中的透明质酸表达。
图6C表示用来自乳杆菌科和微藻的同时发酵的双重发酵提取物处理的体外角质层破坏模型中的透明质酸表达。
图7A表示未经处理的处理的体外角质层破坏模型中的半胱天冬酶-14表达。
图7B表示用视黄醇处理的体外角质层破坏模型中的半胱天冬酶-14表达。
图7C表示用来自乳杆菌科和微藻的同时发酵的双重发酵提取物处理的体外角质层破坏模型中的半胱天冬酶-14表达。
图8A和8B显示施用微藻和乳杆菌科双重发酵物后，通过皮肤弹性测量仪(cutometer)对皮肤弹性的体内评价。
图9A和9B显示施用微藻和乳杆菌科双重发酵物后，对细纹和皱纹的体内评价。
图10A和10B显示施用微藻和乳杆菌科双重发酵物后，对眼周部位的细纹和皱纹的体内Silflo评价。
具体实施方式
目前本发明出乎意料地发现含有从至少两种微生物的同时发酵或顺序发酵过程中取出的发酵提取物的局部用组合物在用于个人护理和治疗用途的局部用组合物中具有有益性质。所述有益性质包括，例如，当含有所述发酵提取物的组合物局部施用于皮肤时，发现该组合物在刺激皮肤细胞中的透明质酸、CD44和半胱天冬酶14的蛋白的生成方面是有效的。
在不受任何理论束缚的条件下，相信同时发酵或顺序发酵使一种微生物可与另一微生物竞争。在存在来自第一微生物的代谢产物的条件下，第二微生物的竞争环境使第二微生物开始表达使其在该竞争环境中生长旺盛的代谢产物。具体而言，第二微生物可代谢来自第一微生物的次级代谢产物和细胞因子，反之，第一微生物也可代谢来自第二微生物的次级代谢产物和细胞因子。因此，发酵提取物变成含有独特的代谢活性物质的新组合物，而所述独特的代谢活性物质不能在上述微生物单独发酵时得到。
为了制备本发明的发酵提取物，在一种实施方式中，使第一微生物在通过化学方法定义的营养培养基中生长。如本文所使用的“通过化学方法定义的营养培养基”是指含有用于微生物生长的营养物质的特定化学来源的培养基，例如氮、碳的化学来源等。通过化学方法定义的营养培养基一般不含营养物质的生物来源，例如酵母菌或动物/植物组织营养物质。第一微生物通过表达次级代谢产物改良营养培养基。次级代谢产物包括蛋白、细胞因子、多糖、核酸等。接着，第二微生物可接种于含有第一微生物和来自第一微生物的代谢产物的改良的营养培养基中。然后，使第一微生物和第二微生物在改良的营养培养基中同时发酵以生成发酵混合物。可选地，在第一微生物发酵之后，使第二微生物在改良的营养培养基中发酵。一般而言，所述发酵会含有水溶性部分和水不溶性部分。可从发酵混合物中除去水不溶性部分，由此分离水溶性部分(本发明的发酵提取物)。本文使用的“水溶性”是指溶于1克水中的1克双重发酵提取物。所述提取物还可溶于水/有机溶剂混合物，所述水/有机溶剂混合物例如，但不限于，水性乙二醇和水性丙三醇。
如本文使用的“发酵提取物”是指来自两种或两种以上微生物的发酵的组合物。本发明的发酵提取物含有来自两种微生物的细胞质成分和细胞外成分，包括，但不限于，营养肉汤(nutrient broth)、细胞蛋白物质、细胞核物质、细胞原生质物质和/或细胞壁成分等。
当两种微生物同时或按顺序生长时，该过程在本文中称作为“双重发酵”。来自双重发酵的发酵提取物在本文中称作为“双重发酵提取物”。如本文所述的，实例涉及用于制备双重发酵提取物的双重发酵；然而，预期额外的微生物可同时或按顺序进行发酵。
一般而言，为了制备双重发酵提取物，使第一微生物在生长培养基中生长至对数生长后期。如本文使用的“对数生长后期”是指微生物培养物的指数生长的最后阶段。指数生长的特征为指数的细胞生长或加倍的细胞生长。指数生长的持续时间取决于在给定时间存在的微生物的种群数量以及培养基中营养物质的可用性。典型地，使第一微生物生长直至600nm下的光密度为至少约6。使第一微生物在规定的温度范围下生长持续规定的时间段。在无菌转移罐中收集得到的改良的营养培养基。可进一步纯化改良的营养培养基以除去第一微生物。可选地，在添加诸如乳杆菌之类的第二微生物的过程中，可使第一微生物保留在改良的培养基中。通过光密度和活菌数(600nm下光密度至少为6；或者活菌数约为109菌落形成单位/ml)的改变监测第二微生物的生长。
基本上任何营养培养基均可用于本发明，其没有特别限制。营养培养基是本领域技术人员已知的，并且对本发明有用的营养培养基的生成没有特别限制。典型的营养培养基可在例如“Handbook of MicrobiologicalMedia”CRC Press出版(Boca Raton，FL)中找到。例如，用于本发明发酵过程的合适的营养培养基为通过化学方法限定的培养基，不含任何动物来源的产物，含有明确定义的且充足的碳源、氮源和磷源。
在发酵过程中，使流加培养物一般在约20至30℃下，在补充有碳源(丙三醇、乳糖)；氮源(肽和氨基酸)以及磷的营养培养基中生长。pH一般通过滴加2M NH4OH保持恒定为5.0±1.5。发酵氧条件通过可灭菌的氧探针时刻监测，发酵环境一般通过在发酵罐中以最低限度搅拌维持，所述搅拌的最大速度为介于100rpm至150rpm之间。氮气的进给速度一般设定为0.01至0.5VVM(体积空气/容器体积/每分钟)。可采用其它气体或可不采用其它气体，可施加额外的外部压力或者可不施加额外的外部压力，例如，使用氧化压力(stress)促进技术(例如添加臭氧或UV光)或者使用压力相关技术(例如，加热)。
发酵工艺可以在任何类型的搅拌生物反应器或波型生物反应器中实施。对本发明有用的生物反应器包括，但不限于，可获自New BrunswickScientific(新泽西州爱迪生)或Applikon Biotechnology(加州福斯特城)的分批补料反应器。
第一微生物和第二微生物菌两者可在有氧条件下生长或在无氧条件下生长，或者在有氧和无氧条件下生长以刺激次级代谢产物。任选地，在发酵过程中，可将微生物暴露在压力源下，所述压力源例如，诸如过氧化氢和臭氧之类的化学品，诸如超声、UV、红外辐射或热之类的能量。
可使用本领域技术人员已知的技术对次级代谢产物进行检测。一种特别有效的技术包括与质谱结合的色谱分析法(LC/MS或GC/MS)。检测次级代谢产物的另一有效方法为通过使用商售的微生物基因组阵列。这种阵列是本领域技术人员已知的，并且诸如酵母和乳杆菌之类的微生物的阵列可购买得到。用于检测次级代谢产物表达的其它方法可包括流式细胞术。可使用气相色谱和质谱分析(GC/MS)检测次级代谢物表达。这些仪器的实例包括来自Skyray Instrument公司和Thermo-Scientific公司的仪器。
可通过从第一微生物和第二微生物的胞外分泌物中分离生物质和提取活性成分得到发酵提取物。可选地，可通过本领域技术人员已知的方法溶解细胞得到双重发酵提取物的溶解物。在这些方法中，通过化学方式、酶解方式或物理方式或者通过这些方式的组合使细胞壁破裂。可通过本领域技术人员已知的许多方式进一步纯化双重发酵提取物，包括但不限于，色谱法、溶剂萃取、离心、倾析、过滤或活性炭处理。可通过本领域技术人员已知的任何方式进一步浓缩双重发酵提取物，包括但不限于，蒸发、喷雾干燥、低压升华干燥、带式或转鼓式干燥。
用于本发明的同时或顺序发酵的合适的微生物可包括本领域技术人员已知的各种不同的微生物科属，包括，但不限于：脉孢菌属(Neurospora)，长喙壳属(Ceratostomella)，麦角菌属(Claviceps)，炭角菌属(Xylaria)，座坚壳属(Rosellinia)，柔膜菌属(Helotium)，核盘霉属(Sclerotinia)，柄灰包属(Tulostoma)，须腹菌属(Rhizopogon)，耳柱干真菌类(Truncocolumella)，毛霉菌属(Mucor)，根霉属菌(Rhizopus)，虫霉属(Entomophthora)，网柱菌属(Dictostylium)，芽枝莓属(Blastocladia)，壶菌属(synchytrium)，水霉属(Saprolegnia)，霜霉属(Peronospora)，白锈菌属Albugo，腐霉属(Pythium)，喇叭菌属(Craterellus)，皮特瑞菌属(Pterygellus)，疫霉属(Phytophthora)，根肿菌属(Plasmodiophora)，块菌属(Tuber)，齿菌属(Hydnum)，茶渍属(Lecanora)，染料衣属(Roccella)，鸡皮衣属(Pertusaria)，松萝属(Usnea)，扁枝衣属(Evernia)，树花属(Ramalina)，树发属(Alectoria)，石蕊属(Cladonia)，梅衣属(Parmelia)，冰岛衣属(Cetraria)，伞菌属(Agaricus)，鸡油菌属(Cantharellus)，类脐菇属(Omphalotus)，鬼伞属(Coprinus)，乳菇属(Lactarius)，皮伞属(Marasmius)，侧耳属(Pleurotus)，鳞伞属(Pholiota)，红菇属(Russula)，球盖菇属(Stropharia)，粉红孢子伞菌类(Entoloma)，环柄菇科(Lepiotaceae)，伏革菌属(Corticium)，薄膜革菌属(Pellicularia)，口蘑属(Tricholoma)，台蕈属(Volvaria)，杯伞属(Clitocybe)，火菇属(Flammulina)，酵母属(Saccharomyces)，裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)，曲霉菌属(Eurotium)，曲霉属(Aspergillus)，梭孢壳属(Thielavia)，盘菌属(Peziza)，普拉塔暗盘菌属(Plectania)，羊肚菌属(Morchella)，丛耳菌属(Wynnea)，马鞍菌属(Helvella)，鹿花菌属(Gyromitra)，鬼笔目(Phallales)，狄克提欧菌属(Dictyophera)，蛇头菌属(Mutinus)，笼头菌属(Clathrus)，三叉鬼笔属(Pseudocolus)，马勃菌属(Lycoperdon，马勃属(Calvatia)，地星属(Geastrum)，根灰包菌属(Radiigera)，阿斯特斯菌属(Astreus)，鸟巢菌属(Nidularia)，伽氏灰菇属(Gastrocybe)，地红菇属(Macowanites)，腹牛肝菌属(Gastroboletus)，地花菌属(Albatrellus)，新香菰属(Neolentinus)，黑孔菌属(Nigroporus)，褐腐干酪属(Oligoporus)，多孔菌属(Polyporus)，牛排菌属(Fistulina)，层孔菌属(Fomes)，牛肝菌属(Boletus)，褐小牛肝菌属(Fuscoboletinus)，疣柄牛肝菌属(Leccinum)，褶孔牛肝菌属(Phylloporus)，乳牛肝菌属(Suillus)，松塔牛肝菌属(Strobilomyces)，牛肝菌(Boletellus)，银耳属(Tremella)，木耳属(Auricularia)，花耳属(Dacrymyces)，栅锈菌属(Melampsora)，柱锈菌属(Cronartium)，柄锈属(Puccinia)，胶锈菌属(Gymnosporangium)，腥黑粉菌属(Tilletia)，条黑粉菌属(Urocystis)，隔担菌属(Septobasidium)，湿伞属(Hygrocybe)，蜡伞属(Hygrophorus)，湿菌髓(Hygrotrama)，新蜡伞属(Neohygrophorus)，丝膜菌属(Cortinarius)，裸伞属(Gymnopilus)，发癣菌属(Trichophyton)，小孢霉属(Microsporum)，串珠霉属(Monilia)，念珠菌属(Candida)，小尾孢属(Cercosporella)，青霉菌属(Penicillium)，芽生菌属(Blastomyces)，尾孢属(Cercospora)，绿核菌属(Ustilaginoidea)，瘤座孢属(Tubercularia)，镰孢菌属(Fusarium)，丝核菌(Rhizoctinia)，束丝菌属(Ozonium)，菌核属(Sclerotium)，地舌菌(Geoglossum)，或松蕈属(Armillaria)；类诺卡氏菌科(Nocardioidaceae)，气微菌属(Aeromicrobium)；弗莱德门菌属(Friedmanniella)，扑科研菌属(Kribbella)，大理石雕菌属(Marmoricola)；微白霜菌属(Micropruina)，类诺卡氏菌属(Nocardioides)，脂肪肝菌属(Pimelobacter)，丙酸胞菌属(Propionicicella)，丙酸单胞菌属(Propionicimonas)，热孔菌属(Thermasporomyces)，布鲁克劳尼亚菌属Brooklawnia，黄络球菌属(Luteococcus)，丙酸杆菌属(Propionibacterium)，微丙酸菌属(Propionimicrobium)，乳杆菌属(Lactobacillus)，夏普氏菌属(Sharpea)，两性囊霉属(Ambispora)，无梗囊霉菌属(Acaulospora)，恩氏孔菌属(Enthrophospora)，残孔菌(Abortiporus)，阿米露孔菌属(Amylocystis)，薄孔菌属(Antrodia)，似薄孔菌属(Antrodiella)，深黄孔菌属(Aurantiporus)，黄孔菌属(Auriporia)，牛舌草孔菌属Buglossoporus，蜡孔菌属(Ceriporia)，拟蜡菌属(Ceriporiopsis)，齿毛菌属(Cerrena)，克里欧孔菌属(Criolopsis)，隐孔菌属(Cryptoporus)，迷孔菌属(Daedalea)，拟迷孔菌属(Daedaleopsis)，丹特罗亚菌属(Dantronia)，二丝孔菌属(Diplomitoporus)，董氏孔菌(Donkioporia)，拟孔菌属(Fomitopsis)，彩孔菌属(Hapalopilus)，硫色绚孔菌属(Laetiporus)，拉氏孔菌Laeptoporus，大孔菌属(Megasporoporia)，灰黑孔菌(Melanoporia)，亚灰树花菌属(Meripilus)，黑孔菌属(Nigroporus)，少孔菌属(Oligoporus)，欧式孔菌属(Ossicaulis)，锐孔菌属(Oxyporus)，帕氏孔菌属(Parmastomyces)，皮拉孔菌属(Pilatoporus)，剥管菌属(Piptoporus)，卧孔菌属(Poria)，波斯特孔菌属(Postia)，硬孔菌属(Rigidoporus)，苔芝属(Taiwanofungus)，红木色孔菌属(Tinctoporellus)，栓菌属(Trametes)，干酪菌属(Tyromyces)，茯苓菌属(Wolfiporia)，古老球菌属(Palaeococcus)，火球菌属(Pyrococcus)，高温球菌属(Thermococcus)，丝衣霉属(Byssochlamys)，毛萨托菌属(Chaetosartorya)，克劳姆菌属(Chromocleista)，双叉菌属(Dichotomomyces)，埃德菌属(Edyuillia)，翘孢霉属(Emericella)，艾里斯菌属(Erythrogymnotheca)，正青霉属(Eupenicillium)，散囊菌属(Eurotium)，芬尼菌属(Fennellia)，钩囊菌属(Hamigera)，半内果菌属(Hemicarpenteles)，新石座菌属(Neopetromyces)，新萨托菌属(Neosartorya)，拟青霉属(Penicilliopsis)，石座菌属(Petromyces)，西格菌属(Segenoma)，裸节菌属(Talaromyces)，嗜热子囊菌属(Thermoascus)，特里希菌属(Thrichocoma)，沃卡菌属(Warcupiella)，曲菌属(Aspergillus)，梅丽霉属(Merimbla)，拟青霉(Paecilomyces)，菲亚罗霉属Phialosimplex，赛捷罗霉属(Sagenomella)，隔梭孢属(Septofusidium)，缨霉属(Thysanophora)，疣青霉(Geosmithia)，乳酸杆菌科，丙酸杆菌科，放线菌目，马拉色菌属(Malasezzia)，和微藻和其它类似种类。还应理解的是，原核生物、藻类细胞、植物细胞、动物细胞或昆虫细胞也可与一种或一种以上上述微生物共同发酵。上述微生物/生物(mirobe/organism)酵母属，裂殖酵母属，丙酸胞菌属，丙酸单胞菌属，热孔菌属，丙酸杆菌科，微丙酸菌属，乳酸杆菌科，彩孔菌属(Hapalopilus)，革菌科(Coriolaceae)，半知发菌科(Mitosporic Trichocomaceae)，马拉色菌科(Malasseziaceae)，乳酸杆菌科，丙酸杆菌科，放线菌目(Actinomycetales)和微藻尤其优选。
在一种实施方式中，使用属于乳酸杆菌科和丙酸杆菌科的微生物培养物制备双重发酵提取物。分别使乳酸杆菌和丙酸杆菌生长的方法是本领域技术人员已知的。典型地，属于乳酸杆菌门和丙酸杆菌门的细菌为喜欢在没有氧的条件下生长的专性厌氧菌或微嗜气的细菌。一些种类可忍受存在少量氧的条件。
为了制备双重发酵提取物，使第一微生物(例如丙酸杆菌属)在生长培养基中生长至对数生长后期。优选地，使第一微生物生长直至600nm下的光密度至少为6。在一种实施方式中，在25℃至30℃下使第一微生物生长约16小时至约18小时。在无菌的转移罐中收集得到的改良的营养培养基。可进一步纯化改良的营养培养基以除去第一微生物。可选地，可在添加诸如乳酸杆菌之类的第二微生物的过程中，使第一微生物保留在改良的培养基中。通过光密度和活菌数(600nm下光密度至少为6；或者活菌数为109菌落形成单位/ml)的改变监测第二微生物的生长。
在另一实施方式中，使用属于微藻科吾肯氏壶菌属(Ulkeniasp.)和乳杆菌科的培养物制备双重发酵提取物。使吾肯氏壶菌和乳杆菌分别生长的方法是本领域技术人员已知的。典型地，属于吾肯氏壶菌和乳杆菌门的细菌为专性厌氧菌或微嗜气的细菌，并且这种细菌喜欢在含有无机盐的富营养培养基中生长。
为了制备双重发酵提取物，使第一微生物(例如微藻)在生长培养基中生长至对数生长后期。在一种实施方式中，在20℃至24℃下使第一微生物生长持续约96小时至约388小时。在无菌转移罐中收集得到的改良的营养培养基。可进一步纯化改良的营养培养基以除去第一微生物。可选地，可在添加诸如乳酸杆菌之类的第二微生物的过程中，使第一微生物保留在改良的培养基中。通过光密度和活菌数(600nm下光密度至少为6；或者活菌数为109菌落形成单位/ml)的改变监测第二微生物的生长。
可使用本领域技术人员已知的技术封装双重发酵提取物，所述技术包括，但不限于，形成脂质体或其它脂质封装物、对双重发酵提取物进行喷雾干燥、将双重发酵提取物封装在聚合物胶囊中、将双重发酵提取物吸收或吸附在惰性基质上等。
所述双重发酵提取物可用于局部用组合物。所述局部用组合物可通过次级代谢产物的表达向皮肤细胞提供保护，所述次级代谢产物在单一微生物的发酵过程中不表达。通过施用含有双重发酵提取物的局部用组合物，其可提供抗老化、皮肤增白、皮肤细胞更新、皮肤细胞保护、皮肤屏障保护、皮肤保湿以及其它疗效的益处。
本发明的局部用组合物可含有基于所述局部用组合物的重量的约0.01wt％至高达约10wt％的发酵提取物。一般而言，所述局部用组合物可含有基于所述局部用组合物的重量的约0.1wt％至5wt％，典型地，约0.5wt％至约2wt％的发酵提取物。
除了发酵提取物，所述局部用组合物可优选含有防腐剂。可将防腐剂加至所述发酵提取物或局部用组合物中以保持发酵提取物的环境并保护发酵提取物不被不期望的空气传播的微生物污染。如本文使用的“防腐剂”是指使发酵提取物无菌或对不期望的微生物保持生物稳定的成分。防腐剂包括酸、醇、乙二醇、对羟基苯甲酸酯、含四氮的化合物、异噻唑啉酮、释放甲醛的化合物和卤代化合物以及酶。示例性的醇包括苯氧乙醇、异丙醇和苄醇；示例性的乙二醇包括丙二醇、丁二醇和戊二醇；示例性的对羟基苯甲酸酯(paraben或parahydroxybenzioc acid)包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯；示例性的含四氮化合物包括苯扎氯铵、季铵盐(Quaternium)15；示例性的异噻唑类包括甲基异噻唑啉、甲基氯代异噻唑啉；示例性的醛释放剂包括DMDM乙内酰脲、咪唑烷基脲和双咪唑烷基脲；示例性的抗氧化剂包括丁羟甲苯、生育酚，示例性的卤代化合物包括三氯生和氯己定二葡糖酸盐。示例性的酶包括葡萄糖氧化酶和乳过氧化酶。可用于本发明的目的的防腐剂的实例可在Steinberg,D.“Frequency of Use ofPreservatives2007”.Cosmet.Toilet.117,41–44(2002)和“PreservativeEncyclopedia”Cosmet.Toilet.117,80–96(2002)中找到。此外，诸如“Cosmeticand Drug Microbiology”,Orth DS ed.,Francis&Taylor,Boca Raton,Fla.(2006)中的Ciccognani D.的文章Cosmetic Preservation Using Enzymes中描述的那些防腐剂之类的酶防腐体系也可有效用于局部用组合物中。
一般而言，优选地，防腐剂的量至少为局部用组合物的总重量的约0.01wt％，至少为约0.1wt％，高达约10wt％。典型地，使用所需防腐剂的最小量，典型地，所述防腐剂以少于局部用组合物的重量的约5wt％存在，更典型地，所述防腐剂以基于局部用组合物的重量的约0.1wt％至约2.0wt％的范围存在。
局部用组合物还可含有皮肤病学上可接受的载体。如本文使用的短语“皮肤病学上可接受的载体”是指所述载体适于局部施用于具有良好的美学特性的皮肤、毛发、指甲等，与发酵提取物和任何其它成分相容，并且不会引起任何不期望的安全性问题或毒性问题。皮肤病学上可接受的载体也是一般美容和/或药学上可接受的。
所述皮肤病学上可接受的载体或“载体”可为多种不同形式的载体。例如，乳剂载体，包括，但不限于，水包油、油包水、水包油包水和硅树脂包水包油乳剂在本文中是有用的。这些乳剂可包括较大的粘性范围，所述粘性范围例如约100cps至约200000cps。这些乳剂也可使用机械泵容器或使用常规推进剂的加压气溶胶容器以喷雾形式递送。这些载体还可以奶油冻(mousse)的形式递送。其它合适的局部用载体包括无水液体溶剂，例如油、醇和硅树脂(例如矿物油、乙醇、异丙醇、二甲聚硅氧烷、环甲硅油等)；基于水性的单相液体溶剂(例如含氢的醇溶剂体系)；这些无水和基于水性的单相液体溶剂的增稠形式(例如，其中通过添加适当的胶、树脂、蜡、聚合物、盐等增大溶剂的粘性以形成固体或半固体)。可用于本发明的局部用载体体系的实例在以下四篇文献中描述："Sun Products Formulary"Cosmetics&Toiletries，第105卷，第122–139页(1990年12月)；"SunProducts Formulary"，Cosmetics&Toiletries，第102卷，第117–136页(1987年3月)；美国专利第4,960,764号；和美国专利第4,254,105号。
所述载体可含有局部用组合物的重量的约50wt％至约99wt％，一般而言，所述载体的量为基于所述局部用组合物的总重量的约75wt％至约99wt％。典型地，所述载体占所述组合物的总重量的约85wt％至约95wt％。
示例性的载体包括含氢的醇体系和水包油乳剂。当所述载体为含氢的醇体系时，所述载体可含有约0％至约99％的乙醇、异丙醇或者其混合物，以及约1％至约99％的水。更优选的是含有约5％至约60％的乙醇、异丙醇或其混合物，以及约40％至约95％的水的载体。尤其优选的是含有约20％至约50％的乙醇、异丙醇或者其混合物，以及约50％至约80％的水的载体。当所述载体为水包油乳剂时，所述载体可包括用于制备这些乳剂的常规赋形剂成分中的任何一种。对合适载体的更加详细的讨论可在美国专利第5,605,894号和美国专利第5,681,852号中找到。
任选地，局部用组合物可含有其它功能性成分，例如，水、表面活性剂、乳化剂、调节剂、软化剂、蜡、油、聚合物、增稠剂、固定剂、着色剂、湿润剂、保湿剂、稳定剂、稀释剂、溶剂和芳香剂。此外，个人护理组合物还可含有活性成分，例如植物萃取物、营养素、药妆品、治疗剂、药物、抗真菌剂、抗菌剂、甾族激素、去屑止痒剂、抗痘成分、遮光剂、防腐剂等。
含有所述发酵提取物的局部用组合物可用于各种不同类型的美容制剂，包括，但不限于乳液、软膏、霜剂、喷雾、针剂、水性凝胶或水-醇混合物凝胶、奶油冻、贴剂、护具、罩、湿润的面膜、擦拭巾、固体棒、清洁棒、唇膏、气溶胶霜剂、无水粉末、滑石、补剂、油、乳剂和浴盐。这些美容制剂可通过局部施加在皮肤上使用。
根据本发明的另一实施方式，本发明还提供组合物的浓缩物，所述组合物的浓缩物含有(a)发酵提取物；(b)足以对成分(a)起灭菌作用或生物静态作用的防腐剂，其中，成分(a)的量为所述组合物的重量的约90％至约99.9％，成分(b)的量为所述组合物的重量的约0.1％至10％。一般而言，所述发酵提取物为所述组合物的重量的约98％至约99.5％，成分(b)的量为所述组合物的重量的0.5％至2％。诸如溶剂或载体之类的其它额外的成分也可存在于所述浓缩物中。
下列实施例意于举例说明本发明的范围，对本发明的范围不构成任何限制。除非另有明确说明，所有部分和百分数为重量部分和重量百分数，所有温度的单位为摄氏度。
实施例
实施例1
微生物和培养基
从乳清粉提取物中分离细菌细胞培养物。为了实现本发明的目的，特别优选属于乳杆菌科和丙酸杆菌科的微生物培养物。严格根据生长速率选择第一微生物(乳杆菌科vs.丙酸杆菌科)。丙酸杆菌科由于其具有更快的生长速率而被选择，因为理想情况是代谢并富集培养基中的大多数初级成分。为了实现本发明的目的，使两种微生物在缺氧条件下生长或在微嗜气的条件下(没有氧气或有限的氧气)生长。将原种培养物保持在含有胰蛋白胨、酵母提取物、过滤的乳清提取物(pH7.0)和琼脂(Sigma，St.Louis，MO)的培养基中。使母种培养物在含有培养基的震荡烧瓶中生长，所述培养基包含酵母提取物10％、大豆胰蛋白胨肉汤5％、磷酸二氢钾2.5％、磷酸氢二钾1.5％、乳糖10％、丙三醇5％(Sigma St.Louis，MO)。除了上述培养基成分，向生长培养基中添加诸如氨基酸、微生物混合物和矿物质之类的补充生长因子(Sigma，St.Louis，MO)。在整个过程中使用阻沫剂σ-乳剂B(Sigma，St.Louis，MO)。
生物反应器
在通过震荡烧瓶试验优化处理之后，将工艺按比例增加至2L和15L发酵阶段(2L:新泽西州爱迪生的New Brunswick Scientific和15L:加州福斯特城的Applikon Biotechnology)。使两种微生物在缺氧条件下生长，通过溶氧检测器监测氧浓度。将氮气喷入生物反应器中以控制氧的浓度并用于次级代谢产物表达。通过可灭菌的DO探针时刻监测缺氧条件，并通过在发酵罐中以最低限度搅拌保持缺氧环境，所述搅拌的最大速度为100至150rpm。氮速率设为0.01至0.5VVM(体积空气/容器体积/每分钟)。为了制备本发明的双重发酵提取物，使谢氏丙酸杆菌(Propionibacteriumshermanii)细胞培养物在25℃至30℃下生长；最优选地，在27℃下生长。为了实现本发明的目的，使两种微生物同时在发酵罐中生长(第二微生物植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)在存在第一微生物的条件下生长)。在发酵过程中，当营养培养基有限时，在特定时间点(接种第一微生物后16至18小时；600nm下光密度≥5)接种植物乳杆菌；由此引起封闭环境中对营养物质的竞争。在营养受限阶段引入第二微生物植物乳杆菌导致在两种微生物之间产生竞争性的、‘生存型’反应，尤其当生长在诸如生物反应器之类的封闭体系中时。连续监测培养基中的生长和营养消耗(通过在线监测、光密度检测)。在引入第二微生物之前，由营养限制和第一微生物对氧的消耗引起压力。
通过从双重微生物的胞外分泌物中分离生物质和提取活性成分获得最终双重发酵提取物。可通过过滤进一步纯化所述双重发酵提取物。可通过本领域技术人员已知的选择性分子量膜过滤方法进一步浓缩该双重发酵提取物。水性培养基中双重发酵提取物的最终浓缩物至少为0.01％。更优选地，双重发酵提取物的浓度至少为0.1％。使用浓度为0.5至1.1％的苯氧乙醇作为防腐剂(密苏里州圣路易斯的Sigma)。
两种单一微生物对照(乳杆菌科与丙酸杆菌科)在与上述相同的条件下生长。微生物对照样品的区别参数为没有第二微生物且没有诱导次级代谢产物。使用上述选择性分子量膜过滤技术纯化单一微生物的提取物。
实施例2：通过GC/MS进行代谢物分析
在实施例1中的双重发酵结束之后进行GC-MS以分析不同代谢物的表达。三种样品如下分析：
发酵对照1-乳杆菌科
发酵对照2-丙酸杆菌科
双重发酵提取物
对水性样品(1、2和3)进行特定的酸提取；其中，分离酸部分，用重氮甲烷试剂进行甲基化，对有机酸的相应甲酯进行GC-MS分析。将测试样品直接注入GC中，通过挥发性成分顶部空间分析(顶部空间GC-MS)还对低分子量酸进行分析。图1和图2为对照样品微生物1和微生物2的GC-MS分析。图3表示双重发酵提取物的GC-MS分析，说明两种微生物的竞争诱导新代谢物的表达，否则所述新代谢物不表达(如果微生物单独生长)。
实施例3人皮肤细胞微阵列分析
使用人基因组微阵列(Agilent Technologies)检测如实施例1所述制备的双重发酵产物对两种皮肤细胞系(纤维母细胞和角质细胞)的影响。用来自实施例1的1％的双重发酵物处理细胞24小时。离心得到的处理过的皮肤细胞，用RNA Later(Ambion)重悬含有细胞核物质的小粒并在4℃下保存。使用RiboPure RNA提取试剂盒(Ambion)提取来自人细胞的总RNA，随后使用Message AMP aRNA试剂盒(Ambion)扩增mRNA。对于该阵列，使用MicroMax阵列标记试剂盒(Perkin Elmer)用Cy-3或Cy-5对aRNA的样品进行荧光标记。然后将标记的aRNA施加至表皮纤维母细胞和角质细胞的皮肤细胞DNA微阵列芯片并杂交过夜(Agilent Technologies)。第二天，洗涤芯片并用Axon4100A DNA微阵列扫描仪扫描，使用AxonGenepix-软件分析。用于基因微阵列分析的方法可在美国专利申请公开第US2006/0110815号中找到。
从获自人体表皮角质细胞和人体皮肤纤维母细胞基因微阵列的感兴趣的基因中筛选与重要的特定皮肤功能有关的基因。对与多种不同的皮肤新陈代谢功能有关的几个基因的上调(与中等水平的比率＞1.3)或下调(与中等水平的比率＜0.7)进行分析。为了进行基因微阵列分析，术语“上调”是指RNA过表达的基因。术语“下调”是指RNA低表达。结果在表1中报道。
实施例4将单一微生物发酵提取物与实施例1中的双重发酵进行比较的全层评估
以实施例1的微生物为对照(SNA1380A和SNA-1380B)，通过全层皮肤组织模型对实施例1的双重发酵提取物进行测试。该皮肤模型由生长在嵌有纤维母细胞的胶原蛋白基质上的高度分化的角质细胞构成。一旦到达，在4℃下储存组织待用。为了便于使用，从琼脂糖-装载托盘中移出组织并将其置于含有4mL分析培养基的6孔平板中，使其在37–2℃和5–1％CO2下平衡过夜。过夜平衡之后，用4ml新鲜培养基替换培养基，然后将50μL测试物质局部涂敷于组织。然后在37–2℃和5–1％CO2下孵育组织24小时。通过全层皮肤组织评估实施例1中的下列样品：
1.未处理
2.SNA1380A-发酵对照1–乳杆菌科(处理1％&2％)
3.SNA1380B-发酵对照1-丙酸杆菌科(处理1％&2％)
4.SNA1380C-双重发酵提取物(处理1％和2％)
CD44和HAS1分析
在Tris缓冲盐水(TBS:20mM Tris，pH7.5，150mM NaCl)中平衡膜，并将膜组装到Bio-Dot微过滤装置。组装之后，将200μLTBS加至Bio-Dot中使用的各孔，并施加真空以保证充分的流通过所有孔。接着，将各组织匀浆样品(约10μg)分配至所述装置中的孔中，并将所述样品加至合适的孔。在低真空下过滤样品。将TBS加至未分配样品的孔中，从而确保在工作过程中膜不变干。在印迹(blotting)方法结束时，再加入200μL TBS并滤过各孔。然后将膜从Bio-Dot装置中移出，用TBS洗涤5分钟至10分钟，再放置于封闭溶液(Tris缓冲盐水[20mM Tris，pH7.5，150mM NaCl，1％脱脂奶粉])中，并在室温下在摇动平台上孵育至少1小时。分析结果见图4和图5。
全层组织评估结果表明在1％和2％条件下，与未处理的对照相比，实施例1的双重发酵物(SNA-1380C)表现出具有统计学意义的HAS1蛋白上调。单一对照样品与未处理对照相比未显示出具有统计学意义。结果以图表的形式在图4中表示。
全层组织评估结果表明在1％和2％条件下，与未处理的对照相比，实施例1的发酵物(SNA-1380C)表现出具有统计学意义的CD44蛋白上调。单一对照样品与未处理对照相比未显示出具有统计学意义。结果以图表的形式在图5中表示。
实施例5-微藻和乳杆菌科的双重发酵物
双重发酵过程启动微藻和细菌细胞培养物的竞争性发酵。微藻和细菌培养物为Lonza专有菌株。为了实现本发明的目的，尤其优选地，微生物为属于破囊壶菌(Thraustochytrids)科的微藻培养物和属于乳杆菌科的细菌。严格根据生长速率选择第一微生物(微藻vs.乳杆菌科)。选择微藻是因为其具有更慢的生长速率，因为理想的是代谢并富集培养基中大多数的初级成分。为了达到本发明的目的，使两种微生物在有氧条件下生长。将原种培养物保持在含有胰蛋白胨、酵母提取物、过滤的乳清提取物(pH7.0)和琼脂(密苏里州圣路易斯的Sigma)的培养基中。使母种培养物在含有培养基的震荡烧瓶中生长，所述培养基由NaNO3(25％)，CaCl2·2H2O(2.5％)，MgSO4·7H2O(7.5％)，K2HPO4(7.5％)，KH2PO4(17.5％)，NaCl(2.5％)，KOH(31％)，FeSO4·7H2O(4.98％)，H2SO4(1％)和H3BO3(11.42％)构成。除了培养基成分，将诸如氨基酸、维生素混合物和矿物质之类补充生长因子加至生长培养基(密苏里州圣路易斯的Sigma)。在整个过程中使用阻沫剂σ-乳剂B(密苏里州圣路易斯的Sigma)。
生物反应器
在通过震荡烧瓶试验优化处理之后，将工艺按比例增加至2L和15L发酵阶段(2L:新泽西州爱迪生的New Brunswick Scientific和15L:加州福斯特城的Applikon Biotechnology)。使微藻在富含二氧化碳的环境中生长。将空气喷入生物反应器中以控制二氧化碳浓度并用于次级代谢产物的表达。通过可灭菌的DO探针时刻监测条件，通过以250至600rpm的最大速度搅拌细胞核培养基来保持上述气氛。空气速率设为1.0–2.0VVM(体积空气/容器体积/每分钟)。为了制备本发明的双重发酵提取物，使Ulkenia sp.培养物在20℃至24℃下生长；最优选地，在21℃下生长。为了实现本发明的目的，使两种微生物同时在发酵罐中生长(第二微生物植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)在存在第一微生物的条件下生长)。在发酵过程中，当营养培养基有限时，在特定时间点(接种第一微生物后96至388小时)接种植物乳杆菌；由此引起封闭环境中对营养物质的竞争。在营养受限阶段引入第二微生物植物乳杆菌导致在两种微生物之间产生竞争性的、‘生存型’反应，尤其当生长在诸如生物反应器之类的封闭体系中时。连续监测培养基中的生长和营养消耗(通过在线监测、光密度检测)。在引入第二微生物之前，由营养限制和第一微生物对二氧化碳的消耗引起压力。
通过从两种微生物的胞外分泌物中分离生物质和提取活性成分获得最终双重发酵提取物。可通过过滤进一步纯化所述双重发酵提取物。可通过本领域技术人员已知的选择性分子量膜过滤方法进一步浓缩该双重发酵提取物。水性培养基中双重发酵提取物的最终浓缩物至少为0.01％。更优选地，双重发酵提取物的浓度至少为0.1％。使用浓度为0.5至1.1％的苯氧乙醇作为防腐剂(密苏里州圣路易斯的Sigma)。
实施例6-将单一微生物发酵提取物与实施例5的双重发酵物进行比较的体外角质层破坏模型上的体外评估
对实施例5的双重发酵提取物评估实施例5中的全层组织模型发生的组织学改变。这种皮肤模型由生长在嵌有纤维母细胞的胶原蛋白基质上的高度分化的角质细胞构成，并且如实施例4所述保持这种皮肤模型。在第二天，使用4mm活检穿孔器通过仅除去组织的表皮层在组织上形成创伤。在组织形成创伤之后，连续两天在早晨和下午将100μL新鲜测试物质涂敷于组织。在涂敷新的测试物质之前，除去旧的测试物质，并用100μLPBS漂洗组织一次。在组织形成创伤之后，连续七天在早晨和下午将100μL新鲜测试物质涂敷于组织。在涂敷新的测试物质之前，除去旧的测试物质，并用100μL PBS漂洗组织一次，在两次涂敷中间孵育组织。
在处理时间结束时，在Histochoice MB中固定组织持续3小时。然后处理组织，将其包埋于固体石蜡中，制作5μm切片并固定。然后使用一抗或用生物素化的透明质酸结合蛋白对载玻片进行探测，并进行特定蛋白活性染色。使用装配有QiClick成像相机的荧光显微镜观察组织。然后使用QCapture软件捕捉显微图像。
通过体外角质层破坏模型评估实施例5中的下列样品：
1.未处理的
2.视黄醇50nm
3.2％条件下，实施例5中的双重发酵物
半胱天冬酶14和透明质酸分析
组织学图像在图6A、6B和6C以及图7A、7B和7C中显示，对处理过程描述并解释如下。来自透明质酸评估的图像在图6A、6B和6C中显示(对透明质酸进行选择性染色，在图中显示为光亮区)。而来自半胱天冬酶-14研究的图像在图7A、7B和7C中显示(对半胱天冬酶-14进行选择性染色，显示为光亮区)。图像获自创伤边缘，使得在创伤位点的表皮边缘，创伤开口和下方表皮层均可看见。图6A、6B和6C中的透明质酸和图7A、7B和7C中的半胱天冬酶-14显示为沿着创伤表皮的前缘的光亮区。小的白点为细胞。
来自体外角质层破坏模型的结果表明，与未处理的对照(如图6A所示)和视黄醇阳性对照(如图6B所示)相比，实施例5的双重发酵物显示出具有统计学意义的透明质酸蛋白的上调(如图6C所示)。来自体外角质层破坏模型的结果表明，与未处理的对照(如图7A所示)和视黄醇阳性对照(如图7C所示)相比，实施例5的双重发酵物显示出具有统计学意义的半胱天冬酶-14蛋白的上调(如图7A所示)。在两项研究中，单一对照样品与未处理的对照相比均未显示出统计学意义。
实施例7-对来自实施例5的双重发酵提取物的抗老化益处的体内评估
在面部护肤产品和对照剂中对来自实施例5的双重发酵物的功效进行单盲临床评估和比较。实施研究持续60天，每天涂敷该面部产品两次。在7天洗脱期之后开始研究，在第0天、第30天和第60天获得结果。处理组说明如下：
a.测试产品A：对照剂(样品A)
b.测试产品B：2％的来自实施例5的双重发酵物
体内评估了几种标准，包括用皮肤弹性测量仪定量测量皮肤弹性、用硅树脂复制品定量评价细纹和皱纹以及对皮肤屏障功能的保护作用。与对照剂相比，按重量计2％的来自实施例5的双重发酵物显示出具有统计学意义的对皮肤弹性的改善(如图8所示)。此外，如图9A和9B所示，来自实施例5的双重发酵物显示出对细纹和皱纹的具有统计学意义的改善。如图10A和10B所示，眼周部位的硅树脂复制品也表明局部涂敷来自实施例5的双重发酵物显示出对细纹和皱纹具有统计学意义的改善。
以下为可根据本发明使用双重发酵提取物制备的护肤组合物的实施例，所示双重发酵提取物通过使用实施例1的方法制备。
实施例组合物A
以下实施例显示出可通过混合表A中的成分制备的混有双重发酵提取物的具有高内相油包水乳剂的组合物，所述双重发酵提取物通过实施例1公开的方法制备。
表A
1.DMDM乙内酰脲
实施例组合物B
以下实施例显示可通过混合表B中的成分制备的混有双重发酵提取物的具有水包油霜剂稠度的组合物，所述双重发酵提取物通过实施例1公开的方法制备。
表B
实施例组合物C
以下实施例显示可为混有双重发酵提取物的含酒精的乳液的、可通过混合表C中的成分制备的组合物，所述双重发酵提取物通过实施例1公开的方法制备。
表C
实施例D
以下实施例显示可为含有双重发酵提取物的亚微米乳剂浓缩物的且可通过混合表D中的成分制备的组合物，所述双重发酵提取物通过实施例1公开的方法制备。
表D
实施例E
以下实施例显示含有双重发酵提取物的且可通过混合表E中的成分制备的水性组合物，所述双重发酵提取物通过实施例1公开的方法制备。
表E

Claims (23)

1.一种局部用组合物，所述组合物含有从至少两种微生物的同时发酵或顺序发酵中取出的发酵提取物。
2.根据权利要求1所述的局部用组合物，其中，所述发酵提取物含有第二微生物的代谢物，所述第二微生物的代谢物在存在第一微生物的代谢物的条件下生长。
3.根据权利要求2所述的局部用组合物，其中，所述第二微生物的代谢物与所述第一微生物的代谢物同时生长。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的局部用组合物，所述组合物还含有数量足以对所述发酵提取物起灭菌作用或生物静态作用的防腐剂和皮肤病学上可接受的载体。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中，每一微生物选自：脉孢菌属，长喙壳属，麦角菌属，炭角菌属，座坚壳属，柔膜菌属，核盘霉属，柄灰包属，须腹菌属，耳柱干真菌类，毛霉菌，根霉属菌，虫霉属，网柱菌属，芽枝莓属，壶菌属，水霉属，霜霉属，白锈菌属，腐霉属，喇叭菌属，皮特瑞菌属，疫霉属，根肿菌属，块菌属，齿菌属，茶渍属，染料衣属，鸡皮衣属，松萝属，扁枝衣属，树花属，树发属，石蕊属，梅衣属，冰岛衣属，伞菌属，鸡油菌属，类脐菇属，鬼伞属，乳菇属，皮伞属，侧耳属，鳞伞属，红菇属，球盖菇属，粉红孢子伞菌类，环柄菇科，伏革菌属，薄膜革菌属，口蘑属，台蕈属，杯伞属，火菇属，酵母属，裂殖酵母属，曲霉菌属，曲霉属，梭孢壳属，盘菌属，普拉塔暗盘菌，羊肚菌属，丛耳菌属，马鞍菌属，鹿花菌属，鬼笔目，狄克提欧菌属，蛇头菌属，笼头菌属，三叉鬼笔属，马勃菌属，马勃属，地星属，根灰包菌属，阿斯特斯菌属，鸟巢菌属，伽氏灰菇属，地红菇属，腹牛肝菌属，地花菌属，新香菰属，黑孔菌属，褐腐干酪属，多孔菌属，牛排菌属，层孔菌属，牛肝菌属，褐小牛肝菌属，疣柄牛肝菌属，褶孔牛肝菌属，乳牛肝菌属，松塔牛肝菌属，牛肝菌，银耳属，木耳属，花耳属，栅锈菌属，柱锈菌属，柄锈属，胶锈菌属，腥黑粉菌属，条黑粉菌属，隔担菌属，湿伞属，蜡伞属，湿菌髓，新蜡伞属，丝膜菌属，裸伞属，发癣菌属，小孢霉属，串珠霉属，念珠菌属，小尾孢属，青霉菌属，芽生菌属，尾孢属，绿核菌属，瘤座孢属，镰孢菌属，丝核菌，束丝菌属，菌核属，地舌菌，或松蕈属；类诺卡氏菌科，气微菌属；弗莱德门菌属，扑科研菌属，大理石雕菌属；微白霜菌属，类诺卡氏菌属，脂肪肝菌属，丙酸胞菌属，丙酸单胞菌属，热孔菌属，布鲁克劳尼亚菌属，黄络球菌属，丙酸杆菌属，微丙酸菌属，乳杆菌属，夏普氏菌属，两性囊霉属，无梗囊霉菌属，恩氏孔菌属，残孔菌属，阿米露孔菌属，薄孔菌属，似薄孔菌属，深黄孔菌属，黄孔菌属，牛舌草孔菌属，蜡孔菌属，拟蜡菌属，齿毛菌属，克里欧孔菌属，隐孔菌属，迷孔菌属，拟迷孔菌属，丹特罗亚菌属，二丝孔菌，董氏孔菌，拟孔菌属，彩孔菌属，硫色绚孔菌属，拉氏孔菌，大孔菌属，灰黑孔菌，亚灰树花菌属，黑孔菌属，少孔菌属，欧式孔菌属，锐孔菌属，帕氏孔菌属，皮拉孔菌属，剥管菌属，卧孔菌属，波斯特孔菌属，硬孔菌属，苔芝属，红木色孔菌属，栓菌属，干酪菌属，茯苓菌，古老球菌属，火球菌属，高温球菌属，丝衣霉属，毛萨托菌属，克劳姆菌属，双叉菌属，埃德菌属，翘孢霉属，艾里斯菌属，正青霉属，散囊菌属，芬尼菌属，钩囊菌属，半内果菌属，新石座菌属，新萨托菌属，拟青霉属，石座菌属，西格菌属，裸节菌属，嗜热子囊菌属，特里希菌属，沃卡菌属，曲菌属，梅丽霉属，拟青霉，菲亚罗霉属，赛捷罗霉属，隔梭孢属，缨霉属，疣青霉，乳酸杆菌科，丙酸杆菌科，放线菌目，马拉色菌属和微藻。
6.根据权利要求5所述的组合物，其中，每一微生物选自：酵母属，裂殖酵母属，丙酸胞菌属，丙酸单胞菌属，热孔菌属，丙酸杆菌科，微丙酸菌属，乳酸杆菌科，彩孔菌属，革菌科，半知发菌科，马拉色菌科，乳酸杆菌科，丙酸杆菌科，放线菌目和微藻。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的组合物，其中，所述第一微生物为谢氏丙酸杆菌，所述第二微生物为植物乳杆菌。
8.根据权利要求2至6中任一项所述的组合物，其中，所述第一微生物为微藻，第二微生物为植物乳杆菌。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，所述组合物还含有防腐剂，所述防腐剂选自：水杨酸、山梨酸、苯氧乙醇、苄醇、乙醇、季铵盐-15、与底物组合的葡糖氧化酶和乳过氧化物酶、及上述物质的组合。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中，所述防腐剂含有苯氧乙醇。
11.根据权利要求9或10所述的组合物，其中，所述防腐剂的量为基于所述组合物的总重量的至少0.1wt％。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，所述组合物还含有至少一种选自以下的成分：水、表面活性剂、乳化剂、调节剂、软化剂、蜡、油、聚合物、增稠剂、固定剂、着色剂、湿润剂、保湿剂、稳定剂、稀释剂、溶剂、芳香剂、植物萃取物、营养素、药妆品、治疗剂、药物、抗真菌剂、抗菌剂、甾族激素、去屑止痒剂、抗痘成分、遮光剂、防腐剂及其组合。
13.根据权利要求4所述的组合物，其中，所述组合物含有0.1wt％至10wt％的所述发酵提取物、0.1wt％至10wt％的所述防腐剂以及50wt％至95wt％的所述皮肤病学上可接受的载体。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，所述组合物含有按重量计90.0％至99.9％的所述发酵提取物和按重量计0.1％至10.0％的所述防腐剂。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中，所述发酵提取物含有在存在植物乳杆菌的代谢物的条件下同时生长的谢氏丙酸杆菌的代谢物。
16.根据权利要求14所述的组合物，其中，成分(a)含有在存在植物乳杆菌的代谢物的条件下同时生长的微藻的代谢物。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中，所述发酵提取物通过含有以下步骤的方法制备：
(i)使用通过化学方法定义的第一营养培养基使第一微生物生长至对数生长后期，以制备含有所述第一微生物和由所述第一微生物表达的次级代谢物的第二营养培养基；
(ii)使所述第二营养培养基与第二微生物接触；
(iii)在第二营养培养基中使所述第一微生物和所述第二微生物同时发酵以制备含有水溶性部分和水不溶性部分的发酵混合物；以及
(iv)从所述发酵混合物中分离所述水不溶性部分，由此隔离所述水溶性部分并制备出所述双重发酵提取物。
18.一种制备来自同时发酵的发酵提取物的方法，所述方法包括：
(i)使用通过化学方法定义的第一营养培养基使第一微生物生长至对数生长后期，以制备含有所述第一微生物和由所述第一微生物表达的次级代谢物的第二营养培养基；
(ii)使所述第二营养培养基与第二微生物接触；
(iii)在第二营养培养基中使所述第一微生物和所述第二微生物同时发酵以制备含有水溶性部分和水不溶性部分的发酵混合物；以及
(iv)从所述发酵混合物中分离所述水不溶性部分，由此隔离所述水溶性部分并制备出所述双重发酵提取物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述第一微生物为谢氏丙酸杆菌，所述第二微生物为植物乳杆菌。
20.根据权利要求18所述的方法，其中，所述第一微生物为微藻吾肯氏壶菌，所述第二微生物为植物乳杆菌。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的方法，其中，所述第一微生物与所述第二微生物在有氧条件下、无氧条件下或者组合条件下生长。
22.一种刺激皮肤细胞中的透明质酸和CD44生成的方法，所述方法包括使使用者的皮肤与根据权利要求1至17中任一项所述的局部用组合物接触。
23.一种刺激皮肤细胞中的透明质酸和半胱天冬酶-14生成的方法，所述方法包括使使用者的皮肤与根据权利要求1至17中任一项所述的局部用组合物接触。
CN201280052827.6A 2011-10-25 2012-10-25 含有顺序发酵或同时发酵的提取物的组合物 Expired - Fee Related CN103957997B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161550981P 2011-10-25 2011-10-25
US61/550,981 2011-10-25
PCT/EP2012/071137 WO2013060771A2 (en) 2011-10-25 2012-10-25 Composition containing an extract of a sequential or simultaneous fermentation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103957997A true CN103957997A (zh) 2014-07-30
CN103957997B CN103957997B (zh) 2018-09-21

Family

ID=47146356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280052827.6A Expired - Fee Related CN103957997B (zh) 2011-10-25 2012-10-25 含有顺序发酵或同时发酵的提取物的组合物

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10272121B2 (zh)
EP (1) EP2773431B1 (zh)
JP (1) JP6284881B2 (zh)
KR (1) KR20140094563A (zh)
CN (1) CN103957997B (zh)
HK (1) HK1201486A1 (zh)
WO (1) WO2013060771A2 (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105125475A (zh) * 2015-09-27 2015-12-09 常州市奥普泰科光电有限公司 一种化妆品成膜保湿添加剂
CN106821948A (zh) * 2015-09-23 2017-06-13 豪威株式会社 将利用银耳菌丝体的松萝发酵提取物作为有效成分的化妆品组合物
CN108471757A (zh) * 2015-12-22 2018-08-31 3M创新有限公司 用于移除孢子的方法
CN111617120A (zh) * 2020-06-03 2020-09-04 广州鹰远生物科技有限公司 一种人参虫草发酵提取物的制备方法
CN112438912A (zh) * 2019-08-30 2021-03-05 株式会社Lg生活健康 含有松露蘑菇提取物的发酵物作为有效成分的化妆品组合物
CN112725482A (zh) * 2021-01-19 2021-04-30 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 微生物在耐重金属蔬菜品种分类中的应用
CN112852666A (zh) * 2021-01-19 2021-05-28 新疆河润水业有限责任公司 一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的微生物肥料
CN114010548A (zh) * 2021-11-29 2022-02-08 天津市康婷生物工程集团有限公司 层孔菌深层发酵浓缩液与菌体提取物组合物及其制备方法、应用
CN112438912B (zh) * 2019-08-30 2024-06-11 株式会社Lg生活健康 含有松露蘑菇提取物的发酵物作为有效成分的化妆品组合物

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ201523A3 (cs) * 2015-01-16 2016-07-27 Bio Agens Research And Development - Bard, S.R.O. Duální mikrobiální preparát pro dlouhodobé potlačení nebo prevenci symptomů oportunních mikrobiálních infekcí
US10258567B1 (en) 2016-11-17 2019-04-16 Grace Procurements Llc Vaginal probiotic products and related processes
CN108641988B (zh) * 2018-06-15 2021-09-21 吉林省农业科学院 植物乳杆菌na136及其在缓解非酒精性脂肪肝病中的应用
CN116463248B (zh) * 2023-03-14 2024-02-23 华南农业大学 一株抑制水霉生长的乳酸菌及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050196480A1 (en) * 2004-03-04 2005-09-08 Michael Sullivan Skin treatment method with lactobacillus extract
CN101531978A (zh) * 2009-04-23 2009-09-16 中国水产科学研究院南海水产研究所 乳酸杆菌调控微藻混合培养及协同净化养殖排放水的方法

Family Cites Families (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1541463A (en) 1975-10-11 1979-02-28 Lion Dentifrice Co Ltd Process for prparing a multiple emulsion having a dispersing form of water-phase/oil-phase/water-phase
DE3139093C1 (de) 1981-10-01 1988-05-05 Dr. Babor GmbH & Co, 5100 Aachen Kosmetisches Mittel
US4960764A (en) 1987-03-06 1990-10-02 Richardson-Vicks Inc. Oil-in-water-in-silicone emulsion compositions
FR2621327B1 (fr) * 1987-10-06 1990-01-05 Commissariat Energie Atomique Procede de production et d'extraction de polysaccharides a partir d'une culture de porphyridium cruentum et dispositif pour la mise en oeuvre du procede
JPH07501540A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 リチャードソン、ビックス、インコーポレーテッド 皮膚シワ及び／又は皮膚萎縮を調節するための組成物
FR2696932B1 (fr) * 1992-10-19 1994-11-25 Sederma Sa Nouvelles compositions à usage cosmétique consistant de l'association d'un filtrat de fermentation et d'extraits de plantes.
US5681852A (en) 1993-11-12 1997-10-28 The Procter & Gamble Company Desquamation compositions
FR2725896B1 (fr) * 1994-10-19 1996-11-29 Sederma Sa Nouvelles compositions cosmetiques ou dermopharmaceutiques
CN1136429A (zh) * 1995-01-24 1996-11-27 康白 微生态制剂美容霜及其制备方法
JP3580453B2 (ja) 1995-09-28 2004-10-20 株式会社アドバンス 細胞賦活性化粧料
FR2754709B1 (fr) * 1996-10-23 1999-03-05 Sanofi Sa Composition cosmetique contenant un antagoniste des recepteurs du neuropeptide gamma et alpha 2 antagonistes susceptibles d'etre incorpores dans une telle composition
CA2274524A1 (en) * 1996-12-10 1998-06-18 Nishiyama, Kenichi Remedy for axillary osmidrosis containing adrenocorticosteriodal preparation
JP3711377B2 (ja) * 2001-01-31 2005-11-02 共栄化学工業株式会社 乳化剤及び乳化化粧料並びにその製造法
JP2003081808A (ja) * 2001-09-13 2003-03-19 Taiyo Corp 乳酸菌発酵代謝物を含有する保湿剤及び化粧料組成物
EP1308506A1 (en) * 2001-11-06 2003-05-07 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Mixtures of Propionibacterium jensenii and Lactobacillus sp. with antimicrobial activities for use as a natural preservation system
US7217417B2 (en) 2002-05-20 2007-05-15 Dermacia, Inc. Gel-based cosmetic and wound-healing formulation and method
FR2873038B1 (fr) 2004-07-16 2009-11-27 Source Marine Ile Grande Composition comprenant un milieu de culture de microorganisme marin et/ou d'eau douce photosynthetique
JP2008511318A (ja) * 2004-09-01 2008-04-17 アグロテクノロジー アンド フード イノベイションズ ビー．ブイ． 基質の変換効率が向上された発酵方法
JP4520386B2 (ja) 2004-09-01 2010-08-04 株式会社東洋新薬 ニンニクから得られる発酵物
US20060110815A1 (en) 2004-10-13 2006-05-25 Gruber James V Personal care composition containing ozone-stressed yeast lysates
JP2006199618A (ja) * 2005-01-20 2006-08-03 Ryuichi Kamioka 焼酎粕抽出残渣又は焼酎粕抽出物を含有する美白剤及びチロシナーゼ阻害剤
FR2889057B1 (fr) * 2005-08-01 2008-07-18 Oreal Composition cosmetique et/ou dermatologique pour la prevention et/ou le traitement des peaux sensibles ou seches
JP4942322B2 (ja) * 2005-09-30 2012-05-30 株式会社琉球バイオリソース開発 皮膚線維芽細胞増殖促進剤
WO2007074479A1 (en) * 2005-12-29 2007-07-05 Abl Biotechnologies Ltd Novel strain of schizochytrium limacinum useful in the production of lipids and extracellular polysaccharides and process thereof
US20070207939A1 (en) * 2006-02-10 2007-09-06 Gyorgyi Fenyvesi Compositions comprising mono and di esters of biologically-based 1,3-propanediol
FR2912917B1 (fr) 2007-02-26 2012-05-18 Oreal Milieu conditionne et ses utilisations
FR2912916B1 (fr) 2007-02-26 2009-05-22 Oreal Composition cosmetique ou dermatologique comprenant un milieu de culture cellulaire
US20080226568A1 (en) * 2007-03-13 2008-09-18 Playtex Products, Inc. Synergistic preservative systems and their use in topical compositions
RU2351376C1 (ru) * 2007-12-26 2009-04-10 Алексей Алексеевич Грызунов Косметическая маска
JP2009209057A (ja) * 2008-03-01 2009-09-17 Takagi Sadaji 免疫活性剤およびその製造方法、並びにその免疫活性剤を配合した人用食品、動物・家畜用飼料、植物用免疫活性剤及び化粧品原材料
IL192333A0 (en) * 2008-06-19 2011-08-01 Nahshon Edelson Photobioreactor, system and method for the cultivation of microalgae
US9376659B2 (en) * 2008-07-24 2016-06-28 Arch Personal Care Products, L.P. Personal care composition containing yeast/polyphenol ferment extract
FR2938437B1 (fr) * 2008-11-19 2020-03-27 Société des Produits Nestlé S.A. Utilisation cosmetique de microorganisme pour le traitement des peaux grasses
EP2657342B1 (en) * 2008-08-08 2015-11-18 Genisphere, LLC DNA dendrimers protected against nuclease degradation
BRPI0923281A2 (pt) * 2008-12-03 2020-11-03 Shiseido Company, Ltd. produto cosmetico à base de óleo em água e seu método de produção
JP2010173991A (ja) * 2009-01-30 2010-08-12 Kouai Kagaku Co Ltd 皮膚外用剤
CH701253A1 (de) * 2009-06-12 2010-12-15 Mibelle Ag Verwendung eines Extraktes aus Schneealgen in kosmetischen oder dermatologischen Formulierungen.
KR101255050B1 (ko) * 2009-07-14 2013-04-16 씨제이제일제당 (주) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
ES2689170T3 (es) * 2009-08-31 2018-11-08 Avon Products, Inc. Usos cosméticos de extractos de levadura estresada modificados y composiciones relacionadas
JP5546335B2 (ja) * 2010-04-27 2014-07-09 株式会社豊田中央研究所 微生物培養添加剤
FR2984126B1 (fr) * 2011-12-20 2014-08-22 Oreal Polysaccharides sulfates agent antipelliculaire

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050196480A1 (en) * 2004-03-04 2005-09-08 Michael Sullivan Skin treatment method with lactobacillus extract
CN101531978A (zh) * 2009-04-23 2009-09-16 中国水产科学研究院南海水产研究所 乳酸杆菌调控微藻混合培养及协同净化养殖排放水的方法

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106821948A (zh) * 2015-09-23 2017-06-13 豪威株式会社 将利用银耳菌丝体的松萝发酵提取物作为有效成分的化妆品组合物
CN105125475A (zh) * 2015-09-27 2015-12-09 常州市奥普泰科光电有限公司 一种化妆品成膜保湿添加剂
CN108471757A (zh) * 2015-12-22 2018-08-31 3M创新有限公司 用于移除孢子的方法
CN112438912A (zh) * 2019-08-30 2021-03-05 株式会社Lg生活健康 含有松露蘑菇提取物的发酵物作为有效成分的化妆品组合物
CN112438912B (zh) * 2019-08-30 2024-06-11 株式会社Lg生活健康 含有松露蘑菇提取物的发酵物作为有效成分的化妆品组合物
CN111617120A (zh) * 2020-06-03 2020-09-04 广州鹰远生物科技有限公司 一种人参虫草发酵提取物的制备方法
CN111617120B (zh) * 2020-06-03 2021-08-13 广州鹰远生物科技有限公司 一种人参虫草发酵提取物的制备方法
CN112725482A (zh) * 2021-01-19 2021-04-30 贵州省蚕业研究所(贵州省辣椒研究所) 微生物在耐重金属蔬菜品种分类中的应用
CN112852666A (zh) * 2021-01-19 2021-05-28 新疆河润水业有限责任公司 一种微生物菌剂的制备方法及采用微生物菌剂制备的微生物肥料
CN114010548A (zh) * 2021-11-29 2022-02-08 天津市康婷生物工程集团有限公司 层孔菌深层发酵浓缩液与菌体提取物组合物及其制备方法、应用
CN114010548B (zh) * 2021-11-29 2024-05-03 天津市康婷生物工程集团有限公司 层孔菌深层发酵浓缩液与菌体提取物组合物及其制备方法、应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20130101576A1 (en) 2013-04-25
US10272121B2 (en) 2019-04-30
HK1201486A1 (zh) 2015-09-04
EP2773431B1 (en) 2019-03-20
JP2014530890A (ja) 2014-11-20
WO2013060771A2 (en) 2013-05-02
EP2773431A2 (en) 2014-09-10
JP6284881B2 (ja) 2018-02-28
CN103957997B (zh) 2018-09-21
KR20140094563A (ko) 2014-07-30
WO2013060771A3 (en) 2014-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103957997B (zh) 含有顺序发酵或同时发酵的提取物的组合物
US9744121B2 (en) Personal care composition containing yeast/polyphenol ferment extract
CN114209617B (zh) 一种酵母发酵的灵芝提取物及其制备方法和用途
KR20130074172A (ko) 미선나무 발효물질을 이용한 화장용품용 조성물
KR101785954B1 (ko) 영지버섯 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물
CN115125153A (zh) 一种半乳糖酵母样菌发酵产物滤液的制备方法及其应用
CN102851259B (zh) 抗氧化剂的制造方法
CN109939059B (zh) 一种稻胚芽五菌发酵缓释化妆品及其制备方法和应用
CN113842341B (zh) 一种玫瑰茄发酵产物及其制备方法和应用
CN114262675A (zh) 复合菌发酵滤液的制备及其美白功效在化妆品中的应用
KR101737940B1 (ko) 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물
KR101815925B1 (ko) 폴리코사놀이 증대된 보리새싹 발효물 및 그의 제조방법
WO2021111286A1 (fr) Preparation de micro-organismes pour l'extraction d'actifs vegetaux, extraits obtenus et leurs utilisations
KR20110135477A (ko) 항산화 및 미백 효능을 갖는 효모 발효액 및 이의 제조 방법
KR102155716B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸 ami-1103 균주를 이용한 당근 발효물 제조방법
Shon et al. Cancer chemoprevention: inhibitory effect of soybeans fermented with basidiomycetes on 7, 12-dimethylbenz [a] anthracene/12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-induced mouse skin carcinogenesis
KR20190037436A (ko) 수련 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법
KR101904971B1 (ko) 괄루근 동충하초 고체 발효물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물
KR102018883B1 (ko) 상황버섯 균사체에 의한 복분자 발효물을 포함하는 화장품 원료 조성물 및 이를 포함하는 기능성 화장료 조성물
KR102244812B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸 아종 플란타룸 sdcm 1002 및 사카로마에세스 세르비지에 sdcm 3017의 혼합 균주, 그 배양액, 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물
CN109007804A (zh) 一种玫瑰益生菌酵素及其制备方法
KR102155717B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸 ami-1103 균주를 이용한 브로콜리 발효물 제조방법
WO2019167177A1 (ja) 海洋由来酵母培養物含有皮膚外用用組成物
KR20240067544A (ko) 신품종 늘품콩의 락토바실러스 플란타룸 유산균 발효배양물을 포함하는 항산화 조성물
CN114891852A (zh) 获得高含量仙客来皂甙发酵液的方法、发酵液及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20180921

Termination date: 20191025

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee