CN103808814B - 一种检测食品中邻苯二甲酸酯的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测食品中邻苯二甲酸酯（PAEs）的新方法，本发明的特点在于：（1）采用适量有机溶剂作为食品样品中PAEs的萃取剂；（2）用液液微萃取技术对食品样品的提取液进行萃取；（3）通过HPLC进行测定，对照PAEs的工作曲线判断PAEs的含量。与现有的检测技术相比，本发明的方法优势在于：操作简单；绿色环保；成本低廉；准确度高；重现性好；检测时间短。适用于食品安全检测，具有广泛的应用潜力和广阔的市场前景。

Description

一种检测食品中邻苯二甲酸酯的方法

技术领域

发明属于分析化学领域，更具体涉及一种食品中邻苯二甲酸酯的检测方法。

背景技术

塑化剂又称增塑剂，为邻苯二甲酸酯类（PAEs）化合物，因增大产品的可塑性和柔韧性而广泛地应用于日常生活中，在润滑剂、驱虫剂、化妆品、去泡剂、食品包装材料、医疗用具、人造革等生产中都有使用。它具有种类多，难以降解等特点，对人体、生物体、植物体都有较大的毒性，最主要的表现其对生殖系统危害和对婴儿的致畸性，并有极强的致癌性和免疫抑制性，成为全球性最普遍的污染物之一。在塑料制品中，由于邻苯二甲酸酯与聚烯烃类塑料分子是相溶的，两者间并没有严格的化学结合键，因此在使用过程中，邻苯二甲酸酯很容易从塑料中迁移到外环境，造成对食品、土壤、水和空气的污染。由于塑料制品使用方便，在日常生活被广泛的用来盛装食品，如各种塑料盒、塑料袋及塑料罐等食品容器等往往都含有PAEs，而PAEs又很容易从塑料中溶出，所以日常生活中喝的水、饮料、吃的蔬菜、水果、畜产品、甚至是熟食的包装袋都可能含有PAEs。基于上述原因，PAEs污染已受到全世界的高度重视。美国、日本以及欧洲许多国家都将PAEs列入优先监测的黑名单，美国环保局129种重点控制的污染物黑名单中列入了6种邻苯二甲酸酯。因此，寻找一种简便、快速、精确的检测食品中PAEs的方法是非常必要，也是势在必行的。

国内外对食品中检测的报道较多，基本以气相色谱检测为主，以液相色谱为辅，另外还有一些使用荧光分光光度法检测。这些检测方法一般都结合了一些样品前处理技术，目前主要采用的有液液萃取(LLE)、浊点萃取(CPE)、固相萃取(SPE)和固相微萃取(SPME)。这些方法在萃取PAEs上或多或少都有自己的缺点。本发明采用的长链脂肪酸或者长链醇类作为萃取剂进行微萃取是一种绿色的样品前处理技术，具有萃取率高，绿色环保等优点，与色谱技术连用能达到较低的检出限，得到较好的效果。

发明内容

本发明的目的就是针对现有检测PAEs的方法所存在的弊端，研究出一种食品中的PAEs经过液液微萃取以后，然后进行HPLC分析的方法，该方法快速简便、成本低廉、准确性高、重现性好的适用于食品中PAEs的检测方法。

本发明的目的是通过以下方案来实现的：

（1）工作曲线的绘制：在10ng/mL-1000ng/mL范围配置不同浓度梯度的混合标准工作溶液，按照确定的最佳检测条件，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标制作标准工作曲线，测定PAEs的回归方程、相关系数、相对标准偏差和回收率。

（2）样品处理

①面包或饼干

称取2.00-5.00g面包或饼干，粉碎后放于洁净锥形瓶中，向锥形瓶中加入3-6mL无水乙醇、2-4mL丙酮，然后振摇5-10min后，将萃取液用普通漏斗过滤，将滤液移至容量瓶中用蒸馏水稀释至25mL，制得样品提取液。

②牛奶样品

取5-10mL牛奶样品于10mL离心管中，加入0.1-0.2g乙酸钠、0.4-0.8g硫酸镁或0.5-1.0mL乙腈中一种，在3000-6000r/minl离心5-10min沉淀蛋白质，上清溶液转移至另一只离心管中，重复上述的操作，取上清溶液用0.5% pH=6.0的磷酸二氢钾缓冲溶液稀释至5mL，然后移至25mL定容瓶中定容，制得样品提取液。

③食用油

取食用油5-10mL于洁净分液漏斗中，向分液漏斗中加入1-2mL无水甲醇和1-2mL乙腈，振摇，静置分层，取出上清液，萃取两次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得样品提取液。

④果汁样品

取果汁样品5-10mL使用普通漏斗过滤，滤液移至25mL容量瓶中定容，制得样品提取液。

（3）取适量样品提取液于具塞试管中，用缓冲溶液调pH，然后加入适量两性溶剂和长链脂肪酸或长链脂肪醇，涡旋，离心，移除下层溶液，取上层溶液用甲醇稀释，取适量甲醇溶液进液相色谱分析，对照工作曲线判断PAEs的含量。

所述长链脂肪酸或长链脂肪醇为：正癸酸、正己酸、正壬酸、正辛酸、正庚酸、正丁醇、正辛醇、正己醇、正癸醇之一种。

所述缓冲溶液为pH=8.0磷酸缓冲溶液，将样品调至7.0-8.0。

所述长链脂肪酸或长链脂肪醇萃取剂体积为0.1-1.0mL。

所述涡旋时间为1-3min，离心转速2500-5000 r/min时间为5 -10min。

所述萃取溶液用甲醇稀释至1.0mL。

所述色谱条件为：采用的设备为高效液相色谱仪，流动相: 乙腈:水 0-10min：55%-80乙腈;10min-12min：80%-100%乙腈;12min-20min：100%乙腈；v/v ；流速 1.0 mL/min；检测波长：225nm。

本发明的特点以及与现有技术相比所具有的优点：

1.本方法选择长链脂肪酸和长链脂肪醇作为萃取剂萃取食品中的PAEs，由于所选萃取剂只需通过涡旋即可产生乳化均相，之后离心又可分相完全，对PAEs有较高的萃取率，萃取剂用量少，达到了分散液液微萃取的效果，而又没有加入分散剂，对环境友好。该检测具有较高的灵敏度，能达到较低的检出限。

2.操作简单，不需加热，所需时间短，只用到涡旋器、小型离心机进行样品前处理，一般实验室都能进行。

3. 本方法适用范围广，可用于一般食品中PAEs的检测，并可用于相关部门的检测。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地说明, 但本发明的保护范围并不限于此。

具体实施例1

牛奶中PAEs的含量检测方法，包括以下步骤：（1）工作曲线的绘制：将DBEP、DMEP、BBP、DBP、DNOP、DCHP 100μg/mL的标准储备液用甲醇分别稀释成0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL，然后在下面的色谱条件下进样：C18柱(150 mm×4.6 mm, i.d, 5 μm)；进样量：20μL；流动相：乙腈:水 0-10min：55%-80乙腈;10min-12min：80%-100%乙腈;12min-20min：100%乙腈；v/v ；流速 1.0 mL/min；检测波长：225 nm。回归方程、相关系数、相对标准偏差、回收率等见表1；

（2）样品处理：取5mL牛奶样品于10mL离心管中，加入0.1g乙酸钠，在6000r/minl离心6min沉淀蛋白质，上清溶液转移至另一只离心管中，重复上述的操作，取上清溶液用0.5%的磷酸二氢钾缓冲溶液（pH=6.0）稀释至5mL，然后移至25mL定容瓶中定容，制得样品提取液；（3）取5mL牛奶样品提取液，用pH =8.0的磷酸缓冲液调节pH至8，取0.5mL正己酸加入离心管，涡旋1min，然后在5000 r/min离心5 min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相0.4 mL用甲醇溶解至1.0 mL。取所得甲醇溶液20μL，与测定工作曲线相同的色谱条件，得到相应峰面积，代入表1工作曲线，求得牛奶中PAEs的含量：、DMEP、BBP、DBP、DCHP分别为0.01、0.07、0.10、0.09µg /mL 。

表1 PAEs的线性方程

具体实施例2

饼干中PAEs的含量的检测方法，包括以下步骤：

（1）工作曲线的绘制：按上述工作曲线绘制部分；（2）样品处理：称取2.00g饼干样品，粉碎后放于洁净锥形瓶中，向锥形瓶中加入3mL无水乙醇、2mL丙酮，振摇10min后，将萃取液用普通漏斗过滤，将滤液移至容量瓶中用蒸馏水稀释至25mL，制得样品提取液；（3）取5mL饼干样品提取液，用pH =8.0的磷酸缓冲液调节pH至8，取0.5mL正壬酸加入离心管，涡旋2min，然后在3500 r/min离心8min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相0.3 mL用甲醇溶解至1.0 mL。各取所得甲醇溶液20μL，与测定工作曲线相同的色谱条件，得到相应峰面积，代入表1工作曲线，求得饼干中PAEs的含量：DBEP、DCHP分别为0.02、0.08µg /mL。

具体实施例3

食用油中PAEs的含量的检测方法，包括以下步骤：

（1）工作曲线的绘制：按上述工作曲线绘制部分；（2）样品处理：称取10mL食用油样品于洁净分液漏斗中，向分液漏斗中加入2mL无水甲醇和2mL乙腈，振摇8min，静置分层，取出上清液，萃取两次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得样品提取液；（3）取5mL食用油样品提取液，用pH =8.0的磷酸缓冲液调节pH至8，然后加入0.5 mL正辛醇，涡旋3min，然后在4500 r/min离心6min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相0.5 mL用甲醇溶解至1.5 mL。各取所得甲醇溶液20μL，与测定工作曲线相同的色谱条件，得到相应峰面积，代入表1工作曲线，求得食用油中PAEs的含量: DMEP、DBP、DCHP分别为0.56、0.17、0.21、µg /mL。

具体实施例4

果汁中PAEs的含量的检测方法，包括以下步骤：

（1）工作曲线的绘制：按上述工作曲线绘制部分；（2）样品处理：取果汁样品5mL，使用普通漏斗过滤，滤液移至25mL容量瓶中定容，制得样品提取液；（3）取5mL果汁样品提取液，用pH =8.0的磷酸缓冲液调节pH至8，取0.5mL正癸醇加入离心管，涡旋2min，在5000 r/min离心5 min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相0.4 mL用甲醇溶解至1.0 mL。各取所得甲醇溶液20μL，与测定工作曲线相同的色谱条件，得到相应峰面积，代入表1工作曲线，求得果汁中PAEs的含量：DBEP、BBP、DBP、DNOP、DCHP分别为0.12、0.14、0.09、0.19、0.16µg /mL。

以上实施例与液液萃取（LLE）结合高效液相色谱（HPLC）测定方法相比，检测限从0.1μg/mL降到0.01μg/mL。

Claims (6)

1.一种检测食品中邻苯二甲酸酯的方法，包括以下步骤：

（1）工作曲线的绘制：在10ng/mL-1000ng/mL范围配置不同浓度梯度的PAEs标准工作溶液，按照确定的最佳检测条件，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标制作标准工作曲线，测定PAEs的回归方程、相关系数、相对标准偏差和回收率；

（2）样品处理

①面包或饼干

称取2.00-5.00g面包或饼干，粉碎后放于洁净锥形瓶中，向锥形瓶中加入3-6mL无水乙醇、2-4mL丙酮，然后振摇5-10min后，将萃取液用普通漏斗过滤，将滤液移至容量瓶中用蒸馏水稀释至25mL，制得样品提取液；

②牛奶样品

取5-10mL牛奶样品于10mL离心管中，加入0.1-0.2g乙酸钠、0.4-0.8g硫酸镁或0.5-1.0mL乙腈中一种，在3000-6000r/minl离心5-10min沉淀蛋白质，上清溶液转移至另一只离心管中，重复上述的操作，取上清溶液用0.5% pH=6.0的磷酸二氢钾缓冲溶液稀释至5mL，然后移至25mL定容瓶中定容，制得样品提取液；

③食用油

取食用油5-10mL于洁净分液漏斗中，向分液漏斗中加入1-2mL无水甲醇和1-2mL乙腈，振摇，静置分层，取出上清液，萃取两次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得样品提取液；

④果汁样品

取果汁样品5-10mL使用普通漏斗过滤，滤液移至25mL容量瓶中定容，制得样品提取液；

（3）取适量样品提取液于具塞试管中，用缓冲溶液调pH，加入适量长链脂肪酸或长链脂肪醇，涡旋，离心，移除下层溶液，取上层溶液用甲醇稀释，取适量甲醇溶液进液相色谱分析，对照工作曲线判断PAEs的含量；长链脂肪酸或长链脂肪醇为：正癸酸、正己酸、正壬酸、正辛酸、正庚酸、正丁醇、正辛醇、正己醇、正癸醇之一种；

（4）色谱分析条件为：采用的设备为高效液相色谱仪，流动相: 乙腈:水 0-10min：55%-80%乙腈;10min-12min：80%-100%乙腈;12min-20min：100%乙腈；v/v；流速 1.0 mL/min；检测波长：225nm。

2.根据权利要求书1所述的一种检测食品中PAEs的方法，其特征在于PAEs包括：邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、邻苯二甲酸丁基苄基酯（BBP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）中一种或几种。

3.根据权利要求书1所述的一种检测食品中PAEs的方法，其特征在于缓冲溶液为pH=8.0磷酸缓冲溶液，将样品调至7.0-8.0。

4.根据权利要求1所述的一种检测食品中邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于加入的长链脂肪酸或长链脂肪醇体积为0.1-1.0mL。

5.根据权利要求1所述的一种检测食品中邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于涡旋时间为1-3min，离心转速2500-5000 r/min时间为5-10 min。

6.根据权利要求1所述的一种检测食品中邻苯二甲酸酯的方法，其特征在于萃取溶液用甲醇稀释至1.0-1.5mL。