CN103947550B - 大麦幼胚直接成苗组织培养法及所用培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大麦幼胚直接成苗组织培养基，包括成苗培养基和生根壮苗培养基；成苗培养基的制备方法为：每升成苗培养基的母液先调节pH为5.7～5.9，然后加入植物凝胶；接着进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B1、维生素B6、烟酸、6-苄基氨基嘌呤和2，4-二氯苯氧乙酸；生根壮苗培养基的制备方法为：先在每升MS基本培养液中加入肌醇、水解酪蛋白、脯氨酸、麦芽糖，然后调pH值至5.8～6.0，接着加入植物凝胶，再进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B1。本发明还同时提供了利用上述培养基所进行的大麦幼胚直接成苗组织培养方法。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种快速成苗的大麦幼胚组织培养方法及相应的组织培养体系。
背景技术
大麦是世界上主要的粮食作物之一，可作啤酒、饲料、食品和保健品。用常规育种培育大麦新品种年限过长，在不进行加代的情况下需要8～10年左右的时间。为缩短育种年限,育种家探索和研究了许多加代的方法，概括起来主要有以下方法:一是选择利用在地理上较适宜育种地大麦生态类型的自然环境和季节进行异地加代；二是利用自然条件和人工气候室相结合的就地或异地加代；三是完全模拟自然条件利用人工气候室进行加代。唐亚伟等（2008，西藏科技，（10）：10～11）充分利用西藏地区丰富的光热资源，辅以人工光、温，研制出可使青稞（裸大麦）实现一年两代的就地加代技术。曾亚文等（2013，中国农业科技导报，15(3):48～56）充分利用云南地区特有的气候条件，实现了大麦一年三代。
在加代过程中，前代种子一经成熟甚至未成熟收获后就急需播种。刚收获的大麦种子一般都具有休眠期，尤其是未成熟种子，因此最佳的种子采收时期和有效的种子休眠破除技术在大麦加代技术体系中较为关键。为了缩短加代的世代周期，育种家们进行了不少的研究，总结出了一些具体可供利用的休眠破除技术，归纳起来大致有药剂法(双氧水和“920”浸种)和物理法(干湿交替、高低温交替、自然曝晒、刺破种皮等)，但各人方法不一，效果难以进行比较。
一般来讲，大麦从开花到成熟要40～50天，但是授粉10d左右的大麦幼胚就具有直接成苗的能力，此后种子进一步发育所耗的时间(30～40天)在育种过程中可以省去；这是寻求加速发育进程的重要时间潜力。幼胚培养直接成苗不仅可以省去种子后熟所用的时间,还可以减少以后的休眠破除处理的时间，为实现大麦一年4～5代奠定基础。
目前大麦幼胚培养方法一般都经过3步培养，依次为诱导愈伤培养、分化培养和生根壮苗培养，这3步都需要配制相应的培养基，这个过程所用的培养时间较长，一般完成整个培养过程需要12～16周，而且，大麦幼胚培养的成本和工作量都很大。因为用幼胚诱导的愈伤组织是作为转基因的理想受体，所以目前大麦幼胚培养技术主要用于大麦转基因研究，幼胚培养在大麦加代中很少应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种快速成苗的大麦幼胚组织培养方法及所用培养基，幼胚培养不产生愈伤直接成苗，整个过程只需要经过2步培养,完成整个培养过程需要3～4周。采用该方法能解决目前大麦种子成熟和破除休眠耗时、传统大麦幼胚组织培养：愈伤-分化-成苗过程周期长、污染率高，易变异等问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种大麦幼胚直接成苗组织培养基，包括成苗培养基和生根壮苗培养基；
成苗培养基的制备方法如下：
每升成苗培养基的母液先调节pH为5.7～5.9，然后加入3.8～4.2g的植物凝胶（Phytagel）；接着进行灭菌处理（为常规的高温、高压的灭菌处理，下同），最后加入过滤灭菌处理（例如采用0.2μm微孔膜过滤灭菌，下同）后的维生素B1（VB1）0.45～0.55mg、维生素B6（VB6）0.24～0.26mg、烟酸0.24～0.26mg、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）0.18～0.22mg和2，4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.035～0.055mg；得成苗培养基；
备注说明：上述成苗培养基的制备方法为：
VB1、VB6、烟酸、6-BA和2,4-D先分别配成1000倍的母液，过滤灭菌，分别得过滤灭菌后的VB1母液（0.45～0.55g/L）、VB6母液（0.24～0.26g/L）、烟酸母液（0.24～0.26g/L）、6-BA母液（0.18～0.22g/L）和2,4-D母液（0.035～0.055g/L）；保存备用；
每升成苗培养基的母液先调节pH为5.7～5.9，然后加入3.8～4.2g植物凝胶，灭菌处理，待灭菌溶液温度降至50～60℃时，分别加入1ml的VB1，1ml的VB6、1ml的烟酸、1ml的6-BA和1ml的2,4-D的过滤灭菌母液；得成苗培养基；
所述成苗培养基的母液由以下含量的组分组成：
KNO31800～2000mg/L，NH4NO3160～170mg/L，KH2PO4160～180mg/L，CaCl2·2H2O160～170mg/L，MgSO4·7H2O175～195mg/L，Na2-EDTA·2H2O36.5～38.5mg/L，FeSO4·7H2O26.5～28.5mg/L，H3BO36.0～6.4mg/L，MnSO4·4H2O22.0～22.6mg/L，ZnSO4·7H2O8.4～8.8mg/L，Na2MoO4·2H2O0.20～0.30mg/L，KI0.80～0.86mg/L，CuSO4·5H2O0.02～0.03mg/L，CoCl2·6H2O0.02～0.03mg/L，脯氨酸580～620mg/L，谷氨酰胺240～260mg/L，水解酪蛋白380～420mg/L，肌醇90～110mg/L和麦芽糖28～32g/L，其余为蒸馏水；
生根壮苗培养基的制备方法如下：
先在每升MS基本培养液（即为常规的液体状的MS基本培养基）中加入肌醇230～270mg、水解酪蛋白0.9～1.1g、脯氨酸680～700mg、麦芽糖28～32g，然后调pH值至5.8～6.0，接着加入植物凝胶（Phytagel）3.8～4.2g，再进行灭菌处理（为常规的高温、高压的灭菌处理），最后加入过滤灭菌处理后的维生素B10.35～0.45mg。
备注说明：生根壮苗培养基的制备方法具体为：
①、VB1用蒸馏水配成1000倍的母液，过滤灭菌，得过滤灭菌后的VB1母液（0.4g/L）；
②、在1LMS基本培养液中加入肌醇230～270mg、水解酪蛋白0.9～1.1g、脯氨酸680～700mg、麦芽糖28～32g，然后调pH值至5.8～6.0，接着加入植物凝胶（Phytagel）3.8～4.2g，再进行灭菌处理；待灭菌溶液温度降至50～60℃时，加上述过滤灭菌后的VB1母液1ml，得生根壮苗培养基。
作为本发明的大麦幼胚直接成苗组织培养基的改进：
成苗培养基的制备方法如下：
每升成苗培养基的母液先调节至pH为5.8，然后加入4g的植物凝胶（Phytagel）；接着进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B1（VB1）0.5mg、维生素B6（VB6）0.25mg、烟酸0.25mg、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）0.2mg和2，4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.04mg；
所述成苗培养基的母液由以下含量的组分组成：
KNO31900mg/L，NH4NO3165mg/L，KH2PO4170mg/L，CaCl2·2H2O165mg/L，MgSO4·7H2O185mg/L，Na2-EDTA·2H2O37.3mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，KI0.83mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，脯氨酸600mg/L，谷氨酰胺250mg/L，水解酪蛋白400mg/L，肌醇100mg/L和麦芽糖30g/L，其余为蒸馏水；
生根壮苗培养基的制备方法如下：
先在每升MS基本培养液中加入肌醇250mg、水解酪蛋白1g、脯氨酸690mg、麦芽糖30g，然后调pH值至5.9，接着加入植物凝胶（Phytagel）4g，再进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B1（VB1）0.4mg。
本发明还同时提供了利用上述大麦幼胚直接成苗组织培养基所进行的大麦幼胚直接成苗组织培养方法，包括以下步骤：
1）、选取授粉后12-15天的未成熟大麦种子经消毒灭菌后，取幼胚接种到成苗培养基上；
2）、将步骤1）所得的接种在成苗培养基上的离体胚放入22～26℃的培养箱中黑暗培养，暗培养时间为2～4天；
3）、将步骤2）所得的接种在成苗培养基上的离体胚放入25～28℃光照培养直至长出2～3片的叶子（一般2～3周），光照强度为40～60μmol/m2/s，每天的光照时间为14小时，得绿苗；
4）、将步骤3）所得的绿苗（长有2～3片叶子）转到生根壮苗培养基上，25～28℃光照培养，光照强度为40～60μmol/m2/s，每天的光照时间为14小时；直至绿苗长出≥2cm的根（一般5～7天）；
5）、将步骤4）所得的绿苗在室内放置1～2天（温度一般为22～25℃），洗去根上的培养基，得可移栽的苗。
作为本发明的大麦幼胚直接成苗组织培养方法的改进：所述步骤1）的消毒灭菌为：选取授粉后12-15天的未成熟大麦种子，剥去外壳，然后将上述处理后的种子浸泡在质量浓度为30～55%的次氯酸钠（NaClO）水溶液中15～35min，弃去次氯酸钠溶液再加体积浓度70～75%（v/v）酒精浸泡4～6min，再弃去体积浓度70～75%（v/v）酒精加入体积浓度2.5～3.5%（v/v）的双氧水浸泡4～6min，最后用灭菌水洗涤（一般为5～6次）；
所述取幼胚为：在无菌操作台上，用灭菌的解剖刀将消毒灭菌后的未成熟种子从胚侧边轻轻刺破，然后从胚的前端往后慢慢将胚取出，盾片朝上接种到成苗培养基上。
备注说明：本发明所述的过滤灭菌是指0.2μm微孔膜过滤灭菌。
将本发明所得的可移栽的苗移栽到盆钵中，等绿苗恢复生长后即可移栽至大田或在温室中继续生长，至种子收获。
在本发明中：
取未成熟种子的幼胚进行组织培养。
培养基的制备方法例如可具体为以下：
成苗培养基的制备方法为：将维生素B1（VB1）、维生素B6（VB6）、烟酸、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和2，4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）过滤灭菌；成苗培养基的母液先用1MKOH调pH值，然后加入植物凝胶，在1.1个大气压，121℃下灭菌15min；待灭菌溶液温度降至50～60℃时，加入上述过滤灭菌的试剂，将培养液倒入75×15mm的灭菌培养皿中，待降至室温后用封口膜封好，4℃冰箱中保存备用。
生根壮苗培养基制备方法为：将维生素B1（VB1）过滤灭菌；MS基本培养液中加入肌醇、水解酪蛋白、脯氨酸、麦芽糖后，先用1MKOH调pH值，然后加入植物凝胶；在1.1个大气压，121℃下灭菌15min，待灭菌溶液温度降至50～60℃时，加入过滤灭菌的维生素B1（VB1），所得的培养液倒入35×120mm的灭菌培养瓶中待降至室温后用封口膜封好，4℃冰箱中保存备用。
本发明提供的大麦幼胚离体培养的组培方法：将未成熟的种子，剥去外壳直至胚外露，种子消毒灭菌处理后，取幼胚接种到培养基上，幼胚直接出牙生根。与以前报道的等待种子成熟收获后采取破除种子休眠技术进行加代的方法相比，该方法通过幼胚离体培养，幼胚直接出牙生根，减少了种子成熟的时间，省去了破除种子休眠的过程，缩短了加代的世代周期；与用于基因转化的幼胚培养方法相比，本方法没有幼胚形成愈伤的过程，减少了操作次数和培养时间，减少了污染和变异的机会，提高了组培效率。
本发明构建的大麦幼胚成苗体系，成苗率高，达到90～95%，而且可适用于不同基因型的大麦品种，为大麦育种的快速加代奠定了基础。
综上所述，本发明创建的大麦幼胚快速成苗组织培养体系能够显著减少大麦从授粉到成苗的时间（约为35天），组培效率高（约为92.8%），大大推动了大麦加代的进程。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为本发明实施例2中“浙秀12/苏啤3号”F1大麦幼胚离体培养的绿苗；
A为“浙秀12/苏啤3号”F1大麦幼胚分化的绿苗，
B为“浙秀12/苏啤3号”F1大麦幼胚生根的绿苗。
具体实施方式
实施例1、大麦幼胚离体培养基，由成苗培养基和生根壮苗培养基这2类培养基组成：
1）、成苗培养基：
先配制成苗培养基的母液：
成苗培养基的母液由以下含量的组分组成：
KNO31900mg/L，NH4NO3165mg/L，KH2PO4170mg/L，CaCl2·2H2O165mg/L，MgSO4·7H2O185mg/L，Na2-EDTA·2H2O37.3mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，KI0.83mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，脯氨酸600mg/L，谷氨酰胺250mg/L，水解酪蛋白400mg/L，肌醇100mg/L和麦芽糖30g/L，其余为蒸馏水；
成苗培养基的母液的制备方法如下：
①、分别称取KNO319.0g，NH4NO31.65g，KH2PO41.7g，MgSO4·7H2O1.85g，CaCl2·2H2O1.65g，用蒸馏水溶解后混合定容至1L，配成10倍的母液A保存备用。
再分别称取MnSO4·4H2O2.23g，ZnSO4·7H2O0.86g，H3BO30.62g，Na2MoO4·2H2O0.025g，CuSO4·5H2O0.0025g，CoCl2·6H2O0.0025g，KI0.083g，用蒸馏水溶解后混合定容至1L，配成100倍母液B保存备用。
再称取FeSO4·7H2O2.78g和Na2-EDTA·2H2O3.73g，先用蒸馏水加热后溶解，再混合后再煮沸，冷却后蒸馏水定容至1L，配成100倍的母液C保存备用；
②、称取脯氨酸0.6g，谷氨酰胺0.25g，水解酪蛋白0.4g，肌醇0.1g和麦芽糖30g，用蒸馏水溶解后，再加100ml母液A，10ml母液B和10ml母液C，加入蒸馏水定容至1L。
再配制成苗培养基：
VB1、VB6、烟酸、6-BA和2,4-D先分别配成1000倍的母液，0.2μm微孔膜过滤灭菌，分别得过滤灭菌后的VB1母液（0.5g/L）、VB6母液（0.25g/L）、烟酸母液（0.25g/L）、6-BA母液（0.2g/L）和2,4-D母液（0.04g/L）；保存备用；
每升成苗培养基的母液用1MKOH调pH值至5.8，加入4g植物凝胶（Phytagel），在1.1个大气压，121℃下灭菌15min，待灭菌溶液温度降至55℃左右时，分别加入1ml的VB1，1ml的VB6、1ml的烟酸、1ml的6-BA和1ml的2,4-D的过滤灭菌母液；得成苗培养基；
将所得的成苗培养基倒入75×15mm的灭菌培养皿中，待降至室温后用封口膜封好，4℃冰箱中保存备用。
2）、生根壮苗培养基：
其制备方法如下：
①、VB1用蒸馏水配成1000倍的母液，0.2μm微孔膜过滤灭菌，得过滤灭菌后的VB1母液（0.4g/L），保存备用；
②、在1LMS基本培养液（即为常规的液体状的MS基本培养基）中加入0.25g肌醇，1g水解酪蛋白，0.69g脯氨酸，30g麦芽糖，所得溶液用1MKOH调pH值至5.9，加入4g植物凝胶（Phytagel），在1.1个大气压，121℃下灭菌15min，待灭菌溶液温度降至55℃左右时，加上述过滤灭菌后的VB1母液1ml，得生根壮苗培养基。
将生根壮苗培养基倒入35×120mm的灭菌培养瓶中待降至室温后用封口膜封好，4℃冰箱中保存备用。
实施例2、一种大麦幼胚离体培养的方法，使用实施例1中的相应培养基，以“浙秀12/苏啤3号”F1大麦为实验材料按如下步骤进行：
1）、选取“浙秀12/苏啤3号”F1大麦授粉后12-15天的未成熟种子，剥去外壳使胚露出，然后将上述处理后的种子浸泡在50%（质量浓度）的次氯酸钠溶液中30min，弃去次氯酸钠溶液再加70%（v/v）酒精浸泡5min，再弃去70%酒精加3%（v/v）的双氧水浸泡5min，最后用灭菌水洗5次。
在无菌操作台上，用灭菌的解剖刀将消毒灭菌后的未成熟种子从胚侧边轻轻刺破，然后从胚的前端往后慢慢将胚取出，盾片朝上接种到成苗培养基上。
2）、将步骤1）所得的接种在成苗培养基上的离体胚放入22～26℃的培养箱中黑暗培养，暗培养时间为3天；
3）、将步骤2）所得的接种在成苗培养基上的离体胚放入25～28℃光照培养直至长出2～3片的叶子（一般2～3周），光照强度为50μmol/m2/s，每天的光照时间为14小时，得绿苗（如图1A所示）；
4）、将步骤3）所得的绿苗（长有2～3片叶子）转到生根壮苗培养基上，25～28℃光照培养，光照强度为50μmol/m2/s，每天的光照时间为14小时；直至绿苗长出≥2cm的根（一般5～7天）（如图1B所示）；
5）、将步骤4）所得的绿苗在室内放置1～2天（温度一般为22～25℃），洗去根上的培养基，得可移栽的苗。
6）、按照常规方式，将步骤5）所得的苗移栽到盆钵中，等绿苗恢复生长后即可移栽至大田或在温室中继续生长，至种子收获。
设置了3次重复，每次接种60个胚，成苗率（平均值）为92.8%。
实施例3、按照实施例2的方法，对大麦品种“浙啤33”幼胚进行离体培养，设置了3次重复，每次接种60个胚，成苗率（平均值）为90.6%。
实施例4、按照实施例2的方法，对大麦品种“浙皮8号”幼胚进行离体培养，设置了3次重复，每次接种60个胚，成苗率（平均值）为95.0%。
对比例1-1、将实施例1的“成苗培养基”中的6-BA的浓度由0.2mg/L改成1.0mg/L；其余内容同实施例1。在实施例4中使用该对比例1-1所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，成苗率（平均值）为71.7%。
对比例1-2、在实施例1的“成苗培养基”中取消6-BA的使用；其余内容同实施例1。在实施例4中使用该对比例1-2所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，成苗率（平均值）为57.8%。
对比例2-1、将实施例1的“成苗培养基”中的2,4-D的浓度由0.04mg/L改成1.0mg/L；其余内容同实施例1。在实施例4使用该对比例2-1所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，产生了大量愈伤组织，成苗率（平均值）仅为17.2%。
对比例2-2、在实施例1的“成苗培养基”中取消2,4-D的使用；其余内容同实施例1。在实施例4中使用该对比例2-2所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，成苗率（平均值）为85.6%。
对比例3-1、将实施例1中的成苗培养基的母液中NH4NO3的浓度由165mg/L改成1650mg/L（为常规MS基本培养基中的浓度）；其余内容同实施例1。在实施例4中使用该对比例3-1所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，成苗率（平均值）为73.9%。
对比例3-2、将实施例1中的成苗培养基的母液中CaCl2·2H2O的浓度由165mg/L改成440mg/L（为常规MS基本培养基中的浓度）；其余内容同实施例1。在实施例4中使用该对比例3-2所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，成苗率（平均值）为63.9%。
对比例3-3、将实施例1中的成苗培养基的母液中MgSO4·7H2O的浓度由185mg/L改成370mg/L（为常规MS基本培养基中的浓度）；其余内容同实施例1。在实施例4中使用该对比例3-3所得的成苗培养基，其余等同于实施例4。一共接种了180个幼胚，成苗率（平均值）为82.8%。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (5)
1.大麦幼胚直接成苗组织培养基，其特征是：包括成苗培养基和生根壮苗培养基；
所述成苗培养基的制备方法为：
每升成苗培养基的母液先调节pH为5.7～5.9，然后加入3.8～4.2g的植物凝胶；接着进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B10.45～0.55mg、维生素B60.24～0.26mg、烟酸0.24～0.26mg、6-苄基氨基嘌呤0.18～0.22mg和2，4-二氯苯氧乙酸0.035～0.055mg；得成苗培养基；
所述成苗培养基的母液由以下含量的组分组成：
KNO31800～2000mg/L，NH4NO3160～170mg/L，KH2PO4160～180mg/L，CaCl2·2H2O160～170mg/L，MgSO4·7H2O175～195mg/L，Na2-EDTA·2H2O36.5～38.5mg/L，FeSO4·7H2O26.5～28.5mg/L，H3BO36.0～6.4mg/L，MnSO4·4H2O22.0～22.6mg/L，ZnSO4·7H2O8.4～8.8mg/L，Na2MoO4·2H2O0.20～0.30mg/L，KI0.80～0.86mg/L，CuSO4·5H2O0.02～0.03mg/L，CoCl2·6H2O0.02～0.03mg/L，脯氨酸580～620mg/L，谷氨酰胺240～260mg/L，水解酪蛋白380～420mg/L，肌醇90～110mg/L和麦芽糖28～32g/L，其余为蒸馏水；
所述生根壮苗培养基的制备方法为：
先在每升MS基本培养液中加入肌醇230～270mg、水解酪蛋白0.9～1.1g、脯氨酸680～700mg、麦芽糖28～32g，然后调pH值至5.8～6.0，接着加入植物凝胶3.8～4.2g，再进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B10.35～0.45mg。
2.根据权利要求1所述的大麦幼胚直接成苗组织培养基，其特征是：
所述成苗培养基的制备方法为：
每升成苗培养基的母液先调节至pH为5.8，然后加入4g的植物凝胶；接着进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B10.5mg、维生素B60.25mg、烟酸0.25mg、6-苄基氨基嘌呤0.2mg和2，4-二氯苯氧乙酸0.04mg；得成苗培养基；
所述成苗培养基的母液由以下含量的组分组成：
KNO31900mg/L，NH4NO3165mg/L，KH2PO4170mg/L，CaCl2·2H2O165mg/L，MgSO4·7H2O185mg/L，Na2-EDTA·2H2O37.3mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·4H2O22.3mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，KI0.83mg/L，CuSO4·5H2O0.025mg/L，CoCl2·6H2O0.025mg/L，脯氨酸600mg/L，谷氨酰胺250mg/L，水解酪蛋白400mg/L，肌醇100mg/L和麦芽糖30g/L，其余为蒸馏水；
所述生根壮苗培养基的制备方法如下：
先在每升MS基本培养液中加入肌醇250mg、水解酪蛋白1g、脯氨酸690mg、麦芽糖30g，然后调pH值至5.9，接着加入植物凝胶4g，再进行灭菌处理，最后加入过滤灭菌处理后的维生素B10.4mg。
3.根据权利要求1或2所述的大麦幼胚直接成苗组织培养基，其特征是：所述过滤灭菌处理为采用0.2μm微孔膜过滤灭菌。
4.利用如权利要求1、2或3所述的大麦幼胚直接成苗组织培养基所进行的大麦幼胚直接成苗组织培养方法，其特征是包括以下步骤：
1)、选取授粉后12-15天的未成熟大麦种子经消毒灭菌后，取幼胚接种到成苗培养基上；
2)、将步骤1)所得的接种在成苗培养基上的离体胚放入22～26℃的培养箱中黑暗培养，暗培养时间为2～4天；
3)、将步骤2)所得的接种在成苗培养基上的离体胚放入25～28℃光照培养直至长出2～3片的叶子，光照强度为40～60μmol/m2/s，每天的光照时间为14小时，得绿苗；
4)、将步骤3)所得的绿苗转到生根壮苗培养基上，25～28℃光照培养，光照强度为40～60μmol/m2/s，每天的光照时间为14小时；直至绿苗长出≥2cm的根；
5)、将步骤4)所得的绿苗在室内放置1～2天，温度为22～25℃，洗去根上的培养基，得移栽的苗。
5.根据权利要求4所述的大麦幼胚直接成苗组织培养方法，其特征是：所述步骤1)的消毒灭菌为：选取授粉后12-15天的未成熟大麦种子，剥去外壳，然后将上述处理后的种子浸泡在质量浓度为30～55％的次氯酸钠水溶液中15～35min，弃去次氯酸钠溶液再加体积浓度70～75％酒精浸泡4～6min，再弃去体积浓度70～75％酒精加入体积浓度2.5～3.5％的双氧水浸泡4～6min，最后用灭菌水洗涤；
所述取幼胚为：在无菌操作台上，用灭菌的解剖刀将消毒灭菌后的未成熟种子从胚侧边刺破，然后从胚的前端往后将胚取出，盾片朝上接种到成苗培养基上。
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Citations (7)
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|---|---|---|---|---|
| JPH04360633A (ja) * | 1991-06-04 | 1992-12-14 | Norin Suisan Gijutsu Joho Kyokai | オオムギプロトプラストからの植物体の再生方法 |
| JPH08172955A (ja) * | 1994-12-26 | 1996-07-09 | Sapporo Breweries Ltd | オオムギ植物体の再生方法 |
| CA2383944A1 (en) * | 2001-05-02 | 2002-11-02 | Stephen L. Fox | Efficient production of multiple shoots from thidiazuron-treated mature embryos and leaf-base/apical meristems of barley (hordeum vulgare l.) genotypes |
| CN102533633A (zh) * | 2012-02-26 | 2012-07-04 | 浙江省农业科学院 | 抑制发芽/生根的大麦成熟胚组织培养法及所用培养基 |
| CN102577946A (zh) * | 2012-02-03 | 2012-07-18 | 浙江省农业科学院 | 大麦花药快速培养法及所用培养基 |
| CN102919130A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-02-13 | 江苏省农业科学院 | 一种二棱大麦苏啤4号的幼胚离体培养再生植株的方法 |
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04360633A (ja) * | 1991-06-04 | 1992-12-14 | Norin Suisan Gijutsu Joho Kyokai | オオムギプロトプラストからの植物体の再生方法 |
| JPH08172955A (ja) * | 1994-12-26 | 1996-07-09 | Sapporo Breweries Ltd | オオムギ植物体の再生方法 |
| CA2383944A1 (en) * | 2001-05-02 | 2002-11-02 | Stephen L. Fox | Efficient production of multiple shoots from thidiazuron-treated mature embryos and leaf-base/apical meristems of barley (hordeum vulgare l.) genotypes |
| CN102577946A (zh) * | 2012-02-03 | 2012-07-18 | 浙江省农业科学院 | 大麦花药快速培养法及所用培养基 |
| CN102533633A (zh) * | 2012-02-26 | 2012-07-04 | 浙江省农业科学院 | 抑制发芽/生根的大麦成熟胚组织培养法及所用培养基 |
| CN102919130A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-02-13 | 江苏省农业科学院 | 一种二棱大麦苏啤4号的幼胚离体培养再生植株的方法 |
| CN103583369A (zh) * | 2013-11-22 | 2014-02-19 | 上海市农业科学院 | 一种用于大麦小孢子培养愈伤组织诱导的培养基 |
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