CN105707856B - 具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊及其制备方法 - Google Patents
具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊及其制备方法。李果经超声波‑微波分阶段联合提取、大孔树脂纯化、微胶囊化、真空冷冻干燥制备得李果提取物微胶囊；所述的李果提取物微胶囊含有20～50 wt%李果总酚；其中，结合态多酚占2～8 wt%，杨梅素占1～10 wt%，芦丁占1～10 wt%，檞皮素占0.2～1 wt%，山奈酚占0.1～1 wt%，阿魏酸占0.05～0.5 wt%，芥子酸占0.1～0.8 wt%。本发明的李果提取物微胶囊药效明显，制备方法简单，适宜规模化生产，且具有良好的加工贮藏稳定性，可为降尿酸功能营养食品和药品提供了一种新的原料来源。
Description
技术领域
本发明属于果蔬深加工技术领域，具体涉及一种具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊及其制备方法。
背景技术
高尿酸血症及痛风是当今社会的常见病、多发病，至今无法根治，研究表明长期高尿酸血症与高血压、糖尿病、冠心病、肾衰竭等密切相关。黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase，XOD)是介导尿酸生成的重要酶，能催化黄嘌呤和次黄嘌呤的氧化生成尿酸，同时产生过氧化物自由基。黄嘌呤氧化酶抑制剂可通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性，减少黄嘌呤及次黄嘌呤向尿酸盐的转化，从根本上减少尿酸的生成，从而达到治疗痛风的目的。在临床上抑制黄嘌呤氧化酶的药物包括别嘌呤醇、非布司他等，这些西药治疗虽然见效快，但副作用大，使其应用受到明显限制。如别嘌呤醇用后，病人会引起发热、腹痛、腹泻、过敏性皮疹、白细胞及血小板减少，甚至有肝功能损害等副作用。因此寻找新的低毒、高效的黄嘌呤氧化酶抑制剂显得尤为重要。天然产物来源的黄嘌呤氧化酶抑制剂毒性小，安全性高，引起了广泛关注。
许多文献已公开各种天然产物来源的黄嘌呤氧化酶抑制剂，如中药材夏枯草提取物（CN104997843）、中药组合物（CN1698858、CN102205083、CN101879193）、花生四烯酸（CN102133214）、山药、生姜和蒜等蔬菜提取物（CN102106516）、白果仁（CN103893225）、侧柏叶多酚（CN105055463）、秋刀鱼美拉德肽（CN104673865）等，然而目前尚未见以李果实提取物为原料的黄嘌呤氧化酶抑制剂或降尿酸组合物。此外，大部分天然产物来源的黄嘌呤氧化酶抑制剂主要有效成分主要是多酚、黄酮类化合物、活性肽等活性物质，在潮湿、高温、阳光等环境条件下极易发生氧化、聚合等反应，从而影响其贮藏稳定性，限制它们的应用范围，目前公开的文献中大部分未考虑天然黄嘌呤氧化酶抑制剂的加工贮藏稳定性。
李(Prunus salicina Lindl.)，是蔷薇科李属植物，是人们最喜欢的水果之一，在福建、广东等中国许多省市及世界各地均有栽培，为重要温带果树之一。目前李果已报道具有抗氧化，促进胃酸和胃消化酶的分泌等功效，但关于李果在抑制黄嘌呤氧化酶和降尿酸方面尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊及其制备方法。本发明的制备方法简单、高效；所制得的李果提取物微胶囊活性成分含量高，抑制黄嘌呤氧化酶功效明显，毒副作用小、制备工艺简单、加工贮藏性能好。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，含有20～50 wt%李果总酚；其中，结合态多酚占2～8 wt %，杨梅素占1～10 wt %，芦丁占1～10 wt %，檞皮素占0.2～1wt %，山奈酚占0.1～1 wt %，阿魏酸占0.05～0.5 wt %，芥子酸占0.1～0.8 wt %。
一种制备如上所述的李果提取物微胶囊的方法：将新鲜李果经预处理制得李果粉，然后经超声波-微波分阶段联合提取得到李果粗提液，再经真空浓缩、大孔树脂纯化得到李果多酚提取物，最后经微胶囊化、真空冷冻干燥制备得到李果提取物微胶囊。
具体制备步骤为：
1）预处理：挑选七八成熟的新鲜李果，经纯净水清洗，去核，切片，50℃热泵干燥至水份含量小于15wt%，再将干李果片粉碎至粒径小于2mm以下，制得李果粉；
2）李果粗提液的制备：李果粉先用超声波提取，以40～80 %（v/v）乙醇溶液作为提取溶剂，提取温度为50℃，李果粉:乙醇=1g:15mL，超声波功率为100~400W，提取时间为20~60min，100目筛过滤得李果粗提液Ⅰ；滤渣再用微波萃取，微波萃取参数为：滤渣中加入滤渣质量10～20倍体积的60-80%（v/v）乙醇溶液，在微波功率400-600W下处理5-8min，采用间断微波处理，微波40s，暂停20s，微波萃取后100目筛过滤得李果粗提液Ⅱ；合并李果粗提液Ⅰ和李果粗提液Ⅱ得到李果粗提液；
3）李果多酚提取物的制备：李果粗提液经40℃真空浓缩去除乙醇，真空度为0.01MPa～0.06MPa；再经AB-8大孔树脂纯化李果提取液，蒸馏水洗树脂，80%（v/v）乙醇溶液解吸洗脱，洗脱液40℃真空浓缩，真空冷冻干燥制备得李果多酚提取物；
4）微胶囊化：以明胶和羧甲基纤维素为复合壁材，以李果多酚提取物为芯材，采用复凝聚法制备李果多酚微胶囊；芯材与壁材的质量比为l:1~3，明胶与羧甲基纤维素的质量比为4~6:1；具体为：将2~4wt%明胶水溶液在50℃热水浴中以1500r/min转速搅拌溶解15min，将乙醇溶解后的李果多酚提取物以1500r/min转速边搅拌边加入至明胶溶液中，再将羧甲基纤维素用水溶解后缓慢加入；用10%（v/v）冰醋酸调节pH值至4.5，在45℃下恒温反应20min，于冰水浴中搅拌冷却至10℃以下，加入37%（v/v）甲醛溶液固化15min，用10wt%NaOH溶液调pH 8～9，固化l h，抽滤、洗涤至中性，再抽滤，真空冷冻干燥后即得李果提取物微胶囊。
一种如上所述的具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊在制备降尿酸功能营养食品或辅助治疗高尿酸血症及痛风的药物中的应用。
本发明所述的李果为芙蓉李、胭脂李的一种；或其副产物（小果、异形果等）。
本发明的显著优点在于：
（1）本发明从李果分离提取出天然、副作物小的黄嘌呤氧化酶抑制剂；该李果提取物微胶囊药效明显，制备方法简单，适宜规模化生产，为降尿酸功能营养食品和药品提供了一种新的天然原料来源；
（2）本发明利用复凝聚法制备李果黄嘌呤氧化酶抑制剂微胶囊，提高李果黄嘌呤氧化酶抑制剂贮藏稳定性，拓宽其应用范围；本发明提供的李果提取物微胶囊，其主要活性物质主要是酚类物质，其中游离态多酚占80%以上，容易受高温、高湿等不利环境影响而遭到破坏，采用操作简单、反应条件温和的复凝聚法制备李果提取物微胶囊，既可减少功能因子在加工或贮藏过程中的损失，又能减少活性物质在人体胃肠消化过程中受胃酸、胃酶的破坏。
具体实施方式
一种具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，含有20～50 wt%李果总酚；其中，结合态多酚占2～8 wt %，杨梅素占1～10 wt %，芦丁占1～10 wt %，檞皮素占0.2～1wt %，山奈酚占0.1～1 wt %，阿魏酸占0.05～0.5 wt %，芥子酸占0.1～0.8 wt %。
一种制备如上所述的李果提取物微胶囊的方法：将新鲜李果经预处理制得李果粉，然后经超声波-微波分阶段联合提取得到李果粗提液，再经真空浓缩、大孔树脂纯化得到李果多酚提取物，最后经微胶囊化、真空冷冻干燥制备得到李果提取物微胶囊。
具体制备步骤为：
1）预处理：挑选七八成熟的新鲜李果，经纯净水清洗，去核，切片，50℃热泵干燥至水份含量小于15wt%，再将干李果片粉碎至粒径小于2mm以下，制得李果粉；
2）李果粗提液的制备：李果粉先用超声波提取，以40～80 %（v/v）乙醇溶液作为提取溶剂，提取温度为50℃，李果粉:乙醇=1g:15mL，超声波功率为100~400W，提取时间为20~60min，100目筛过滤得李果粗提液Ⅰ；滤渣再用微波萃取，微波萃取参数为：滤渣中加入滤渣质量10～20倍体积的60-80%（v/v）乙醇溶液，在微波功率400-600W下处理5-8min，采用间断微波处理，微波40s，暂停20s，微波萃取后100目筛过滤得李果粗提液Ⅱ；合并李果粗提液Ⅰ和李果粗提液Ⅱ得到李果粗提液；
3）李果多酚提取物的制备：李果粗提液经40℃真空浓缩去除乙醇，真空度为0.01MPa～0.06MPa；再经AB-8大孔树脂纯化李果提取液，蒸馏水洗树脂，80%（v/v）乙醇溶液解吸洗脱，洗脱液40℃真空浓缩，真空冷冻干燥制备得李果多酚提取物；
4）微胶囊化：以明胶和羧甲基纤维素为复合壁材，以李果多酚提取物为芯材，采用复凝聚法制备李果多酚微胶囊；芯材与壁材的质量比为l:1~3，明胶与羧甲基纤维素的质量比为4~6:1；具体为：将2~4wt%明胶水溶液在50℃热水浴中以1500r/min转速搅拌溶解15min，将乙醇溶解后的李果多酚提取物以1500r/min转速边搅拌边加入至明胶溶液中，再将羧甲基纤维素用水溶解后缓慢加入；用10%（v/v）冰醋酸调节pH值至4.5，在45℃下恒温反应20min，于冰水浴中搅拌冷却至10℃以下，加入37%（v/v）甲醛溶液固化15min，用10wt%NaOH溶液调pH 8～9，固化l h，抽滤、洗涤至中性，再抽滤，真空冷冻干燥后即得李果提取物微胶囊。
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
李果提取物微胶囊的制备方法为：
（1）挑选七八成熟的新鲜芙蓉李果实，经干净水清洗，去核，切片，50℃热泵干燥至水份含量14%，再将干李果片粉碎至粒径小于2mm以下；
（2）李果粉先用超声波提取，以80%（v/v）乙醇作为提取溶剂，提取温度为50℃，李果粉:乙醇=1g:15mL，超声波功率为400W，提取时间为20min，100目筛过滤得李果粗提液Ⅰ，滤渣再用微波萃取；微波萃取参数为：滤渣中加入滤渣质量20倍体积的60%（v/v）乙醇，在微波功率400W下处理8min，采用间断微波处理，微波40s，暂停20s，微波萃取后100目筛过滤得李果粗提液Ⅱ；合并李果粗提液Ⅰ和李果粗提液Ⅱ得到李果粗提液；
（3）李果粗提液经40℃真空浓缩去除乙醇，真空度为0.03MPa；再经AB-8大孔树脂纯化李果提取液，蒸馏水洗树脂，80%（v/v）乙醇溶液解吸洗脱，洗脱液40℃真空浓缩至原洗脱液的50%以下，真空冷冻干燥制备得李果多酚提取物；
（4）以明胶和羧甲基纤维素(CMC)为壁材，采用复凝聚法制备李果多酚微胶囊；将明胶加入水中，在50℃热水浴中以1500r/min转速搅拌15min，制得2wt%的明胶溶液；称取李果多酚提取物后，乙醇溶解，以1500r/min转速边搅拌边加入至明胶溶液中，再将羧甲基纤维素热水溶解缓慢加入，芯材:壁材=l:3，明胶与羧甲基纤维素质量比为4:1；用10%（v/v）冰醋酸调节pH值至4.5，在45℃下恒温反应20min，于冰水浴中搅拌冷却至10℃以下，加入37%（v/v）甲醛溶液固化15min ，用10wt%NaOH溶液调pH 9，固化l h，抽滤、洗涤至中性，再抽滤，真空冷冻干燥后即得李果多酚组合物（微胶囊产品）。
制备的李果提取物微胶囊含有李果总酚22.65wt%；其中结合态多酚占2.72 wt %，杨梅素占1.26 wt %，芦丁占1.19 wt %，檞皮素占0.27 wt %，山奈酚占0.19 wt %，阿魏酸占0.06 wt %，芥子酸占0.11 wt %。
该李果提取物微胶囊对黄嘌呤氧化酶抑制率达47.36%。
实施例2
李果提取物微胶囊的制备方法为：
（1）挑选七八成熟的新鲜胭脂李果实，经干净水清洗，去核，切片，50℃热泵干燥至水份含量小于15wt%，再将干李果片粉碎至粒径小于2mm以下；
（2）李果粉先用超声波提取，以40%（v/v）乙醇作为提取溶剂，提取温度为50℃，李果粉:乙醇=1g:15mL，超声波功率为100W，提取时间为60min，100目筛过滤得李果粗提液Ⅰ，滤渣再用微波萃取；微波萃取参数为：滤渣中加入滤渣质量10倍体积的80%（v/v）乙醇，在微波功率600W下处理5min，采用间断微波处理，微波40s，暂停20s，微波萃取后100目筛过滤得李果粗提液Ⅱ；合并李果粗提液Ⅰ和李果粗提液Ⅱ得到李果粗提液；
（3）李果粗提液经40℃真空浓缩去除乙醇，真空度为0.06MPa；再经AB-8大孔树脂纯化李果提取液，蒸馏水洗树脂，80%（v/v）乙醇溶液解吸洗脱，洗脱液40℃真空浓缩至原洗脱液的50%以下，真空冷冻干燥制备得李果多酚提取物；
（4）以明胶和羧甲基纤维素(CMC)为壁材，采用复凝聚法制备李果多酚微胶囊；将明胶加入水中，在50℃热水浴中以1500r/min转速搅拌15min，制得4wt%的明胶溶液；称取李果多酚提取物后，乙醇溶解，以1500r/min转速边搅拌边加入至明胶溶液中，再将羧甲基纤维素热水溶解缓慢加入，芯材:壁材=l:1，明胶与羧甲基纤维素质量比为6:1；用10%（v/v）冰醋酸调节pH值至4.5，在45℃下恒温反应20min，于冰水浴中搅拌冷却至10℃以下，加入37%（v/v）甲醛溶液固化15min ，用10wt%NaOH 溶液调pH 8，固化l h，抽滤、洗涤至中性，再抽滤，真空冷冻干燥后即得李果多酚提取物（微胶囊产品）；
制备的李果提取物微胶囊含有李果总酚48.41wt%，其中，结合态多酚占5.16 wt%，杨梅素占8.64 wt %，芦丁占8.39 wt %，檞皮素占0.91 wt %，山奈酚占0.84 wt %，阿魏酸占0.34 wt %，芥子酸占0.27 wt %。
李果提取物微胶囊对黄嘌呤氧化酶抑制率达81.22%。
实施例3
李果提取物微胶囊的制备方法为：
（1）挑选七八成熟的新鲜芙蓉李果实，经干净水清洗，去核，切片，50℃热泵干燥至水份含量10%，再将干李果片粉碎至粒径小于2mm以下；
（2）李果粉先用超声波提取，以60%（v/v）乙醇作为提取溶剂，提取温度为50℃，李果粉:乙醇=1g:15mL，超声波功率为300W，提取时间为30min，100目筛过滤得李果粗提液Ⅰ，滤渣再用微波萃取；微波萃取参数为：滤渣中加入滤渣质量15倍体积的70%（v/v）乙醇，在微波功率500W下处理6min，采用间断微波处理，微波40s，暂停20s，微波萃取后100目筛过滤得李果粗提液Ⅱ；合并李果粗提液Ⅰ和李果粗提液Ⅱ得到李果粗提液；
（3）李果粗提液经40℃真空浓缩去除乙醇，真空度为0.01MPa；再经AB-8大孔树脂纯化李果提取液，蒸馏水洗树脂，80%（v/v）乙醇溶液解吸洗脱，洗脱液40℃真空浓缩至原洗脱液的50%以下，真空冷冻干燥制备得李果多酚提取物；
（4）以明胶和羧甲基纤维素(CMC)为壁材，采用复凝聚法制备李果多酚微胶囊；将明胶加入水中，在50℃热水浴中以1500r/min转速搅拌15min，制得3wt%的明胶溶液；称取李果多酚提取物后，乙醇溶解，以1500r/min转速边搅拌边加入至明胶溶液中，再将羧甲基纤维素热水溶解缓慢加入，芯材:壁材=l:2，明胶与羧甲基纤维素质量比为5:1；用10%（v/v）冰醋酸调节pH值至4.5，在45℃下恒温反应20min，于冰水浴中搅拌冷却至10℃以下，加入37%（v/v）甲醛溶液固化15min，用10wt%NaOH 溶液调pH 9，固化l h，抽滤、洗涤至中性，再抽滤，真空冷冻干燥后即得李果多酚提取物（微胶囊产品）；
制备的李果提取物含有李果总酚30.66wt%；其中，结合态多酚占3.46 wt %，杨梅素占4.54 wt %，芦丁占3.16 wt %，檞皮素占0.46 wt %，山奈酚占0.37 wt %，阿魏酸占0.14 wt %，芥子酸占0.31 wt %。
李果提取物微胶囊对黄嘌呤氧化酶抑制率达69.57%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (5)
1.一种具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，其特征在于：所述的李果提取物微胶囊含有20～50 wt%李果总酚；其中，结合态多酚占2～8 wt %，杨梅素占1～10 wt %，芦丁占1～10 wt %，檞皮素占0.2～1 wt %，山奈酚占0.1～1 wt %，阿魏酸占0.05～0.5 wt%，芥子酸占0.1～0.8 wt %；其制备方法为：将新鲜李果经预处理制得李果粉，然后经超声波-微波分阶段联合提取得到李果粗提液，再经真空浓缩、大孔树脂纯化得到李果多酚提取物，最后经微胶囊化、真空冷冻干燥制备得到李果提取物微胶囊；所述的微胶囊化是以明胶和羧甲基纤维素为复合壁材，以李果多酚提取物为芯材，采用复凝聚法制备李果多酚微胶囊；芯材与壁材的质量比为l:1~3，明胶与羧甲基纤维素的质量比为4~6:1；所述的微胶囊化具体为：将2~4wt%明胶水溶液在50℃热水浴中以1500r/min转速搅拌溶解15min，将乙醇溶解后的李果多酚提取物以1500r/min转速边搅拌边加入至明胶溶液中，再将羧甲基纤维素用水溶解后缓慢加入；用10%（v/v）冰醋酸调节pH值至4.5，在45℃下恒温反应20min，于冰水浴中搅拌冷却至10℃以下，加入37%（v/v）甲醛溶液固化15min，用10wt%NaOH溶液调pH 8～9，固化l h，抽滤、洗涤至中性，再抽滤，真空冷冻干燥后即得李果提取物微胶囊。
2.根据权利要求1所述的具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，其特征在于：所述的预处理为：挑选七八成熟的新鲜李果，经纯净水清洗，去核，切片，50℃热泵干燥至水份含量小于15wt%，再将干李果片粉碎至粒径小于2mm以下，制得李果粉。
3.根据权利要求1所述的具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，其特征在于：所述的李果包括芙蓉李、胭脂李中的一种。
4.根据权利要求1所述的具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，其特征在于：李果粗提液的制备方法为：李果粉先用超声波提取，以40～80 %（v/v）乙醇溶液作为提取溶剂，提取温度为50℃，李果粉:乙醇=1g:15mL，超声波功率为100~400W，提取时间为20~60min，100目筛过滤得李果粗提液Ⅰ；滤渣再用微波萃取，微波萃取参数为：滤渣中加入滤渣质量10～20倍体积的60-80%（v/v）乙醇，在微波功率400-600W下处理5-8min，采用间断微波处理，微波40s，暂停20s，微波萃取后100目筛过滤得李果粗提液Ⅱ；合并李果粗提液Ⅰ和李果粗提液Ⅱ得到李果粗提液。
5.根据权利要求1所述的具有抑制黄嘌呤氧化酶的李果提取物微胶囊，其特征在于：李果多酚提取物的制备方法为：李果粗提液经40℃真空浓缩去除乙醇，真空度为0.01MPa～0.06MPa；再经AB-8大孔树脂纯化李果提取液，蒸馏水洗树脂，80%（v/v）乙醇溶液解吸洗脱，洗脱液40℃真空浓缩，真空冷冻干燥制备得李果多酚提取物。
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