CN103923908A - 一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法。其特征在于：所述方法包括如下步骤：制备菌丝体细胞悬浮液，配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105℃灭菌15分钟，冷却到30℃后加入少量菌体细胞悬浮液，用注射器法滴入3%的氯化钙溶液中，静置3～4h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；将以上制备好的小珠表面吹干后移入螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度0～25°C、湿度30%～75%。该方法制备的菌种使用简单、方便，保藏时间长，更适合商品化包装和运输,可有效解决现有食用菌制种和存储方面存在的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法。该方法制备的菌种使用简单、方便，保藏时间长，更适合商品化包装和运输。
背景技术
食用菌传统制种模式包括母种、原种、栽培种三部分，周期漫长，导致成本增加。迫切需要有制种周期短，外观商品化，便于包装运输的菌种开发应用。同时传统的斜面试管继代保藏法存放时间短，菌种活力易衰退，而冷冻干燥保藏、液氮超低温保藏等新方法对设备要求高，菌种致死率高，限制了其推广应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种食用菌固定化菌种及菌种的保藏方法。它可有效解决现有食用菌制种和存储方面存在的问题。
为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：a、制备菌丝体细胞悬浮液，将固体PDA平板培养基上接食用菌菌种，待菌丝长满后，收集菌丝体，碾磨，加少量的无菌水制成悬浮液；b、制备固定化菌种，配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105℃灭菌15分钟，冷却到30℃后加入少量菌体细胞悬浮液，用注射器法滴入3%的氯化钙溶液中，静置3～4h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；c、将以上制备好的小珠表面吹干后移入螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度0～25°C、湿度30%～75%。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进一步详细描述。
实施例：灵芝固定化菌种的制备及保藏方法
具体操作步骤如下：灵芝菌种（G9），由天津市林业果树研究所提供；a、配制马铃薯综合培养基，马铃薯去皮 200g（加水煮沸20min，过滤取汁）、葡萄糖 20g、磷酸二氢钾 3g、硫酸镁 1.5g、琼脂 20g、水1000mL，pH值 5.8，0.1MPa灭菌20min，温度降到40℃时分装平皿，冷却凝固。接种灵芝母种，25℃培养箱培养10天，待菌丝长满后，取出，收集菌丝体，碾磨破碎。b、配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105℃灭菌15分钟，冷却到30℃后加入少量菌丝体细胞，混合均匀，采用滴落法用注射器吸取上述混合液滴入3%的氯化钙溶液中，静置3h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；c、去除无菌水，将制备好的珠体表面吹干，分装到灭过菌的螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度4℃、湿度40%，以传统的试管母种做对照。
按着以上方法制备的菌种小球保藏18个月后，并未发生失水干缩现象，转接于综合PDA培养基上仅用3天菌种即萌发，菌丝生长旺盛；而对照法保藏的菌种存放18个月后，试管斜面失水严重，干缩变形，转接于培养基上需5-7天才萌发，菌丝生长一般，说明本法制备保藏的菌种明显优于现有技术的菌种。
Claims (1)
1.一种食用菌固定化菌种的制备及其保藏方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：a、制备菌丝体细胞悬浮液，将固体PDA平板培养基上接食用菌菌种，待菌丝长满后，收集菌丝体，碾磨，加少量的无菌水制成悬浮液；b、制备固定化菌种，配制含3%海藻酸钠、1%明胶、0.5%聚乙烯醇、0.5%贝壳粉、0.5%滑石粉的混合溶液，105℃灭菌15分钟，冷却到30℃后加入少量菌体细胞悬浮液，用注射器法滴入3%的氯化钙溶液中，静置3～4h完全硬化，用无菌水洗净制得固定化小珠；c、将以上制备好的小珠表面吹干后移入螺口小玻璃瓶中密封保藏，保藏温度0～25°C、湿度30%～75%。
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