CN103845722A - 一种防治辐射损伤或化学药物治疗损伤的低聚肽组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的提供一种新的组合物,包括甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽,本发明上述的组合物,还可以进一步包括水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合;该组合物具有防治肿瘤和改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的作用,以及增强免疫力的功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种肽组合物在改善放射性治疗或化学药物治疗不良反应方面的应用,特别是涉及低聚肽在改善放射性治疗或化学药物治疗不良反应方面的应用。
背景技术
肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤,一般所说的癌即指恶性肿瘤,世界每年死于癌症的人数多达数百万人,自1997年以来,癌症已成为中国人的第一死因,每年有近130万人死于癌症。恶性肿瘤病情的发展是一个动态过程,在癌细胞形成以后,其生长较快而且容易转移,因此凡是能抑制癌细胞生长和转移某一个环节的营养代谢因素,均可影响癌细胞生长和转移的的整个过程。现在抑制癌细胞生长与转移的方法主要有手术,化疗和放疗,但是放化疗的毒副反应是有目共睹的,有的患者因为毒性反应而放弃治疗,有的医生因毒性反应过大而终止对患者的治疗计划,因此开发一种能辅助抑制癌细胞生长和转移,减少对身体的伤害,提高患者的免疫力的药物或保健食品是刻不容缓的工作。
甲鱼低聚肽含有的8种必需氨基酸,除蛋氨酸为限制氨基酸以外,甘氨酸、脯氨酸等其它氨基酸均超过或接近世界卫生组织(WHO)的推荐标准,因此具有较高的营养价值,分子量小于1000Dalton的肽吸收率高达90%以上,优质甲鱼低聚肽的分子量分布以小于1000Dalton的为主,分子量主要在300~700Dalton范围内。
甲鱼低聚肽具有降血压,抗氧化,延缓衰老,提高免疫力的功效。
申请号为201010103157.9的专利文献公开了甲鱼小分子多肽的制备方法;徐怀德等《甲鱼蛋白酶解产物体外ACE抑制和抗氧化活性研究》(《中国食品学报》2008,02)公开了体外实验,证实甲鱼蛋白酶解物ACE的抑制和抗氧化活性,现有技术和专利中均未述及甲鱼低聚肽抗肿瘤、防止和改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的相关报道。
彭宏斌《海洋鱼低聚肽辅助降血糖和免疫营养功能的效果研究》(CHKD博硕士学位论文全文数据库2008年博士论文)中报道海洋鱼低聚肽具有辅助降血糖功能,可改善糖尿病患者胰岛素敏感性和改善胰岛素分泌功能,缩短糖尿病患者的血糖调整期,降低夜间低血糖的发生率,海洋鱼低聚肽短期用于手术后患者可以改善营养状况、提高免疫能力、缩短平均住院日。
刘桂琴等《海洋鱼低聚肽对2型糖尿病大鼠过氧化应激标志物表达 的影响》,(《中国组织工程研究与临床康复》,2008,12(23))中报道,体外实验证实海洋鱼低聚肽具有抗氧化等生物活性,海洋鱼低聚肽可能具有一定的抗炎症效应。
关于海洋鱼低聚肽的用途,申请号为200710157641.8的专利文献中公开了海洋鱼低聚肽作为制备降血糖药物、保健食品或食品的用途;申请号200710157643.7专利文献中公开了海洋鱼低聚肽作为制备抗氧化药物、保健食品、食品或化妆品的用途;申请号为200610086812.8的专利文献公开了海洋鱼低聚肽在制备免疫调节药物或食品中的用途。
申请号为200510077612.1的专利文献中公开了大豆低聚肽应用于解酒护肝功能的产品及其制备方法和用途;申请号为200610026655.1的专利文献中公开了一种促进肥牛肌腱发育的多肽及微生物制剂及制备方法,以上专利均未述及大豆低聚肽抗肿瘤,防止和改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的用途。
现有天然来源的短肽类产品中有三九蛋白肽,主要是供肿瘤放化疗患者,经常接触射线者,配方为:禽卵蛋白粉、维生素、大枣提取液、枸杞提取液、复合矿物质,产品特征在于短肽分子量小于1000 Dalton,适用于1.肿瘤放化疗患者 2.经常接触射线者(如从事核医学的医务工作者等)、长期在电脑前工作者 3.消化系统未发育成熟的婴儿、消化功能开始退化的中老年人及消化系统障碍、受损的人群、免疫力低下者(如易患感冒者、慢性疾病长期不愈者等)4.产后、手术后处于恢复期患者 5.肝炎及肝腹水患者、更年期。
李英杰等《枸杞多糖免疫调节作用机制研究进展》(《中国新药杂志》,2004,13(10))研究表明枸杞多糖能增强人体免疫力;杨海军,《功能性食品配料——水溶性膳食纤维》,(《中国食物与营养》,2003,(9))报道水溶性膳食纤维能增强胃肠蠕动;黄祥元,《酪蛋白磷酸肽及其促进矿物质吸收的因素》,(《食品与机械》,2008,(3))报道酪蛋白磷酸肽能增强钙、铁等微量元素的吸收。
申请号200910114806.2专利文献中公开了大豆低聚肽,海洋鱼低聚肽,葡萄糖酸锌、水溶性膳食纤维、酪蛋白磷酸肽组合物在促进手术后伤口愈合的应用,但是未述及其抗肿瘤,防止和改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的用途。
综上所述,目前还没有关于分子量在1000Dalton以下的天然来源的甲鱼低聚肽,大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽应用于抗肿瘤,防止和改善放射性治疗及化学药物治疗的药品、保健品或产品的报道。
发明内容
本发明的目的提供一种新的组合物,该组合物具有防治肿瘤和改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的作用,以及增强免疫力的功效;本发明组合物在防治肿瘤和改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应效果显著。
本发明的组合物,原料包括甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽。
本发明上述的组合物,原料还可以进一步包括:水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸
杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合。
本发明优选的组合物原料包括:甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽。
本发明优选组合物原料包括:甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳
食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂。
本发明的组合物,优选包括下列重量份的原料:甲鱼低聚肽1-200份、大豆低聚肽
粉1-100份、海洋鱼低聚肽1-100份。
优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽10-120份、大豆低聚肽10-60份、海洋鱼低聚
肽5-30份。
更优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽80份、大豆低聚肽20份、海洋鱼低聚肽10
份。
本发明组合物还可以加入下述重量份的原料:水溶性膳食纤维1-100份、葡萄糖酸
锌0.01-0.1份、枸杞提取物0.1-10份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份、乙二胺四乙酸二钠0.01-0.25份、口感调节剂1-500份中的一种或任意组合。
优选下列重量份的原料:水溶性膳食纤维5-30份、葡萄糖酸锌0.02-0.08份、枸杞提取物0.5-5份、酪蛋白磷酸肽0.2-2份、乙二胺四乙酸二钠0.05-0.22份、口感调节剂10-200份中一种或任意组合。
更优选下列重量份的原料:水溶性膳食纤维15份、葡萄糖酸锌0.04份、枸杞提取物2份、酪蛋白磷酸肽1份、乙二胺四乙酸二钠0.1份、口感调节剂100份中的一种或任意组合。
本发明的组合物优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽1-200份、大豆低聚肽1-100份、海洋鱼低聚肽1-100份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份。
优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽10-120份、大豆低聚肽10-60份、海洋鱼低聚肽5-30份、酪蛋白磷酸肽0.2-2份。
更优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽80份、大豆低聚肽20份、海洋鱼低聚肽10
份、酪蛋白磷酸肽1份。
本发明的组合物更优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽1-200份、大豆低聚肽1-100份、海洋鱼低聚肽1-100份、水溶性膳食纤维1-100份、葡萄糖酸锌0.01-0.1份、枸杞提取物0.1-10份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份、乙二胺四乙酸二钠0.01-0.25份、口感调节剂1-500份。
更优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽10-120份、大豆低聚肽10-60份、海洋鱼低
聚肽5-30份、水溶性膳食纤维5-30份、葡萄糖酸锌0.02-0.08份、枸杞提取物0.5-5份、酪蛋白磷酸肽0.2-2份、乙二胺四乙酸二钠0.05-0.22份、口感调节剂10-200份。
最优选下列重量份的原料:甲鱼低聚肽80份、大豆低聚肽20份、海洋鱼低聚肽10份、水溶性膳食纤维15份、葡萄糖酸锌0.04份、枸杞提取物2份、酪蛋白磷酸肽1份、乙二胺四乙酸二钠0.1份、口感调节剂100份。
本发明甲鱼低聚肽是鳖科动物甲鱼Trionyx Sinensis全体或肉、鳖甲为主要原料,可以是用酶解法,酸水解法或微生物发酵法生产、分子质量低于1000Dalton的低聚肽(短肽)的混合物,所述的酶解法包括但不局限于碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种进行酶解;本发明组合物及其用途中使用甲鱼低聚肽的目的是经上述方法处理的甲鱼以低聚肽混合物形式被利用,即保留了甲鱼本身的营养,也使得甲鱼的成份更容易吸收,因此,可以处理甲鱼的酶及其处理方法都包括。本发明中所述甲鱼低聚肽可以通过下述方法制备:以甲鱼为原料,去除内脏和油脂,搅碎,煎煮;然后冷却,加入碱性蛋白酶,风味蛋白酶酶解;将酶解液离心后过滤,上清液经过中空超滤膜,卷式膜或管式膜精制分离。本发明中所述甲鱼肽也可以根据其它现有技术制备,例如: 段旭昌、徐怀德等在《甲鱼的酶解液化及保健冲剂研究》采用胰蛋白酶酶解甲鱼,申请号201010103157.9的专利文件中公开的采用胰酶酶解-煮沸保温-复合酶酶解处理制备的甲鱼小分子肽;本发明中所述甲鱼低聚肽也可以从市场上直接购得。
海洋鱼低聚肽marine fish oligopeptides powder是以海洋鱼皮、鱼骨或鱼肉为主要原料,可以是用酶解法,酸水解法或微生物发酵法生产的、分子质量低于1000Dalton的低聚肽(短肽)的混合物,所述的酶解法包括但不局限于碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种进行酶解,本发明组合物及其用途中使用海洋鱼低聚肽的目的是经上述方法处理的海洋鱼皮、鱼骨或鱼肉以低聚肽混合物形式被利用,本说明书中所述海洋鱼低聚肽可以根据现有技术制备,例如韩道财《均匀设计法优化罗非鱼肉富肽酶解液制备工艺》采用均匀设计筛选酶解制备海洋鱼低聚肽。
大豆低聚肽soy peptides powder是以大豆、豆粕或大豆蛋白为主要原料,可以是用酶解法,酸水解法或微生物发酵法生产的,主要成分为肽,且分子量分布在1000Dalton以下的低聚肽的混合物,所述的酶解法包括但不局限于碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种进行酶解,本发明组合物及其用途中使用大豆低聚肽的目的是经上述方法处理的大豆、豆粕或大豆蛋白以低聚肽混合物形式被利用,本说明书中所述的大豆蛋白低聚肽可以根据现有技术制备,例如申请号:200910128506.X的专利申请文件公开的大豆蛋白低聚肽及其制备方法和用途;枸杞提取物具有增强免疫力的作用;加入水溶性膳食纤维增强胃肠蠕动,本发明中所述水溶性膳食纤维包括但不限于聚葡萄糖、低脂果胶、高脂果胶、苹果果胶、柚皮果胶、蓝莓果胶、菠萝果胶、低聚果糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚木糖、大豆低聚糖、琼脂粉、羧甲基纤维素等;加入酪蛋白磷酸肽casein phosphopeptides,cpp可增强钙、铁等微量元素的吸收;本发明中的枸杞提取物是枸杞子经过水提取和/或醇提取得到的,本发明所述的枸杞子为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。
本发明的口感调节剂可以是甜味剂、酸度调节剂、食用香精中的一种或任意组合,其中甜味剂可以是蔗糖、麦芽糖醇、三氯蔗糖、阿斯巴甜、甜菊苷、甜蜜素中的一种或任意组合;酸度调节剂可以是柠檬酸钾、柠檬酸、磷酸、盐酸、氢氧化钠中的一种或任意组合;食用香精可以是去腥剂香精、多肽香精、蜜糖香精、红牛香精、菠萝香精、竹叶香精、蓝莓香精等中的一种或任意组合。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物或者由甲
鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物或者由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物或者由甲
鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物或者由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物或者由甲
鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物或者由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入水溶性
膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入上述重量份的水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入水溶性
膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入上述重量份的水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入水溶性
膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入上述重量份的水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物或者由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物或者由述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物或者由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物或者由述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物或者由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物或者由述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡
萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物或者由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物或者由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡
萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物或者由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物在制备防治肿瘤保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物或者由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物在制备改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应的保健品或药品或产品中的用途。
本发明还涉及含有甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡
萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物或者由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物在制备增强免疫力保健品或药品或产品中的用途;本发明还涉及含有上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物或者由上述重量份的甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂组成的组合物在制备增强免疫力的保健品或药品或产品中的用途。
本发明所述的放化疗的不良反应主要有:(1)造血系统症状(骨髓抑制):白细胞减少,贫血,血小板减少;(2)消化道症状:恶心,呕吐,食欲缺乏,便秘,腹泻;(3)粘膜损害:口腔炎,口腔溃疡,食管炎;(4)肝,心,肺,肾毒性;(5)神经毒性:中枢神经障碍,末梢神经障碍;(6)皮肤损害;(7)脱发;(8)其他:性腺损害,第二原发癌等。
本发明的组合物可制成口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂 、散剂、分散片、糖浆剂中的任意一种。
本发明组合物按下列步骤制备成口服液:
1. 配制:按处方称取原辅料,加水定容;
2. 过滤:用30μm-0.1μm滤材过滤,灌装;
3. 灭菌:100-125℃,灭菌5-60分钟;
4. 包装,即得。
上述步骤2中,也可以选用10μm-0.15μm滤材过滤,优选0.2μm滤材过滤;步骤3中,优选102-121℃,灭菌8-50分钟;更优选105℃,灭菌30分钟;
本产品具有成本低,疗效好,天然来源无毒副作用特点。
为了更好地理解本发明的实质,下面将用实施例61的由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、
海洋鱼低聚肽组成的组合物的动物实验及结果来说明其具有防治肿瘤、改善放射性治疗及化学药物治疗不良反应、增强免疫力的作用。
同样地由甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽组成的组合物加入水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合组成的组合物均能达到有同样的药理作用,区别在于使用量不同。
附图说明
A、肿瘤生长曲线;B、瘤重结果,n=10;与空白对照组比较:*p < 0.05,**p< 0.01。
图2是实施例61样品和5-FU对人胃癌裸鼠移植瘤模型联合治疗作用图。
A、肿瘤生长曲线;B、瘤重结果,n=10;与对照组比较: *p < 0.05,**p< 0.01。
具体实施方式
实施例1
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg、枸杞提取物1kg、乙二胺四乙酸二钠0.03kg、柠檬酸2.5Kg、柠檬酸钾1.5kg、麦芽糖醇70kg、三氯蔗糖0.2kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精 1.4kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入乙二胺四乙酸二钠、甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糖醇,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,将三氯蔗糖、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌用适量纯化水溶解后,加入到滤液中,加水至1000L,搅拌15分钟,加入香精,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例2
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用30μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例3
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌60分钟,即得。
实施例4
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌5分钟,即得。
实施例5
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例6
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,125℃灭菌60分钟,即得。
实施例7
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.1μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例8
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、水溶性膳食纤维100kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例9
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、水溶性膳食纤维5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例10
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、水溶性膳食纤维30kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例11
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例12
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、葡萄糖酸锌0.01kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、葡萄糖酸锌,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例13
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、葡萄糖酸锌0.1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、葡萄糖酸锌,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用30μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例14
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、葡萄糖酸锌0.02kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、葡萄糖酸锌,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例15
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、葡萄糖酸锌0.08kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、葡萄糖酸锌,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例16
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、葡萄糖酸锌0.04kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、葡萄糖酸锌,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌5分钟,即得。
实施例17
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、枸杞提取物0.1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例18
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、枸杞提取物10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例19
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、枸杞提取物0.5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌50分钟,即得。
实施例20
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、枸杞提取物5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用10μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,125℃灭菌8分钟,即得。
实施例21
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、枸杞提取物2kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,100℃灭菌60分钟,即得。
实施例22
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、酪蛋白磷酸肽0.1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为0.45μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.15μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,102℃灭菌60分钟,即得。
实施例23
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、酪蛋白磷酸肽10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例24
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、酪蛋白磷酸肽0.2kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例25
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、酪蛋白磷酸肽2kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例26
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、酪蛋白磷酸肽1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例27
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物0.1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,121℃灭菌8分钟,即得。
实施例28
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、水溶性膳食纤维100kg、枸杞提取物10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例29
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、水溶性膳食纤维5kg、枸杞提取物0.5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,125℃灭菌30分钟,即得。
实施例30
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、水溶性膳食纤维30kg、枸杞提取物5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例31
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg、枸杞提取物2kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维,枸杞提取物,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例32
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg,枸杞提取物0.1kg、酪蛋白磷酸肽0.1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例33
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、枸杞提取物10kg、酪蛋白磷酸肽10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例34
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、枸杞提取物0.5kg、酪蛋白磷酸肽0.2kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例35
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、枸杞提取物5kg、酪蛋白磷酸肽2kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例36
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、枸杞提取物2kg、酪蛋白磷酸肽1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例37
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、麦芽糖醇1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、麦芽糖醇,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例38
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、麦芽糖醇350kg, 柠檬酸80kg、乙二胺四乙酸二钠0.01kg、柠檬酸钾67kg、三氯蔗糖0.25kg、香精 2.5kg在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、麦芽糖醇,柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸钾、三氯蔗糖、香精搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例39
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、麦芽糖醇10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、麦芽糖醇,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例40
甲鱼低聚肽120kg、大豆低聚肽60kg、海洋鱼低聚肽30kg、麦芽糖醇150kg, 柠檬酸28kg、乙二胺四乙酸二钠0.25kg、柠檬酸钾20kg、三氯蔗糖0.25kg、香精 1.5kg在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、麦芽糖醇,柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸钾、三氯蔗糖、香精搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例41
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、麦芽糖醇90kg, 柠檬酸5kg、乙二胺四乙酸二钠0.03kg、柠檬酸钾3kg、三氯蔗糖0.25kg、香精 1.5kg在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、麦芽糖醇,柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸钾、三氯蔗糖、香精搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例42
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物0.1kg、葡萄糖酸锌0.01kg、酪蛋白磷酸肽0.1 kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例43
甲鱼低聚肽200 kg 、大豆低聚肽100 kg 、海洋鱼低聚肽100kg、水溶性膳食纤维100kg、枸杞提取物10kg、葡萄糖酸锌0.1kg、酪蛋白磷酸肽10 kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例44
甲鱼低聚肽10kg、大豆低聚肽10kg、海洋鱼低聚肽5kg、水溶性膳食纤维5kg、枸杞提取物0.5kg、葡萄糖酸锌0.02kg、酪蛋白磷酸肽0.2 kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例45
甲鱼低聚肽120 kg、大豆低聚肽60 kg、海洋鱼低聚肽30kg、水溶性膳食纤维30kg、枸杞提取物5kg、葡萄糖酸锌0.08kg、酪蛋白磷酸肽5kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例46
甲鱼低聚肽80 kg、大豆低聚肽20 kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg、枸杞提取物2kg、葡萄糖酸锌0.04kg、酪蛋白磷酸肽1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例47
甲鱼低聚肽1 kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物0.1kg、葡萄糖酸锌0.01kg、酪蛋白磷酸肽0.1kg、麦芽糖醇1kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽、麦芽糖醇1kg搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例48
甲鱼低聚肽200 kg、大豆低聚肽100 kg、海洋鱼低聚肽100kg、水溶性膳食纤维100kg、枸杞提取物10kg、葡萄糖酸锌0.1kg、酪蛋白磷酸肽10kg、麦芽糖醇350kg、柠檬酸5 kg、乙二胺四乙酸二钠0.05kg、柠檬酸钾3kg、三氯蔗糖0.25 kg、香精 1.5kg在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽、麦芽糖醇,柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸钾、三氯蔗糖、香精搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例49
甲鱼低聚肽10 kg、大豆低聚肽10 kg、海洋鱼低聚肽5kg、水溶性膳食纤维5kg、枸杞提取物0.5kg、葡萄糖酸锌0.02kg、酪蛋白磷酸肽0.2 kg、麦芽糖醇10kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽、麦芽糖醇1kg搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例50
甲鱼低聚肽120 kg、大豆低聚肽60 kg、海洋鱼低聚肽30kg、水溶性膳食纤维30kg、枸杞提取物5kg、葡萄糖酸锌0.08kg、酪蛋白磷酸肽2kg、麦芽糖醇150kg、柠檬酸28 kg、乙二胺四乙酸二钠0.22kg、柠檬酸钾20kg、三氯蔗糖0.25kg、香精1.5kg在配制罐中加入500L纯化水,依次加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、葡萄糖酸锌、酪蛋白磷酸肽、麦芽糖醇,柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、柠檬酸钾、三氯蔗糖、香精搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,加水至1000L,搅拌15分钟,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例51
甲鱼低聚肽80 kg、大豆低聚肽20 kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸2.5 kg、乙二胺四乙酸二钠0.03kg、柠檬酸钾1.5kg、麦芽糖醇90kg、三氯蔗糖0.25 kg 、酪蛋白磷酸肽1kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精 1.4kg在配制罐中加入500L纯化水,依次加入乙二胺四乙酸二钠、甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糖醇,搅拌使其溶解后,用孔径为0.45μm滤器过滤,得到滤液,将三氯蔗糖、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌用适量纯化水溶解后,加入到滤液中,加水至1000L,搅拌15分钟,加入香精,再搅拌10分钟,用0.2μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例52
甲鱼低聚肽80 kg、大豆低聚肽20 kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸2.5 kg、乙二胺四乙酸二钠0.03kg、柠檬酸钾1.5kg、麦芽糖醇90kg、三氯蔗糖0.20 kg、酪蛋白磷酸肽1kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精 1.4kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入乙二胺四乙酸二钠、甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糖醇,搅拌使其溶解后,用孔径为10μm滤器过滤,得到滤液,将三氯蔗糖、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌用适量纯化水溶解后,加入到滤液中,加水至1000L,搅拌15分钟,加入香精 ,再搅拌10分钟,用0.45μm滤器过滤,灌装,每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得。
实施例53
甲鱼低聚肽200kg、大豆低聚肽100kg、海洋鱼低聚肽100kg、水溶性膳食纤维100kg、枸杞提取物10kg、柠檬酸3.0Kg、柠檬酸钾2.0kg、麦芽糊精120kg,酪蛋白磷酸肽10kg、葡萄糖酸锌0.1 kg、香精2kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精,酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用20目筛整粒,加入香精,用铝铝包装,每袋10克。
实施例54
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg 、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维15kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸2.5kg、柠檬酸钾1.5kg、麦芽糊精90kg、酪蛋白磷酸肽1kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精1.2kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精,酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用30目筛整粒,加入香精,用铝铝包装,每袋10克。
实施例55
甲鱼低聚肽1 kg、大豆低聚肽1 kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物1kg、柠檬酸1.5 kg、柠檬酸钾1kg、麦芽糊精75kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.054 kg、香精1.0kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精,酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用30目筛整粒,加入香精,用铝铝包装,每袋10克。
实施例56
甲鱼低聚肽1 kg、大豆低聚肽1 kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸1.5kg、柠檬酸钾1kg、麦芽糊精75kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精0.5kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精,酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行沸腾制粒,控制雾化压力为0.15MPa,物料温度为45℃,进风温度为75℃;所得颗粒用30目筛整粒,加入香精,灌胶囊。
实施例57
甲鱼低聚肽1 kg、大豆低聚肽1kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸1.5 kg、柠檬酸钾1kg、麦芽糊精1.5kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精0.5kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精,酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行制粒;所得颗粒用30目筛整粒,加入香精,硬脂酸镁,压片。
实施例58
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1 kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸1.5kg、柠檬酸钾1kg、麦芽糊精1.5kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.04kg、香精0.5kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用聚维酮K30的10%水溶液作粘合剂进行制粒;所得颗粒用30目筛整粒,加入香精,MCC,PVPPXL,压片,即得分散片。
实施例59
甲鱼低聚肽1 kg、大豆低聚肽1 kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸1.5 kg、柠檬酸钾1kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精0.5kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料用麦芽糊精,加适量的粘合剂或湿润剂,制成丸剂。
实施例60
甲鱼低聚肽1kg、大豆低聚肽1 kg、海洋鱼低聚肽1kg、水溶性膳食纤维1kg、枸杞提取物2kg、柠檬酸1.5 kg、柠檬酸钾1kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、葡萄糖酸锌0.04 kg、香精0.5kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糊精、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌进行混料,将混匀的物料,加适量的蔗糖和防腐剂,制成糖浆剂。
实施例61
实验原料:
甲鱼低聚肽:由江中药业股份有限公司提供,
大豆低聚肽:浙江海氏生物科技有限公司 生产批号你:20110415
海洋鱼低聚肽:浙江海氏生物科技有限公司 生产批号:20110511
称取甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽进行混料,用铝铝包装,每袋10克。
实施例61制备的样品进行如下功效学实验:
一、对胃癌放射治疗的减毒和增效作用研究
1 材料与方法
1.1 动物:Balb/C Nu裸鼠,雄性,18-22g由北京大学医学部实验动物科学部提供。合格证号SCXK-2008-008。
细胞株:人体胃癌细胞株BGC-823,购自中国医学科学院细胞库,由江西中医学院药理学科组传代、保管。
药品与试剂:实施例61的样品:由江中药业股份有限公司提供,批号20100909,用前用灭菌蒸馏水配制成每毫升相当于0.158g的实施例61样品;血红蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20101237)。
主要仪器NanoVue微量蛋白核酸仪(GE公司);AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);AC 900血细胞计数仪(瑞典Swelab instrument公司);数显螺旋测微器(沧州冀路试验仪器公司);200万居里钴源(江西科苑辐照技术开发有限公司)。
方法
人体胃癌裸鼠移植瘤模型的建立以及实施例61样品对放射治疗的增效作用研究:雄性4-6周龄BALB/C/Nu裸鼠,于背部皮内接种BGC-823人胃癌细胞,当肿瘤体积长至1 cm3左右时,无菌条件下取下部分瘤块,切成1 mm3左右的瘤块,用套管针接种到实验裸鼠背部皮下,形成皮下移植瘤。接种48 h后随机分为5组,每组10只:A、空白对照组,只给予等体积溶剂;B、照射组,于接种后第21天经单次全身照射,照射剂量为5.0Gy,剂量率为0.97Gy/min;C、+高剂量实施例61样品,于接种后第21天经单次全身照射,照射剂量同B组,实施例61样品剂量3.16g/kg,接种后第7天开始给药,连续35天,每天1次;D、+中剂量实施例61样品组,于接种后第21天经单次全身照射,照射剂量同B组,实施例61样品剂量1.58g/kg,接种后第7天开始给药,连续35天,每天1次;E、+低剂量实施例61样品组,于接种后第21天经单次全身照射,照射剂量同B组,实施例61样品剂量0.79g/kg,接种后第7天开始给药,连续35天,每天1次。上述各组动物每周两次测量肿瘤体积, 绘制生长曲线,5周后结束实验,剥离肿瘤组织称重并计算肿瘤抑制率。
为了解实施例61样品对放射治疗的减毒作用,上述荷瘤裸鼠在末次给药24h 后眼眶静脉丛采血,全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血细胞。颈椎脱臼处死小鼠,剥离右侧股骨,并按照文献的方法检测小鼠骨髓DNA含量。
3. 结果
3.1 实施例61样品对胃癌放射治疗的增效作用研究
实施例61样品对胃癌放射治疗的减毒作用研究
表1中所列为实施例61样品与联合治疗后,裸鼠外周血中白细胞计数和骨髓DNA含量的结果。荷瘤动物经全身照射之后,受试动物出现了明显的骨髓抑制作用,外周血白细胞计数以及骨髓DNA含量均显著低于正常对照组(p< 0.01),而受试动物在连续给予5周实施例61样品后,上述指标均有所回升,实施例61样品具有明显的骨髓保护作用。
4. 结论
本研究表明,实施例61样品与照射联合治疗后,对移植于裸鼠体内的人胃癌的生长具有一定协同抑制作用,肿瘤重量以及瘤体积均表现出下降趋势,但与单独照射组相比没有统计学差异。而实施例61样品可显著降低照射对荷瘤动物所产生的骨髓损害,其外周血白细胞数和骨髓DNA含量均显著升高,即实施例61样品具有明显的骨髓保护作用。
总之,实施例61样品对放射性治疗具有明显的减害作用,同时也具有一定协同作用。
二、对钴源辐照所致机体损伤的保护作用研究
1. 实验材料
1.1 动物:昆明种小鼠,18~22g,清洁级,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,合格证号:SCXK(湘)2009-0004。
药品与试剂:实施例61样品:由江中药业股份有限公司提供,批号20100909,用前用灭菌蒸馏水配制成每毫升相当于甲鱼复合肽0.158g的药液;茜草双酯,上海第二制药厂,批号910901;鲨肝醇,上海信谊万象药业股份有限公司,批号20100723;秋水仙素(Sigma公司),绵羊红细胞(SRBC,广州市齐云生物技术有限公司);血红蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20101237)。
主要仪器 NanoVue微量蛋白核酸仪(GE公司);AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);AC 900血细胞计数仪(瑞典Swelab instrument公司);ELx800型酶标仪(BioTek,美国);DM3000型正置显微镜(Leica公司);200万居里钴源(江西科苑辐照技术开发有限公司)。
方法与结果
2.1 实施例61样品对钴源辐射所致机体损伤的保护作用研究
昆明种小鼠,雄性,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、茜草双酯组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。连续给药15天后,将模型组、茜草双酯组以及实施例61样品组的动物分别放在自制射线暴露盒内,经单次全身照射,总照射剂量为5.0Gy。随后,小鼠继续给药15d。末次给药24h后,将小鼠称重,眼眶取血。脱颈椎处死,摘取脾脏、胸腺并分离完整股骨,分别计算脾脏及胸腺指数,测定血中白细胞计数,并按照国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法检测小鼠骨髓DNA含量,结果见表2。
如表2所示,模型组动物经全身照射之后,脾脏指数、胸腺指数以及外周血白细胞计数均显著低于正常对照组(p < 0.01),而受试动物在连续给予30天实施例61样品后,上述指标均有所回升,其中,实施例61样品3.16g/Kg组的脾脏指数、胸腺指数以及白细胞计数均显著高于模型组。
另外,为了观察实施例61样品对射线照射之后的骨髓保护作用,本研究按照国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法,检测了实施例61样品对所导致的骨髓损害的保护作用。结果表明,阳性对照药茜草双酯以及实施例61样品均可不同程度的增加模型动物骨髓DNA含量,其中实施例61样品3.16 g/Kg组具有统计学意义(p< 0.05)
2.2 实施例61样品对钴源辐照小鼠存活时间的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig),每组20只。各组动物每天给药一次,连续30天。d1-d7天,将小鼠逐个置于自制射线暴露盒内,用照射,每天1次,每次吸收剂量2.0Gy,总吸收剂量为14Gy。观察并比较各组动物受照射后30d内的平均存活时间,并记录动物的大体状况。
结果表明,小鼠经连续照射后,出现食欲不振,体重显著减轻,蜷缩和活动减少,部分动物出现稀便和皮下出血等症状。大多数动物在7~14d死亡。在给予实施例61样品后,实验动物的存活率显著增加,平均存活时间也显著延长。结果见表3。
实施例61样品对辐照小鼠溶血素的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16g/kg,ig),每组10只,各组动物每天给药一次,连续30天;于给药第15天,除正常对照组之外,其余各组动物均接受全身照射,照射剂量为3.0Gy,而后继续给药。实验结束前4天,每只动物腹腔注射2%(v/v)SRBC悬液进行免疫,末次给药后24h,摘眼球取血,分离血清,并按照文献的方法测定HC50。
从上表中可以看出,受试动物经3.0Gy的射线照射之后,免疫系统均不同程度受到影响,其血清溶血素含量显著降低(p<0.01),在给予实施例61样品30天后,各给药组血清溶血素含量均有所增加,其中高剂量组具有显著的统计学意义(p<0.01)。
实施例61样品对辐照小鼠骨髓微核形成的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。各组动物每天给药一次,连续30天。实验结束前3天,除正常对照组之外,其余各组动物均接受全身照射,照射剂量为5.0Gy,而后继续给药。末次给药后24h,颈椎脱臼处死动物,取出胸骨,用止血钳挤出骨髓液,参考文献的方法涂片,自然干燥后,Giemsa染液中染色15min,蒸馏水冲洗后晾干。镜下计数1000个嗜多染红细胞中微核细胞数。
从表5中可知,射线照射可致小鼠骨髓细胞微核形成率显著增加,而实施例61样品可明显降低骨髓细胞微核形成,显示实施例61样品可明显保护骨髓细胞受射线照射的损害。
实施例61样品对辐照小鼠骨髓染色体畸变的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。各组动物每天给药一次,连续30天。实验结束前3天,除正常对照组之外,其余各组动物均接受全身照射,照射剂量为5.0Gy,而后继续给药。实验结束前8h,腹腔注射0.1%秋水仙素,剂量为2mg/kg。实验结束时,采用颈椎脱臼处死动物,剥离股骨,参考国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法制备骨髓细胞悬液,经低渗、固定处理后,滴片,自然干燥后,Giemsa染液中染色15min,蒸馏水冲洗后晾干。
经过细胞染色和滴片,在镜下观察染色体的数目和形态,由表6可以看出射线照射可明显提高骨髓染色体的畸变数目,而高剂量和中剂量实施例61样品可明显抑制受试动物的骨髓细胞畸变形成率,而鲨肝醇则无明显影响。
结论
本研究表明,实施例61样品可明显增加钴源辐照小鼠的外周血白细胞数目,并可提高射线所导致的小鼠胸腺指数、脾脏指数以及血清溶血素的含量。而且,实施例61样品可增加辐照小鼠骨髓DNA含量,并可显著减少骨髓微核的形成和染色体畸变的出现。另外,实施例61样品可显著延长辐照小鼠的存活期和存活比例。
综上所述,实施例61样品对放射性治疗所引起的机体损伤具有明显的保护作用,尤其在辐照导致的免疫系统损害和骨髓损害方面具有保护作用。
三、对胃癌化疗药物治疗的减毒和增效作用研究
1 材料与方法
1.1 动物:Balb/C Nu裸鼠,雄性,18-22g由北京大学医学部实验动物科学部提供。合格证号SCXK-2008-008。
细胞株:人体胃癌细胞株BGC-823,购自中国医学科学院细胞库,由江西中医学院药理学科组传代、保管。
药品与试剂:实施例61样品:由江中药业股份有限公司提供,批号20100909,用前用灭菌蒸馏水配制成每毫升相当于实施例61样品0.158g的药液。氟尿嘧啶氯化钠注射液,山东齐都药业,规格:注射剂,125mg(5ml),批号为11021512;血红蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20101237)。
主要仪器 NanoVue微量蛋白核酸仪(GE公司);AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);AC 900血细胞计数仪(瑞典Swelab instrument公司);数显螺旋测微器(沧州冀路试验仪器公司)。
方法
人体胃癌裸鼠移植瘤模型的建立以及实施例61样品对药物治疗的增效作用研究:雄性4-6周龄BALB/C/Nu裸鼠,于背部皮内接种BGC-823人胃癌细胞,当肿瘤体积长至1 cm3左右时,无菌条件下取下部分瘤块,切成1 mm3左右的瘤块,用套管针接种到实验裸鼠背部皮下,形成皮下移植瘤。接种48 h后随机分为五组:A、空白对照组,只给予等体积溶剂;B、5-FU治疗组,自接种后第28天起,腹腔注射5-FU,剂量为25 mg/kg,每天1次,连续14天。C、5-FU+高剂量实施例61样品组,自接种后第28天起开始给予5-FU,剂量同B组,实施例61样品每天3.16g/kg,接种后第7天开始给药,连续35天,每天1次;D、5-FU+中剂量实施例61样品组,自接种后第28天起开始给予5-FU,剂量同B组,实施例61样品每天1.58g/kg,接种后第7天开始给药,连续35天,每天1次;E、5-FU+低剂量实施例61样品组,自接种后第28天起开始给予5-FU,剂量同B组,实施例61样品每天0.79g/kg,接种后第7天开始给药,连续35天,每天1次。上述各组动物每周1次测量肿瘤体积, 绘制生长曲线,5周后结束实验,剥离肿瘤组织称重并计算肿瘤抑制率。
为了解实施例61样品对5-FU治疗对小鼠产生的减毒作用,上述荷瘤在末次给药24h 后眼眶静脉丛采血,全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血细胞,测定血中白细胞计数。之后颈椎脱臼处死小鼠,剥离右侧股骨,并按照文献的方法检测小鼠骨髓DNA含量。
结果
3.1 实施例61样品对胃癌化学治疗的增效作用研究
图2中所示为实施例61样品和5-FU联合使用后人胃癌裸鼠移植瘤的生长情况。
从图中可知,实施例61样品与5-FU联合治疗后,肿瘤的生长受到明显抑制,与对照组相比具有统计学意义。与5-FU单独治疗组相比,各联合治疗组的瘤体积和瘤重均有不同程度的降低,肿瘤生长受到进一步抑制,并呈现剂量依赖性,但是并未出现统计学意义(p>0.05)。
实施例61样品对胃癌化学治疗的减毒作用研究
表7中所列为实施例61样品与5-FU联合治疗后,裸鼠外周血中白细胞计数和骨髓DNA含量的结果。荷瘤动物经5-FU连续给药14天之后,受试动物出现了明显的骨髓抑制作用,外周血白细胞计数以及骨髓DNA含量均显著低于正常对照组(p< 0.01),而受试动物在连续给予5周实施例61样品后,上述指标均有所回升,实施例61样品具有明显的骨髓保护作用。
结论
本研究表明,实施例61样品与5-FU联合治疗后,对移植于裸鼠体内的人胃癌的生长具有一定协同抑制作用,肿瘤重量以及瘤体积均表现出下降趋势,但与与5-FU单独治疗组相比没有统计学差异。而实施例61样品可显著降低与5-FU对荷瘤动物所产生的骨髓损害,其外周血白细胞数和骨髓DNA含量均显著升高,即实施例61样品具有明显的骨髓保护作用。
总之,实施例61样品对肿瘤化疗药物的治疗具有明显的减害作用,同时也具有一定协同作用。
四、对化学治疗药物所致机体损伤的保护作用研究
1. 实验材料
1.1 动物:昆明种小鼠,18~22g,清洁级,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,合格证号:SCXK(湘)2009-0004。
药品与试剂:实施例61样品:由江中药业股份有限公司提供,批号20110606,每毫升相当于实施例61样品0.158g;氟尿嘧啶氯化钠注射液,山东齐都药业,规格:注射剂,125mg(5ml),批号为11021512;茜草双酯,上海第二制药厂,批号910901;鲨肝醇,上海信谊万象药业股份有限公司,批号20100723;秋水仙素(Sigma公司),绵羊红细胞(SRBC,广州市齐云生物技术有限公司);血红蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20101237)。
主要仪器 NanoVue微量蛋白核酸仪(GE公司);AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);AC 900血细胞计数仪(瑞典Swelab instrument公司);ELx800型酶标仪(BioTek,美国);DM3000型正置显微镜(Leica公司)。
方法与结果
2.1 实施例61样品对化学治疗药物所致机体损伤的保护作用研究
昆明种小鼠,雄性,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、茜草双酯组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。连续给药30天。自给药后第15天开始,模型组、茜草双酯组以及实施例61样品组的动物均分别腹腔注射5-FU,剂量为25 mg/kg,每天1次,连续15天。末次给药24h后,将小鼠称重,眼眶取血。脱颈椎处死,摘取脾脏、胸腺并分离完整股骨,分别计算脾脏及胸腺指数,测定血中白细胞计数,并按照文献的方法检测小鼠骨髓DNA含量,结果见表8。
如表8所示,模型组动物连续15天注射5-FU之后,脾脏指数、胸腺指数以及外周血白细胞计数均显著低于正常对照组(p < 0.01),而受试动物在连续给予30天实施例61样品后,上述指标均有所回升,其中,实施例61样品3.16g/Kg组的脾脏指数、胸腺指数以及白细胞计数均显著高于模型组。
另外,为了观察实施例61样品对使用化疗药物之后的骨髓保护作用,本研究按照国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法,检测了实施例61样品对5-FU造模之后骨髓DNA含量的影响。结果表明,阳性对照药茜草双酯以及实施例61样品均可不同程度的增加模型动物骨髓DNA含量,其中实施例61样品3.16g/Kg组具有统计学意义(p<0.05)
2.2 实施例61样品对化疗的小鼠溶血素的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(,0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。各组动物每天给药一次,连续30天。于给药第15天,除正常对照组之外,其余各组动物分别腹腔注射5-FU,剂量为25 mg/kg,每天1次,连续15天。实验结束前4天,每只动物腹腔注射2%(v/v)SRBC悬液进行免疫。末次给药后24h,摘眼球取血,分离血清,并按照国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法测定HC50。
从上表中可以看出,受试动物注射5-FU后,免疫系统均不同程度受到影响,其血清溶血素含量显著降低(p<0.01),在给予实施例61样品30天后,各给药组血清溶血素含量均有所增加,其中3.16g/kg、1.58g/kg剂量组具有显著的统计学意义(p<0.01和p<0.05)。
实施例61样品对给予化疗药物的小鼠骨髓微核形成的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。各组动物每天给药一次,连续30天。实验结束前30h,除正常对照组之外,其余各组动物腹腔注射5-FU造成骨髓损伤,剂量为50mg/kg。24h后,第二次腹腔注射5-FU,剂量为50mg/kg,。6h后颈椎脱臼处死动物,取出胸骨,用止血钳挤出骨髓液,参考国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法涂片,自然干燥后,Giemsa染液中染色15min,蒸馏水冲洗后晾干。镜下计数1000个嗜多染红细胞中微核细胞数。
从表10中可知,化疗药物可导致小鼠骨髓细胞微核形成率显著增加,而实施例61样品可明显降低骨髓细胞微核形成,显示实施例61样品可明显保护骨髓细胞受化疗药物的损害。
实施例61样品对给予化疗药物的小鼠骨髓染色体畸变的影响
取雄性昆明小鼠,随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、模型对照组(蒸馏水,ig)、鲨肝醇组(100mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。各组动物每天给药一次,连续30天。实验结束前3天,除正常对照组之外,其余各组动物腹腔注射5-FU造成骨髓损伤,剂量为75mg/kg。实验结束前8h,腹腔注射0.1%秋水仙素,剂量为2mg/kg。实验结束时,采用颈椎脱臼处死动物,剥离股骨,参考国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法制备骨髓细胞悬液,经低渗、固定处理后,滴片,自然干燥后,Giemsa染液中染色15min,蒸馏水冲洗后晾干。
经过细胞染色和滴片,在镜下观察染色体的数目和形态,由表11可以看出化疗药物5-FU可明显提高骨髓染色体的畸变数目,3个剂量组的实施例61样品可明显抑制受试动物的骨髓细胞畸变形成率。
结论
本研究表明,实施例61样品可明显增加给予化疗药物后小鼠的外周血白细胞数目,并可提高化疗药物所导致的小鼠胸腺指数、脾脏指数以及血清溶血素的含量。而且,实施例61样品可增加给予化疗药物后小鼠骨髓DNA含量,并可显著减少骨髓微核的形成和染色体畸变的出现。
综上所述,实施例61样品对化学治疗药物所引起的机体损伤具有明显的保护作用,尤其在化疗药物所导致的免疫系统损害和骨髓损害方面具有保护作用。
五、对荷瘤动物的免疫监视作用影响研究
1 实验材料
1.1 动物和瘤株 C57BL/6小鼠,体重18-22g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号SCXK(京)2006-009;小鼠胃癌细胞株MFC、淋巴瘤细胞株YAC-1和EL4细胞株购自上海复祥生物科技有限公司,由江西中医学院药理学科组传代、保存。
药品 实施例61样品:由江中药业股份有限公司提供,批号20100909,用前用灭菌蒸馏水配制成每毫升相当于实施例61样品0.158g的药液;转移因子胶囊(西安金花制药厂,批号2010727);MTT(Sigma公司,批号11085)。
试剂 小鼠TNF-αELISA检测试剂盒(ExCell公司,批号201009217);小鼠IL-2 ELISA试剂盒IL-2含量检测试剂盒(ExCell公司,批号201103041);
1.4 仪器 ELx800型酶标仪(BioTek,美国);Allegra X-12R低温冷冻离心机(Beckman Coulter公司)。
方法
2.1 小鼠胃癌模型的建立
选用C57BL/6小鼠,将培养的MFC细胞制成,每只小鼠腹腔注射0.2ml,7天后,将荷瘤小鼠脱颈椎处死。无菌条件下取腹水,用生理盐水稀释,于每只小鼠腋窝下接种瘤液0.2ml,建立小鼠胃癌MFC模型。
分组给药
C57BL/6小鼠随机分成6组,分别为正常对照组(蒸馏水,ig)、肿瘤模型组(蒸馏水,ig)、转移因子胶囊组(27.3mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。连续给药30天,每天一次。各组动物于给药的第15天开始接种MFC瘤液,建立MFC移植瘤模型,而后继续给药15天。
小鼠脾细胞悬液的制备
参照国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法制备脾细胞悬液。无菌条件下取小鼠脾脏,制成单细胞悬液,经裂解红细胞后用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调整脾细胞密度,制成5×106/ml小鼠脾细胞悬液。
细胞的培养基杀瘤活性测定
上述已免疫小鼠的脾细胞,采用完全RPMI 1640培养基中加入IL-2(终浓度:20U/ml)培养,每两天补充IL-2。取上述脾细胞,以效靶比为50:1加入MFC细胞,37℃、5%CO2培养箱内培养96h。培养结束后,用MTT法测定NK细胞的杀伤活性[2,3]。
细胞活性测定
取脾细胞悬液,以效靶比为50:1加入YAC-1细胞,37℃、5%CO2培养箱内培养20h。培养结束后,用MTT法测定NK细胞的杀伤活性。
血清TNF-α和IL-2含量检测
用双抗体夹心ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-2含量的变化。以检测TNF-α为例:用抗小鼠TNF-α mAb包被酶标板,将标准品和样品中的TNF-α与mAb混合形成免疫复合物,依次加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲合素,最后加酶底物OPD显色。用酶标仪在波长450nm处测定OD值,并绘制标准曲线。IL-2的检测步骤基本同上。
统计学方法
结果
2.1 实施例61样品对NK细胞的体内杀瘤能力的影响
表12显示,荷瘤后,小鼠脾脏NK细胞的杀伤活性平均下降近17%,当给予实施例61样品后,荷瘤不再导致NK细胞杀伤活性下降,并且高剂量组NK细胞活性比正常对照组略有升高。
实施例61样品对CTL细胞的体内杀瘤能力的影响
表13显示,荷瘤后,小鼠脾脏CTL细胞的杀伤活性显著降低(p<0.05),下降超过30%,当给予实施例61样品后,荷瘤动物的CTL活性均有不同程度的升高,其中高剂量和中剂量组具有统计学意义(p<0.01)。
实施例61样品对小鼠血清TNF-α、IL-2 含量的影响
表14显示,荷瘤小鼠经高剂量和中剂量实施例61样品干预后,其血清中TNF-α、IL-2较模型组小鼠显著升高(p<0.01),提示实施例61样品可提高小鼠免疫力,增强荷瘤动物的免疫监视能力。
结论
本研究表明,小鼠皮下接种胃癌细胞后,其免疫功能明显受到抑制,NK细胞和CTL细胞杀伤靶细胞的能力显著降低,而实施例61样品可明显增加荷瘤小鼠NK细胞和CTL细胞的活力,并可提高荷瘤小鼠血清中TNF-α和IL-2的含量。
综上所述,实施例61样品可显著提高荷瘤小鼠的肿瘤免疫监视能力。
六、对小鼠免疫功能影响的研究
1. 实验材料
1.1 实验动物和细胞株
C57BL/6小鼠,体重18-22g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号SCXK(京)2006-009;淋巴瘤细胞株YAC-1购自上海复祥生物科技有限公司,由江西中医学院药理学科组传代、保存。
药品实施例61样品:由江中药业股份有限公司提供,批号20100909,用前用灭菌蒸馏水配制成每毫升相当于实施例61样品0.158的药液;转移因子胶囊(西安金花制药厂,批号2010727);MTT(Sigma公司,批号11085)
1.3 主要试剂刀豆蛋白A(ConA,Sigma公司,批号2010124)、MTT(Sigma公司,批号11085)、二硝基氟苯(DNFB,成都格雷西亚化学技术有限公司,批号1013401)、绵阳红细胞(SRBC,广州市齐云生物技术有限公司)、血红蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号20101237)、印度墨汁(青岛海博生物技术有限公司,批号09097),氧化型辅酶I(NAD)、吩嗪二甲基酯硫酸盐(PMS)以及碘硝基氯化四氯唑(INT)皆为Sigma产品,噻唑蓝(MTT)为上海生工生物工程有限公司、小牛血清为杭州四季青生物材料有限公司产品。
仪器ELx800型酶标仪(BioTek,美国);Allegra X-12R低温冷冻离心机(Beckman Coulter公司);数显螺旋测微器(沧州冀路试验仪器公司)、DM3000型正置显微镜(Leica公司)。
实验方法
2.1 分组
每项实验均将动物随机分成5组,分别为空白对照组(蒸馏水,ig)、转移因子胶囊组(27.3mg/kg,ig)以及3 个实施例61样品组(0.79,1.58,3.16 g/kg,ig)。连续给药30天,每天一次。
诱导的小鼠淋巴细胞转化实验
无菌条件下取小鼠脾脏,制成单细胞悬液,经裂解红细胞后用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调脾细胞密度,制成。将每一份脾细胞悬液分别加入两个96孔板中,其中一孔加入75μl ConA,另一孔加入等量培养基作为对照。上述每个样品重复3个复孔。96孔板置于37℃下5%的CO2培养箱中培养72h。培养结束前4h,每孔加入MTT(5mg/ml)50μl,继续培养。培养结束后,弃上清液,每孔加入150μl酸性异丙醇,混匀,用酶标仪测定570nm波长处的光密度,计算脾淋巴细胞转化数。
2.3 DNFB诱导的小鼠耳廓肿胀实验
给药结束前3天,各组采用硫化钡将每鼠腹部皮肤脱毛,范围为3×3cm,用10mg/ml的DNFB丙酮麻油溶液50μl涂抹于去毛处。末次给药1h后,将10μlDNFB丙酮麻油溶液均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击。24h后,螺旋测微器测量左右两耳的厚度,并计算耳廓肿胀度。
小鼠脾细胞抗体形成能力的测定
参照国家食品药品监督管理局,《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》,2003版的方法,采用Jerne改良玻片法测定脾细胞抗体生成能力。在实验结束前第4天,除正常对照组外,每只小鼠腹腔注射绵羊红细胞(SRBC)。实验结束当天,处死小鼠,无菌制备脾细胞悬液,以RPMI1640培养液调整其细胞浓度为倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,作平行片,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入CO2培养箱中孵育1.5h,然后加入补体(1:8的新鲜豚鼠血清),继续温育1.5h,计数溶血空斑数。
小鼠血清溶血素测定
实验结束前4天,除正常对照组之外,每只动物腹腔注射2%(v/v)SRBC悬液进行免疫。末次给药后24h,摘眼球取血,分离血清,并按照文献的方法测定HC50。
小鼠碳粒廓清实验
于末次灌胃1h后称取小鼠体重,以每鼠10g体重0.1ml尾静脉注射3.5倍稀释的印度墨汁,于注射后2、10min后眼眶采血20μl溶于2ml质量分数0.1% Na2CO3溶液中,摇匀后,以Na2CO3溶液做空白对照,于紫外分光光度计600nm波长处测定吸光度,以廓清指数比较单核巨噬细胞吞噬能力:
OD1、OD2分别为在时间t1、t2时所取血样的吸光度; t2-t1为取两血样的时间差。
末次取血后,将小鼠脱颈处死,称小鼠取小鼠体重,并取出肝脏、脾脏、胸腺,称重,用下列公式计算胸腺指数和脾脏指数,并计算吞噬系数α:
2.7 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
末次灌胃后,各组小鼠腹腔注射20%鸡红细胞(CRBC)1ml间隔30min,颈椎脱臼处死动物,用生理盐水冲洗腹腔,然后吸出腹腔液体1ml,分别滴在两张玻片上,37℃孵育30min。玻片经清洗、固定、晾干后以Giemsa-磷酸缓冲液染色后,镜检计数,计算吞噬百分率及吞噬指数。
2.8 自然杀伤细胞(NK)活性测定
末次给药24h后,无菌条件下取脾细胞,制成脾细胞悬液,调整悬液细胞浓度为。取浓度为的YAC-1靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50:1)加入U型96孔培养板。靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μl,上述各项均设3个复孔,于37℃、5%CO2培养箱中培养20 h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中,同时加入LDH基质液100μl反应3min,每孔加入1mol/L HCl 30μl,全自动酶标仪490nm处测定光密度值。
统计学处理
用Excel进行数据录入,数据经核对和清理后,用SPSS11.0软件进行一般资料的统计描述,各组间比较采用单因素方差分析,方差齐性检验用F检验。
结果
3.1 实施例61样品对ConA诱导的淋巴细胞转化的影响
实施例61样品各剂量组的脾淋巴细胞转化OD差值与空白对照组比较,均无显著性差异, 表明实施例61样品对小鼠脾淋巴细胞转化无明显的提高作用,结果见表15。
实施例61样品对DNFB诱导的小鼠耳廓肿胀的影响
实施例61样品各剂量组小鼠的耳廓肿胀度均大于空白对照组, 其中高、中剂量组与空白对照组的差异具有显著性(p<0.01),表明实施例61样品能提高DNFB诱导的耳廓肿胀程度,具有促进迟发型变态反应的作用,见表16。
实施例61样品对小鼠脾细胞抗体生成的影响
实施例61样品各剂量组小鼠的抗体生成细胞数(空斑数)均高于空白对照组,但与空白对照组相比,没有统计学意义,见表17。
实施例61样品对小鼠血清溶血素生成的影响
从表18中可以看出,受试动物在给予实施例61样品30天后,各给药组血清溶血素含量均有所增加,其中高剂量组具有显著的统计学意义(p<0.05,p<0.01)。
实施例61样品对小鼠碳粒廓清能力的影响
从表19可知,高剂量实施例61样品可显著增加受试动物的脾脏指数,而中、低剂量组动物的脾脏指数则与对照组相比无显著差异。对于胸腺指数,实施例61样品则没有显著影响(p>0.05)。
表20所示为实施例61样品对小鼠RES清除碳粒能力的影响。实施例61样品高剂量组的碳廓清吞噬指数与空白对照组的差异有显著性(p<0.05),表明实施例61样品具有促进小鼠的单核-巨噬细胞碳廓清功能的作用。
实施例61样品对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
实施例61样品各剂量组小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数均高于空白对照组,其中高剂量组的吞噬率和吞噬指数与空白对照组比较,有显著性差异(p<0.01),表明实施例61样品具有促进小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力。
实施例61样品对小鼠NK细胞活性的影响
实施例61样品各剂量组小鼠的NK细胞活性均高于空白对照组,但与空白对照组比较,仅有高剂量组实施例61样品具有显著性差异(p<0.05),表明实施例61样品对小鼠的NK细胞活性有一定提高作用,见表22。
结论
与空白对照组比较,实施例61样品可显著增强迟发型变态反应能力、血清溶血素生成能力、碳粒廓清能力和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,同时还可增加NK细胞对靶细胞的杀伤活性。因此,实施例61样品具有增强机体细胞免疫、体液免疫能力,同时可增强单核-巨噬细胞的吞噬功能以及NK细胞的杀细胞活性。
总之,实施例61样品具有增强小鼠免疫功能的作用。
实施例62
甲鱼低聚肽80kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg,在混合器中加入甲鱼低聚肽、海洋鱼低聚肽进行混料,用铝复合膜袋包装,每袋10克。
实施例62进行了如下质量控制:
一、总肽含量测定
1.方法提要
低分子量的蛋白质水解物(包含低聚肽及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子量的蛋白质在三氯乙酸溶液中易沉淀。样品经三氯乙酸溶液溶解后,可分离去除高分子量蛋白质物质。在碱性溶液中,肽键与Cu2+螯合,形成肽-铜复合物,此复合物使酚试剂的磷钼酸还原,产生蓝色化合物,该蓝色化合物在650nm处的吸光度与低聚肽含量成正比。以此测定肽总量。
2.分析步骤
2.1 试剂
超纯水;19%三氯乙酸;4%碳酸钠;0.8%氢氧化钠溶液;1%硫酸铜;2%酒石酸钾钠溶液;酚试剂;
碱性铜试液:取2%酒石酸钾钠溶液与1%硫酸铜溶液各0.5mL,4%碳酸钠溶液与0.8%氢氧化钠溶液各25mL,摇匀,即得。本液应临用前配制。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取实施例62样品1g,置25ml容量瓶中,加水适量,振摇使溶解,必要时可超声处理,加水定容至25ml,离心15min(4000r/min),精密量取上清液2ml至10ml的容量瓶中,加19%三氯乙酸至刻度,摇匀,静置10min,离心15min(4000r/min)。精密量取上清液1mL至100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即为供试品溶液。
2.2 牛血清白蛋白标准溶液的配制
精密称取牛血清白蛋白标准品(Ⅴ组分)适量,置量瓶中,用水溶解,稀释至刻度,摇匀,使浓度为0.1mg/mL,临用前配制。
2.3 测定方法
精密移取供试品制备液1mL,置10mL具塞试管中,加碱性铜溶液5mL,摇匀。室温放置10min后,快速加入酚试剂0.5mL,充分摇匀,置30℃水浴锅中恒温30分钟,取出,放冷,于波长650nm处测定吸光度,精密移取标准蛋白溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分别置于试管中,加水至1mL,自“加碱性铜溶液5mL”起,同法操作,随行空白对照。以标准品浓度对应吸光度,求线性回归方程,将测得的供试品吸光度代入回归方程,计算供试品含量。
3. 测定结果
实施例62五份样品分别测定总含量,结果见表23。
二、相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例(高效凝胶过滤色谱法)
1. 方法提要
采用高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差别进行分离,在肽键的紫外吸收波长220nm条件下检测,使用凝胶色谱测定相对分子质量分布的专用数据处理软件(即GPC软件),对色谱图及其数据进行处理,计算得到蛋白质水解物的相对分子质量大小及分布范围,进而得到相对分子质量小于1000u的蛋白质水解物所占比例。
2.分析步骤
2.1 试剂
乙腈:色谱纯;三氟醋酸:分析纯;水:超纯水或二次蒸馏水。
相对分子质量校正曲线所用标准品:细胞色素C(cyyochrome,Mw12500);抑酞酶(aprotinin,Mw6500);杆菌酶(bacitracin,Mw1450);乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸(Mw451);乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(Mw189)
2.2 仪器和设备
高效液相色谱仪:配有紫外检测器和含有GPC数据处理软件的色谱工作站;流动相真空抽滤脱气装置;超声波振荡器;分析天平:感量0.0001g。
2.3 色谱条件与系统适应性试验
色谱柱:TSKgel G2000 SWXL 300mm×7.8mm或性能与此相近的同类型其他适用于测定蛋白质和多肽的凝胶柱;流动相:乙腈:水:三氟乙酸,20:80:0.1(体积比)检测波长:UV220nm;流速:0.5ml/min;柱温:30℃;进样体积:10μl。
为使色谱系统符合检测要求,规定在上述色谱条件下,凝胶色谱柱的柱效即理论塔板数(N)按三肽标准品(乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸)峰计算不低于5000,低聚肽的分配系数(Kd)应在0~1之间。
2.4 相对分子质量校正曲线制作
分别用流动相配制成0.1%的上述不同相对分子质量的肽标准品溶液,用孔径为0.2μm~0.5μm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后分别进样,得到系列标准品的色谱图。以相对分子质量的对数(lgMw)对保留时间作图或作线性回归得到相对分子质量校正曲线及其方程。
2.5 样品制备
称取样品20.0mg于10mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,超声振荡10min,使样品充分溶解混匀,用孔径为0.2-0.5μm聚四氟乙烯或尼龙过滤膜过滤后,上机进样。
2.6 相对分子质量的计算
将2.5 制备的样品溶液在上述色谱条件下分析。然后用GPC数据处理软件,将样品的色谱数据代入校正曲线方程中进行计算,即可得到样品中蛋白质水解物的相对分子质量及其分布范围。用峰面积归一化法计算相对分子质量范围在1000u以下的峰面积相对百分比之和。
3. 测定结果
取实施例62四份样品测定分子量分布范围,测定结果见表24。
实施例63
甲鱼低聚肽80Kg、大豆低聚肽20kg、海洋鱼低聚肽10kg、水溶性膳食纤维10kg、枸杞提取物1kg、抗坏血酸0.03kg、柠檬酸2.5kg、柠檬酸钾1.5kg、麦芽糖醇90kg、三氯蔗糖0.25kg、酪蛋白磷酸肽0.25kg、、葡萄糖酸锌0.054 kg、香精 1.4kg,在配制罐中加入500L纯化水,依次加入抗坏血酸、甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、枸杞提取物、柠檬酸、柠檬酸钾、麦芽糖醇,搅拌使其溶解后,滤器(孔径为30μm,0.45μm)过滤,得到滤液,将三氯蔗糖、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸锌用适量纯化水溶解后,加入到滤液中,加水至1000L,搅拌15分钟,加入香精,再搅拌10分钟,用滤器过滤(板材:B-2,孔径:0.45μm),每瓶100ml,105℃灭菌30分钟,即得
实施例63进行了如下质量控制:
1.方法提要
低分子量的蛋白质水解物(包含低聚肽及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子量的蛋白质在三氯乙酸溶液中易沉淀。样品经三氯乙酸溶液溶解后,可分离去除高分子量蛋白质物质。在碱性溶液中,肽键与Cu2+螯合,形成肽-铜复合物,此复合物使酚试剂的磷钼酸还原,产生蓝色化合物,该蓝色化合物在650nm处的吸光度与低聚肽含量成正比。以此测定肽总量。
2.分析步骤
2.1 试剂
超纯水;19%三氯乙酸;4%碳酸钠;0.8%氢氧化钠溶液;1%硫酸铜;2%酒石酸钾钠溶液;酚试剂;
碱性铜试液:取2%酒石酸钾钠溶液与1%硫酸铜溶液各0.5mL,4%碳酸钠溶液与0.8%氢氧化钠溶液各25mL,摇匀,即得。本液应临用前配制。
2.2 供试品溶液的制备
精密吸取实施例63样品溶液2ml,置25ml容量瓶中,加19%三氯乙酸8ml,摇匀,静置10min,加水定容至25ml,离心15min(4000r/min)。精密量取上清液1mL至100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即为供试品溶液。
2.2 牛血清白蛋白标准溶液的配制
精密称取牛血清白蛋白标准品(Ⅴ组分)适量,置量瓶中,用水溶解,稀释至刻度,摇匀,使浓度为0.1mg/mL,临用前配制。
2.3 测定方法
精密移取供试品制备液1mL,置10mL具塞试管中,加碱性铜溶液5mL,摇匀。室温放置10min后,快速加入酚试剂0.5mL,充分摇匀,置30℃水浴锅中恒温30分钟,取出,放冷,于波长650nm处测定吸光度,精密移取标准蛋白溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分别置于试管中,加水至1mL,自“加碱性铜溶液5mL”起,同法操作,随行空白对照。以标准品浓度对应吸光度,求线性回归方程,将测得的供试品吸光度代入回归方程,计算供试品含量。
3. 测定结果
实施例63五份样品分别测定总肽含量,结果见表25。
Claims (24)
1.一种组合物,其特征在于原料包括:甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于原料进一步包括:水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂中的一种或任意组合。
3.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于原料包括:甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、酪蛋白磷酸肽。
4.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于原料包括:甲鱼低聚肽、大豆低聚肽、海洋鱼低聚肽、水溶性膳食纤维、葡萄糖酸锌、枸杞提取物、酪蛋白磷酸肽、乙二胺四乙酸二钠、口感调节剂。
5.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽1-200份、大豆低聚肽1-100份、海洋鱼低聚肽1-100份。
6.根据权利要求5所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽10-120份、大豆低聚肽10-60份、海洋鱼低聚肽5-30份。
7.根据权利要求6所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽80份、大豆低聚肽20份、海洋鱼低聚肽10份。
8.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:水溶性膳食纤维1-100份、葡萄糖酸锌0.01-0.1份、枸杞提取物0.1-10份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份、乙二胺四乙酸二钠0.01-0.25份、口感调节剂1-500份中的一种或任意组合。
9.根据权利要求8所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:水溶性膳食纤维5-30份、葡萄糖酸锌0.02-0.08份、枸杞提取物0.5-5份、酪蛋白磷酸肽0.2-2份、乙二胺四乙酸二钠0.05-0.22份、口感调节剂10-200份中的一种或任意组合。
10.根据权利要求9所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:水溶性膳食纤维15份、葡萄糖酸锌0.04份、枸杞提取物2份、酪蛋白磷酸肽1份、乙二胺四乙酸二钠0.1份、口感调节剂100份中的一种或任意组合。
11.根据权利要求3所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽1-200份、大豆低聚肽1-100份、海洋鱼低聚肽1-100份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份。
12.根据权利要求11所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽10-120份、大豆低聚肽10-60份、海洋鱼低聚肽5-30份、酪蛋白磷酸肽0.2-2份。
13.根据权利要求12所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽80份、大豆低聚肽20份、海洋鱼低聚肽10份、酪蛋白磷酸肽1份。
14.根据权利要求4所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽1-200份、大豆低聚肽1-100份、海洋鱼低聚肽1-100份、水溶性膳食纤维1-100份、葡萄糖酸锌0.01-0.1份、枸杞提取物0.1-10份、酪蛋白磷酸肽0.1-10份、乙二胺四乙酸二钠0.01-0.25份、口感调节剂1-500份。
15.根据权利要求14所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽10-120份、大豆低聚肽10-60份、海洋鱼低聚肽5-30份、水溶性膳食纤维5-30份、葡萄糖酸锌0.02-0.08份、枸杞提取物0.5-5份、酪蛋白磷酸肽0.2-2份、乙二胺四乙酸二钠0.05-0.22份、口感调节剂10-200份。
16.根据权利要求15所述的组合物,其特征在于包括下述重量份的原料:甲鱼低聚肽80份、大豆低聚肽20份、海洋鱼低聚肽10份、水溶性膳食纤维15份、葡萄糖酸锌0.04份、枸杞提取物2份、酪蛋白磷酸肽1份、乙二胺四乙酸二钠0.1份、口感调节剂100份。
17.根据权利要求1—16任一所述的组合物,其特征在于:加入辅料制成口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂 、散剂、分散片、糖浆剂中的任意一种。
18.根据权利要求17所述的口服液的制备工艺,其特征在于包括下列步骤:
(1)配制:按处方称取原辅料,加水定容;
(2)过滤:用30μm-0.2μm滤材过滤,灌装;
(3)灭菌:105-125℃,灭菌5-60分钟,即得。
19.根据权利要求18所述的口服液的制备工艺,其特征在于:用10μm-0.15μm滤材过滤;102-121℃,灭菌8-50分钟。
20.根据权利要求19所述的口服液的制备工艺,其特征在于:用0.2μm滤材过滤;105℃,灭菌30分钟。
21.权利要求1-16任一所述的组合物在制备抗肿瘤保健品或药品或产品中的用途。
22.权利要求1-16任一所述的组合物在制备增强免疫功能保健品或药品或产品中的用途。
23.权利要求1-16任一所述的组合物在制备改善放射性治疗或化学药物治疗不良反应的保健品或药品或产品中的用途。
24.根据权利要求23所述的用途,其中不良反应是胃肠道和造血系统症状。
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