CN115136889B - 一种番木瓜未成熟种子萌发方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种番木瓜未成熟种子萌发方法，涉及番木瓜种子萌发技术领域，包括以下步骤，取番木瓜青果，先用肥皂水洗干净表面污垢，然后用酒精浸泡1‑2分钟进行番木瓜青果表面消毒，消毒后，用灭菌的手术刀刨开番木瓜，取出颗粒饱满且未成熟的白色种子，用手术刀在种子近胚根的位置横切，舍弃远胚根的部分，接着，将切开的种子收集到带有灭菌滤纸的培养皿中。本发明解决番木瓜未成熟种子不萌发的问题，对于番木瓜育种工作具有重要意义，同时克服了现有技术通过激素诱导未成熟胚形成愈伤组织而导致番木瓜变异的因素，在一个月的时间能得到遗传稳定的番木瓜小苗，可以短时间内快速得到番木瓜种子幼苗，提高了番木瓜种子的萌发效率。

Description

一种番木瓜未成熟种子萌发方法
技术领域
本发明涉及番木瓜种子萌发技术领域，尤其涉及一种番木瓜未成熟种子萌发方法。
背景技术
番木瓜是番木瓜科、番木瓜属常绿软木质小乔木，番木瓜株高可达10米，番木瓜果实成熟时橙黄色或黄色，长圆球形，倒卵状长圆球形，梨形或近圆球形，果肉柔软多汁，味香甜，种子多数，卵球形，花果期全年，番木瓜果实成熟可作水果，未成熟的果实可作蔬菜煮熟食或腌食，可加工成蜜饯、果汁、果酱、果脯及罐头等，种子可榨油，果和叶均可药用。
番木瓜种子成熟之前种子种皮为白色或者微黄色，种子胚尚未成熟，种子没有发芽能力。番木瓜传统杂交育种工作中重要育种材料果实中的种子成熟时因遇到不可抗拒因素(台风等)导致番木瓜植株死亡，未成熟种子不能萌发，所以会导致种质资源的流失。
在番木瓜种植的过程中，常常需要对其种子进行萌发得到幼苗，这就需要用到萌发方法，现有的萌发方法采用的是番木瓜成熟种子，在30℃培养箱中10天左右开始破壳，21天左右种子萌发，这种萌发方式虽然可以实现种子萌发，但是从萌发到得到幼苗周期比较长，无法得到遗传稳定的番木瓜小苗，因此具有待改进的空间。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的从未成熟种子萌发到得到幼苗周期比较长，无法得到遗传稳定的番木瓜小苗的缺点，而提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法。其优点在于解决番木瓜未成熟种子不萌发的问题，对于番木瓜育种工作具有重要意义，同时克服了现有技术通过激素诱导未成熟胚形成愈伤组织而导致番木瓜的变异的因素，在一个月的时间能得到遗传稳定的番木瓜小苗，可以短时间内快速得到番木瓜种子幼苗，提高了番木瓜种子的萌发效率。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种番木瓜未成熟种子萌发方法，包括以下步骤：
步骤一：首先，准备20％次氯酸钠溶液、75％酒精、1/2MS固体培养基和灭菌水，选取番木瓜青果，先用肥皂水洗干净表面污垢，然后用酒精浸泡1-2分钟进行番木瓜青果表面消毒；
步骤二：消毒后，用灭菌的手术刀刨开番木瓜，取出颗粒饱满且未成熟种子；
步骤三：待完成受精后，用手术刀在种子近胚根的位置横切，舍弃远胚根的部分；
步骤四：接着，将切开的种子收集到带有灭菌滤纸的培养皿中，在培养皿中加入适量灭菌水，然后将切开的种子放入28℃培养箱中暗培养24-48h；
步骤五：当切开的种子胚体吸水胀大从种皮的束缚中脱出时，小心将胚体移到装有1/2MS培养基的培养皿中培养约一周，胚根伸长开始长出侧根；
步骤六：最后，将种子胚体转移到锥形瓶继续光下培养，长出番木瓜小苗。
通过采用以上技术方案：：该番木瓜未成熟种子萌发方法，解决番木瓜未成熟种子不萌发的问题，对于番木瓜育种工作具有重要意义，同时克服了现有技术通过激素诱导未成熟胚形成愈伤组织而导致番木瓜的变异的因素，在一个月的时间能得到遗传稳定的番木瓜小苗，可以短时间内快速得到番木瓜种子幼苗，提高了番木瓜种子的萌发效率。
本发明进一步设置为，所述种子胚体没有脱出时可以用钝头镊子轻轻挤压使其脱出，手动使胚脱出时时应注意避免镊子对种子胚体造成损伤。
通过采用以上技术方案：通过手动干预挤压出没有脱出的种子胚体，有助于提高种子萌发率。
本发明进一步设置为，所述胚体移到装有1/2MS培养基的培养皿中时应注意胚根向下。
通过采用以上技术方案：胚根在形态学下端，当胚体的胚根向下放置时，可以促进胚根发育。
本发明进一步设置为，所述未成熟种子为番木瓜花授粉后80-100 天青色果实种子，种子种皮及假种皮为白色。
通过采用以上技术方案：番木瓜青果中未成熟种子不能萌发，选用该番木瓜果实种子能有力证明横切种子能解决种子萌发。
本发明进一步设置为，所述1/2MS培养基相比MS培养基大量元素减半,微量元素不变，琼脂6.5g/L，蔗糖30g，pH5.8-6.0，pH值采用pH计进行测量。
通过采用以上技术方案：选用1/2MS培养基能够为种子萌发提供必需的营养后，同时避免所用材料的浪费，降低了番木瓜种子的萌发成本。
本发明进一步设置为，所述灭菌水通过灭菌装置制得，且灭菌装置为自动蒸汽灭菌锅和高压灭菌锅中的至少一种。
通过采用以上技术方案：通过自动蒸汽灭菌锅和高压灭菌锅能够方便获得灭菌水，提高了实验操作的便捷性。
本发明进一步设置为，所述灭菌水为超纯水，且灭菌水经高压灭菌锅120℃，蒸煮20min灭菌得到。
通过采用以上技术方案：通过高压灭菌锅120℃，蒸煮20min灭菌就能得到灭菌水，方便以最短的时间获得符合要求的灭菌水，提高了人们操作的便捷性。
本发明进一步设置为，所述蔗糖采用称重装置称取获得，且称重装置为电子天平和电子秤中的至少一种。
通过采用以上技术方案：通过电子天平和电子秤可方便或者规定质量的蔗糖，降低了蔗糖称取时的误差。
本发明进一步设置为，所述酒精的浓度为75％，且配置酒精用到的材料为无水乙醇和灭菌水，所述无水乙醇和灭菌水的体积比为3： 1。
通过采用以上技术方案：通过灭菌水配置酒精消毒液，可避免细菌对番木瓜的污染。
本发明进一步设置为，所述手术刀刨开番木瓜应当在工作台上进行，且在刨开番木瓜前应当对工作台进行杀菌处理，保证工作台处于无菌的状态。
通过采用以上技术方案：当工作台处于无菌的状态的状态时，就可以避免在刨开番木瓜时细菌对番木瓜的污染，提高了实验的准确性。
本发明的有益效果为：
1、该番木瓜未成熟种子萌发方法，解决番木瓜未成熟种子不萌发的问题，对于番木瓜育种工作具有重要意义，同时克服了现有技术通过激素诱导未成熟胚形成愈伤组织而导致番木瓜的变异的因素，在一个月的时间能得到遗传稳定的番木瓜小苗，可以短时间内快速得到番木瓜种子幼苗，提高了番木瓜种子的萌发效率。
2、该番木瓜未成熟种子萌发方法，手动干预挤压出没有脱出的种子胚体，有助于提高种子萌发率；当胚体的胚根向下放置时，可以促进胚根生长发育；选用1/2MS培养基能够为种子萌发提供必需的营养后，同时避免所用材料的浪费，降低了番木瓜种子的萌发成本。
3、该番木瓜未成熟种子萌发方法，通过自动蒸汽灭菌锅和高压灭菌锅能够方便获得灭菌水，提高了实验操作的便捷性；通过电子天平和电子秤可方便或者规定质量的蔗糖，降低了蔗糖称取时的误差；当工作台处于超净的状态的状态时，就可以避免在刨开番木瓜时细菌对番木瓜的污染，提高了实验的准确性。
附图说明
图1为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的使用流程结构示意图；
图2为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的番木瓜未成熟种子获取的结构示意图；
图3为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的未成熟种子胚在培养基中的结构示意图；
图4为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的胚根伸长的结构示意图；
图5为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的未成熟种子发育成长成番木瓜小苗的结构示意图；
图6为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的番木瓜发育成熟种子萌发结构示意图；
图7为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的成熟种子萌发结构示意图；
图8为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的番木瓜未成熟种子培养结构示意图；
图9为本发明提出的一种番木瓜未成熟种子萌发方法的21天培养种子状态结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
下面详细描述本专利的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利，而不能理解为对本专利的限制。
在本专利的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利的限制。
在本专利的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“设置”应做广义理解，例如，可以是固定相连、设置，也可以是可拆卸连接、设置，或一体地连接、设置。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本专利中的具体含义。
参照图1-5，一种番木瓜未成熟种子萌发方法，包括以下步骤：
步骤一：首先，准备20％次氯酸钠溶液、75％酒精、1/2MS固体培养基和灭菌水，选取番木瓜青果，先用肥皂水洗干净表面污垢，然后用酒精浸泡1-2分钟进行番木瓜青果表面消毒；
步骤二：消毒后，用灭菌的手术刀刨开番木瓜，取出颗粒饱满且未成熟种子；
步骤三：待完成受精后，用手术刀在种子近胚根的位置横切，舍弃远胚根的部分；
步骤四：接着，将切开的种子收集到带有灭菌滤纸的培养皿中，在培养皿中加入适量灭菌水，然后将切开的种子放入28℃培养箱中暗培养24-48h；
步骤五：当切开的种子胚体吸水胀大从种皮的束缚中脱出时，小心将胚体移到装有1/2MS培养基的培养皿中培养约一周，胚根伸长开始长出侧根；
步骤六：最后，将种子胚体转移到锥形瓶继续光下培养，长出番木瓜小苗。
解决番木瓜未成熟种子不萌发的问题，对于番木瓜育种工作具有重要意义，同时克服了现有技术通过激素诱导未成熟胚形成愈伤组织而导致番木瓜的变异的因素，在一个月的时间能得到遗传稳定的番木瓜小苗，可以短时间内快速得到番木瓜种子幼苗，提高了番木瓜种子的萌发效率。
为了提高了种子的萌发率，在本实施例中，种子胚体没有脱出时可以用钝头镊子轻轻挤压使其脱出，手动脱落时应注意避免镊子对种子胚体造成损伤，通过手动干预挤压出没有脱出的种子胚体，有助于提高种子萌发率。
为了方便种子进行萌发，在本实施例中，胚体移到装有1/2MS 培养基的培养皿中时应注意胚根向下，胚根在形态学下端，当胚体的胚根向下放置时，可以促进胚根发育。
为了提取最佳质量的种子，在本实施例中，未成熟种子为番木瓜花授粉后80-100天青色果实种子，种子种皮及假种皮为白色，番木瓜青果中未成熟种子不能萌发，选用该番木瓜果实种子能有力证明横切种子能解决种子萌发。
为了方便种子在萌发时汲取足够的营养，在本实施例中，1/2MS 培养基相比MS培养基大量元素减半,微量元素不变，琼脂6.5g/L，蔗糖30g，pH5.8-6.0，pH值采用pH计进行测量，选用1/2MS培养基能够为种子萌发提供必需的营养后，同时避免所用材料的浪费，降低了番木瓜种子的萌发成本。
为了方便对实验用水进行杀菌，在本实施例中，灭菌水通过灭菌装置制得，且灭菌装置为自动蒸汽灭菌锅和高压灭菌锅中的至少一种，通过自动蒸汽灭菌锅和高压灭菌锅能够方便获得灭菌水，提高了实验操作的便捷性。
为了方便得到灭菌水，在本实施例中，灭菌水为超纯水，且灭菌水经高压灭菌锅120℃，蒸煮20min灭菌得到，通过高压灭菌锅120℃，蒸煮20min灭菌就能得到灭菌水，方便以最短的时间获得符合要求的灭菌水，提高了人们操作的便捷性。
为了得到准确质量的蔗糖，在本实施例中，蔗糖采用称重装置称取获得，且称重装置为电子天平和电子秤中的至少一种，通过电子天平和电子秤可方便或者规定质量的蔗糖，降低了蔗糖称取时的误差。
为了提高酒精的纯净度，在本实施例中，酒精的浓度为75％，且配置酒精用到的材料为无水乙醇和灭菌水，无水乙醇和灭菌水的体积比为3：1，通过灭菌水配置酒精消毒液，可避免细菌对番木瓜的污染。
为了降低细菌的污染，在本实施例中，手术刀刨开番木瓜应当在工作台上进行，且在刨开番木瓜前应当对工作台进行杀菌处理，保证工作台处于无菌的状态，当工作台处于无菌的状态的状态时，就可以避免在刨开番木瓜时细菌对番木瓜的污染，提高了实验的准确性。
为了进一步验证该萌发方法相对于现有技术的优势，先做出两组对比实验如下：
首先，选取番木瓜新鲜的发育成熟种子，然后将其放置在温度为 30℃培养箱中培养，培养10天左右开始发现种子开始破壳，21天左右种子完全萌发，萌发率能够达到99％。实验结果如图6和图7所示。
选取番木瓜未成熟种子在温度为30℃培养箱中培养，培养10天左右可以看出种子外种皮已经腐烂脱落，然后用温水洗去腐烂的外种皮，内种皮颜色变成褐色，21天种子萌发率为零，经过一个月的观察发现未成熟种子在环境适宜的情况下不会萌发。实验结果如图8和图9所示。
通过以上对比实验可以得出，解决番木瓜未成熟种子不萌发的问题，对于番木瓜育种工作具有重要意义，同时克服了现有技术通过激素诱导未成熟胚形成愈伤组织而导致番木瓜的变异的因素，在一个月的时间能得到遗传稳定的番木瓜小苗，可以短时间内快速得到番木瓜种子幼苗，提高了番木瓜种子的萌发效率。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：首先，准备20％次氯酸钠溶液、75％酒精、1/2MS固体培养基和灭菌水，选取番木瓜青果，先用肥皂水洗干净表面污垢，然后用酒精浸泡1-2分钟进行番木瓜青果表面消毒；
步骤二：消毒后，用灭菌的手术刀刨开番木瓜，取出颗粒饱满且未成熟种子；所述未成熟种子为番木瓜花授粉后80-100天青色果实种子，种子种皮及假种皮为白色；
步骤三：然后用手术刀在种子近胚根的位置横切，舍弃远胚根的部分；
步骤四：接着，将切开的种子收集到带有灭菌滤纸的培养皿中，在培养皿中加入适量灭菌水，然后将切开的种子放入28℃培养箱中暗培养24-48h；
步骤五：当切开的种子胚体吸水胀大从种皮的束缚中脱出时，小心将胚体移到装有1/2MS培养基的培养皿中培养约一周，胚根伸长开始长出侧根；
所述1/2MS培养基相比MS培养基大量元素减半,微量元素不变，琼脂6.5g/L，蔗糖30g，pH5.8-6.0，pH值采用pH计进行测量；
步骤六：最后，将种子胚体转移到锥形瓶继续光下培养，长出番木瓜小苗。
2.根据权利要求1所述的一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，所述胚体移到装有1/2MS培养基的培养皿中时应注意胚根向下。
3.根据权利要求1所述的一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，所述灭菌水通过灭菌装置制得，且灭菌装置为自动蒸汽灭菌锅和高压灭菌锅中的至少一种。
4.根据权利要求3所述的一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，所述灭菌水为超纯水，且灭菌水经高压灭菌锅120℃，蒸煮20min灭菌得到。
5.根据权利要求1所述的一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，所述蔗糖采用称重装置称取获得，且称重装置为电子天平和电子秤中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，所述酒精的浓度为75％，且配置酒精用到的材料为无水乙醇和灭菌水，所述无水乙醇和灭菌水的体积比为3：1。
7.根据权利要求1所述的一种番木瓜未成熟种子萌发方法，其特征在于，所述手术刀刨开番木瓜应当在超净工作台上进行，且在刨开番木瓜前应当对超净工作台进行杀菌处理，保证超净工作台处于无菌状态。
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