CN103751260B - 从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法。从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷,将大豆脐中的有效资源进行了进一步的回收利用,提高了资源利用率,产生了更高的价值,本发明方法大豆异黄酮提取率达2.0%,大豆皂苷提取率可达3.0%。
Description
技术领域
本发明涉及提取大豆异黄酮技术,特别是涉及一种从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法。
背景技术
异黄酮是黄酮类化合物中的一种,主要存在于豆科植物中,大豆异黄酮是大豆生长中形成的一类次级代谢产物。由于是从植物中提取,与雌激素有相似结构,因此大豆异黄酮又称植物雌激素,能够弥补30岁以后女性雌性激素分泌不足的缺陷,改善皮肤水分及弹性状况,缓解更年期综合症和改善骨质疏松,使女性再现青春魅力。大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性,是天然的癌症化学预防剂。
皂苷又名皂甙或皂素,是固醇类或三萜类化合物的低聚配糖体总称,因其水溶液能形成持久泡沫,象肥皂一样而得名,它广泛存在于植物和海洋动物体内。大豆皂苷是一种常见的皂苷,它主要存在于豆科植物中。豆类植物种子中大豆皂苷的含量一般在0.62%-6.16%之间。大豆皂苷不仅毒副作用很小,而且其本上还具有许多对人体健康有益的生理功能。
增强免疫调节功能:关于大豆皂苷增强免疫调节功能的作用机理在于:大豆皂苷对T细胞具有增强作用,特别是T细胞功能的增强,可以使IL一2(白介素)的分泌提高,而IL一2的功能可以保护T细胞的存活与繁殖。促进T细胞产生淋巴因子,增强诱杀性细胞NK(自然杀伤性细胞)的分化。提高LAK(淋巴因子激活的杀伤性细胞)的活性,从而生物体表现出较强的免疫功能。
抗肿瘤作用:国外学者曾发现大豆皂苷在150mL/kg-660mL/kg条件下,可抑制人类肿瘤细胞(HCT一15)的生成。国内学者李百祥等同研究结果表明,大豆皂苷对SGC一7901(人胃腺癌细胞)具有明显抑制作用。加拿大学者A.V.RADc7I对大豆皂苷的抗肿瘤作用机理总结为:①对肿瘤细胞有直接毒杀作用和生长抑制作用。②具有免疫调节功能。③大豆皂苷与胆汁酸相结合可以形成较大的混合微团,从而防止结肠癌的发生。④防止上皮细胞增生,使增生细胞正常化,从而起到杀伤肿瘤细胞的作用。
抗氧化、抗自由基的作用:研究发现,大豆皂苷能通过增加SOD (超氧化物歧化酶)的含量,降低LPO(过氧化脂质),清除自由基,减轻自由基的损害作用,促进修复。陈静的研究表明大豆皂苷可以降低x射线诱发遗传物质损伤的机率,可以通过减少辐射水解产物一自由基,加速自由基的代谢而起间接作用,LPO是自由基代谢产物。
抗凝血,抗血栓及抗糖尿病:大豆皂苷的抗凝血作用很早就被人们发现,通过对白鼠做实验,发现大豆皂苷可以抑制血小板凝聚,并使血纤维蛋白减少,还可以抑制体内毒索引起纤维蛋白的凝聚作用,并可以抑制凝血酶引起的血栓纤维蛋白的形成,这表明大豆皂苷具有抗血栓作用。经过大量动物实验还发现,大豆皂苷可以抑制纤维蛋白原向纤维蛋白转化,可降低血糖,血小板的凝聚率,有抗糖尿病的功效。
调节心脑血管系统:大豆皂甙可以调节中枢单胺类神经递质的释放,进而影响心律及血压,是极具前景的治疗心脑血管疾病的药物。
其他功能:关于大豆皂苷生理功能的研究报道还有很多:大豆皂苷可以促进人体内胆固醇和脂肪代谢;改善心肌供氧;提高肌体的耐缺氧功能;可以降脂减肥;可以加强中枢交感神经的活动;还有抗衰老,防止动脉粥样硬化;抗石棉尘毒性等作用。
大豆脐是大豆生产大豆低温粕脱皮过程中产生的,再经过多层筛选确保大豆脐的纯度。传统的方法是将大豆脐浸提后的大豆脐粕当做饲料处理掉,但是,大豆脐中仍然含有大量的大豆异黄酮和大豆皂苷,可作进一步提取,充分利用资源。
发明内容
本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法。
本发明从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法技术方案为,包括下述的步骤:
①将大豆脐用有机溶剂浸出,浸出后得大豆脐粕;
②加入醇类溶剂洗涤;
③经醇类洗涤后,加入复合蛋白酶得酶解浓缩蛋白和大豆蜜糖,酶解浓缩蛋白为功能性蛋白,蛋白含量达70%以上,细度在100目-200目;
④再经过大孔吸附树脂吸附后,得到粗大豆皂苷和粗大豆异黄酮。
⑤将步骤④得到的粗大豆皂苷和粗大豆异黄酮分别经酒精洗脱、分离、浓缩。
步骤①中大豆脐与有机溶剂的质量比为1:1-1:1.5。
步骤①中有机溶剂为正丁烷或正己烷。
步骤②中大豆脐粕与醇类溶剂的质量比为1:1-1.5。
步骤②中醇类溶剂为浓度为80%-90%的乙醇。
步骤③中添加质量比为0.01%-0.05%的复合蛋白酶。
酶解温度50℃-60℃,pH值在6.0-7.0,酶解6h-10h。在这个条件下酶解蛋白水解度较好,成本最低。采用复合蛋白酶酶解浓缩蛋白优点:比用单一的蛋白酶酶解效果好,水解度高,成本低。
步骤③中蛋白酶包括木瓜蛋白酶、复合风味蛋白酶、碱性内切酶。
步骤④中大孔树脂为ADS-7大孔树脂。
步骤⑤具体为:
步骤④得到的粗大豆皂苷加入60%-70%的酒精洗脱2-4遍,得大豆皂苷溶液溶液,浓缩后真空干燥,得大豆皂苷;
步骤④得到的粗豆异黄酮加入95%-98%的酒精洗脱2-4遍,得大豆异黄酮溶液,再经过浓缩后喷雾干燥得到大豆异黄酮。
ADS-7大孔树脂本身具有离子交换树脂的特性,所以树脂每使用一个周期后需用碱性溶液进行活化,在树脂解析完毕用水洗至无醇后,用事先配好的3%碱性溶液进行通柱,用量为2倍树脂体积,流速控制在0.8-1倍树脂体积每小时。然后用水洗至中性备用。
使用一定周期后树脂吸附能力明显下降后需要再强化再生,具体方法如下:
强化再生使用3%的碱性乙醇溶液进行冲洗树脂,用量为2倍树脂体积,一般情况下需要浸泡2小时左右进行通柱,通完后水洗至无醇(乙醇可回收);然后再用碱性水溶液进行活化树脂,方法同上。最后用水洗至中性备用。
所述水均为纯净水;
碱性乙醇调配方法:碱和水先按1:1的比例溶解,然后再溶在乙醇中;碱性乙醇现配现用。
ADS-7树脂还可以在有机溶剂中进行吸附,可提取脂溶性物质或去除提取物中某些杂质。具有良好的吸附选择性,最终得到大豆异黄酮含量可达40-60%,用该树脂同时提取大豆皂苷含量在35%-50%,该树脂兼具吸附和脱色(植物色素)双重功能,可以用来去除皂苷提取物中的色素,使脱色和纯化一步完成。 在水溶液中植物色素的去除率≥98%。
ADS-7树脂使用条件:
吸附流速:1-1.5BV/hr
常用洗脱溶剂:乙醇水溶液,乙醇,甲醇水溶液,甲醇,丙酮等。
洗脱流速:0.5-1.0 BV/hr
洗脱剂用量:2-5 BV
ADS-7树脂使用操作方法:
预处理:ADS-7树脂湿态装柱后,先用工艺水或具有一定纯度的水漂洗再用95%的乙醇浸泡24小时,然后小流量淋洗以脱除致孔剂或低聚物,终点以流出的乙醇加水不显混浊为标准。大量水洗净乙醇后,用2-3倍树脂体积的3-5%的盐酸处理,水洗到接近中性后用2-4倍树脂体积的3-5%的氢氧化钠处理,然后大量水洗至中性备用(所用水要为去离子水)。
再生处理:使用一定周期,树脂的吸附量明显下降后,用适量的4-6%的氢氧化钠水溶液淋洗树脂,也可根据树脂变色情况用氢氧化钠乙醇溶液深度处理,或根据具体情况灵活掌握(所用水要为去离子水)。
存储运输
密闭保湿保持含水率,存储温度0-40摄氏度。
本发明的有益效果为:本发明方法从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷,将大豆脐中的有效资源进行了进一步的回收利用,提高了资源利用率,产生了更高的价值,本发明方法大豆异黄酮提取率达2.0%,大豆皂苷提取率可达3.0%。
具体实施方式:
为了更好地理解本发明,下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案,但是本发明并不局限于此。
实施例1
本发明从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法为,包括下述的步骤:
①将大豆脐用正丁烷浸出,浸出后得大豆脐粕;大豆脐与正丁烷的质量比为1:1。
②加入80%-90%的乙醇溶液洗涤;大豆脐粕与乙醇溶液的质量比为1:1。
③经醇类洗涤后,加入质量比为0.03%的蛋白酶得酶解浓缩蛋白和大豆蜜糖,酶解浓缩蛋白为功能性蛋白,蛋白含量达70%以上,细度在100目-200目;酶解温度50℃-60℃,pH值在6.0-7.0,酶解6h-10h。
④再经过ADS-7大孔吸附树脂吸附后,得到粗大豆皂苷和粗大豆异黄酮。
⑤步骤④得到的粗大豆皂苷加入65%的酒精洗脱2-4遍,得大豆皂苷溶液溶液,浓缩后真空干燥,得大豆皂苷;
步骤④得到的粗豆异黄酮加入95%的酒精洗脱2-4遍,得大豆异黄酮溶液,再经过浓缩后喷雾干燥得到大豆异黄酮。
本发明方法大豆异黄酮提取率为1.8%,大豆皂苷提取率为3.0%。
实施例2
本发明从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法为,包括下述的步骤:
①将大豆脐用正丁烷浸出,浸出后得大豆脐粕;大豆脐与正丁烷的质量比为1:1.5。
②加入浓度为80%-90%的乙醇溶液洗涤;大豆脐粕与乙醇溶液的质量比为1.5。
③经醇类洗涤后,加入质量比为0.05%的蛋白酶得酶解浓缩蛋白和大豆蜜糖,酶解浓缩蛋白为功能性蛋白,蛋白含量达70%以上,细度在100目-200目;酶解温度50℃-60℃,pH值在6.0-7.0,酶解6h-10h。
④再经过ADS-7大孔吸附树脂吸附后,得到粗大豆皂苷和粗大豆异黄酮。
⑤步骤④得到的粗大豆皂苷加入70%的酒精洗脱2-4遍,得大豆皂苷溶液溶液,浓缩后真空干燥,得大豆皂苷;
步骤④得到的粗豆异黄酮加入98%的酒精洗脱2-4遍,得大豆异黄酮溶液,再经过浓缩后喷雾干燥得到大豆异黄酮。
本发明方法大豆异黄酮提取率为1.9%,大豆皂苷提取率为2.8%。
实施例3
本发明从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法为,包括下述的步骤:
①将大豆脐用正己烷浸出,浸出后得大豆脐粕;大豆脐与有机溶剂的质量比为1:1.2。
②加入浓度为90%的乙醇溶液洗涤;大豆脐粕与乙醇溶液的质量比为1:1.2。
③经醇类洗涤后,加入质量比为0.03%的蛋白酶得酶解浓缩蛋白和大豆蜜糖,酶解浓缩蛋白含量达70%以上,细度在100目-200目;酶解温度50℃-60℃,pH值在6.0-7.0,酶解6h-10h。
④再经过ADS-7大孔吸附树脂吸附后,得到粗大豆皂苷和粗大豆异黄酮。
⑤步骤④得到的粗大豆皂苷加入60%的酒精洗脱2-4遍,得大豆皂苷溶液溶液,浓缩后真空干燥,得大豆皂苷;
步骤④得到的粗豆异黄酮加入96%的酒精洗脱2-4遍,得大豆异黄酮溶液,再经过浓缩后喷雾干燥得到大豆异黄酮。
本发明方法大豆异黄酮提取率为1.7%,大豆皂苷提取率为2.3%。
Claims (2)
1.一种从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法,其特征在于,包括下述的步骤:
①将大豆脐用有机溶剂浸出,浸出后得大豆脐粕;大豆脐与有机溶剂的质量比为1:1-1:1.5,所述有机溶剂为正丁烷或正己烷;
②加入醇类溶剂洗涤,大豆脐粕与醇类溶剂的质量比为1:1-1.5,所述醇类溶剂为浓度为80%-90%的乙醇;
③经醇类洗涤后,加入质量比为0.01%-0.05%的复合蛋白酶得酶解浓缩蛋白和大豆糖蜜,酶解温度50℃-60℃,pH值在6.0-7.0,酶解6h-10h,酶解浓缩蛋白中蛋白含量达70%以上,细度在100目-200目;
④再经过ADS-7大孔吸附树脂吸附后,得到粗大豆皂苷和粗大豆异黄酮;
⑤步骤④得到的粗大豆皂苷加入60%-70%的酒精洗脱2-4遍,得大豆皂苷溶液溶液,浓缩后真空干燥,得大豆皂苷;
步骤④得到的粗豆异黄酮加入95%-98%的酒精洗脱2-4遍,得大豆异黄酮溶液,再经过浓缩后喷雾干燥得到大豆异黄酮。
2.根据权利要求1所述的从大豆脐中提取大豆异黄酮和大豆皂苷的方法,其特征在于,步骤③中蛋白酶包括木瓜蛋白酶、复合风味蛋白酶、碱性内切酶。
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