CN103860479A

CN103860479A - 从栓塞剂送递药物

Info

Publication number: CN103860479A
Application number: CN201410016386.5A
Authority: CN
Inventors: A·L·刘易斯; P·W·斯拉特福德; M·V·冈萨雷斯－费贾多; Y·唐
Original assignee: Biocompatibles UK Ltd
Current assignee: Biocompatibles UK Ltd
Priority date: 2004-09-07
Filing date: 2005-09-06
Publication date: 2014-06-18
Also published as: AU2005281483B2; US20120201867A1; ATE505185T1; EP1796644B1; WO2006027567A2; JP5221134B2; CN101052378A; EP2269580A3; JP2017025071A; JP2008512370A; DE602005027477D1; CA2579533A1; CA2579533C; AU2005281483A1; US20120276151A1; HK1198691A1; EP1796644A2; US20070275991A1; EP3085361A1; JP2015180625A

Abstract

一种包含微球的栓塞组合物，所述微球由水不溶性、水溶涨性阴离子聚合物和阳离子喜树碱化合物优选伊立替康形成，所述阴离子聚合物具有的溶涨直径超过100μm。微球优选由与阴离子烯式不饱和阴离子共聚单体交联的交联聚乙烯醇，优选烯式不饱和聚乙烯醇大分子单体形成。该组合物用于治疗血管过多肿瘤例如结直肠癌肝转移。

Description

从栓塞剂送递药物

本申请是申请日为2005年9月6日，申请号为200580037469.1，发明名称为“从栓塞剂送递药物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明的范围是用于肿瘤化疗栓塞的栓塞形成用微球的制备和用途，其中所述微球包含水不溶性聚合物和治疗量的喜树碱，优选盐酸伊立替康。

背景技术

喜树碱（camptothecin，CPT）及其类似物是过去几年里已被鉴定的新一类抗癌剂。喜树碱依赖于pH会以两种形式存在：pH低于5时的活性内酯形式以及碱性pH或生理的中性pH时的无活性羧酸酯形式。喜树碱的A环是下述结构的核心部分中的左边的环。

伊立替康（irinotecan）是喜树碱的改良形式，已被开发用以提高药物的溶解性和特异性。它被公开于US4,604,463中。喜树碱与酶拓扑异构酶I特异性相互作用，所述拓扑异构酶I通过引起可逆转的单链断裂而消除DNA中的扭转链。伊立替康及其活性代谢物SN-38结合至拓扑异构酶I-DNA复合物，并阻止这些单链断裂的重新连接。目前的研究认为伊立替康的细胞毒性是由于在DNA合成期间所产生的双链DNA损害，此时复制酶与由拓扑异构酶I、DNA和伊立替康或SN-38形成的三元复合物相互作用。哺乳动物细胞不能有效修复这些双链断裂。

酸加成盐形式的伊立替康如盐酸伊立替康某种程度上可作为亲脂代谢物SN-38的水溶性前体。SN-38是由伊立替康通过羧酸酯酶介导的喜树碱部分和双哌啶基侧链之间氨基甲酸酯键的裂解而形成。作为从人和啮齿类肿瘤细胞系纯化得到的拓扑异构酶I的抑制剂，SN-38的效力约为伊立替康的1000倍。体外细胞毒性分析表明SN-38相对于伊立替康的效力在2倍至2000倍之间变化。但是，浓度对时间曲线（AUC）下SN-38的血浆面积值为伊立替康的2%至8%，而与约50%伊立替康与血浆蛋白结合相比，有95%的SN-38与血浆蛋白结合。

伊立替康注射可诱导似乎由不同机制介导的早期形式和晚期形式的腹泻。早期腹泻（输注伊立替康时出现或紧随其后出现）本质上是胆碱能的。它通常是暂时的，偶尔比较严重。它可能伴随如下症状：鼻炎、唾液分泌增加、瞳孔缩小、流泪、发汗、潮红和可引起腹部痛性痉挛的肠蠕动亢进。

该药物是用于治疗结直肠癌和肝转移（CRM）的选用药物之一。该药物通常与其它治疗剂一起通过静脉内给药。其它药物将微粒用作静脉内送递药物的工具；在这些情况下，微粒需要足够小以避免阻塞血管（Evaluation of camptothecin microspheres in cancer therapy.Tong,Wenkai.Avail.UMI,Order No.DA3061801.(2002),214pp.From:Diss.Abstr.Int.,B2003,63(8),3730;Injectablepharmaceutical composition comprising microparticles ormicrodroplets of camptothecin.Sands,Howard;Mishra,Awadhesh.(Supergen,Inc.,USA;Rtp Pharma,Inc.).PCT Int.Appl.(2002),103pp.）。

由于聚（丙交酯-共-乙交酯）（PLGA）降解所形成的酸性微环境，PLGA微球被认为是良好的CPT送递载体（Evaluation of PLGAMicrospheres as Delivery System for Antitumor Agent-Camptothecin.Tong,Wenkai;Wang,Lejun;D'Souza,Martin J.Drug Developmentand Industrial Pharmacy(2003),29(7),745-756)和Poly(D,L-lactic-co-glycolic acid)microspheres for sustained deliveryand stabilization of camptothecin,Ertl,B.,et a/.,J.Contr.ReI.1999,61,305-317。喜树碱或其衍生物被包封于聚合物中，得到平均直径为2-70μm的抗癌控释微球。(Controlled-releasemicrospheres containing antitumor agents.Machida,Masaaki;Onishi,Hiroshi;Morikawa,Akinobu;Machida,Ryoji;Kurita,Akinari.Jpn.Kokai Tokkyo Koho(2002),7pp.)。这个尺寸的颗粒通常用于静脉内送递，但是也可例如在手术期间用作植入物或者直接注射至肿瘤位点。(Camptothecin Delivery Methods Hatefi,A.et al.,Pharm.Res.2002,19(10)1389-1399)。

其它研究人员研究了聚合物-药物相互作用对聚合物微球的表面形态学和体外释放特征的影响。包封盐酸伊立替康（CPT）的聚丙交酯微球通过O/O乳化系统的溶剂蒸发法制备，以便控制活体内药物的浓度。聚丙交酯微球的平均直径保持在约50μm，而CPT含量有所变化(Surface morphology change of polylactide microspheres enclosinglrinotecan hydrochloride and its effect on release properties.Yoshizawa,Hidekazu;Nishino,Satoru;Natsugoe,Shoji;Aiko,Takashi;Kitamura,Yoshiro.Journal of Chemical Engineering ofJapan(2003),36(10),1206-1211)。

由可降解聚（丙交酯-共-乙交酯）送递喜树碱衍生物（10-羟基喜树碱）的另一个研究使用乳剂二氯甲烷-聚合物的水溶液。该药物以溶于DMF中的溶液形式加入乳剂中。微球的平均颗粒大小介于27-82μm之间。目的在于微球在几周的时间内循环并释放药物。尽管建议胶囊化喜树碱可用于使肝肿瘤形成栓塞，但是没有指示表明这如何实现。（Stabilization of10-hydroxycamptothecin in Poly(lactide-co-glycolide)microsphere delivery vehicles Shenderova,A.et al.,Pharm.Res.1997,14(10)1406-1414）。

可生物降解的微球已被用于通过直接注射至肿瘤块将药物直接送递至该肿瘤中（Use of biodegradable microspheres for the deliveryof an anticancer agent in the treatment of glioblastoma.Faisant,Nathalie;Benoit,Jean-Pierre;Meinei,Philippe.WO-A-0069413。微球由聚乙交酯形成，平均直径为48μm。

已表明药物掺入微球延长了循环中药物的寿命（Pharmacokineticsof prolonged-release CPT-11-loaded microspheres in rats.Machida,Y.;Onishi,H.;Kurita,A.;Hata,H.;Morikawa,A.;Machida,Y.Journal of Controlled Release(2000),66(2-3),159-175）。由聚（DL-乳酸）或聚（DL-乳酸-共-羟乙酸）共聚物组成的、包含CPT-11的微球通过水包油蒸发法制备得到。测量微球的大小和形状，并由体外释放曲线分析药物释放速率。CPT-11水溶液以10mg/kgi.v.或i.p.注射入大鼠，微球以50mg当量CPT-11/kg i.p.给药至大鼠。微球平均直径约为10μm，且形状为球形。

其它研究试图通过外加磁场的使用来靶向微球（In vivoevaluation of camptothecin microspheres for targeted drugdelivery.Sonavaria,Vandana J.;Jambhekar,Sunil;Maher,Timothy.Proceedings of the International Symposium onControlled Release of Bioactive Materials(1994),21ST194-5.）。含有喜树碱的磁场响应清蛋白微球可以可靠地靶向大鼠模型中的所需位点。此外，除去磁场后靶向微球在该位置保留数小时，这表明微球被吞入细胞，并且药物在该位点释放。推测该微球非常小，可能约1μm。

姑息治疗结直肠癌肝转移的一种方法是化疗栓塞。在一种操作中，通过导管将活性药物直接导入为肿瘤提供营养的动脉中，然后导入栓塞剂以阻止或减缓血流进入患病区段，由此减少药物冲出。没有采用过金标法，并且所使用治疗剂有所不同，包括但不限于5-FU、丝裂霉素C或顺铂、多柔比星和丝裂霉素的混合物（CAM）等。异乎寻常的是，虽然伊立替康是全身治疗的一种选择，但是还未被广泛使用的化疗栓塞所采用。仅有一个最近在大鼠中的研究特别通过一种方法将伊立替康和栓塞形成结合起来，所述方法中药物溶液和栓塞淀粉微球悬液被导入肝动脉（Chemoembolization of rat liver metastasis with irinotecan andquantification of tumour cell reduction.Saenger Jan;LeibleMaike;Seelig Matthias H;Berger Martin R.Journal of cancerresearch and clinical oncology(Germany)Apr2004,130(4)p203-10）。所使用方法并未涉及到药物和栓塞材料的聚合物之间的联系，因此不能控制药物释放。淀粉微球仅仅减缓血流流过血管，并且在不到约1小时的时间内降解。

WU,S.J.,An Experimental study of the basic properties ofdrug microsphere and target treatment of rats with liver tumour,Zhonghua-Waike Za Zhi Apr199028(4)241-243描述了用喜树碱-清蛋白微球进行肝动脉栓塞。采用该微球使肿瘤坏死并且由肿瘤引起的组织损害得到逆转。

有一个关于在膀胱癌的髂内动脉用超选择喜树碱微球栓塞形成的临床研究（Xu A;Wang X;Yu M.Department of Urology,GeneralHospital of PLA,Beijing100853,China.Zhonghua yi xue za zhi(China)May2000,80(5)p358-9）。微球的性质并未具体说明。大小为直径约200μm。作者评估了膀胱癌髂内动脉的喜树碱微球栓塞形成的效力。对十八名不能手术的和晚期的膀胱癌患者用髂内动脉的喜树碱微球超选择栓塞形成进行治疗。肿瘤大小显著缩小，并且17名患者中肿瘤细胞受到不同程度损害。未发现不良反应。他们得出的结论认为髂内动脉的喜树碱微球栓塞形成是对不能手术的和晚期的膀胱癌的安全有效的疗法。

发明内容

根据本发明，提供了一种微球在制备用于治疗方法中的组合物的新用途，所述微球含有在pH7时带负电的、水不溶性、水溶涨性聚合物，以及与该聚合物以可释放形式通过静电结合的、带正电的喜树碱化合物，在所述治疗方法中，所述组合物被引入血管中，所述微球在血管中形成栓塞，栓塞中的颗粒在37℃于水中平衡时具有介于范围为100至1500μm之间的尺寸，并且所述方法中，所述喜树碱化合物从栓塞中释放。

所述治疗方法通常用于治疗实体瘤。在本发明中，微球于室温下与水平衡时直径超过100μm。因此，优选基本所有微球的尺寸不小于100μm。该大小可最高达200μm，优选最高达1500μm。优选地，在负载喜树碱化合物之前，测量微球大小而确定微球的直径。尽管微球优选基本为球形，但是它们也可为类似球形或者甚至为不太规则的形状。在下面的说明书中，我们所指代的微球和颗粒可互换。非球形颗粒的直径为其最大直径。

喜树碱化合物优选至少略微溶于水，例如在室温下以至少0.001g/l、优选大于0.002g/l、更优选大于0.01g/l的浓度溶于水中。优选喜树碱化合物在pH7时带正电。阳离子基团可为伯胺基团，但是优选为仲胺、叔胺或季胺基团。

合适的化合物的一个家族具有通式I：

其中，R¹为H、任选由羟基、胺、烷氧基、卤素、酰基或酰氧基基团取代的低级（C_1-6）烷基或卤素；并且

R为氯或NR²R³，其中R²和R³相同或相异，并且每个代表氢原子、取代或未取代的C_1-4烷基基团或者取代或未取代的碳环或杂环基团，或者R²和R³以及与它们相连接的氮原子一起形成环上可带有-O-、-S-或>NR⁴的任选取代的杂环，其中R⁴为氢原子、取代或未取代的C_1-4烷基基团或者取代或未取代的苯基基团；

并且其中-O-CO-R基团键合至位于包括喜树碱化合物的盐在内的喜树碱化合物A环中的9、10或11位任意一个的碳原子。

优选-O-CO-R基团连接于10位。

R¹优选为C_1-4烷基，最优选为乙基，并且m优选为1。

卤素原子R为例如F、Cl、Br或I，优选为F或Cl。

R¹至R⁴可为甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基，优选为甲基。

R和R¹中的取代基优选地选自卤素原子、羟基、C_1-4烷氧基、苯氧基、COOR⁶、SO₃R⁶和PO₃(R⁶)₂、芳基、

NR⁸R⁹和CONR⁸R⁹、QAOR⁵、QANR⁸R⁹和QAQR⁵，其中R⁵为C_1-4烷基或芳基；R⁶为氢、卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基；R⁷为氢、卤素或C_1-4烷基；R⁸和R⁹相同或相异，并且每个为H或C_1-4烷基或者R⁸和R⁹一起代表C_3-6链烷二基(alkanediyl);

Q为OCO或-COO-，A为C_2-4链烷二基。

优选地，R为NR³R³，其中R²和R³以及所述氮原子一起形成具有任选取代基的5元环或6元环，优选为饱和环。取代基优选为-NR⁸R⁹。在这样一个取代基中，R⁸和R⁹优选一起为C_4-5链烷二基。该基团为碱性的，并且在pH7时倾向于带正电。最优选的R为：

合适化合物的另一个家族具有通式II：

包括其盐以及四级衍生物；

其中R²⁰和R²³每个为羟基或氢或者一起为CH₂OCH₂;

R²¹和R²²中有一个为H，另一个为CH₂NR²⁴R²⁵，其中R²³和R²⁴相同或相异，并且每个代表氢原子、取代或未取代的C_1-4烷基基团或者取代或未取代的碳环基团或杂环基团，或者R²³和R²⁴和与它们相连接的氮原子一起形成环上可带有-O-、-S-或>NR⁴的任选取代杂环，其中R⁴为氢原子、取代或未取代的C_1-4烷基基团或取代或未取代的苯基基团。要求保护的合适化合物的一个实例是拓泊替康（topotecan），其中R²⁰为羟基，R²²和R²³为氢，R²¹为CH₂NR²⁴R²⁵，R²⁴和R²⁵均为甲基。

聚合物为水不溶性材料。尽管它可被生物降解，以使所述药物基本可通过聚合物基质的蚀解从表面释放药物得以释放，但是优选地，所述聚合物基本是生物稳定的（即非可生物降解的）。

聚合物是水溶涨性的。可用于本发明的水溶涨性聚合物优选地在37℃溶涨于水中时具有平衡水含量，所述平衡水含量由重量分析测量，范围在40至99wt%、优选地在75至95%之间。

在本发明的一个优选实施方案中，给予需要栓塞治疗的患者的组合物为液体载体中水溶涨性水不溶性聚合物的颗粒悬浮液形式。优选地，所述颗粒被分级为经校准的大小范围，以便正确地在血管中形成栓塞。优选地，所述颗粒于37℃在水中平衡时具有的大小范围在100至1500μm之间，更优选介于100至1200μm之间。经校准的范围可包括具有带宽约100至300μm的直径的颗粒。该大小范围可为例如100至300μm、300至500μm、500至700μm、700至900μm以及900至1200μm。优选地所述颗粒形状基本为球形。这类颗粒在本文中被称为微球。

一般而言，尽管对所述聚合物而言离子交联可以适用，但是所述聚合物至少部分地共价交联。尽管使用来源于天然来源的聚合物如清蛋白、藻酸盐、明胶、淀粉、壳多糖或胶原（每一种均已被用作栓塞剂）可以适用，但是所述聚合物优选基本不含天然存在的聚合物或衍生物。它优选地在双官能或多官能交联单体存在下通过烯式不饱和单体的聚合而形成。所述烯式不饱和单体包括离子（包括两性离子）单体。

可使用甲基丙烯酸羟乙酯、丙烯酸和交联单体如二甲基丙烯酸乙二酯或亚甲基双丙烯酰胺的共聚物，如用于以etafilcon A为基础的接触镜片。还可使用N-丙烯酰-2-氨基-2-羟甲基-丙-1,3-二醇和N,N-二丙烯酰胺的共聚物。

其他聚合物为用作分离介质或离子交换介质类的、例如具有离子取代基的交联苯乙烯聚合物。

另一类可用于形成水溶涨性、水不溶性基质的聚合物为使用醛类交联剂如戊二醛交联的聚乙烯醇。对这类产物而言，通过含有功能性离子基团的化合物与羟基基团进行反应来提供离子侧基，可使聚乙烯醇（PVA）离子化。与羟基基团反应的合适功能基团的实例是酰化剂如羧酸或其衍生物，或其它可形成酯的酸性基团。

本发明特别的价值在于：所述聚合物基质是由每个分子具有多于一个烯式不饱和侧基的聚乙烯醇大分子单体通过烯式基团的自由基聚合形成。优选地，PVA大分子单体与烯式不饱和单体共聚化，所述烯式不饱和单体例如包括非离子和/或离子单体，包括阴离子单体。

例如通过提供PVA聚合物，可形成PVA大分子单体，所述PVA大分子单体具有合适分子量如范围在1000至500,000D、优选10,000至100,000D之间，并具有乙烯侧基或丙烯侧基。丙烯侧基可例如通过丙烯酸或甲基丙烯酸与PVA反应，通过一些羟基基团形成酯键提供。其他将可聚合的乙烯基团连接至聚乙烯醇上的方法描述于例如US4,978,713和优选US5,508,317和5,583,163。因此，优选的大分子单体包括聚乙烯醇主链，（烷基）丙烯酰胺烷基（(alk)acrylaminoalkyl）部分通过环状缩醛键连接到主链上。实施例1描述了这么一种大分子单体的实例（被批准称为nelfilcon B）的合成。优选地，所述PVA大分子单体每分子具有约2至20个烯式侧基，例如5至10个。

PVA大分子单体与包括离子单体在内的烯式不饱和单体共聚时，所述离子单体优选具有通式Ⅱ

Y¹BQ¹ ｜｜

其中Y¹选自

CH₂＝C(R¹⁰)-CH₂-O-,CH₂＝C(R¹⁰)-CH₂OC(O)-,CH₂＝C(R¹⁰)OC(O)-,CH₂＝C(R¹⁰)-O-,CH₂＝C(R¹⁰)CH₂OC(O)N(R¹¹)-,R¹²OOCCR¹⁰＝CR¹⁰C(O)-O-,R¹⁰CH＝CHC(O)O-,R¹⁰CH＝C(COOR¹²)CH₂-C(O)-O-,

其中：

R¹⁰为氢或C₁-C₄烷基基团；

R¹¹为氢或C₁-C₄烷基基团；

R¹²为氢或C_1-4烷基基团或BQ¹，其中B和Q¹定义如下；

A¹为-O-或-NR¹¹-；

K¹为基团-(CH₂)_rOC(O)-、-(CH₂)_rC(O)O-、-(CH₂)_rOC(O)O-,-(CH₂)_rNR¹³-、-(CH₂)_rNR¹³C(O)-、-(CH₂)_rC(O)NR¹³-、-(CH₂)_rNR¹³C(O)O-、-(CH₂)_rOC(O)NR¹³-、-(CH₂)_rNR¹³C(O)NR¹³-(其中基团R¹³相同或相异)、-(CH₂)_rO-、-(CH₂)_rSO₃-，或者一个价键，该价键任选地与B结合，并且r为1至12，R¹³为氢或C₁-C₄烷基基团；

B为直链或支链链烷二基、氧杂亚烷基(oxaalkylene)、链烷二基氧杂链烷二基(alkanediyloxaalkanediyl)或链烷二基低聚（氧杂链烷二基）链(alkanediyloligo(oxaalkanediyl)chain)，所述链任选地包含一个或多个氟原子，最高并包括全氟链，或者，若Q¹或Y¹含有与B键接的末端碳原子，则B为一个价键；并且

Q¹为离子基团。

优选包括包含阴离子基团Q¹的这样一种化合物。

阴离子基团Q¹可为例如羧酸酯、碳酸酯、磺酸酯、硫酸酯、硝酸酯、膦酸酯或磷酸酯基团。单体可以游离酸或盐的形式聚合。优选共轭酸的pK_a小于5。

合适的阳离子基团Q¹优选为基团N⁺R¹⁴ ₃、P⁺R¹⁵ ₃或S⁺R¹⁵ ₂，其中基团R¹⁴相同或相异，并且每个为氢、C_1-4烷基或芳基（优选苯基）或其中的两个R¹⁴以及与它们相连接的杂原子一起形成一个含有5至7个原子的饱和或不饱和的杂环，基团R¹⁵每个为OR¹⁴或R¹⁴。优选地，阳离子基团一直都是阳离子性的，也即每个R¹⁴均不为氢。优选地阳离子基团Q为N⁺R¹⁴ ₃，其中每个R¹⁴均为C_1-4烷基，优选为甲基。

两性离子基团Q¹例如可通过具有一个二价阴离子电荷中心和一个一价阳离子电荷中心总体上具有电荷，反之亦然；或者通过具有两个阳离子电荷中心和一个阴离子电荷中心总体上具有电荷，反之亦然。但是，优选两性离子基团总体上不带电，最优选地具有一个单价阳离子电荷中心和一个单价阴离子电荷中心。

本发明中可用作Q的两性离子基团的实例公开于WO-A-0029481。

例如，若烯式不饱和单体包括两性离子单体，则这会提高所述颗粒的亲水性、润滑性、生物相容性和/或血相容性。合适的两性离子单体描述于我们早期的公布文本WO-A-9207885、WO-A-9416748、WO-A-9416749和WO-A-9520407。优选地，两性离子单体为2-甲基丙烯酰氧基-2’-磷酸三甲铵乙酯内盐(2-methacryloyloxy-2’-trimethylammonium ethyl phosphate inner salt，MPC)。

通式I的单体中，优选Y¹为基团CH²=CR¹⁰COA-，其中R¹⁰为H或甲基、优选甲基，并且其中A¹优选为NH。B优选为1至12、优选2至6个碳原子的链烷二基基团。该单体为丙烯酸单体。

烯式不饱和单体中可包括稀释单体例如非离子单体。这样一种单体可用于控制酸基团的pK_a、控制产物的亲水性或疏水性、在聚合物中提供疏水区域或仅仅用作惰性稀释剂。非离子稀释单体的实例为例如（烷）丙烯酸烷酯和（烷）丙烯酰胺，特别是具有1至12个碳原子的烷基基团、羟基的这类化合物；以及二羟基取代的（烷）丙烯酸烷酯和（烷）丙烯酰胺；乙烯基内酰胺；苯乙烯和其它芳香族单体。

在聚合物基质中，优选地，阴离子的水平范围在0.1至10meq g^-1，优选地至少1.0meq g^-1。优选的阴离子来源于强酸，例如硫酸、磺酸、磷酸和膦酸。

当PVA大分子单体与其它烯式不饱和单体共聚时，则PVA大分子单体与其它单体的重量比优选地介于50∶1至1∶5，更优选地介于20∶1至1∶2。烯式不饱和单体中，阴离子单体优选以范围在10至100mole%、优选至少25mole%的量存在。

交联聚合物例如可以颗粒形式形成，例如通过在连续不互溶载体中的分散相中聚合小滴形式的单体而形成。溶涨时，生产具有所需大小的颗粒的合适的油包水聚合的实例是已知的。例如，US4,224,427描述了形成直径最高达5mm的均一球形小球（微球）的方法，所述方法通过在助悬剂存在下将水溶性单体分散至连续溶剂相中进行。可存在稳定剂和表面活性剂以对分散相颗粒的大小进行控制。聚合后，交联的微球通过已知手段回收、并洗涤和任选地灭菌。优选地，颗粒如微球在水性液体中是溶涨的，并根据其大小被分类。

优选的，喜树碱化合物与聚合物联合，以便在一段时间内控释药剂。这段时间可为几分钟至几周，优选地至少最高达几天，优选地最高达72小时。所述药剂与聚合物静电键合。聚合物中阴离子基团的存在使得可以控制带正电的喜树碱活性成分的释放。

通过多种技术可将药物活性成分掺入聚合物基质中。在一种方法中，聚合或交联之前，活性成分可与聚合物的前体例如单体或大分子单体混合物或可交联聚合物和交联物混合物相混合。或者，活性成分可在聚合物交联之后负载入聚合物中。例如，干燥的颗粒聚合物可溶涨于优选溶于水或醇如乙醇的活性成分溶液中，任选地随后除去非吸收药剂和/或将溶剂蒸发。溶于有机溶剂如醇或更为优选地溶于水的活性成分溶液可被喷雾于颗粒移动床上，藉此药物被吸收入颗粒内部，同时除去溶剂。更方便地，我们发现仅仅将悬浮于连续液体载体如水中的溶涨颗粒与药物的水性醇溶液接触一段时间，就可以使得药物被吸收至颗粒内部。将药物固定在颗粒内的技术可提高负载水平，例如通过将负载悬液的pH改变为活性成分为相对不溶形式时的值的沉淀法就可提高负载水平。溶涨载体随后可被除去，或者方便地，可保留在颗粒中作为产品的一部分，随后用作栓塞剂，或者，溶涨颗粒可以溶涨形式或以浆液形式使用，即在溶涨颗粒外没有液体或液体量很少。或者，颗粒悬液可从任何残留的药物负载溶液中除去，并且将通过任何一种常规技术干燥得到的颗粒用于基于药物的干燥产品。这可包括但不限于在室温或较高温度下或者在减压或真空条件下风干；常规的冷冻干燥；大气压冷冻干燥、超临界流体增强溶液分散（SEDS）。或者，药物负载微球可通过如下步骤进行脱水：在一系列步骤中用有机溶剂代替水，然后将更易挥发的有机溶剂蒸发。溶剂应选为并非药物的溶剂。

简而言之，通常常规的冷冻干燥方法可按照如下方法进行：样本被等分装入部分塞住的玻璃小瓶中，所述玻璃小瓶被置于冷冻干燥器中被冷却的温控架上。降低架温度，使样本被冷冻至均一的规定温度。完全冷冻后，干燥器中的压力被降低至规定压力，由此开始第一次干燥。第一次干燥期间，通过升华将水蒸气从冷冻物质中逐渐除去，同时将架温度控制为恒定低温。升高架温度并进一步减少容器压力以开始第二次干燥，这样被吸收至半干物质中的水可被除去，直至残留水含量降低至所需水平。如若需要，可在保护性氛围下在原处封闭小瓶。

大气压冷冻干燥可通过在冷冻产物上快速循环非常干燥的空气完成。与常规冷冻干燥方法相比较，非真空的冷冻干燥有很多优点。循环干燥气体使热量和质量从冷冻样本的转移过程加快，这与在有风天气里衣物干得更快相同。这一领域的大部分工作与食品的生产有关，并且已观察到挥发性芳香族化合物的滞留有所增加，这种方法对生物制品的干燥可能的益处有待确定。特别值得关注的是，通过使用大气喷雾干燥方法，可获得微小的、自由流动的粉末而非团块。可获得亚微米直径的颗粒，这比通常通过碾磨获得的微粒要小十倍。较高表面积的颗粒性质可获得可易于再水合的产物，目前还不能对吸入应用和经皮应用所需颗粒大小的进行精细控制，但是在该领域还是有应用潜力的。

尽管所述组合物可在即用前用聚合物和喜树碱化合物制备，但还是优选预先将所述组合物制备好。干的聚合物-喜树碱颗粒可在即用前进行水合。或者可提供充分化合的组合物，所述组合物优选地包含具有吸收有喜树碱化合物的聚合物颗粒和已吸收的水（如生理盐水）和颗粒外的液体（例如盐水）。

优选地，给药组合物中喜树碱化合物的水平范围在0.1至500mg/ml组合物，优选10至100mg/ml。优选地，化疗栓塞法重复一至五次，对每一剂量而言，喜树碱化合物的给药量范围在0.1至100mg/ml，优选10至100mg/ml。正常栓塞形成中组合物的给药量范围为1至6ml。每一剂量的喜树碱化合物的给药总量优选范围在10至1000mg，更优选50至250mg。基于下文实施例中示出的释放数据，发明人相信这将会在肿瘤处的血管中获得治疗有效浓度，并且能产生显著的胞内送递水平，藉此可获得治疗效果。还能够避免全身性喜树碱给药的不良副作用。

用于使肿瘤形成栓塞的栓塞组合物可以常规方式混合。因此，所述组合物可由介入放射学医师在立即给药前给予，同时给予显像剂例如不透射线剂。或者，除了喜树碱化合物以外，所述颗粒还可预先负载不透射线的物质。因此，预先形成混合物形式的聚合物和药物活性成分可与不透射线的显像剂在用作送递装置的储存器的注射器中预先混合。组合物可例如由微导管装置给药至合适的动脉中。根据栓塞形成的最终位点，合适的颗粒大小范围的选择可由介入放射学医师以常规方式进行。

本发明有望帮助治疗血管过多而可进行栓塞的原发性肿瘤和继发性肿瘤，例如原发性肝癌（肝细胞癌，HCC）、（结直肠肿瘤、乳腺肿瘤、内分泌腺肿瘤的）肝转移和肾脏肿瘤、骨瘤、乳腺肿瘤、膀胱肿瘤、前列腺肿瘤、结肠肿瘤和肺肿瘤。

附图说明

本发明在如下实施例中进一步阐明。其中的一些结果在附图中示出，在实施例中更为详细地描述，但是简述如下：

图1示出如实施例1所述由几种不同的小球负载伊立替康；

图2示出实施例1中由所负载的小球洗脱至磷酸盐缓冲盐溶液中；

图3示出来自实施例1中所负载的小球的伊立替康洗脱至水中的洗脱曲线图；

图4示出实施例2中示例的负载容量；

图5示出如实施例3中所测定的小球大小的变化；

图6示出如实施例4所示小球大小和离子基团含量对药物负载的影响；

图7示出如实施例6所述从凝胶球（gel sphere）洗脱伊立替康；

图8示出实施例7的结果；

图9示出实施例9的化学发光结果；

图10示出实施例9的试验后肝脏中肿瘤细胞的数目；

图11示出实施例9的试验后对照大鼠和测试大鼠的肝脏的照片。

具体实施方式

参照实施例：制备微球的方法概述

Nelfilcon B大分子单体合成：

微球合成的第一步包括由广泛使用的水溶性聚合物PVA制备nelficon B-可聚合的大分子单体。将Mowiol8-88聚乙烯醇（PVA）粉末（88%水解，乙酸盐含量12%，平均分子量约67,000D）(150g)(Clariant,Charlotte,NC USA)加入2升玻璃反应器中。温和搅拌的同时加入1000ml水，并且搅拌加速至400rpm。为确保PVA完全溶出，温度升高至99±9℃，并维持2-3小时。冷却至室温时，将N-丙烯酰胺乙醛（N-acryloylaminoacetaldehyde，NAAADA）（Ciba Vision，Germany）（2.49g或0.104mmol/g PVA）混至PVA溶液中，然后加入浓盐酸（100ml），所述浓盐酸可通过酯交换催化将NAAADA加成至PVA。反应在室温下进行6-7小时，然后使用2.5M氢氧化钠溶液中和至pH7.4终止反应。所产生的氯化钠以及任何未反应的NAAADA通过渗滤除去（步骤2）。

大分子单体的渗滤：

通过沿膜表面连续循环待纯化的供给溶液（在此情况下为nelfilcon B溶液）进行渗滤（正切流动过滤），所述膜可透过将成为废物的不需要的物质（NaCl，NAAADA），同时具有足够小的孔径以阻止循环中保留的渗余物通过。

Nelfilcon B渗滤可使用装有0.1m2纤维素膜（Millipore公司，Bedford，MA USA）的不锈钢Pellicon2Mini固定器进行，所述纤维素膜具有截留分子量为3000的孔径。Mowiol8-88重均分子量为67000，因此从膜透过的能力受到限制。

装有大分子单体的烧瓶配有磁力搅拌棒，并被置于搅拌盘上。通过配有Easy LoadⅡ泵压头的Masterflex LS蠕动泵并使用LS24Ⅵ类配管将溶液装入渗滤组件。Nelfilcon在约50psi下在膜上循环以加速透过。当溶液被浓缩至约1000ml时，通过以与滤液被收集为废物的速率相同的速率加入水使得体积保持不变，直到加入另外6000ml。渗滤完成时，在25℃下以粘度1700-3400cP将溶液浓缩至含20-23%固体的溶液。通过GFC、NMR和粘度表征Nelfilcon。

微球合成

球体通过悬浮聚合法合成，其中，若各相之间不能相互混合，那么将水相（Nelfilcon B）加入有机相（乙酸丁酯）。通过采用快速混合，水相可被分散形成小滴，其大小和稳定性可通过如下因素控制，例如搅拌速率、粘度、水相/有机相的比率和影响各相之间界面能的稳定剂和表面活性剂的使用。制备了两个系列的微球：低AMPS系列和高AMPS系列，其配方如下所示。

A高AMPS：

水相：约21%w/w Nelfilcon B溶液（约400±50g）

约50%w/w2-丙烯酰胺-2-甲丙磺酸钠盐（140±10g）

纯水（137±30g）

过硫酸钾（5.22±0.1g）

四甲基乙二胺TMEDA（6.4±0.1ml）

有机相：乙酸正丁酯（2.7±0.3L）

10%w/w溶于乙酸乙酯中的醋酸丁酸纤维素（46±0.5g）

纯水（19.0±0.5ml）

B低AMPS：

水相：约21%w/w Nelfilcon B溶液（约900±100g）

约50%w/w2-丙烯酰胺-2-甲丙磺酸钠盐（30.6±6g）

纯水（426±80g）

过硫酸钾（20.88±0.2g）

TMEDA（25.6±0.5ml）

有机相：乙酸正丁酯（2.2±0.3L）

10%w/w溶于乙酸乙酯中的醋酸丁酸纤维素（CAB）（92±1.0g）

纯水（16.7±0.5ml）

使用计算机控制水浴（Julabo PN9-300-650）加热4000ml套层反应容器，所述水浴具有连续监控反应温度的反馈感受器。

25℃下将醋酸丁酯加入反应器中，然后加入CAB溶液和水。加入PVA大分子单体前将系统用氮气清洗15分钟。通过在氮气下加入TMEDA并将温度升至55℃并维持3小时引发分散PVA溶液的交联。通过氧化还原引发的聚合而出现交联，此时TMEDA的氨基基团与过硫酸钾的过氧基团反应产生自由基类物质。然后这些自由基引发AMPS和PVA上的双键的聚合和交联，这使得分散的PVA-AMPS小滴转变成不溶聚合物微球。冷却至25℃后，将所述产物转移至纯化用过滤反应器，在此乙酸丁酯通过过滤除去，然后：

●用2×300ml乙酸乙酯洗涤，除去醋酸丁酯和CAB

●乙酸乙酯中平衡30min，然后过滤

●真空过滤条件下用2×300ml乙酸乙酯洗涤

●丙酮中平衡30min，并过滤除去乙酸乙酯、CAB和水

●真空过滤条件下用2×300ml丙酮洗涤

●丙酮中平衡过夜

●真空下用2×300ml丙酮洗涤

●55℃下真空干燥两小时，除去残留溶剂。

染色

该步骤是任选的。药物与有色活性物质一起负载时，通常不需要染色（因为有色活性物质提供了颜色），但是在本文中所述的染色具有从下面的实施例8中显而易见的优点。水合时，微球含有约90%（w/w）水，难于显色。为有助于在临床装置中显色，使用活性蓝#4染料（RB4）将球体染成蓝色。RB4是水溶性氯三嗪（chlorotriazine）染料，碱性条件下它将与PVA主链上的羟基侧基反应，形成共价醚键。反应在pH12（NaOH）下进行，由此所形成的HCl被中和，生成NaCl。

染色前，球体被完全再水合，并被分为35g等份（分别处理）。染料溶液制备如下：将0.8g RB4溶于2.5M NaOH溶液（25ml）和水（15ml）中，然后将其加入已加入上述球体的2升80g/L^-1盐水中。混合20分钟后，将所述产物收集于32μm滤网上，并冲洗以除去没有反应的染料。

提取

粗提法用于除去任何未结合或非特异性吸附的RB4。方案如下所示：

●2升水中平衡5min。收集于滤网上并冲洗。重复5次

●在2升溶于0.29%（w/w）盐水中的80mM磷酸氢二钠溶液中平衡。加热至沸腾，维持30min。冷却，滤网上收集并用1升盐水洗涤。再重复两次。

●滤网上收集、洗涤，并在2升水中平衡10min。

●收集，并在1升丙酮中脱水30min。

●合并所有等份，并在2升丙酮中平衡过夜。

筛析

制备得到的微球产物尺寸为100至1200微米，必须通过使用某个范围内的筛目尺寸的筛析法进行分级分离，获得下列标称分布。

1.100-300μm

2.300-500μm

3.500-700μm

4.700-900μm

5.900-1200μm

筛析前，真空干燥球体以除去任何溶剂，然后于60℃在水中平衡直至完全再水合。使用316L不锈钢涡旋滤网装置（MM Industries，SalemOhio）筛析球体，所述不锈钢涡旋滤网装置具有38cm（15in）不锈钢滤网支架，筛目尺寸介于32至1000μm之间。过滤得到的盐水通过所述装置再循环，帮助分级分离。弃去32微米滤网上收集得到的球体。

实施例

实施例1：负载伊立替康以及从栓塞形成小球上洗脱伊立替康

测试了下列微球（“小球”）产物：

1.高AMPS微球（“Gelsphere GS”）（以与实施例1中相同的方法制备），颗粒大小级分为100至300μm、500-700μm和900-1200μm，平衡水含量94%。（本发明）

2.商购栓塞产品Contour SE，含有颗粒大小级分为500-700μm的非离子性聚乙烯醇微球，平衡水含量40%。（参照）

3.上述低AMPS微球（“BeadBlock-BB”）（以与实施例1中相同的方法制备），颗粒大小介于100至300μm之间，平衡水含量90%。（本发明）

4.商购栓塞剂Embosphere，所述栓塞剂含有与明胶和戊二醛交联的N-丙烯酰-2-氨基-2-羟甲基-丙-1,3-二醇-共-N,N-双丙烯酰胺共聚物颗粒，颗粒大小介于100-300μm和500至700μm之间。该聚合物在中性pH时具有来自于明胶成分的净正电荷。（FR-A-7723223）。平衡水含量为91%。（参照）

5.Amberlite ira400（强碱性凝胶型树脂，季胺盐功能性，平均大小=510μm，WC=52.44%）。（参照）

6.Amberlyst（湿性），极强酸性，磺酸功能性，氢形式，平均大小=667μm，WC=57.25）。（本发明）

7.Ultra-drivalon250-4000μm（PVA颗粒）。（参照）

使用浓度为20mg/ml的盐酸伊立替康三水合物（Campto，fromAventis）。该制剂内其它成分包括山梨醇和乳酸。使用UV分光光度计在369nm测定喜树碱化合物的浓度。

1ml的每一种小球浆液与1ml计算量的伊立替康溶液（20mg/ml）混合，室温下旋转混合2小时。残留溶液浓度用UV分光光度计于369nm测量，以确定伊立替康的浓度。负载至小球中的药物量通过耗竭法计算。图1示出所研究微球的负载特征。很清楚的是，具有离子组分的所述小球能负载可观的药物量（特别是GelSphere和Amberlyst）。GelSphere的负载特别迅速（5-10min），而Amberlyst的负载需要～60min。上述小球主动地从溶液中负载全部20mg浓度的药物。其它栓塞剂仅能从溶液中负载5-7mg药物，这本质上是平衡分配效应，表明小球和药物之间没有特异性相互作用。

室温下用2小时将伊立替康从上述1ml负载小球洗脱至200ml PBS缓冲液。结果（图2）表明所有小球洗脱速率几乎相同，并且在前10分钟里洗脱了全部被洗脱药物的90%。2小时内完成，但Amberlyst36湿性小球除外，该Amberlyst表现出较慢的洗脱曲线，在前2小时洗脱40%。这归因于较高水平的强酸性磺酸组分。

但是，图3示出对不同的负载伊立替康的小球洗脱至水中的洗脱曲线的比较。在30分钟里将1ml负载小球洗脱至100ml水（HPLC级）中。Contour SE和Embosphere小球在前10分钟内表现出100%洗脱，而GelSphere小球仅洗脱不到全部负载的1%。这表明洗脱由离子交换机制所驱动，并表明在纯水中制备水合形式的本发明球体是可能的，无需担心在储存过程中药物随着时间被洗脱至介质中而损失。目前市售微球型栓塞剂不可能具有该特征。

实施例2：GelSphere负载能力的研究

使用GelSphere，500-700μm测定伊立替康负载含量和负载效力。小球浆液与计算量伊立替康溶液（20mg/ml）混合，旋转混合至少4小时。用UV分光光度计在369nm测量溶液，以测定伊立替康浓度和小球中的药物负载（通过耗竭法）。图4中的直线表明，较低浓度（低于50mg/ml）下小球中的伊立替康含量随设定负载量线性增加。超过该浓度，负载效力显著下降，指示小球的饱和。

实施例3：随伊立替康负载的大小变化

随伊立替康负载的GelSphere大小变化通过使用具有光学图像显微镜的Image-ProPlus4.5测量。负载条件是：GelSphere大小500-700μm；伊立替康负载溶液浓度为20mg/ml（Campto），在滚筒混合器上常温过夜。图5示出随着小球内相关药物浓度的增加小球大小减少。这与水凝胶结构的水替换为与离子基团相互作用的药物相关。

实施例4：小球大小和离子基团含量对药物负载的影响

对负载至不同大小的高AMPS GelSphere和低AMPS BeadBlock的伊立替康负载速率进行比较。负载条件为1ml每一种小球浆液（100-300μmGelSphere和BeadBlock）与2.5ml伊立替康溶液（20mg/ml）混合；1ml小球浆液（300-500μm GelSphere）与1ml伊立替康溶液（20mg/ml）混合。将混合物旋转混合，用UV分光光度计在369nm测量溶液浓度。图6示出不同大小的GelSphere以相似且非常快速的速率负载；低AMPS球体负载较少药物，这是由于微球中离子组分浓度较低。

实施例5：伊立替康负载GelSphere的冷冻干燥

1ml GelSphere小球与Campto（20mg/ml）溶液混合并滚筒混合3小时。使用吸管将残留溶液除去获得小球浆液，该小球浆液被冷冻干燥成干燥产物。可通过改变药物溶液的量获得不同负载水平。

实施例6：从冷冻干燥GelSphere中洗脱伊立替康

将伊立替康从按照实施例5所制备的、具有不同喜树碱负载物的冷冻干燥GelSphere洗脱至PBS缓冲液中。结果示于图7。与未冷冻干燥样本相比较，冷冻干燥后洗脱速率下降。同样，与较低药物负载相比，较高药物负载表现的洗脱较慢。

实施例7：制剂形式和非制剂形式的盐酸伊立替康的洗脱比较

1ml小球浆液与Campto制剂混合，并滚筒混合3-4小时。在一个单独的负载研究中，通过将小球浆液与粉剂药物和2ml水混合，1ml小球负载上固体盐酸伊立替康纯药（neat drug），并滚筒混合3-4小时，在此期间所述药物缓慢溶解，并主动被吸收至小球中。将伊立替康从各个900-1200μm GelSphere洗脱至200ml PBS缓冲液中。图8中示出的洗脱曲线表明由制剂负载的小球之间或使用纯药负载的小球之间没有显著差异。

实施例8：药物负载指示

GelSphere微球用活性蓝4染料染成淡蓝色，目的在于使用期间它们容易被介入放射学医师观察到。一旦将伊立替康负载至小球中，所述微球具有的蓝色染色转变成为翠蓝色。这可用作区分负载小球和未负载小球的目测指示剂。颜色变化在冷冻干燥的伊立替康负载小球中更为明显。

实施例9：CC531-lacZ大鼠肝脏转移模型中伊立替康-和多柔比星负载GelSphere的临床前试验性研究的总结

本试验性研究的目的在于，使用伊立替康负载小球或多柔比星负载小球，评估在大鼠肝脏转移模型中化疗栓塞用药物洗脱性小球的有效性。该研究的目的在于评估可行性，测定用化疗栓塞治疗的大鼠体内肿瘤负担的减少，和测定在主要研究中待使用药物的剂量。

在本研究中该大鼠模型被选作合适的化疗栓塞模型，是因为之前使用该模型已证实了伊立替康有显著活性，这是根据有44%的大鼠体内肿瘤完全消除以及平均肿瘤细胞负载减少了66%。（Saenger et al.,前文已引用）。在该模型中，将CC531-lacZ细胞通过门静脉注射移植至雄性WAG/Rij大鼠中，肿瘤细胞的检测通过其β-半乳糖苷酶活性完成。这使得可以使用化学发光分析法测定细胞数目。

由于大鼠中血管的尺寸较小，并且为了与早期研究相一致，还可使用大小为75μm±25μm的微球产物。通过前面的实施例1详细描述的方法专门制备用于本研究的微球，并对其染色并按照常规方法灭菌。

药物与微球混合后立即进行栓塞。

药物和微球静置30至60分钟以便负载，并每5至10分钟搅拌以便负载，或者将它们置于有助于负载的旋转混合器上。

在第0天将肿瘤细胞注射至大鼠模型的门静脉。在第8天进行腹腔再切开术（relaparatomy），它为直观控制肝脏中肿瘤细胞是否存在提供了可能。肿瘤阳性动物在第8天接受通过肝动脉的栓塞治疗。第21天结束实验。测定动物的肝脏重量，并将肝脏低温冷冻，直至通过冷光光谱仪（luminometry）测定肿瘤细胞数目。

下列伊立替康剂量用于试验性研究中：60mg/kg、30mg/kg和15mg/kg。图9示出的结果示出对照（n=9）、60mg/kg和15mg/kg（n=3）伊立替康负载小球组的肝脏中活肿瘤细胞的平均数和中数。

使用化学发光分析法，测量了对照动物和测试动物的肝脏中活肿瘤细胞数目。图9示出经历了伊立替康剂量为60mg/kg的化疗栓塞的大鼠中活肿瘤细胞数目降低了两倍以上。尽管15mg/kg组显得具有较高的肿瘤细胞数目，应该注意的是，对照组中肿瘤细胞数目会坏死，而在15mg/kg组中，肿瘤的生长速率减缓，因此坏死降低，这使得在该时间点活肿瘤细胞数目增加。

30mg/kg伊立替康的另外的实验表明大鼠肝脏中肿瘤细胞完全消失（图10）。图10示出对照组和30mg/kg伊立替康组的肝脏中肿瘤细胞的平均数和中数。

图11示出处死时肝脏的外观。对照肝脏（A）示出整个肝脏中肿瘤扩散的外观以及肝脏体积的增大。用60mg/kg（B）或30mg/kg（C）伊立替康化疗栓塞后动物的肝脏表明肝脏具有表面上健康的外观，没有可检测到的肿瘤，而且肝脏体积也没有增大。

Claims

1.一种微球在制备用于治疗方法中的组合物的用途，所述微球含有在pH7时带负电的、水不溶性、水溶涨性聚合物，以及与该聚合物以可释放形式通过静电结合的、带正电的喜树碱化合物，在所述治疗方法中所述组合物被引入血管中，微球在血管中形成栓塞，栓塞中的颗粒在37℃于水中平衡时具有介于范围在100至1500μm之间的尺寸，并且所述方法中，所述喜树碱化合物从所述栓塞中释放。

2.根据权利要求1的用途，其中所述治疗针对实体瘤。

3.根据权利要求1或权利要求2的用途，其中所述喜树碱化合物优选具有通式1：

4.根据权利要求3的用途，其中R为NR²R³，其中R²和R³以及所述氮原子一起形成任选取代的杂环。

5.根据权利要求4的用途，其中R为

6.根据权利要求3至5任一项的用途，其中RCOO在10位被取代。

7.根据权利要求3至6任一项的用途，其中R¹为乙基并且m为1。

8.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述颗粒的大小范围介于200至1200μm之间。

9.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述聚合物为交联的聚乙烯醇。

10.根据权利要求9的用途，其中所述聚合物由聚乙烯醇大分子单体通过烯式基团的自由基聚合形成，每个所述大分子单体具有多于一个的烯式不饱和侧基团。

11.根据权利要求10的用途，其中所述PVA大分子单体与烯式不饱和单体共聚。

12.根据权利要求11的用途，其中所述单体包括具有如下通式Ⅱ的离子单体：

Y¹BQ¹ Ⅱ

其中Y¹选自

CH₂＝C(R¹⁰)-CH₂-0-,CH₂＝C(R¹⁰)-CH₂OC(O)-,CH₂＝C(R¹⁰)OC(O)-,CH₂=C(R^la)-O-,CH₂＝C(R¹⁰)CH₂OC(O)N(R¹¹)-,R¹⁷OOCCR¹⁰＝CR¹⁰C(O)-O-,R¹⁰CH＝CHC(O)O-,R¹⁰CH=G(COOR¹²)GH₂-C(O)-O-,

其中：

R¹⁰为氢或C₁-C₄烷基基团；

R¹¹为氢或C₁-C₄烷基基团；

R¹²为氢或C_1-4烷基基团或BQ¹，其中B和Q¹定义如下；

A¹为-O-或-NR¹¹-；

B为直链或支链链烷二基、氧杂亚烷基、链烷二基氧杂链烷二基或链烷二基低聚（氧杂链烷二基）链，所述链烷二基低聚（氧杂链烷二基）链任选地包含一个或多个氟原子，最高可包括全氟链，或者，若Q¹或Y¹含有与B键接的末端碳原子，则B为一个价键；并且

Q¹为阴离子基团。

13.根据权利要求12的用途，其中Q¹为羧酸酯、碳酸酯、磺酸酯、硫酸酯、硝酸酯、膦酸酯或磷酸酯基团。

14.根据权利要求12或13的用途，其中Y¹为基团CH²=CR¹⁰COA¹-，其中R¹⁰为H或甲基，优选为甲基，并且其中A¹优选为NH，并且B为2至6个碳原子的链烷二基基团。

15.根据前述权利要求任一项的用途，其中所给药组合物包括显像剂，优选不透射线剂。

16.一种包含微球的组合物，所述微球含有在pH7时带负电、水不溶性、水溶涨性聚合物，以及与该聚合物以可释放形式通过静电结合的、带正电的喜树碱化合物，其中所述微球在室温下于水中平衡时具有超过100μm的直径。

17.根据权利要求16的组合物，其中所述喜树碱组合物具有通式I：

其中R¹为H、任选由羟基、胺、烷氧基、卤素、酰基或酰氧基基团取代的低级（C_1-6）烷基或卤素；并且

18.根据权利要求17的组合物，其中R是NR²R³，其中R²和R³以及所述氮原子一起形成任选取代的杂环。

19.根据权利要求18的组合物，其中R是

20.根据权利要求17至19任一项的组合物，其中RCOO-在10位被取代。

21.根据权利要求17至20任一项的组合物，其中R¹是乙基并且m为1。

22.根据权利要求17至21任一项的组合物，其中所述聚合物是交联的聚乙烯醇。

23.根据权利要求22的组合物，其中所述聚合物于37℃在水中平衡时大小为100至1500μm，更优选地为200至1200μm。

24.根据权利要求23的组合物，其中所述PVA大分子单体与烯式不饱和单体共聚。

25.根据权利要求24的组合物，其中所述单体包括具有通式II的离子单体：

Y¹BQ¹ Ⅱ

其中Y¹选自

CH₂＝C(R¹⁰)-CH₂-O-,CH₂＝C(R¹⁰)-CH₂OC(O)-,CH₂＝C(R¹⁰)OC(O)-,CH₂＝C(R¹⁰)-O-,CH₂＝C(R¹⁰)CH₂OC(O)N(R¹¹)-,R¹⁷OOCCR¹⁰＝CR¹⁰C(O)-O-,R¹⁰CH＝CHC(O)O-,R¹⁰CH＝G(COOR¹²)GH₂-C(O)-O-,

其中：

R¹⁰为氢或C₁-C₄烷基基团；

R¹¹为氢或C₁-C₄烷基基团；

R¹²为氢或C_1-4烷基基团或BQ¹，其中B和Q¹定义如下；

A¹为-O-或-NR¹¹-；

B为直链或支链链烷二基、氧杂亚烷基、链烷二基氧杂链烷二基或链烷二基低聚（氧杂链烷二基）链，所述链任选包含一个或多个氟原子，最高可包括全氟链，或者，若Q¹或Y¹含有与B键接的末端碳原子，则B为一个价键；并且

Q¹为阴离子基团。

26.根据权利要求25的组合物，其中Q¹为羧酸酯、碳酸酯、磺酸酯、硫酸酯、硝酸酯、膦酸酯或磷酸酯基团。

27.根据权利要求25或26的组合物，其中Y¹为基团CH₂=CR¹⁰COA-，其中R¹⁰为H或甲基，优选为甲基，并且其中A¹优选为NH，并且B为2至6个碳原子的链烷二基基团。

28.根据权利要求17至27任一项的组合物，所述组合物另外包含液体助悬剂，优选可药用液体，更优选水性液体，最优选水。

29.根据权利要求17至28任一项的组合物，所述组合物包含显像剂，优选不透射线的显像剂。

30.根据权利要求17至27任一项的组合物，所述组合物基本为干的颗粒形式，优选经冷冻干燥的形式。