CN103772339A - 一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括以下主要步骤：a、提取；b、浓缩；c、上大孔吸附树脂；d、上中压层析柱；e、减压浓缩；f、精制。本发明的有益技术效果：从茶叶下脚料中提取、分离、纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的全部过程均采用对设备和环境友好的乙醇水溶液作为溶剂，其兼容性及连续性增强，溶剂回收方便，能耗降低，生产周期缩短。一次性制备表没食子儿茶素没食子酸酯产品的量大大增加。
Description
技术领域
本发明涉及一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法。
背景技术
表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate，EGCG）是茶多酚中最有效的活性成分，属于儿茶素。EGCG具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用。绿茶里有EGCG，但红茶里没有。因为红茶里的EGCG被转化成了茶玉红精（Thearubigin）。EGCG在医药保健上具有防治癌症等多种疾病和增强免疫力等功能；在食品工业上可作抗氧、抑菌、保鲜、祛臭剂；在日化产品上作特殊功能的保质剂、护肤剂。
表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是从中国绿茶中提取的一种成份，它是绿茶主要的活性和水溶性成份，是儿茶素中含量最高的组分，占绿茶毛重的9%-13%，因为具有特殊的立体化学结构，EGCG具有非常强的抗氧化活性，抗氧化活性至少是维生素C的100多倍，是维生素E的25倍，能够保护细胞和DNA受损害，这种损害相信与癌症、心脏疾病和其他重大疾病有关，EGCG的这些功效归结于他们对氧自由基的清除（抗氧化）能力。
表没食子儿茶素没食子酸酯在抗癌和心血管疾病方面担当了重要的角色。此外，它也用作肿瘤多药耐药性的逆转剂，能够改善癌细胞对化疗的敏感性并减轻对心脏的毒性。
EGCG是绿茶茶多酚的主要组成成分，也是绿茶儿茶素类的主成分，儿茶素类包括EGCG、EGC、ECG、EC、GCG等，其中抗氧化活性依次为EC许多研究表明EGCG具有抗自由基DNA损害，抗辐射和紫外线，阻止油脂过氧化，减少血清中低密度 胆固醇、超低密度胆固醇和甘油三酯的含量，干扰癌细胞生存所需的信号传递，抑制饮食中的致癌物质，与肠、肝、和肺中的其他酶和抗氧化剂作用共同阻止某些致癌物质的活力，清除自由基，抵御污染、日晒和吸烟的影响，防治皮肤老化和起皱。
表没食子儿茶素没食子酸酯，即EGCG，可从绿茶中经过提取、分离、纯化精制而得。绿茶为山茶科植物茶的干燥叶，始载于《神农本草经》，药用历史悠久，是世界三大饮料之一，也是我国较早发现能治病的中草药之一。绿茶中含有多种活性成分，其中茶多酚约占18%～36%，而儿茶素为茶多酚的主要成分，包括表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯等，而表没食子儿茶素没食子酸酯约占儿茶素总量的50%。研究表明表没食子儿茶素没食子酸酯具有具有抗癌、抗突变、抗肿瘤形成、抗炎症、抗病毒、清除自由基和抗氧化等作用。目前表没食子儿茶素没食子酸酯主要应用于食品添加剂、保健品等产品，最近几年随着对表没食子儿茶素没食子酸酯研究的进一步深入，有关表没食子儿茶素没食子酸酯应用于医药领域的专利也越来越多。
由于从绿茶中提取出来的多酚类物质的化学结构与性质都很相似，常规分离方法很难将其分开，为表没食子儿茶素没食子酸酯的生产带来了一定的难度，特别是采取绿色环保的工艺生产难度将更大。
目前表没食子儿茶素没食子酸酯分离纯化的研究报道和专利都比较多，而且利用了很多新兴的分离制备技术，但主要还是以色谱分离为主。祖元刚等采用含量不低于50%表没食子儿茶素没食子酸酯的茶多酚为原料，使用中压硅胶填充柱，将层析硅胶用烃溶剂分散后装柱，酯溶剂溶样，烃溶剂与酯溶剂和甲酸的混合液为洗脱剂，柱塞式溶剂泵进液，洗脱后的流分分段收集，减压回收洗脱剂，浓缩物加去离子水溶解后，喷雾干燥，得纯度高于98%的表没食子儿茶素没食子酸酯产品。姜绍通等以Sephadex LH-20柱，不同浓度的乙醇为洗脱剂，进行柱层析，从5.8140g原料茶多酚中制得1.4280g表没食子儿茶素没食子酸酯。王瑞 芳等以茶提取物为原料，用35%～45%乙醇水溶液将其溶解后，先上超高交联吸附树脂柱，层析分离其它儿茶素组分，收集液再上极性大孔树脂柱脱色，滤滤浓缩后，再经SephadexLH-20柱层析进一步纯化，冷冻干燥，得表没食子儿茶素没食子酸酯单体，纯度大于90%，得率30%以上。王洪新等将10g儿茶素粗提物上SephadexLH-20柱（2.5cm×75cm），依次用水和30%，45%，60%，80%丙酮依次洗脱。含有儿茶素的组分再经半制备HPLC纯化后，得到7种纯度均在99%以上的儿茶素单体EGC，（+）-C，EC，EGCG，ECG，（+）-GCG和（+）-CG。沈生荣等称取1g茶叶提取物，加入3～4毫升的溶剂溶解，过滤，得红棕色溶液，在4℃～6℃低温下慢慢加入18～32毫升的结晶溶剂，待儿茶素结晶完全，搅拌使结块沉淀分散，放置，充氮真空抽滤，取滤渣。如此重复不少于7次，滤渣用蒸馏水溶解，制成浓度为15％的溶液，过SephadexLH-20柱，洗脱，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流分，绿色条带出尽后收集，40℃减压回收洗脱剂，冷冻干燥，可获纯度大于98％的表没食子儿茶素没食子酸酯产品。周春山等采用半制备HPLC技术，分离制备了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCC）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）3种酯型儿茶素单体，纯度分别为99.2％、99.4％、99.5％。张莹等用高速逆流色谱分离儿茶素，采用2组溶剂系统，一组是石油醚-乙酸乙酯-水（0.2:1:2）；另一组是正丁醇-乙酸乙酯-水（0.2:1:2）系统，进样量为4g绿茶提取物，用前一组溶剂系统，EC、EGCG、GCG和ECG得到了很好的分离，每一种单体的纯度达到了98%，其中表没食子儿茶素没食子酸酯达到99%；用后一组溶剂系统，EGC和±C得到了分离，纯度达到92%，其中表没食子儿茶素没食子酸酯单体得到1.2g。
目前采用色谱法或色谱串联使用法分离茶叶中儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯提高了表没食子儿茶素没食子酸酯的纯度，但其尚存在许多问题。
发明内容
本发明的目的是提供了一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法。
本发明一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇浸泡后搅拌并加热提取；
b、浓缩：将提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
本发明的一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇，浸泡后搅拌并加热提取三次，合并前两次提取液，其中第三次的提取液用于下一批次的提取液；
b、浓缩：将前两次的提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗一次，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
本发明的一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇，浸泡后搅拌并加热提取三次，合并前两次提取液，其中第三次的提取液用于下一批次的提取液；
b、浓缩：将前两次的提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗一次，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，低温冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
本发明一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法的有益技术效果：从茶叶下脚料中提取、分离、纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的全部过程均采用对设备和环境友好的乙醇水溶液作为溶剂，其兼容性及连续性增强，溶剂回收方便，能耗降低，生产周期缩短。且乙醇廉价无毒，可以重复使用，对环境没有污染，生产中企业对三废的处理成本也会大大降低。采用CG161M将主要酯型儿茶素表没食子儿茶素没食子酸酯与表儿茶素没食子酸酯一次性分离，降低了后续纯化难度。表没食子儿茶素没食子酸酯的制备过程采用柱层析技术，避免了采用半制备HPLC等对设备要求很高的工艺，也避免了半制备HPLC纯化溶剂带来的安全问题，且一次性制备表没食子儿茶素没食子酸酯产品的量大大增加。
附图说明
附图是一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法工艺流程图。
具体实施方式
实施例1：本发明一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇，浸泡后搅拌并加热提取三次，合并前两次提取液，其中第三次的提取液用于下一批次的提取液；b、浓缩：将前两次的提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗一次，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，低温冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
实施例2：本发明一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括以下主要步骤：
1、提取：将1KG茶叶下脚料粉碎至粗粉，放入提取罐中，每次加入60%的乙醇20L，浸泡1小时后搅拌并加热至80℃，保温30min，300目滤布过滤，得提取液，滤渣按上述条件重复提取两次，合并前两次提取液约35L，其中第三次的提取液约19L用于下一批次的提取液,。
2、浓缩：将前两次的提取液在50℃以下减压浓缩至无乙醇，得到约6L浓缩液。
3、D101大孔吸附树脂的处理：将10L D101大孔吸附树用95％的乙醇浸泡24小时，充分溶胀后，湿法装柱，用95％的乙醇冲洗至洗出液加水不显浑浊，并且在200nm～400nm检测无最大吸收为止，再改用大量水洗，直至无乙醇味，水浸泡备用。
4、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液以10L/h的速度室温通过D101大孔吸附树脂柱，其中后面的1L留下一批重复上柱用。用20L无离子水以10L/h速度洗一次，再用20%乙醇以10L/h速度洗脱40L，收集洗脱液；洗脱液50℃以下减压浓缩至无乙醇，得到大约22L浓缩液。
5、CG161M树脂的处理：将2KG CG161M装入中压柱中，压紧，用泵泵入乙醇洗脱除杂质，再用水洗至无乙醇。
6、上CG161M树脂柱：将减压浓缩液用恒流泵以50ml/min的速度泵入中压柱中，其中后面的2L留下一批重复上柱用。先用恒流泵以50ml/min的速度泵入水洗至流出液没有颜色，再用恒流泵以40ml/min的速度泵入30%乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，得到约20L洗脱液。
7、减压浓缩：洗脱液50℃以下减压浓缩至浸膏，零下40℃冷冻，30℃干燥，得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品约110g；
8、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品室温下用去离子水溶解成浓度为0.5g/ml的溶液，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上Sephadex LH-20凝胶柱，先用去离子水洗至无色，再用20%乙醇以0.8ml/min洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液50℃以下减压浓缩，零下40℃冷冻，30℃干燥，产品外观为白色粉末，称量为51.9g。密封真空包装，放入冰箱4℃保藏。
实施例3本发明一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括以下主要步骤：
1、提取：将10KG茶叶下脚料粉碎至粗粉，放入提取罐中，每次加入70%的乙醇180L，浸泡2小时后搅拌并加热至50℃，保温30min，300目滤布过滤，得提取液，滤渣按上述条件重复提取两次，合并前两次提取液约330L，其中第三次的提取液约172L用于下一批次的提取液,。
2、浓缩：将前两次的提取液在50℃以下减压浓缩至无乙醇，得到约65L浓缩液。
3、HPD100大孔吸附树脂的处理：将100L HPD100大孔吸附树用95％的乙醇浸泡24小时，充分溶胀后，湿法装柱，用95％的乙醇冲洗至洗出液加水不显浑浊，并且在200nm～400nm检测无最大吸收为止，再改用大量水洗，直至无醇味，水浸泡备用。
4、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液以30L/h的速度室温通过HPD100大孔吸附树脂柱，其中后面的10L留下一批重复上柱用。用200L无离子水以30L/h速度洗一次，再用40%乙醇以25L/h速度洗脱300L，收集洗脱液；洗脱液50℃以下减压浓缩至无乙醇，得到大约210L浓缩液。
5、CG161M树脂的处理：将10KG CG161M装入中压柱中，压紧，用泵泵入乙醇洗脱除杂质，再用水洗至无乙醇。
6、上CG161M树脂柱：将减压浓缩液用恒流泵以100ml/min的速度泵入中压柱中，其中后面的10L留下一批重复上柱用。先用恒流泵以100ml/min的速度泵入水洗至流出液没有颜色，再用恒流泵以80ml/min的速度泵入40%乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，得到约160L洗脱液。
7、减压浓缩：洗脱液70℃以下减压浓缩至浸膏，零下40℃冷冻，30℃干燥，得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品约1006g
8、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品室温下用去离子水溶解成浓度为0.5g/ml的溶液，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上Sephadex LH-20凝胶柱，先用去离子水洗至无色，再用20%乙醇以4ml/min洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液50℃以下减压浓缩，零下40℃冷冻，30℃干燥，产品外观为白色粉末，称量为522g。密封真空包装，放入冰箱4℃保藏。
实施例4本发明一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括以下主要步骤：
1、提取：将25KG茶叶下脚料粉碎至粗粉，放入提取罐中，每次加入80%的乙醇375L，浸泡1小时后搅拌并加热至50℃，保温30min，300目滤布过滤，得提取液，滤渣按上述条件重复提取两次，合并前两次提取液约715L，其中第三次的提取液约360L用于下一批次的提取液。
2、浓缩：将前两次的提取液在50℃以下减压浓缩至无乙醇，得到约125L浓缩液。
3、AB-8大孔吸附树脂的处理：将200L AB-8大孔吸附树用95％的乙醇浸泡24小时，充分溶胀后，湿法装柱，用95％的乙醇冲洗至洗出液加水不显浑浊，并且在200nm～400nm检测无最大吸收为止，再改用大量水洗，直至无乙醇味，水浸泡备用。
4、上AB-8大孔吸附树脂：将减压浓缩液以50L/h的速度室温通过AB-8大孔吸附树脂柱，其中后面的25L留下一批重复上柱用。用400L无离子水以50L/h速度洗一次，再用50%乙醇以30L/h速度洗脱600L，收集洗脱液；洗脱液50℃以下减压浓缩至无乙醇，得到大约220L浓缩液。
5、CG161M树脂的处理：将15KG CG161M装入中压柱中，压紧，用泵泵入乙醇洗脱除杂质，再用水洗至无乙醇。
6、上CG161M树脂柱：将减压浓缩液用恒流泵以200ml/min的速度泵入中压柱中，其中后面的40L留下一批重复上柱用。先用恒流泵以200ml/min的速度泵入水洗至流出液没有颜色，再用恒流泵以200ml/min的速度泵入50%乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，得到约500L洗脱液。
7、减压浓缩：洗脱液50℃以下减压浓缩至浸膏，零下40℃冷冻，30℃干燥，得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品约2500g；
8、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品室温下用去离子水溶解成浓度为0.5g/ml的溶液，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上Sephadex LH-20凝胶柱，先用去离子水洗至无色，再用30%乙醇以4ml/min洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液50℃以下减压浓缩，零下40℃冷冻，30℃干燥，产品外观为白色粉末，称量为1246g。密封真空包装，放入冰箱4℃保藏。
Claims (3)
1.一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇浸泡后搅拌并加热提取；
b、浓缩：将提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
2.按照权利要求1所述的一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇，浸泡后搅拌并加热提取三次，合并前两次提取液，其中第三次的提取液用于下一批次的提取液；
b、浓缩：将前两次的提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗一次，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
3.按照权利要求1所述的一种从茶叶下脚料中提取高含量的表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，其特征在于包括以下主要步骤：
a、提取：将茶叶下脚料粉碎后放入提取罐中，加入乙醇，浸泡后搅拌并加热提取三次，合并前两次提取液，其中第三次的提取液用于下一批次的提取液；
b、浓缩：将前两次的提取液减压浓缩至无乙醇；
c、上大孔吸附树脂：将减压浓缩液通过大孔吸附树脂柱，用无离子水洗一次，再用乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩至无乙醇；
d、上中压层析柱：将减压浓缩液用恒流泵泵入中压层析柱中，用水洗至流出液没有颜色，再用乙醇洗脱至检测器中无表没食子儿茶素没食子酸酯流出，并收集洗脱液；
e、减压浓缩：洗脱液减压浓缩至浸膏，低温冻干得表没食子儿茶素没食子酸酯粗品；
f、精制：将表没食子儿茶素没食子酸酯粗品用去离子水溶解，用孔径≤0.45um的微孔滤膜过滤，滤液上凝胶柱，先用水洗至无色，再用乙醇洗脱，在线检测收集表没食子儿茶素没食子酸酯的组分；洗脱液减压浓缩，低温冻干，得表没食子儿茶素没食子酸酯精品。
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