CN103789248B - 一种1,3-丙二醇基因工程菌及转化生产1,3-丙二醇的方法 - Google Patents
一种1,3-丙二醇基因工程菌及转化生产1,3-丙二醇的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种1,3-丙二醇基因工程菌及其混合转化生产1,3-丙二醇的方法，属于生物技术领域。本发明通过PCR技术克隆来自短乳杆菌(<i>Lactobacilli？brevis</i>？CICC？6239)的1,3-丙二醇氧化还原酶<i>dhaT</i>基因，构建能高效活性表达1,3-丙二醇氧化还原酶(1,3-propanediol？dehydrogenase,PDOR)的基因工程菌株<i>E.？coli</i>-pSE-<i>dhaT</i>，经验证，该重组菌表达的1,3-丙二醇氧化还原酶的酶活性提高了16倍，利用该工程菌和短乳杆菌混合静止转化甘油，甘油转化为1,3-丙二醇的转化率可达80.6%。
Description
发明技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，涉及一种1,3-丙二醇基因工程菌的构建及其用于混合转化甘油生产1,3-丙二醇的方法。
背景技术
1,3-丙二醇(1,3-propanediol，1,3-PD)是一种重要的环保型化工原料，主要是作为聚酯、聚醚和聚亚氨酯的单体，在化工、纺织、食品等领域具有广阔的应用，是国际上公认的六大石化新产品之一。鉴于，化学合成1,3-PD有众多的缺点，因此，以廉价的原材料为底物的生物法就受到了广泛的关注。甘油是1,3-PD生产菌生物转化的天然底物，近年来随着生物柴油产量的增加，预计到2020年，年产生物柴油将达到900万吨，副产物甘油也随之迅速增加（在生物柴油的生产过程中会生成10%的副产物甘油），从而导致了甘油的价格迅速下滑，为生物法提供了价格低廉的原材料，进一步为生物法取代化学法来生产1,3-PD提供了强劲动力。
目前生物法生产1,3-PD主要通过生产菌发酵产生，微生物体内甘油代谢生产1,3-PD主要涉及2步酶反应：(1)甘油脱水酶（glyceroldehydratase,GDHt）转化甘油为中间产物3-羟基丙醛（3-hydroxypropionaldehyde,3-HPA）；(2)1,3-丙二醇氧化还原酶(1,3-propanedioldehydrogenase,PDOR)在NADH的作用下催化3-HPA生成终产物1,3-PD。有研究显示，在1,3-PD工程菌的发酵过程中，3-HPA往往会大量积累，同时还会生成多种酸性物质，使PDOR的催化活力受到严重影响，而PDOR活力的下降又会使3-HPA进一步积累，形成恶性循环，并使发酵菌株的生长产生不可逆停止；另外，由于发酵液中的1,3-PD浓度积累会反馈抑制PDOR的催化活力，影响终产物1,3-PD的积累浓度，最终严重影响1,3-PD的产量。因此，作为1,3-PD生产的关键酶和限速酶的PDOR对1,3-PD的生成起着至关重要的作用。
本发明利用短乳杆菌（Lactobacillibrevis）将甘油氧化还原为1,3-丙二醇，短乳杆菌购自中国工业微生物菌种保藏中心，编号：CICC6239，该菌同时具有关键酶GDHt的编码基因dhaBCE和PDOR的编码基因dhaT，研究中发现该菌在发酵过程中PDOR的活力比较稳定，因此，利用基因工程法构建该菌的PDOR工程菌，将有助于提高1,3-PD的生产。
发明内容
本发明的目的是提供一株具有高1,3-丙二醇氧化还原酶活力的基因工程菌E.coli-pSE-dhaT，工程菌所涉及的编码1,3-丙二醇氧化还原酶的基因序列已提交并保存于GenBank数据库，其编号为KF250355，序列如下：
1ATGGCTGAACGTAGTTATGACTTTCTGATGCCCAGCGTCAATTTCTTTGGCCCTGGTGTC
61ATTAGTAAGATTGGTGATCGAGCAAAGATGTTAGGGATGAAAAAGCCCGTTATCGTCACG
121GATAAGTTCCTTGAAGGTTTAAAGGACGGCGCCGTGGAACAGACTTTGGATTCTTTAAAG
181GCTGCTGGTGTGGACTACGTTGTTTACAACAACGTTGAACCCAACCCTAAGATTCGTAAC
241ATCAAAGAAGTTAAGAAACTTTACGAAGAATCCGGTGCGGACTCCATCATCACTGTTGGT
301GGGGGTTCTGCTCACGATACTGGTAAAGGTGCCGGCATTATTTTGACTAATGGCGACGAC
361ATTACCAAGTTGGCTGGGATTGAAACACTCGACAAGGCTTTGCCACCATTAATCGCCGTT
421AACACGACGGCCGGTACTGGTTCTGAATTAACCCGTCACGCGGTTATCACGAATGAAGAA
481ACCCACTTGAAGTTCGTGGTTGTTTCATGGCGGAACATTCCGTTGGTTTCATTCAACGAC
541CCAACTCTGATGCTCGATGTGCCTAAGGGCTTAACCGCAGCTACTGGGATGGATGCCTTC
601GTTCAAGCCGTTGAACCTTACGTTTCCGTTGACCACAACCCTATCACCGACTCACAATGT
661GTGGAAGCGATCAAGTTGATTGAAACTTCCCTTCGTGAAGCCGTGGCTAACGGCCACAAC
721TTGGACGCTCGGACTAAGATGGTCGAAGCTGAAATGTTAGCCGGGATGGCCTTCAACAAC
781GCCAACTTGGGTTACGTTCACGCCATGGCTCACCAACTCGGTGGTCAATACGACGCACCT
841CATGGTGTTTGCTGTGCCTTACTTCTACCTTACGTTGAAGAATATAACATCATTGCTTGC
901CCAGATCGTTTCGCCCAATTGGCTGAAATCATGGGTGAAAACACTGAAGGCCTATCAACG
961CGGGACGCTGCCGAATTAGCCATCAAGGCCATGAAGCAATTATCCGAAGACGTTGGTATT
1021CCTCACTCAATCAAAGAAATTGGTGCTAAGCCAGAAGACTTTGAATTGATGGCTGAAAAT
1081GCCTTGAAAGATGGGAATGCTTTCTCTAACCCTCGTAAGGGGACCAAGGAAGATATCATC
1141AAGATTTTCCAAGCTGCCTACGACGCTGAATAA
本发明的另一个目的是提供一种具有高转化率的混合静止转化甘油生产1,3-丙二醇的方法。利用构建的基因工程菌和短乳杆菌混合静止转化甘油生产1,3-丙二醇，甘油的转化率最高可达80.6%。
利用上述构建的基因工程菌和短乳杆菌混合静止转化甘油生产1,3-丙二醇的方法，按照下述步骤进行：
（1）挑取短乳杆菌(Lactobacillibrevis)斜面菌落于种子液培养基，37℃、160rpm振荡培养16h，OD600为3.0。
（2）将种子液以体积比2%的接种量接种到扩大培养基，37℃、160rpm振荡培养48h。
（3）将（2）中的发酵液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，离心后用细胞转化液重悬菌体，菌泥与细胞转化液质量体积比为1：1g/ml。
（4）将上述基因工程菌E.coli-pSE-dhaT接种于LB-Amp（LB-氨苄青霉素）培养基中，37℃振荡培养过夜，次日以2%的接种量将OD600为3.0的种子液转接至新鲜LB-Amp培养基中，37℃培养至菌体光密度值约为0.6时，加入IPTG（异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷）至终浓度0.6mmol/L进行诱导表达10h左右。取一定体积工程菌液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，并将菌泥与0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液按质量体积比1：1g/ml重悬。
（5）将（3）和（4）按体积比1：1混合后进行转化，转化温度为37℃，160rpm振荡转化48h，4h取样，转化液中得到1,3-丙二醇。
其中步骤（1）所述的种子液培养基组成如下：12g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，1‰吐温80，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4；短乳杆菌斜面培养基：12g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4，琼脂15g/L，其余为水。
其中步骤（2）所述的扩大培养基组成如下：12g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，1‰吐温80，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4，甘油20g/L，辅酶B1225mg/L，其余为水。
其中步骤（3）所述的细胞转化液组成如下：甘油40.0g/L，辅酶B1225mg/L，其余为水。
其中步骤（4）所述的LB-Amp培养基组成如下：胰化蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，Amp（氨苄青霉素）50μg/L(终浓度)，其余为水。
具体实施方式
本发明的短乳杆菌(Lactobacillibrevis)购自中国普通微生物菌种保藏中心，编号：CICC6239。本发明所述1,3-丙二醇氧化还原酶基因序列已提交GenBank数据库，接受号为KF250355。通过常规的基因工程技术将1,3-丙二醇氧化还原酶基因导入大肠杆菌得到含有所述1,3-丙二醇氧化还原酶基因（dhaT）的大肠杆菌。本发明的基因工程菌具有较高的1,3-丙二醇氧化还原酶活力，还原反应的比活可达46.7U/mg，氧化反应的比活可达25.3U/mg，其酶活性均较原始菌株提高了16倍。包括以下步骤：
1、培养短乳杆菌，提取菌株的总DNA，通过PCR扩增出目的片段。
2、目的片段和表达载体通过酶切用T4连接酶连接构建重组质粒，将重组质粒导入宿主菌E.coliBL21。
3、提取大肠杆菌质粒，通过PCR和SDS-PAGE进行表达验证，证明重组菌构建成功。
4、测定基因工程菌的1,3-丙二醇氧化还原酶酶活力。具体过程见实施例1。
实施例1具有高活力的1,3-丙二醇氧化还原酶基因工程菌的构建
根据短乳杆菌的1,3-丙二醇氧化还原酶基因序列和表达载体pSE380上多克隆位点的特征，利用生物信息学软件设计合成引物：primer1:5′-AT
TTCATGAAAATGCACCACCATCACCATCATGCTGAACGTAGTTATGAC-3′（含PagⅠ酶切位点），primer2:5′-CCGGAATTCTTATTCAGCGTCGTAGG-3′（含EcoRⅠ酶切位点）。
以短乳杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增目的基因。
PCR反应参数：预变性，95℃2min；变性，94℃30sec；退火，59℃30sec；延伸：，72℃90sec；循环：30个；终止延伸：72℃10min；最后16℃保温；
所得的PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳检测，得到大小约为1.2Kb的电泳条带，将PCR产物进行PCR纯化用于克隆表达。
PCR产物用PagⅠ和EcoRⅠ双酶切，载体pSE380用NcoⅠ和EcoRⅠ双酶切，凝胶回收酶切产物，16℃过夜连接，转化至E.coliBL21感受态细胞。
重组质粒通过PCR及测序验证。结果表明，重组菌构建成功，命名为E.coli-pSE-dhaT。
基因工程菌接种于3mlLB-Amp培养基中，37℃振荡培养过夜，次日以2%的接种量将种子液转接至新鲜LB-Amp培养基中，37℃培养至菌体光密度值（A600）约为0.6时，加入IPTG至终浓度1.0mmol/L进行诱导表达10h左右。采用SDS-PAGE观察目的蛋白的表达。结果表明：外源蛋白获得高效表达。LB-Amp培养基：胰化蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，Amp50μg/L(终浓度)。
基因工程菌接种于3mlLB-Amp培养基中，37℃振荡培养过夜，次日以2%的接种量将种子液转接至新鲜LB-Amp培养基中，37℃培养至菌体光密度值（A600）约为0.6时，加入IPTG至终浓度0.6mmol/L进行诱导表达10h左右。取适量菌液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤两次，离心后用适量的磷酸钾缓冲液重悬菌体，冰浴中超声破碎(超4s停4s，全程时间3min，200w)。之后于10000rpm，4℃离心10min，上清即为粗酶液。
利用粗酶液测定1,3-丙二醇氧化还原酶的酶活力，结果表明：重组菌具有基因克隆供体菌短乳杆菌的1,3-丙二醇氧化还原酶活力，还原反应的比活为46.7U/mg，氧化反应的比活为25.3U/mg，而且重组菌的1,3-丙二醇氧化还原酶活力约为短乳杆菌的16倍。获得具有1,3-丙二醇氧化还原酶高酶活的基因工程菌。
测定方法
（1）PDOR还原活力测定
1.0ml的总体积中按终浓度混合以下成分：27mmol/L丙醛，0.37mmol/LNADH，35mmol/LFe/(NH4)2(SO4)2，100mmol/L碳酸钾缓冲液(pH9.0)，适量酶液，立即测定340nm的OD变化。
（2）PDOR氧化活力测定
1.0ml的总体积中按终浓度混合以下成分：100mmol/L1,3-PD，0.6mmol/LNAD+，35mmol/LFe/(NH4)2(SO4)2，100mmol/L碳酸钾缓冲液(pH9.0)，适量酶液，立即测定340nm的OD变化。
在最适温度及最适pH条件下，按上述反应，每分钟生成1umol1,3-PD或者3-HAP所需的酶量定义为一个酶活单位(IU)。
实施例2混合转化制备1,3-丙二醇
（1）短乳杆菌首先在种子液培养基中培养，挑取2~3环短乳杆菌斜面菌落于10ml种子液培养基，37℃、160rpm振荡培养16h。种子液培养基包括：2g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，1‰吐温80，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4。
（2）将种子液以2%的接种量接种到扩大培养基，37℃、160rpm振荡培养48h。扩大培养基包括：2g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，1‰吐温80，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4。
（3）基因工程菌接种于LB-Amp培养基中，37℃振荡培养过夜，次日以2%的接种量将种子液转接至新鲜LB-Amp培养基中，37℃培养至菌体光密度值约为0.6时，加入IPTG至终浓度0.6mmol/L进行诱导表达10h左右。取一定体积工程菌液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤两次，菌体待用。LB-Amp培养基：胰化蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，Amp50μg/L(终浓度)。
（4）将（2）中的发酵液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤两次，菌体待用。
（5）将（3）和（4）离心得到得菌体用适量的细胞转化液重悬菌体。细胞转化液包括：甘油40.0g/L，辅酶B1225mg/L。
（6）转化液转化温度为37℃，160rpm振荡转化48h，间隔4h取样，用高效液相色谱检测转化液成分，甘油转化为1,3-丙二醇的转化率最高可达80.6%。
Claims (6)
1.1,3-丙二醇基因工程菌E.coli-pSE-dhaT在生产1,3-丙二醇中的应用，其特征在于：1,3-丙二醇基因工程菌E.coli-pSE-dhaT和短乳杆菌混合静止转化甘油高效生产1,3-丙二醇的应用；其中构建工程菌E.coli-pSE-dhaT所用的1,3-丙二醇氧化还原酶基因dhaT来源于短乳杆菌(Lactobacillibrevis)CICC6239，所用表达载体为pSE380，宿主菌为E.coliBL21。
2.根据权利要求1所述的应用，其中1,3-丙二醇基因工程菌E.coli-pSE-dhaT和短乳杆菌混合静止转化甘油高效生产1,3-丙二醇的方法按照下述步骤进行：
（1）挑取短乳杆菌(Lactobacillibrevis)斜面菌落于种子液培养基，37℃、160rpm振荡培养16h，OD600为3.0；
（2）将种子液以体积比2%的接种量接种到扩大培养基，37℃、160rpm振荡培养48h；
（3）将（2）中的发酵液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，离心后用细胞转化液重悬菌体，菌泥与细胞转化液质量体积比为1：1g/ml；
（4）将上述基因工程菌E.coli-pSE-dhaT接种于LB-Amp（LB-氨苄青霉素）培养基中，37℃振荡培养过夜，次日以2%的接种量将OD600为3.0的种子液转接至新鲜LB-Amp培养基中，37℃培养至菌体光密度值约为0.6时，加入IPTG（异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷）至终浓度0.6mmol/L进行诱导表达10h左右；取一定体积工程菌液8000rpm，4℃离心10min，收集菌泥，用0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液洗涤，并将菌泥与0.1mol/LpH6.8的磷酸钾缓冲液按质量体积比1：1g/ml重悬；
（5）将（3）和（4）按体积比1：1混合后进行转化，转化温度为37℃，160rpm振荡转化48h，4h取样，转化液中得到1,3-丙二醇。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于其中步骤（1）所述的种子液培养基组成如下：12g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，1‰吐温80，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4；短乳杆菌斜面培养基：12g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4，琼脂15g/L，其余为水。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于其中步骤（2）所述的扩大培养基组成如下：12g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，12g/L牛肉浸膏，16g/L葡萄糖，5g/L乙酸钠，2.15g/L柠檬酸铵，1‰吐温80，0.58g/LMgSO4·7H2O，0.05g/LMnSO4·4H2O，2.0g/LK2HPO4，甘油20g/L，辅酶B1225mg/L，其余为水。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于其中步骤（3）所述的细胞转化液组成如下：甘油40.0g/L，辅酶B1225mg/L，其余为水。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于其中步骤（4）所述的LB-Amp培养基组成如下：胰化蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，Amp（氨苄青霉素）50μg/L终浓度，其余为水。
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Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108060203B (zh) * | 2018-01-03 | 2020-03-31 | 江苏大学 | 一种全细胞混合转化甘油生产1,3-丙二醇的方法 |
| CN111394396B (zh) * | 2020-03-24 | 2022-04-08 | 江苏大学 | 一种微生物利用甘油发酵生产1,3-丙二醇的方法 |
| CN111996157B (zh) * | 2020-09-08 | 2022-07-08 | 齐鲁工业大学 | 一种高效生产1,3-丙二醇的基因工程菌及其构建方法与应用 |
| CN112226397B (zh) * | 2020-09-29 | 2022-05-31 | 江苏大学 | 一种高效联产3-羟基丙酸和1,3-丙二醇的多菌混合转化体系及建立方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003104471A1 (en) * | 2002-06-07 | 2003-12-18 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Medium for 1,3-propanediol production, process and mocroorganism |
| CN1298852C (zh) * | 1999-08-18 | 2007-02-07 | 纳幕尔杜邦公司 | 用于生产高效价1,3－丙二醇的生物学方法 |
| CN101063106A (zh) * | 2007-02-11 | 2007-10-31 | 华侨大学 | 产1,3－丙二醇氧化还原酶的工程菌及其酶制备方法 |
| CN100463968C (zh) * | 2006-01-27 | 2009-02-25 | 华侨大学 | 一种由生物催化转化甘油制备1,3-丙二醇和二羟基丙酮的方法 |
| CN101260379B (zh) * | 2008-04-23 | 2012-02-01 | 南京工业大学 | 一种产1,3-丙二醇基因工程菌及其制备方法和应用 |
-
2014
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1298852C (zh) * | 1999-08-18 | 2007-02-07 | 纳幕尔杜邦公司 | 用于生产高效价1,3－丙二醇的生物学方法 |
| WO2003104471A1 (en) * | 2002-06-07 | 2003-12-18 | GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) | Medium for 1,3-propanediol production, process and mocroorganism |
| CN100463968C (zh) * | 2006-01-27 | 2009-02-25 | 华侨大学 | 一种由生物催化转化甘油制备1,3-丙二醇和二羟基丙酮的方法 |
| CN101063106A (zh) * | 2007-02-11 | 2007-10-31 | 华侨大学 | 产1,3－丙二醇氧化还原酶的工程菌及其酶制备方法 |
| CN101260379B (zh) * | 2008-04-23 | 2012-02-01 | 南京工业大学 | 一种产1,3-丙二醇基因工程菌及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Lactobacillus brevis KB290 DNA, complete genome;Fukao, M.等;《GenBank Database》;20130329;Accession No. AP012167 * |
| 两种策略实现1,3-丙二醇关键酶基因的共表达;曲荟锦等;《北京化工大学学报(自然科学版)》;20070720;第34卷(第04期);第421-424页 * |
| 克雷伯氏菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达;周文广等;《广西农业生物科学》;20040630;第23卷(第02期);正文第2节 * |
| 克雷伯肺炎杆菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因克隆及表达条件研究;曲荟锦等;《工业微生物》;20070330;第37卷(第01期);第25-29页 * |
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| CN103789248A (zh) | 2014-05-14 |
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