CN103860593A - 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 - Google Patents
间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103860593A CN103860593A CN201210533297.9A CN201210533297A CN103860593A CN 103860593 A CN103860593 A CN 103860593A CN 201210533297 A CN201210533297 A CN 201210533297A CN 103860593 A CN103860593 A CN 103860593A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- surface antigen
- progenitor cells
- mesenchymal stem
- hampcs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 78
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 10
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 title abstract 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 15
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 230000003405 preventing effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 132
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 86
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 52
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 46
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 25
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 25
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 18
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 15
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 15
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims description 15
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 14
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 14
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 14
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 14
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 14
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 13
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 13
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 12
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 12
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 claims description 12
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 claims description 12
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 claims description 12
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims description 12
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 claims description 11
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 claims description 11
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 claims description 11
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 claims description 11
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 claims description 11
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 claims description 8
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims description 8
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 8
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 claims description 8
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 7
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 claims description 5
- 102000006747 Transforming Growth Factor alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 4
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N (4S)-4-[[(4R,7S,10S,16S,19S,25S,28S,31R)-31-[[(2S)-2-[[(1R,6R,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S,36S,39S,42R,47R,53S,56S,59S,62S,65S,68S,71S,76S,79S,85S)-47-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-18-(4-aminobutyl)-27,68-bis(3-amino-3-oxopropyl)-36,71,76-tribenzyl-39-(3-carbamimidamidopropyl)-24-(2-carboxyethyl)-21,56-bis(carboxymethyl)-65,85-bis[(1R)-1-hydroxyethyl]-59-(hydroxymethyl)-62,79-bis(1H-imidazol-4-ylmethyl)-9-methyl-33-(2-methylpropyl)-8,11,17,20,23,26,29,32,35,38,41,48,54,57,60,63,66,69,72,74,77,80,83,86-tetracosaoxo-30-propan-2-yl-3,4,44,45-tetrathia-7,10,16,19,22,25,28,31,34,37,40,49,55,58,61,64,67,70,73,75,78,81,84,87-tetracosazatetracyclo[40.31.14.012,16.049,53]heptaoctacontane-6-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-25-(hydroxymethyl)-19-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-28-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo-16-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29-nonazacyclodotriacontane-4-carbonyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc3ccccc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@H](Cc2c[nH]cn2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc2c[nH]cn2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N 0.000 claims description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 5
- 230000011164 ossification Effects 0.000 abstract 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 14
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 11
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 8
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 4
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 4
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000004072 osteoblast differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 210000004247 hand Anatomy 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 3
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 3
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 3
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 3
- JKYKXTRKURYNGW-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-9,10-dioxo-9,10-dihydroanthracene-2-sulfonic acid Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C(O)=C(O)C(S(O)(=O)=O)=C2 JKYKXTRKURYNGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 2
- 241001111421 Pannus Species 0.000 description 2
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 2
- -1 TGF-a Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000002310 elbow joint Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001624 hip Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 2
- 210000000281 joint capsule Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 208000030428 polyarticular arthritis Diseases 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 210000005065 subchondral bone plate Anatomy 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 2
- 102000004008 5'-Nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 108700004024 5'-Nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000013925 CD34 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108050003733 CD34 antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 description 1
- 101000994369 Homo sapiens Integrin alpha-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000669076 Homo sapiens Zinc phosphodiesterase ELAC protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100032817 Integrin alpha-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010041012 Integrin alpha4 Proteins 0.000 description 1
- 108010022222 Integrin beta1 Proteins 0.000 description 1
- 102000012355 Integrin beta1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 244000236658 Paeonia lactiflora Species 0.000 description 1
- 235000008598 Paeonia lactiflora Nutrition 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 208000018359 Systemic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108010031650 Thy-1 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100039870 Zinc phosphodiesterase ELAC protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000002605 anti-dotal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003356 anti-rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000037873 arthrodesis Diseases 0.000 description 1
- 238000011882 arthroplasty Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000002079 cooperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003677 hemocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940000351 hemocyte Drugs 0.000 description 1
- 210000001357 hemopoietic progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004394 hip joint Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 229960000681 leflunomide Drugs 0.000 description 1
- VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N leflunomide Chemical compound O1N=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C(F)(F)F)=C1C VHOGYURTWQBHIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001711 oxyntic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用。具体地，给需要的对象施用本发明的含有自体脂肪来源的间质血管层细胞和间充质祖细胞的药物组合物，对于类风湿性关节炎有显著的预防或治疗作用。间充质祖细胞具有很高的细胞因子分泌能力，可对体内机体的损伤进行修复；间质血管层细胞和间充质祖细胞具有成软骨分化及成骨化的能力。本发明还提供了一种含有间质血管层细胞和间充质祖细胞的药物组合物，以及预防和治疗类风湿性关节炎的方法。
Description
技术领域
本发明属于干细胞及生物医药领域。具体地，本发明涉及间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用。
背景技术
类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一种在世界范围内常见的由自身免疫障碍导致的免疫系统攻击关节的慢性炎症，其病理特征是关节滑膜的慢性炎性增生、血管翳形成、软骨及软骨下骨破坏，最终导致关节畸形和强直。其患病率大约占到了世界成年人总人口的1%，我国约为0.32%～0.36%。患者的平均寿命缩短5～10年，至少有50%的患者在发病10年后丧失工作能力。临床表现为慢性、进行性、对称性、侵蚀性多关节炎，以双手近指、掌指、腕、肘关节和双足跖趾、踝、膝关节受累最为常见，造成关节软骨、骨和关节囊破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。患者同时可有发热、关节疼痛及晨僵等症状。疾病进展亦会系统地影响其他关节外的组织，包括皮肤、血管、心脏、肺部及肌肉等。
目前对类风湿性关节炎的致病机理尚不十分清楚，主要观点认为细胞因子参与介导了整个病理过程。越来越多的证据显示CD4+T细胞介导的自身免疫应答及B细胞、渗入滑膜的巨噬细胞在RA的发病中起着关键性的作用。由单核细胞/巨噬细胞及成纤维细胞分泌的TNF-ɑ在RA中也有着重要的作用，它主要通过诱导包括IL-1、IL-6、IL-15及IL-18等一些细胞因子和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子影响RA的发生。
目前，类风湿关节炎的治疗包括药物治疗、外科治疗和心理康复治疗等，治疗应个体化。结合病人自身情况，如年龄、性别、体重、自身危险因素、病变部位及程度等选择合适的治疗方案。
当前治疗类风湿关节炎的常用药物分为四大类：非甾类抗炎药(NSAIDs)、 改善病情的抗风湿药(DMARDs)、糖皮质激素、和植物药。但是上述药物均不能完全控制关节破坏，而只能缓解疼痛、减轻或延缓炎症的发展。经过积极正规的内科治疗，仍不能控制病情者，为纠正畸形，改善生活质量可考虑手术治疗。常用的手术主要有滑膜切除术、关节形成术、软组织松解或修复手术、关节融合术等。但手术并不能根治类风湿关节炎，故术后仍需内科药物治疗。
因此，传统的治疗方案尚远不能控制疾病的进展或彻底治愈类风湿关节炎，因此迫使人们寻求新的治疗方法
因此本领域目前尚缺乏预防或治疗类风湿性关节炎的方法，迫切需要探寻新颖的治疗和修复策略。
发明内容
本发明的目的就是提供间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs）的用途，它们被用于制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物组合物。
在另一优选例中，所述的间质血管层细胞为间质血管层细胞群。
在另一优选例中，所述的间充质祖细胞为间充质祖细胞群。
在另一优选例中，所述的间质血管层细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(i)30%以上的细胞具有表面抗原CD29；
(ii)50%以上的细胞具有表面抗原CD73；
(iii)85%以上的细胞具有表面抗原CD49d；
(iv)55%以上的细胞具有表面抗原CD90。
在另一优选例中，35%以上的细胞具有表面抗原CD29。
在另一优选例中，55%以上的细胞具有表面抗原CD73。
在另一优选例中，90%以上的细胞具有表面抗原CD49d。
在另一优选例中，60%以上的细胞具有表面抗原CD90。
在另一优选例中，所述的间质血管层细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(v)85%以下的细胞具有表面抗原CD34；
(vi)15%以下的细胞具有表面抗原CD45。
在另一优选例中，80%以下的细胞具有表面抗原CD34。
在另一优选例中，12%以下的细胞具有表面抗原CD45。
在另一优选例中，所述的间质血管层细胞分泌选自下组的细胞因子：干细胞生长因子(HGF)，血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生因子(PDGF)、人转化生长因子β(TGF-β)、巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、或其组合。
在另一优选例中，所述的间质血管层细胞为间质血管层细胞群。
在另一优选例中，间质血管层细胞分泌的干细胞生长因子(HGF)的浓度≥0.5ng/ml，较佳地≥0.8ng/ml。
在另一优选例中，间质血管层细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)的浓度≥35pg/ml，较佳地≥40pg/ml。
在另一优选例中，间质血管层细胞分泌的人转化生长因子β(TGF-β)的浓度≥150pg/ml，较佳地≥180pg/ml。
在另一优选例中，间质血管层细胞分泌的白介素-2(IL-2)的浓度≥15pg/ml，较佳地≥20pg/ml，更佳地≥30pg/ml。
在另一优选例中，间质血管层细胞分泌的白介素-10(IL-10)的浓度≥15pg/ml，较佳地≥20pg/ml，更佳地≥30pg/ml，最佳地≥40pg/ml。
在另一优选例中，所述的间充质祖细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(i)95%以上的细胞具有表面抗原CD90；
(ii)95%以上的细胞具有表面抗原CD73；
(iii)95%以上的细胞具有表面抗原CD29；
(iv)95%以上的细胞具有表面抗原CD49d。
在另一优选例中，98%以上的细胞具有表面抗原CD90。
在另一优选例中，98%以上的细胞具有表面抗原CD73。
在另一优选例中，98%以上的细胞具有表面抗原CD29。
在另一优选例中，98%以上的细胞具有表面抗原CD49d。
在另一优选例中，所述的间充质祖细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(v)2%以下的细胞具有表面抗原HLA-DR；
(vi)2%以下的细胞具有表面抗原Actin；
(vii)2%以下的细胞具有表面抗原CD34；
(viii)2%以下的细胞具有表面抗原CD45；
(viiii)2%以下的细胞具有表面抗原CD14。
在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原HLA-DR。
在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原Actin。
在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原CD34。
在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原CD45。
在另一优选例中，1%以下的细胞具有表面抗原CD14。
在另一优选例中，所述的间充质祖细胞分泌选自下组的细胞因子：血管内皮生长因子(VEGF)、人转化生长因子α(TGF-α)、人转化生长因子β(TGF-β)、粒细胞集落刺激生物因子(GM-CSF)、肝细胞生长因子(HGF)、血小板衍生因子(PDGF)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)的浓度≥10pg/ml，较佳地≥15pg/ml。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的人转化生长因子β(TGF-β)的浓度≥300pg/ml，较佳地≥400pg/ml。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的粒细胞集落刺激生物因子(GM-CSF)的浓度≥30ng/ml，较佳地≥40ng/ml。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的肝细胞生长因子(HGF)的浓度≥0.4ng/ml，较佳地≥0.5ng/ml。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的血小板衍生因子(PDGF)的浓度≥0.008ng/ml，较佳地≥0.01ng/ml。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的白介素-2(IL-2)的浓度≥25pg/ml，较佳地≥30pg/ml。
在另一优选例中，间充质祖细胞分泌的白介素-10(IL-10)的浓度≥30pg/ml，较佳地≥40pg/ml。
在本发明的第二方面，提供了一种用于预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物组合物，所述的药物组合物包括：有效量的间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs），以及药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物为静脉注射试剂，和/或关节腔内注射试剂。
在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。
在另一优选例中，所述间质血管层细胞的浓度为0.1-100×104个/ml，较佳地为1-10×104个/ml，更佳地为2×105个/ml。
在另一优选例中，所述间充质祖细胞浓度为0.1-100×104个/ml，较佳地为1-10×104个/ml，更佳地为2×105个/ml。
在本发明的第三方面，提供了一种预防和/或治疗类风湿性关节炎的方法，包括步骤：给需要的对象施用间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs）、或施用含有间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs）的药物组合物。
在另一优选例中，所述的对象为人或非人哺乳动物，优选人。
在另一优选例中，所述的方法包括步骤：
(1)给需要的对象施用间质血管层细胞；和
(2)给需要的对象施用间充质祖细胞。
在另一优选例中，施用部位为所述对象的静脉内，和/或关节腔内。
在另一优选例中，步骤(1)与步骤(2)之间间隔时间为1个月以上，和/或3个月以上。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
下列附图用于说明本发明的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本发明范围。
图1显示了SVF与haMPCs混合疗法治疗类风湿性关节炎流程。
图2显示了SVF的表面抗原检测结果；图2A-图2I分别显示CD34、CD29、CD73、CD49d、CD90、CD14、CD45、Actin、HLA-DR抗原的检测结果。
图3为haMPCs的VEGF分泌量的变化；图3A显示LPS刺激24h后haMPCs的VEGF分泌量的变化；图3B显示低氧刺激对haMPCs的VEGF分泌量的影响。
图4显示haMPCs成软骨诱导实验结果。
图5显示haMPCs成骨诱导实验结果。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中具有极为优异的效果。具体地，给需要的对象施用本发明的自体脂肪来源的间质血管层细胞和间充质祖细胞，或施用含有自体脂肪来源的间质血管层细胞和间充质祖细胞的药物组合物，对于类风湿性关节炎有显著的预防或治疗作用。
间充质祖细胞具有很高的细胞因子分泌能力，在体内合适条件下可对机体的损伤进行修复：间质血管层细胞和间充质祖细胞具有成软骨分化及成骨化的能力。本发明还提供了一种预防和治疗类风湿性关节炎的方法以及含有间质血管层细胞和间充质祖细胞的药物组合物。
在此基础上完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“以上”和“以下”包括本数，例如“95%以上“指≥95%,“0.2%以下”指≤0.2%。
类风湿性关节炎
如本文所用，术语“类风湿性关节炎”与“rheumatoid arthritis”或“RA”互换使用。
类风湿性关节炎是一种慢性对称性多关节疾病，尤其属于一种全身性自身免疫性疾病；其病理特征是关节滑膜的慢性炎性增生、血管翳形成、软骨及软骨下骨破坏，最终导致关节畸形和强直。临床表现为慢性、进行性、对称性、侵蚀性多关节炎，以双手近指、掌指、腕、肘关节和双足跖趾、踝、膝关节受累最为常见，造成关节软骨、骨和关节囊破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。疾病进展亦会系统地影响其他关节外的组织，包括皮肤、血管、心脏、肺部及肌肉等。
特别需要说明的是，类风湿性关节炎与常见的骨性关节炎（即OA）不同，骨性关节不属于自身免疫性疾病，并且病变关节多见于负重关节，如膝关节，胯关节等。
脂肪
自体脂肪是整形和抗衰老治疗的优良来源，脂肪组织材料可以来源于腰部、臀部、腹部、大腿、上臂等部位。本领域技术人员可采用通用的技术方法获得自体脂肪组织，包括(但不限于)抽吸、手术分离等方法。
在本发明中，脂肪组织或脂肪原料没有特别限制，可以是来源于动物或人的任何部位的脂肪组织，优选人的脂肪组织。较佳地，脂肪组织可以是腰部、臀部、腹部、大腿、上臂等部位的组织。
间质血管层细胞
如本文所用，术语“间质血管层细胞”、“SVF”、或“间质血管碎片”可以互换使用。
间质血管层细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。SVF能够在体外稳定增殖且衰亡率低，它取材容易、体内储备量大、适宜大规模培养、对机体损伤小、来源广泛、适宜自体移植。SVF是祖细胞辅助脂肪移植中最重要的组分。通过胶原酶消化，从脂肪组织中分离的多种细胞混合物形成的细胞团就叫做间质血管碎片。间质血管碎片中含有丰富的间充质细胞，可分化为多种谱系的细胞，是再生医学、组织工程等最理想的种子细胞，
本领域的技术人员能够使用通用的方法进行SVF的分离和纯化。
如本文所用，术语“分离方法”、“SVF的分离方法”可以互换使用，都指从原始的脂肪组织中获得分离的SVF的方法和过程。对于获得的SVF的脂肪细胞材料，首先进行洗涤，除去血细胞；脂肪破碎，消化；去除未消化的组织，获得含SVF的滤液；离心得到SVF。得到的SVF可以用于进一步传代、培养或冻存。
在一个优选的实施例中，分离SVF可以包括步骤(但不限于)：将吸脂后的脂肪用PBS反复冲洗两次，然后在37℃条件下用胶原酶消化30min，1200g离心10min后即获得高密度的SVF碎片，其中主要包括间质细胞、血管内皮细胞和壁细胞。另外，SVF中也包括一些血管来源的细胞，如白细胞和红细胞等，各种细胞之间具有协同效应。
间质血管层细胞的抗原检测
用本发明使用的SVF具有很高的纯度，基本上不含有其他类型的细胞或干细胞。这可通过细胞表面抗原的检测加以验证。
SVF具有多种特异性抗原和受体，主要有CD3、CD13、D29、CD34、CD45、 CD49e、CD59、CD73、CD90、CD105、HLA-ABC等。
CD34抗原是一种高度糖基化Ⅰ型跨膜蛋白，它选择性的表达于人类造血干细胞(HSC)，祖细胞(PC)和血管内皮细胞(EC)表面，带有CD34的脂肪组织祖细胞在总干细胞的比例优选为≤0.2%，更佳地，≤0.2%。
CD45存在于所有造血细胞的表面，包括造血干细胞和破骨细胞。带有CD45的脂肪组织祖细胞在总干细胞的比例优选为≤0.1%。
CD29、CD73、CD49d、CD90等主要存在于脂肪间充质祖细胞表面。
带有CD29的SVF在总干细胞的比例优选为≥30%，更佳地≥32%，最佳地≥35%。
带有CD73的SVF在总干细胞的比例优选为≥50%，更佳地≥60%，最佳地≥70%。
带有CD49d的SVF在总干细胞的比例优选为≥85%，更佳地≥90%，最佳地≥95%。
带有CD90的SVF在总干细胞的比例优选为≥55%，更佳地≥60%，最佳地≥65%。
本领域内技术人员可以使用通用的方法检测SVF的纯度和分化程度，如流式细胞仪法。检测时，加入不同的与有针对性的特异抗体，抗体可以是完整的单克隆或多克隆抗体，也可以是具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利No.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。加入抗体与细胞表面的抗原结合一定时间，用流式细胞仪对细胞进行自动分析和分选。
脂肪来源的间充质祖细胞
如本文所用，术语“脂肪来源的间充质祖细胞”、“haMPCs”或“adipose tissue-derived mesenchymal progenitor cells”含义相同，可以互换使用。
本发明使用的脂肪来源的间充质祖细胞优选人来源的脂肪来源的间充质祖细胞；更优选人自体脂肪来源的间充质祖细胞。
本领域的普通技术人员可以使用常规方法进行haMPCs的分离和培养，在一个优选例的实施例中，包括步骤：
a.分装脂肪：将抽取的脂肪装至离心管中，抽取的脂肪分两部分，一部分 用胶原酶消化洗涤后，用于制备成SVF细胞悬液，直接进行现场回输；另一部分获得SVF后继续培养，以获得脂肪祖细胞；
b.脂肪分解：向离心管中加入酶剂，置恒温振荡器中，进行脂肪消化，待消化完毕，离心后弃去上层消化后的脂肪，收集沉淀并洗涤；
c.过滤：加细胞洗液，混匀，用细胞滤网过滤后细胞计数，离心，洗涤沉淀。过滤后的细胞即为血管基质层细胞SVF（stromal vasvular fraction Cells）。SVF是从脂肪组织中分离的多种细胞混合物，是由多种同种异质细胞组成的细胞群，其中包括MPCs样细胞，内皮（祖）细胞，血管平滑肌细胞以及其他部分的血液来源细胞，包括粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等；
d.SVF悬液制备：将过滤后的SVF细胞配制成5ml细胞悬液，用注射剂将悬液吸入后，将悬液注入100ml生理盐水袋中；
e.细胞培养：根据计数细胞的量调整接种密度接种至培养瓶置CO2培养箱培养；
f.传代：接种3天左右出现少量贴壁间充质祖细胞，培养5-7天贴壁细胞呈集落时，消化传代，收集并计数细胞，原代贴壁情况1:1-2的比例传代，传代培养2至3周，收集细胞（自体脂肪来源的祖细胞）；
g.制备脂肪来源的祖细胞悬液：将收集的脂肪来源的祖细胞离心洗涤后，注入生理盐水，制成细胞悬液。
脂肪来源的间充质祖细胞的抗原检测
本发明使用的脂肪来源的间充质祖细胞具有极高的纯度和活性。
本领域的普通技术人员可以使用常规方法对间充质祖细胞表面抗原进行检测，如过流式细胞仪法等。
脂肪来源的间充质祖细胞具有多种特异性抗原和受体，主要有：CD29、CD73、CD90、CD49d等。
带有CD73抗原的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≥95％，更佳地≥98％，更佳地≥99％，最佳地为100%。
带有CD90抗原的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≥95％，更佳地≥98％，更佳地≥99％，最佳地为100%。
带有CD29抗原的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≥95％，更佳地≥98％，更佳地≥99％，最佳地为100%。
带有CD49d抗原的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≥95％，更佳地≥98％，更佳地≥99％，最佳地为100%。
脂肪来源的间充质祖细胞的阴性指标包括：HLA-DR、Actin、CD34、CD45、CD14等。
带有HLA-DR抗原的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≤2%，更佳地≤1%，更佳地≤0.5%，最佳地没有HLA-DR抗原。
带有Actin抗原的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≤2%，更佳地≤1%，更佳地≤0.5%，最佳地没有Actin抗原。
带有CD34的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≤2%，更佳地≤1%，更佳地≤0.5%，最佳地没有CD34。
带有CD45的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≤2%，更佳地≤1%，更佳地≤0.5%，最佳地没有CD45。
带有CD14的间充质祖细胞在总间充质祖细胞中的比例≤2%，更佳地≤1%，更佳地≤0.5%，最佳地没有CD14。
本发明使用的haMPCs优选是可以大量分泌VEGF、TGF-ａ、TGF-β、GM-CSF、HGF、PDGF、IL-2、IL-4、IL-10等生子因子的人来源的haMPCs，并具有极强克隆形成能力和极低的免疫原性。
本领域的普通技术人员可以使用常规方法对haMPCs进行使用、处理、施用等操作。如：每批haMPCs发放或使用之前，必须通过无菌、内毒素和支原体检查，以及DNA同一认定。每批发放的细胞都要符合细胞活力≥95%、细胞纯度(阳性指标≥95%，阴性指标<2%)。haMPCs急毒、过敏检测结果均呈阴性，均有一份相应的检测报告。
药物组合物及其应用
本发明还提供了一种药物组合物，它含有有效量的间质血管层细胞和间充质祖细胞，以及药学上可接受的载体。
通常，可将间质血管层细胞和间充质祖细胞配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，如生理盐水中，其中pH通常约为5-8，较佳地，pH约为7-8。
如本文所用，术语“有效量”或“有效剂量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。
本发明的药物组合物含有的载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量。本发明的药物制剂还可制成缓释制剂。
本发明所述间质血管层细胞和间充质祖细胞的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。
本发明的药物组合物优选为皮下注射试剂与及静脉注射试剂同时使用。在另一优选例中，所述皮下注射试剂的间质血管层细胞的浓度为0.1-100×104个/ml，较佳地为1-10×104个/ml，更佳地为2×105个/ml；和/或间充质祖细胞浓度为0.1-100×104个/ml，较佳地为1-10×104个/ml，更佳地为2×105个/ml。
本发明还提供了一种使用本发明所述药物组合物的方法，在一个具体地实施例中，包括步骤：
(1)给需要的对象施用间质血管层细胞，和
(2)给需要的对象施用间充质祖细胞，优选的使用时间为步骤(1)之后的1个月，和/或3个月。
在本发明中，给所需要的对象施用间质血管层细胞间充质祖细胞，优选的施用部位为所述对象的关节腔，和/或静脉内，其机理是通过静脉注射达到全身免疫调节的目的，在关节腔内注射达到局部调节的目的，并刺激祖细胞成骨化和成软骨化从而修复病变。
本发明所述的施用流程见图1。
本发明的主要优点如下：
(1)本发明的SVF和haMPCs在体内使用是安全的；
(2)本发明使用的haMPCs经LPS、低氧等刺激后，各种细胞因子的表达量会出现均明显上升，haMPCs具有较高的细胞因子分泌能力，在体内合适条件下能进行机体损伤修复；
(3)本发明的haMPCs具有典型的间充质祖细胞特性，在体内的合适条件下具有潜在的分化能力，从而满足机体相对需求；
(4)本发明的SVF与haMPCs混合疗法中，haMPCs在特定诱导条件下可转化为软骨细胞，应用于预防或治疗类风湿性关节炎。
(5)本发明的SVF与haMPCs混合疗法中，haMPCs在特定诱导条件下可转化为骨细胞，应用于预防或治疗类风湿性关节炎。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
SVF和haMPCs治疗类风湿性关节炎（RA）
患者女，45岁，因双手关节反复肿痛7年，化验RF 320RU/ml、抗CCP569.5RU/ml，诊断为类风湿关节炎。
予口服非甾体消炎药、白芍总甙及来氟米特等药物，症状缓解，但出现肝酶升高，胆红素升高。改用免疫抑制剂治疗，患者不能耐受。经患者同意后行SVF和haMPCs治疗。
从RA患者下腹部抽取约35ml脂肪，其中从10ml新鲜获取的脂肪组织中分离出血管基质部分，经胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞后得到SVF，对所述SVF进行表面抗原鉴定，鉴定结果见图2。
将剂量为1*107个细胞/100ml的SVF静脉输注，持续时间约为30分钟，再将剂量为1*107个细胞/2ml的SVF注射于患者患病关节腔内。剩余脂肪组织分离提纯后培养P2-P5代获得haMPCs。haMPCs冷冻保存，待解冻复苏后可再次培养，待首次注射后的第1、3个月再同上方法静脉输注加患病关节腔内注射，剂量均为1*107/个。
结果：疗程结束4周后患者自觉症状明显改善，3个月后血清抗体较治疗前明显降低。RF为40RU/ml，抗CCP为98.5RU/ml。
实施例2
SVF及haMPCs的鉴定
流式检测
通过酶消化法将细胞收集到离心管中，细胞悬液调整密度为1×105/mL，800r/min(120g)，离心5min，弃掉上清，用4℃的冷D-Hanks冲洗重悬细胞，再次将细胞悬液以800r/min，离心5min，之后弃去上清。然后用D-Hanks将细胞重悬至1mL，加入抗体5~10μL，避光，冰上放置30min。用D-Hanks冲洗，离心，弃上清，重复该冲洗过程2~3次，确保将未结合抗体除净最后，加入约200至300μL的D-Hanks制成悬液，用流式细胞仪检测（图2）。
SVF的流式检测结果见表1。
表1
通过流式细胞仪对SVF进行细胞表面抗原标记表达的分析，结果表明：新鲜分离的祖细胞中SVF比例为60%，且造血祖细胞含量为70%，混合细胞较多。haMPCs的流式检测结果见表2。
表2
| 抗体 | 比例（%） | 抗体 | 比例（%） |
| CD90 | 99.89 | Actin | ~0%阴性 |
| CD29 | 99.96 | DR | ~0%阴性 |
| CD73 | 99.98 | CD34 | ~0%阴性 |
| CD49d | 99.91 | CD14 | ~0%阴性 |
| CD45 | ~0%阴性 | ||
| CD80 | 0.01 |
[0173]
| CD86 | 0.01 |
细胞分泌因子的检测
将SVF及haMPCs在培养室培养48h，取上清，检测细胞分泌因子，脐带干细胞为对照组，检测结果见表3。
表3
| 细胞因子（单位） | hADMPCs | SVF | 脐带干细胞 |
| VEGF（pg/ml) | 16.80 | 23.73 | 18.14 |
| TGF-β(pg/ml) | 401.00 | 173.19 | 413.70 |
| GM-CSF(ng/ml) | 41.87 | 60.03 | 63.35 |
| HGF(ng/ml) | 0.58 | 0.63 | 0.55 |
| PDGF(ng/ml) | 0.01 | 0.01 | 0.02 |
| IL-2（pg/ml） | 34.23 | 38.23 | 33.56 |
| IL-10（pg/ml） | 44.15 | 41.46 | 40.38 |
结果表明：SVF及haMPCs均有良好的分泌细胞因子的功能。其中，haMPCs分泌的TGF-β高达401.00pg/ml，远远高于SVF，与脐带干细胞相当。
实施例3
haMPCs刺激试验
（1）分别将新鲜及冻存的haMPCs置于完全培养基及5%FBS培养基中培养，并检测haMPCs分泌的VEGF。
结果显示（图3A），完全培养基培养的新鲜haMPCs组随着LPS浓度的增加，VEGF的浓度下降；5%FBS培养基培养的新鲜haMPCs组在200ng/ml时，VEGF与对照组浓度基本一样，100ng/ml和300ng/ml分别有所下降，完全培养基培养的冻存haMPCs组随着LPS浓度的增加，VEGF的浓度基本变化不大。整体来看，血清培养的要比完全培养基的VEGF要高。
（2）检测在低氧刺激下haMPCs的VEGF的分泌量，结果发现，低氧刺激下VEGF的分泌量是正常培养下中的2-3倍，且48小时的分泌量是24小时的2倍，VEGF的增量与细胞浓度的增量成正比（图3B）。
实施例4
haMPCs成软骨分化试验
采用GIBCO STEMPRO成软骨分化试剂盒制备成软骨分化培养基，将haMPCs消化离心获取P3代细胞，使用标准培养基制备1.6x10^7活细胞/mL的细胞悬液待用。用加样枪吸取5μL细胞悬液（细胞量8x104），接种于多孔培养板板孔中心，置于CO2培养箱中预培养2小时。
预培养结束后，在实验孔中添加1mL 37°C水浴锅预热的成软骨分化完全培养基，在对照孔中添加1mL 37°C水浴锅预热标准培养基，并将多孔培养板置于37°C，5%CO2浓度的CO2培养箱中进行培养。在培养过程中，每隔2-3天对相应板孔进行换液。经过足够培养时间后（7、14天），在当天配置4%福尔马林溶液（1mL 40%甲醛溶于9mL水中）和1%Alcian Blue染液（0.1g Alcian Blue溶于10mL 0.1N HCL中）。对各孔进行固定和染色处理。吸除培养基，DPBS洗涤一次，并将细胞使用4%福尔马林溶液固定30分钟。固定后用DPBS洗涤，然后加入1%Alcian Blue溶液(溶于0.1N的HCl)染色30分钟。使用0.1N的HCl洗涤三次，加入蒸馏水中和酸性，然后在光镜下对各实验组及对照组进行观察，保存图片。成功分化为软骨细胞的实验组经Alcian Blue染色后会因软骨细胞合成的蛋白聚糖而呈蓝色。
实验结果：在实验进行第7天对细胞生长状况进行观察，并选取A1、A3、C1孔拍照分析。经观察可见孔A1（图4A）中细胞集中于接种的中心区域，细胞形态为圆形，与软骨细胞接近，细胞的贴壁紧密程度一般，但经过几次换液仍能保持贴壁状态；孔A3（图4B）中的细胞形成了一个球状高度聚集的细胞团结构，在肉眼下可见一个乳白色小球状结构，该结构经过几次换液之后仍然存在，而且排除了污染的可能性；孔C1（图4C）作为对照组加入标准培养基，细胞形态和标准的haMPCs贴壁细胞相符合。因此，从形态上来看，经分化培养基培养的haMPCs与对照组相比有比较明显的差异。
在实验进行第14天的Alcian Blue染色结果表明，C1孔（图4F）没有出现明显蓝色染色；相比之下，A1（图4D）孔出现了明显的蓝色染色，证明存在软骨细胞合成的粘多糖；而A3（图4E）孔可能由于细胞过于致密，所以导致染色呈蓝黑色。因此，经分化培养基培养的haMPCs在经典染色条件下呈现了分化为软骨细胞的特征。
综上所述，本实施例表明，本发明的haMPCs在分化培养基的培养条件下 在细胞形态学及经典化学染色处理呈现了软骨细胞的特征，表明haMPCs具备向软骨细胞的分化潜能。
实施例5
haMPCs成骨分化试验
采用GIBCO STEMPRO成骨分化试剂盒制备成骨分化培养基，将haMPCs消化离心获取P3代细胞，使用适量的生长培养基制备细胞悬液待用。按照5*103个细胞/cm2的密度将haMPCs接种于多孔培养板，置于CO2培养箱中预培养2小时。
预培养结束后，在实验孔中添加1mL 37°C水浴锅预热的成骨分化完全培养基，在对照孔中添加1mL 37°C水浴锅预热标准培养基，并将多孔培养板置于37°C，5%CO2浓度的CO2培养箱中进行培养。在培养过程中，每隔3-4天对相应板孔进行换液。经过足够培养时间后（＞21天），在当天配置4%福尔马林溶液和2%Alizarin Red S染液，对各孔进行固定和染色处理。吸除培养基，DPBS洗涤一次，并将细胞使用4%福尔马林溶液固定30分钟。固定后用蒸馏水洗涤2次，然后加入2%Alizarin Red S染液(PH为4.2)染色2-3分钟。使用蒸馏水洗涤三次，然后在光镜下对各实验组及对照组进行观察，保存图片。
实验结果：在实验进行第25天对细胞生长状况进行观察：实验组染色显示结节状沉积为淡棕色，证实了结节状沉积为钙盐沉积（图5A）；对照组染色显示为阴性（图5B）。
综上所述，本实施例表明，本发明的haMPCs在成骨分化培养基的培养条件下在细胞形态学及经典化学染色处理呈现了骨细胞的特征，表明haMPCs具备向骨细胞的分化潜能。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs）的用途，其特征在于，它们被用于制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物组合物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的间质血管层细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(i)30%以上的细胞具有表面抗原CD29；
(ii)50%以上的细胞具有表面抗原CD73；
(iii)85%以上的细胞具有表面抗原CD49d；
(iv)55%以上的细胞具有表面抗原CD90。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的间质血管层细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(v)85%以下的细胞具有表面抗原CD34；
(vi)15%以下的细胞具有表面抗原CD45。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的间质血管层细胞分泌选自下组的细胞因子：干细胞生长因子(HGF)，血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生因子(PDGF)、人转化生长因子β(TGF-β)、巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、或其组合。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的间充质祖细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(i)95%以上的细胞具有表面抗原CD90；
(ii)95%以上的细胞具有表面抗原CD73；
(iii)95%以上的细胞具有表面抗原CD29；
(iv)95%以上的细胞具有表面抗原CD49d。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的间充质祖细胞具有选自下组的任一或多种特征：
(v)2%以下的细胞具有表面抗原HLA-DR；
(vi)2%以下的细胞具有表面抗原Actin；
(vii)2%以下的细胞具有表面抗原CD34；
(viii)2%以下的细胞具有表面抗原CD45；
(viiii)2%以下的细胞具有表面抗原CD14。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的间充质祖细胞分泌选自下组的细胞因子：血管内皮生长因子(VEGF)、人转化生长因子α(TGF-α)、人转化生长因子β(TGF-β)、粒细胞集落刺激生物因子(GM-CSF)、肝细胞生长因子(HGF)、血小板衍生因子(PDGF)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)。
8.一种用于预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：有效量的间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs），以及药学上可接受的载体。
9.一种预防和/或治疗类风湿性关节炎的方法，其特征在于，包括步骤：给需要的对象施用间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs）、或施用含有间质血管层细胞（SVF）和间充质祖细胞（haMPCs）的药物组合物；
优选地，采用静脉注射，和/或局部关节腔内注射的方法给需要的对象进行施用。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，包括步骤：
(1)给需要的对象施用间质血管层细胞；和
(2)给需要的对象施用间充质祖细胞。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210533297.9A CN103860593A (zh) | 2012-12-11 | 2012-12-11 | 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 |
| PCT/CN2013/088683 WO2014090111A1 (zh) | 2012-12-11 | 2013-12-05 | 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210533297.9A CN103860593A (zh) | 2012-12-11 | 2012-12-11 | 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103860593A true CN103860593A (zh) | 2014-06-18 |
Family
ID=50899980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210533297.9A Pending CN103860593A (zh) | 2012-12-11 | 2012-12-11 | 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103860593A (zh) |
| WO (1) | WO2014090111A1 (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106031792A (zh) * | 2015-03-10 | 2016-10-19 | 西比曼生物科技（上海）有限公司 | 治疗关节软骨缺损的组合物 |
| CN108392624A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-08-14 | 洛阳轩智生物科技有限公司 | 活性促进肽以及间充质干细胞在治疗类风湿性关节炎中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011008277A2 (en) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Hematopoietic stromal progenitor cells and uses thereof |
| WO2012091911A1 (en) * | 2010-12-27 | 2012-07-05 | Intellicell Biosciences, Inc. | Ultrasonic cavitation derived stromal or mesenchymal vascular extracts and cells derived therefrom obtained from adipose tissue and use thereof |
-
2012
- 2012-12-11 CN CN201210533297.9A patent/CN103860593A/zh active Pending
-
2013
- 2013-12-05 WO PCT/CN2013/088683 patent/WO2014090111A1/zh active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011008277A2 (en) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Hematopoietic stromal progenitor cells and uses thereof |
| WO2012091911A1 (en) * | 2010-12-27 | 2012-07-05 | Intellicell Biosciences, Inc. | Ultrasonic cavitation derived stromal or mesenchymal vascular extracts and cells derived therefrom obtained from adipose tissue and use thereof |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JORGE PAZ RODRIGUEZ等: "Autologous stromal vascular fraction therapy for rheumatoid arthritis: rationale and clinical safety", 《INTERNATIONAL ARCHIVES OF MEDICINE》 * |
| 李慧等: "脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预", 《中国组织工程研究与临床康复》 * |
| 陈东旭等: "间充质干细胞治疗类风湿性关节炎的研究与应用", 《中国组织工程研究与临床康复》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106031792A (zh) * | 2015-03-10 | 2016-10-19 | 西比曼生物科技（上海）有限公司 | 治疗关节软骨缺损的组合物 |
| CN107427558A (zh) * | 2015-03-10 | 2017-12-01 | 西比曼生物科技（上海）有限公司 | 治疗关节软骨缺损的组合物 |
| CN108392624A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-08-14 | 洛阳轩智生物科技有限公司 | 活性促进肽以及间充质干细胞在治疗类风湿性关节炎中的应用 |
| CN108392624B (zh) * | 2018-04-23 | 2020-08-25 | 北京诺赛启研再生医学研究院有限公司 | 活性促进肽以及间充质干细胞在治疗类风湿性关节炎中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2014090111A1 (zh) | 2014-06-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105154395B (zh) | 一种增强MSCs免疫调节功能的临床级别细胞制备方法 | |
| JP5647230B2 (ja) | 瘻孔治療のための自家及び同種異系の脂肪由来間質幹細胞組成物 | |
| CN106754674A (zh) | 从人胎盘羊膜制备羊膜间充质干细胞的方法及其应用 | |
| CN111849882A (zh) | 间充质干细胞外泌体及其制备方法和应用 | |
| CN102586182A (zh) | 人源干细胞分泌生物活性因子与裂解液的制备与应用 | |
| CN108865986B (zh) | 用于修复关节软骨损伤/缺损的间充质干细胞制剂及其制备方法和应用 | |
| CN102465148A (zh) | 人源干细胞生物活性物质及其制备与应用 | |
| CN109735490A (zh) | 一种脂肪干细胞提取方法 | |
| CN104707140A (zh) | 治疗骨关节炎的组合物 | |
| CN110935010A (zh) | 一种干细胞制剂和生长因子组合物及其制备方法和应用 | |
| CN103860593A (zh) | 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 | |
| CN104707141A (zh) | 治疗骨关节炎的组合物 | |
| CN103013910A (zh) | 人退变椎间盘软骨终板干细胞、制备方法及其应用 | |
| CN102641296A (zh) | 一种抑制免疫及治疗移植物抗宿主病（gvhd）制剂及其制备方法 | |
| CN103816183A (zh) | 间质血管层细胞和间充质祖细胞在预防或治疗骨性关节炎中的应用 | |
| CN113652398A (zh) | 增强间充质干细胞外泌体黏膜修复功效的方法及复合物 | |
| CN103961374A (zh) | 异体间质血管层细胞和异体间充质祖细胞在预防或治疗类风湿性关节炎中的应用 | |
| KR20230025801A (ko) | 활막 유래 간엽계 줄기 세포의 제조 방법 및 관절 치료용 세포 제제의 제조 방법 | |
| CN108392624B (zh) | 活性促进肽以及间充质干细胞在治疗类风湿性关节炎中的应用 | |
| CN103961373A (zh) | 异体间质血管层细胞和异体间充质祖细胞在预防或治疗骨性关节炎中的应用 | |
| CN1281740C (zh) | 一种细胞分化诱导剂、其制备方法及其在对干细胞向心肌组织细胞分化诱导中的应用 | |
| CN110742906A (zh) | 一种间充质干细胞旁分泌因子在制备疼痛药中的应用 | |
| CN110592008A (zh) | 犬科动物骨髓间充质干细胞的培养方法 | |
| CN105147722A (zh) | 硫酸化白芨多糖的新用途及一种治疗眼表损伤的制剂 | |
| CN104706675A (zh) | 治疗骨关节炎的组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 200233 Guiping Road, Xuhui District, No. 333, building 1, building 5, building Applicant after: CELLULAR BIOMEDICINE GROUP (SHANGHAI) Ltd. Address before: 200233 Guiping Road, Xuhui District, No. 333, building 1, building 5, building Applicant before: Zhenjing Biotechnology (Shanghai) Co.,Ltd. |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: STEMCELL BIOLOGICAL TECHNOLOGIES (SHANGHAI) CO., LTD. TO: CBM BIOTECHNOLOGY (SHANGHAI) CO., LTD. |
|
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20230920 Address after: North Zone, 1st Floor, Building 1, No. 159 Cailun Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 201210 Applicant after: Shibiman Biotechnology (Shanghai) Co.,Ltd. Address before: No. 5, building No. 1, No. 333, Guiping Road, Xuhui District, Shanghai Applicant before: CELLULAR BIOMEDICINE GROUP (SHANGHAI) Ltd. |
|
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: North Zone, 1st Floor, Building 1, No. 159 Cailun Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 201210 Applicant after: Shibiman Biotechnology (Shanghai) Co.,Ltd. Address before: North Zone, 1st Floor, Building 1, No. 159 Cailun Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 201210 Applicant before: Shibiman Biotechnology (Shanghai) Co.,Ltd. |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140618 |