CN103736096B

CN103736096B - 一种含紫杉醇的组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN103736096B
Application number: CN201310676256.XA
Authority: CN
Inventors: 刘新红; 李宏; 岳昌林; 晏敏红
Original assignee: JIANGSU JIUXU PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: JIANGSU JIUXU PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2013-12-11
Filing date: 2013-12-11
Publication date: 2015-11-18
Anticipated expiration: 2033-12-11
Also published as: CN103736096A

Abstract

本发明涉及抗肿瘤药物技术领域，公开了一种含紫杉醇的组合物及其制备方法。所述含紫杉醇的组合物，包括1重量份的紫杉醇和1.2～15重量份的蛋黄卵磷脂，所述组合物的pH值范围为4.0～6.0。在本发明含紫杉醇的组合物中，采用蛋黄卵磷脂作为乳化剂，并调整组合物的pH值至合适范围，而不采用毒性较大的聚氧乙烯蓖麻油，不含乙醇，降低了含紫杉醇的组合物的用药风险，提高了患者的顺应性。

Description

一种含紫杉醇的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物技术领域，特别是涉及一种含紫杉醇的组合物及其制备方法。

背景技术

紫杉醇（Paclitaxel）是20世纪末由美国施贵宝公司开发的一种天然抗癌药物，属细胞抑制剂类药物，其作用机理独特，对很多耐药病人有效，可促进微管蛋白装配成微管，但抑制微管的解聚，使微管稳定，从而导致微管束的排列异常，使纺垂体失去正常功能导致细胞死亡，对乳腺癌、卵巢癌疗效突出，另外，对肝癌、肺癌、食管癌、头颈部癌和前列腺癌也有一定疗效。

现有技术的紫杉醇注射液是溶液型注射剂，具体采用无水乙醇和聚氧乙烯蓖麻油按1：1比例制成的注射液，其中乙醇具有明显刺激性，辅料聚氧乙烯蓖麻油具有明显的毒性，临床表现为严重的过敏反应，为避免过敏反应，使用前30分钟常需要预先静脉注射5-10mg（毫克）地塞米松、300mg西咪替丁；或者肌肉注射50mg苯海拉明，且要进行临床监护，同时乙醇和聚氧乙烯蓖麻油混合溶剂在给药过程中会溶解输液管中的增塑剂，因此，现有的紫杉醇注射液用药安全风险高，患者顺应性很差。

发明内容

本发明提供一种含紫衫醇的组合物及其制备方法，用以降低紫杉醇组合物的用药风险，提高患者的顺应性。

本发明含紫衫醇的组合物，以质量百分比计，包括1重量份的紫杉醇和1.2～15重量份的蛋黄卵磷脂，所述组合物的pH值范围为4.0～6.0。

在本发明技术方案中，采用蛋黄卵磷脂作为乳化剂，而不采用毒性较大的聚氧乙烯蓖麻油，降低了含紫杉醇的组合物的用药风险，提高了患者的顺应性，另外，由于紫杉醇是一种对碱敏感的药物，因此限定含紫杉醇的组合物的pH范围为4.0～6.0的酸性范围，通常磷脂在酸性条件下很难成乳，而优选的蛋黄卵磷脂PL100却具有独特的成膜效果，使得它能够在酸性环境下在水相和油相形成牢固质膜，且能够保护乳粒不因热压灭菌而破乳出油、聚集变大，可以防止药物降解，并且经试验证明，蛋黄卵磷脂可以避免溶血反应。

优选的，以质量百分比计，所述蛋黄卵磷脂含有80%～85%磷脂酰胆碱和15%～18%磷脂酰乙醇胺。

蛋黄卵磷脂的主要成分为磷脂酰胆碱（Phosphatidylcholine，简称PC）和磷脂酰乙醇胺（Phosphatidylethanolamine，简称PE），PC和PE在蛋黄卵磷脂中的含量也会影响蛋黄卵磷脂的作为乳化剂的乳化效果，进而影响乳液的稳定性。

优选的，所述的含紫杉醇的组合物，还包括0.002～0.025重量份的乙二胺四乙酸盐、20～250重量份的中链油、0.8～7重量份的稳定剂、2.2～27.5重量份的等渗调节剂和0.03～0.375重量份的抗氧剂。

乙二胺四乙酸盐作为一种络合剂，可以避免金属离子对乳化剂如磷脂的氧化催化作用，从而可以降低产品的甲氧基苯胺值，降低甲氧基苯胺值过高对肝脏的损害，当乙二胺四乙酸盐的含量较少时，产品中的甲氧基苯胺值升高，乙二胺四乙酸盐可以为乙二胺四乙酸钙钠，抗氧剂也进一步降低含有不饱和键的中链油氧化形成过氧化物，进而降低甲氧基苯胺值。

优选的，所述稳定剂包括油酸、油酸钠、聚乙二醇400中的一种或几种；所述等渗调节剂为甘油；所述抗氧剂为维生素E（VitaminE，简称VE）。

优选的，所述组合物为注射剂。

上述组合物形成注射剂，方便注射进入生物体内，提高用药的便携性。

优选的，所述注射剂为脂肪乳注射液，包括1重量份的紫杉醇、15重量份的蛋黄卵磷脂、0.025重量份的乙二胺四乙酸盐、250重量份的中链油、0.75重量份作为稳定剂的油酸、6.25重量份作为稳定剂的聚乙二醇400、27.5重量份的等渗调节剂和0.375重量份的抗氧剂，900～1000重量份的注射用水，并且使用枸橼酸或盐酸调节pH值的范围为4.5～5.5。

聚乙二醇400（PolyethyleneGlycol400，简称为PEG400）促进了蛋黄卵磷脂亲水基团与水相的结合效果，避免了脂肪乳注射液有效期内药物析出，保证包封率，提高了药物效期内稳定性，因此提高了脂肪乳注射液或下述冻干乳剂的载药量，减少了临床用药体积。对于脂肪乳注射液来说，偏碱性的体系利于获得均匀且稳定的乳粒，但不利于碱敏感药物，而偏酸性体系制成脂肪乳注射液后存储期乳粒易絮凝变大，造成脂肪乳注射液不稳定，而紫杉醇是一个对碱敏感的物质，既要保证得到合适乳粒和体系长期稳定的乳液，又要防止药物降解，因而在脂肪乳注射液的制备和热压灭菌过程中对乳液酸碱度要求苛刻，本发明经多次试验，优选采用高压均质前pH值为5.0-6.0，灭菌前pH值为4.5～5.5；上述组合物可耐受热压灭菌，且灭菌后制成脂肪乳注射液

优选的，所述注射剂为冻干乳剂，包括1重量份的紫杉醇、1.2重量份的蛋黄卵磷脂、0.002重量份的乙二胺四乙酸盐、20重量份的中链油、0.3重量份作为稳定剂的油酸钠、0.5重量份作为稳定剂的聚乙二醇400、2.2重量份的等渗调节剂和0.03重量份的抗氧剂，90～110重量份的冻干赋形剂，并且使用枸橼酸或盐酸调节pH值为5.0～6.0。

冻干乳剂与脂肪乳注射液相比，冻干乳剂轻便，能够在较高的温度下存放，降低了低温储存和冷链运输的成本。

优选的，所述冻干赋形剂包括海藻糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇和葡萄糖中的一种或几种。

冻干赋形剂的种类有很多，优选的冻干赋形剂为海藻糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、葡萄糖，不同于自然界中其他的糖类和赋形剂，它们具有低温、高渗透压及干燥失水条件下在细胞表面形成保护膜的能力，由于这一独特的功能特性，使得它们能够在乳粒表面形成保护膜，经受低温冷冻和干燥失水后仍能水溶复原，且乳粒形态、大小保持完好；并且，可使冻干乳剂复溶后粒径不变，保持了冻干前乳剂的特征。较佳的，采用葡萄糖或甘露醇作为冻干赋形剂。

乳剂型注射剂，包括上述脂肪乳注射液，以及上述冻干乳剂复溶后形成的注射液，与市售的溶液型注射剂相比，在抗肿瘤药物应用中具有靶向性，药物能够最大限度地富集在肿瘤部位，提高临床疗效，相应减少了肿瘤药物普遍存在的全身毒副反应。因此，本发明的含紫杉醇的组合物适于制备形成脂肪乳注射液和冻干乳剂，增强抗肿瘤效果。

本发明提供一种制备上述含紫杉醇的组合物作为注射液的方法，包括：

将等渗调节剂、乙二胺四乙酸盐和聚乙二醇400用水溶解，形成水相溶液；

将紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂、抗氧剂和油酸混合形成混合液，将所述混合液进行高速剪切，挥发乙醇，形成油相溶液；

在高速剪切下将油相加入水相，形成初乳；

调节初乳的pH值至5.0～6.0；

将调节pH值后的初乳进行高压均质形成均质液；

调节所述均质液的pH值至4.5～5.5；

将调节pH值后的均质液进行灌封，并在121℃、F0>12条件下进行灭菌处理。

在本发明紫杉醇注射液的制备方法中，在高压均质乳化过程中pH值5.0～6.0，降低了乳化过程中对药物碱的破坏降解；在灭菌前调整均质液的pH值至4.5～5.5，提高了注射液的热稳定性，满足终端灭菌要求，提高注射液的无菌保证水平。

本发明一种制备上述含紫杉醇的组合物作为冻干乳剂的方法，包括：

将等渗调节剂、乙二胺四乙酸盐、聚乙二醇400和油酸用水溶解，形成水相溶液；

将紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂和抗氧剂混合形成混合液，将所述混合液进行高速剪切，挥发乙醇，形成油相溶液；

在高速剪切下将油相加入水相，形成初乳，调节初乳的pH值至5.0～6.0；

将调节pH值后的初乳进行高压均质形成均质液；

采用注射用水对均质液进行稀释5～20倍，形成稀释液；

在稀释液中加入冻干赋形剂进行搅拌溶解，形成溶解液；

对溶解液进行除菌过滤、灌装和冷冻干燥处理。

冻干前乳液，即均质液，先经过倍增稀释工艺再冻干，倍增稀释是乳剂冻干能否实现的关键环节之一，乳化形成的乳液直接通过加入冻干赋形剂无法实现冻干后合理的外观、粒径，而经过稀释5～20倍形成稀释液后再冻干，使得药品中附加剂的含量急剧降低，提高了药物临床应用安全性。更优选的稀释倍数为10～15倍。

本发明还涉及上述紫杉醇组合物在乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、食管癌、头颈部癌和前列腺癌等肿瘤中的应用。

具体实施方式

为了降低紫杉醇组合物的用药风险，提高患者的顺应性，本发明实施例提供了一种紫杉醇组合物及其制备方法，在该技术方案中，采用蛋黄卵磷脂作为乳化剂，由于蛋黄卵磷脂为适合临床应用的天然乳化剂，相比于其他乳化剂可以避免临床溶血，因此，降低紫杉醇组合物的用药风险，提高患者的顺应性。为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，以下举实施例对本发明作进一步详细说明。

蛋黄卵磷脂与其他乳化剂的溶血试验

溶血实验方法：取新西兰家兔1只，于颈动脉取血10mL（毫升），除去纤维蛋白原，加等量生理盐水，2000rpm*10min离心，倾去上清液，加入红细胞压积5倍的生理盐水，2000rpm*10min离心，倾去上清液，如此反复至上清液无红色后。取2000rpm压积兔红细胞1mL，加生理盐水混悬至50mL（2%兔红细胞生理盐水混悬液）供试验用；分别取含表1所示量的大豆卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油和蛋黄卵磷脂的注射剂作为供试液，进行溶血试验，其中，含大豆卵磷脂的乳剂型注射剂，含蛋黄卵磷脂的乳剂型注射剂，含聚氧乙烯蓖麻油的溶液型注射剂，均来自浙江九旭药业有限公司，表1中用量为大豆卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油和蛋黄卵磷脂在注射剂中的重量份数。结果如表1所示。

表1蛋黄卵磷脂和其他乳化剂溶血试验比较表

种类	用量	平均粒径	90%粒径	溶血结果
					大豆磷脂	15重量份	160nm±10nm	280nm±20nm	溶血
聚氧乙烯蓖麻油	80重量份	/	/	溶血
					蛋黄卵磷脂	15重量份	150nm±10nm	250nm±20nm	不溶血

从表1可知，含大豆磷脂和聚氧乙烯蓖麻油的注射剂具有明显的溶血副作用，而含蛋黄卵磷脂的乳剂型注射剂未显示溶血现象。

不同类型的蛋黄卵磷脂作为乳化剂的试验

蛋黄卵磷脂PC98购自日本丘比工业株式会社，含有≥98%的磷脂酰胆碱和≤2%磷脂酰乙醇胺；蛋黄卵磷脂PL100购自日本丘比工业株式会社，含有70%～85%的磷脂酰胆碱和12%～18%磷脂酰乙醇胺；蛋黄卵磷脂E80购自德国Lipoid公司，含有72%～85%的磷脂酰胆碱和5%～10%磷脂酰乙醇胺。按照表2所示条件以不同类型的蛋黄卵磷脂制作乳液。乳液的制备方法如下：按重量份计，将27.5份甘油、0.025份乙二胺四乙酸钙钠和6.25份聚乙二醇400用水溶解，形成水相溶液；将1份紫杉醇用少许无水乙醇润湿和250份中链油、15份蛋黄卵磷脂、0.375份VE、0.75份油酸混合液进行高速剪切，挥发乙醇形成油相溶液；在12000rpm高速剪切下将油相加入水相，形成初乳；调节pH值至5.5，800bar高压均质形成均质液，调节pH值至5.0；灌封于安瓿中，在121℃、F0>12灭菌即得。采用马尔文公司的激光粒度测定仪对乳液粒径进行检测，下述粒径检测方法与此相同，检测结果如表2所示。

表2不同类型蛋黄卵磷脂乳化效果比较表

从表2可知，相同工艺条件下，采用蛋黄卵磷脂PL100作为乳化剂所得的乳液外观均匀，粒子的粒径无>1um（微米），符合乳剂产品质量要求。

蛋黄卵磷脂中PC和PE含量对乳化效果影响的试验

蛋黄卵磷脂PL100购自日本丘比工业株式会社，通过高效液相色谱法检测不同批次的蛋黄卵磷脂PL100中PC和PE的含量，并对不同批次的蛋黄卵磷脂PL100作为乳化剂制得的乳液进行比较试验，如表3所示。乳液制备方法和粒径检测方法同上。蛋黄卵磷脂PL100中PC和PE的高效液相色谱法的测定条件如下：

仪器：LC2010AHPLC

色谱柱：硅胶柱（4.6×250mm，5μm）

流动相：梯度洗脱，流动相A;甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（85：15：0.45:0.05）流动相B；正己烷-异丙醇-流动相A（20:48:32）

流速：1mL/min

检测器：蒸发光散射检测器

表3蛋黄卵磷脂PL100中PC和PE含量对乳化效果影响比较表

PC含量

PE含量

PL100用量

pH

外观性状

平均粒径

90%粒径

>1um粒子

71%

10%

15重量份

7.0

白色乳液

174nm

261nm

0.02%

76%

13%

15重量份

7.0

白色乳液

164nm

259nm

0.01%

82%

15%

15重量份

7.0

白色乳液

160nm

247nm

无

80%

16%

15重量份

7.0

白色乳液

149nm

218nm

无

85%

18%

15重量份

7.0

白色乳液

164nm

260nm

无

91%

3%

15重量份

7.0

漂油

/

从表3可知，从乳液灭菌后性状和粒径看，优选的，蛋黄卵磷脂PL100中PC含量为80～85%，PE含量为15～18%，最优选的，PC含量为80%，PE含量16%。

蛋黄卵磷脂的用量对乳化效果影响的试验

以表4所示的蛋黄卵磷脂的用量制备乳液，乳液制备方法和检测方法同上。

表4蛋黄卵磷脂的用量对乳化效果影响比较表

PL100用量	pH	外观性状	平均粒径	90%粒径	粒径图
						0.5重量份	7.0	药物析出	/	/	/
1.2重量份	7.0	白色乳液	157nm	230nm	正态分布
						5重量份	7.0	白色乳液	160nm	234nm	正态分布
10重量份	7.0	白色乳液	155nm	230nm	正态分布
						15重量份	7.0	白色乳液	149nm	218nm	正态分布
18重量份	7.0	白色乳液	182nm	284nm	拖尾

通过表4的试验结果，从粒径大小与分布可知，蛋黄卵磷脂PL100用量在1.2～15重量份时，乳液稳定，粒径小且集中。

初乳pH值对药物稳定性影响试验

初乳的制备方法如下：以重量份计，将27.5份甘油、0.025份乙二胺四乙酸钙钠和6.25份聚乙二醇400用水溶解，形成水相溶液；将1份紫杉醇用少许无水乙醇润湿和250份中链油、15份蛋黄卵磷脂、0.375份VE、0.75份油酸混合液进行高速剪切，挥发乙醇形成油相溶液；在12000rpm高速剪切下将油相加入水相，形成初乳。分取四等份初乳，分别调节初乳的pH值至表5所示pH值。经800bar高压均质形成均质液，灌封于安瓿中即得。利用高效液相色谱法测定灭菌前杂质的含量，结果示于表5。

高效液相色谱法的测定条件（以下杂质含量测定条件与此相同）

仪器：LC2010AHPLC

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱VP-ODS（4.6×250mm，5μm）

流动相：水-乙腈-甲醇（40：35：25））

流速：1mL/min

检测波长：227nm

表5初乳pH对药物稳定性影响比较表

初乳pH值	8.0	6.0	5.0	4.0
					灭菌前杂质含量	2.2%	1.28%	1.33%	1.74%

从表5可知，从杂质分析来看，初乳pH值会影响药物稳定性，pH值为5.0-6.0时，灭菌前杂质相近且含量最小。

均质液pH值对药物灭菌稳定性影响试验

均质液的制备方法如下：以重量份计，将27.5份甘油、0.025份乙二胺四乙酸钙钠和6.25份聚乙二醇400用水溶解，形成水相溶液；将1份紫杉醇用少许无水乙醇润湿和250份中链油、15份蛋黄卵磷脂、0.375份VE、0.75份油酸混合液进行高速剪切，挥发乙醇形成油相溶液；在12000rpm高速剪切下将油相加入水相，形成初乳；将粗乳均分两份，一份调节pH值至5.0，两份初乳均经800bar高压均质形成均质液。分取均质液，分别调节均质液的pH值至表6所示pH值。灌封安瓿中，121℃、F0>12灭菌，利用高效液相色谱法测定灭菌后杂质的含量，结果示于表6。

表6均质液的pH值对药物灭菌稳定性影响比较表

从表6可知，从杂质分析来看，初乳和均质液的pH值均会影响药物灭菌稳定性，当初乳pH值为5.0，均质液pH值为4.5～5.5时，灭菌后杂质相近且含量最小。

不同用量络合剂（乙二胺四乙酸盐）对药物灭菌稳定性影响试验

甲氧基苯胺值是反映过氧化物分解成醛、酮类物质的一项指标，其值高，则可能对人体肝功能有损害。以乙二胺四乙酸钙钠（EDTA-CaNa2）作为乙二胺四乙酸盐为例，均质液的制备方法如下：以重量份计，将27.5份甘油、表7所示重量份乙二胺四乙酸钙钠和6.25份聚乙二醇400用水溶解，形成水相溶液；将1份紫杉醇用少许无水乙醇润湿和250份中链油、15份蛋黄卵磷脂、0.375份VE、0.75份油酸混合液进行高速剪切，挥发乙醇形成油相溶液；在12000rpm/min高速剪切下将油相加入水相，形成初乳；调节pH值至5.5，800bar高压均质形成均质液，调节pH值至5.0；灌封于安瓿中，在121℃、F0>12灭菌即得。测试均质液的粒径和甲氧基苯胺值，结果示于表7，

甲氧基苯胺值的测定方法采用紫外分光光度法，具体步骤包括：紫杉醇乳剂用乙酸乙酯萃取，低温真空旋转蒸干，残留物加正己烷溶解，用乙腈萃取，正己烷相备用，乙腈相低温真空旋转蒸干，残留物用乙醇溶解，依次加入亚硫酸氢钠溶液和乙酸乙酯，用水萃取，水相加盐酸后，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相与正己烷相，低温真空旋转蒸干，残留物。用异辛烷溶解，作为供试品溶液，取供试品溶液，以异辛烷作为空白，照紫外-可见分光光度法，在350nm波长处，测得吸光度值为A₀；

精密量取供试品溶液10mL置棕色具塞试管中，精密加入0.25%的4-甲氧基苯胺的冰醋酸溶液2mL，加塞振摇，避光放置10分钟，另精密量取异辛烷10mL代替供试品溶液，同法操作，制成试剂空白溶液，以试剂空白溶液作为空白，在350nm波长处，测得吸光度值为A。

甲氧基苯胺值=25*（1.2A―A₀）/VB。

式中：V为供试品的取样量，单位mL；B为供试品溶液中油相的标示量，单位g/mL。

表7不同用量的络合剂对药物灭菌稳定性影响比较表

从表7可知，乙二胺四乙酸钙钠的重量份为0.002～0.025份时，甲氧基苯胺值较低，乳粒集中可有效减少药物对人体肝功能的损害。

均质液的稀释倍数对冻干乳剂影响的试验

冻干乳剂的制备方法如下：以重量份计，将2.2份甘油、0.002份乙二胺四乙酸钙钠、0.5份聚乙二醇400和0.3份油酸钠用水溶解，形成水相溶液；将1份紫杉醇用少许无水乙醇润湿和20份中链油、1.2份蛋黄卵磷脂和0.03份VE混合，12000rpm高速剪切，挥发乙醇，形成油相溶液；高速剪切下将油相加入水相，形成初乳，调节初乳pH值5.0～6.0；800bar高压均质形成均质液；均分6份，如表8所示稀释倍数，用注射用水对均质液进行稀释，形成稀释液；加入稀释液体积10%的海藻糖搅拌溶解，除菌过滤、灌装和冻干即得。

检测冻干乳剂的粒径和药物含量，药物含量（紫杉醇）采用高效液相色谱法进行检测，其结果示于表8。紫杉醇含量的高效液相色谱法的测定条件如下（以下紫杉醇含量测定条件与此相同）：

仪器：LC2010AHPLC

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱VP-ODS（4.6×250mm，5μm）

流动相：水-乙腈-甲醇（40：35：25）

流速：1mL/min

检测波长：227nm

表8均质液的稀释倍数对冻干乳剂影响比较表

从表8可知，紫杉醇均质液稀释10～15倍后进行冻干处理，可得到与冻干前一致的粒径，由于紫杉醇冻干乳剂是由紫杉醇均质液经过倍增稀释冷冻干燥而成的，因此与市售的脂肪乳剂和冻干乳剂比，由于倍增稀释的作用，使得药品中附加剂的含量急剧降低，因此，提高了药物临床应用安全性，很好的解决了目前临床应用的紫杉醇注射液存在的因附加剂而带来的严重不良反应。

实施例1～3制备紫杉醇脂肪乳注射液1～3的试验

表9实施例1～3的1000mL乳液处方

实施例1的紫杉醇脂肪乳注射液的制备方法如下：

取表9所示用量的甘油、EDTA-CaNa2和PEG400用60℃水溶解，形成水相；取表9所示用量的紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂PL100、VE（维生素E）和油酸混合，在60℃水浴条件下12000r/min高速剪切溶解，挥发乙醇，形成油相；在60℃水浴条件下，在12000r/min高速剪切下将油相加入水相，剪切10分钟，形成初乳，调节初乳pH值至5.5；在800bar高压下对调节pH值后的初乳进行均质8遍，形成紫杉醇的均质液，调节均质液的pH值至5.0，采用0.45um微孔滤器对调节pH值后的均质液进行过滤，灌封，在121℃、F0>12条件下灭菌处理得到紫杉醇脂肪乳注射液1，以下简称注射液1。

实施例2的紫杉醇脂肪乳注射液的制备方法如下：

取表9所示用量的甘油、EDTA-CaNa2和PEG400用60℃水溶解，形成水相；取表9所示用量的紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂PL100、VE和油酸混合，在60℃水浴条件下12000r/min高速剪切溶解，挥发乙醇，形成油相；在60℃水浴条件下，在12000r/min高速剪切下将油相加入水相，剪切10分钟，形成初乳，调节初乳pH值至5.0；在800bar高压下对调节pH值后的初乳进行均质10遍，形成紫杉醇的均质液，调节均质液的pH值至4.5，采用0.45um微孔滤器过滤，灌封，在121℃、F0>12条件下灭菌处理得到紫杉醇脂肪乳注射液2，以下简称注射液2。

实施例3的紫杉醇脂肪乳注射液的制备方法如下：

取表9所示用量的甘油、EDTA-CaNa2和PEG400用60℃水溶解，形成水相；取表9所示用量的紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂PL100、VE和油酸混合，在60℃水浴条件下10000r/min高速剪切溶解，挥发乙醇，形成油相；在60℃水浴条件下，在10000r/min高速剪切下将油相加入水相，剪切20分钟，形成初乳，调节初乳pH值至6.0；在800bar高压下对调节pH值后的初乳进行均质5遍，形成紫杉醇的均质液，调节均质液的pH值至5.5，采用0.45um微孔滤器过滤，灌封，在121℃、F0>12条件下灭菌处理得到紫杉醇脂肪乳注射液3，以下简称注射液3。

实施例4～6制备紫杉醇脂肪乳注射液4～6的试验

表10实施例4～6的1000mL乳液处方

实施例4的紫杉醇脂肪乳注射液的制备方法除了用量采用表10所示用量外，其它步骤和实施例1一致，得到注射液4；

实施例5的紫杉醇脂肪乳注射液的制备方法除了用量采用表10所示用量外，其它步骤和实施例2一致，得到注射液5；

实施例6的紫杉醇脂肪乳注射液的制备方法除了用量采用表10所示用量外，其它步骤和实施例3一致，得到注射液6。

注射液1～6经F0>12灭菌后的质量检测结果示于表12。

实施例7～9制备紫杉醇冻干乳剂7～9的试验

表11实施例7～9的1000mL乳液处方

实施例7的紫杉醇脂肪微球冻干乳剂的制备方法如下：

取表11所示用量的甘油、EDTA-CaNa2、PEG400和油酸钠用60℃水溶解，形成水相；取表11所示用量的紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂PL100和VE混合，在60℃水浴条件下12000r/min高速剪切溶解，挥发乙醇，形成油相；在60℃水浴条件下，在12000r/min高速剪切下将油相加入水相，剪切20分钟，形成初乳，调节初乳pH值至5.5；在800bar高压下对调节pH值后的初乳进行均质8遍，形成紫杉醇的均质液；采用注射用水对均质液倍增稀释10倍，形成稀释液；在稀释液中加入1000g海藻糖进行搅拌溶解，形成溶解液；用0.22um微孔滤器对溶解液进行除菌过滤，灌装，再进行冷冻干燥处理，得到紫杉醇脂肪微球冻干乳剂7，以下简称冻干乳剂7。

实施例8的紫杉醇脂肪微球冻干乳剂的制备方法如下：

取表11所示用量的甘油、EDTA-CaNa2、PEG400和油酸钠用60℃水溶解，形成水相；取表11所示用量的紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂PL100和VE混合，在60℃水浴条件下13000r/min高速剪切溶解，挥发乙醇，形成油相；在60℃水浴条件下，在13000r/min高速剪切下将油相加入水相，剪切10分钟，形成初乳，调节初乳pH值至5.5，在800bar高压下对调节pH值后的初乳进行均质8遍，形成紫杉醇的均质液；采用注射用水对均质液倍增稀释15倍，形成稀释液；在稀释液中加入1000g蔗糖进行搅拌溶解，形成溶解液；用0.22um微孔滤器对溶解液进行除菌过滤，灌装，再进行冷冻干燥处理，得到紫杉醇脂肪微球冻干乳剂8，以下简称冻干乳剂8。

实施例9的紫杉醇脂肪微球冻干乳剂的制备方法如下：

取表11所示用量的甘油、EDTA-CaNa2、PEG400和油酸钠用60℃水溶解，形成水相；取表11所示用量的紫杉醇用无水乙醇润湿后与中链油、蛋黄卵磷脂PL100和VE混合，在60℃水浴条件下13000r/min高速剪切溶解，挥发乙醇，形成油相；在60℃水浴条件下，在13000r/min高速剪切下将油相加入水相，剪切15分钟，形成初乳，调节初乳pH值至5.5；在800bar高压下对调节pH值后的初乳进行均质10遍，形成紫杉醇的均质液；采用注射用水对均质液倍增稀释12倍，形成稀释液；在稀释液中加入650g葡萄糖、350g甘露醇进行搅拌溶解，形成溶解液；用0.22um微孔滤器对溶解液进行除菌过滤，灌装，再进行冷冻干燥处理，得到紫杉醇脂肪微球冻干乳剂9，以下简称冻干乳剂9。

冻干乳剂7～9的质量检测结果示于表13。

表12注射液1～6经F0>12灭菌后的质量检测结果表

表13冻干乳剂7～9的质量检测结果表

实施例1～6制备的紫杉醇脂肪乳注射液1～6在25±2℃下放置6个月，进行稳定性试验，并分别于第1、2、3、6个月取样检测，结果示于表14。

表14紫杉醇脂肪乳注射液25℃条件下6个月稳定性试验结果表

现有市售的紫杉醇注射液（购自浙江九旭药业有限公司），以下称为现有紫杉醇注射液，为溶液型注射剂其主要成分为紫杉醇，辅料成分包括聚氧乙烯蓖麻油、无水乙醇。现有紫杉醇注射液在25±2℃下放置6个月，进行稳定性试验，并分别于第1、2、3、6月取样检测，结果示于表15。

表15现有紫杉醇注射液25℃条件下6个月稳定性试验结果表

从表15可知，现有紫杉醇注射液在25℃加速6个月产品有白色析出，甲氧基苯胺值大于6.0，杂质大于4%，含量降低超过5%，从表14可知，实施例1～6制备的紫杉醇脂肪乳注射液1～3在25±2℃下放置6个月，杂质小于2.0%，无析出，粒度基本无变化，紫杉醇含量降低小于2%，较现有紫杉醇注射液，产品的稳定性有明显改善。

实施例7～9制备的紫杉醇脂肪微球冻干乳剂在30±2℃下放置6个月，进行稳定性试验，并分别于第1、2、3、6个月取样检测，结果示于表16。

表16紫杉醇脂肪微球冻干乳剂30℃条件下6个月稳定性试验结果表

从表14和表16可知，与紫杉醇脂肪乳注射液相比，冻干乳剂在30±2℃6月稳定性与紫杉醇脂肪乳注射液25±2℃6月稳定性相当，冻干乳剂的稳定性得到进一步提高，可实现阴凉储存。

上述实施例1～9为本发明较优的实施例，含紫杉醇的组合物中各组分的含量不同时，检测结果也会不同。以下以乳剂表示本发明的紫杉醇脂肪乳注射液和紫杉醇脂肪微球冻干乳剂，以紫杉醇的重量份为1份作为基准，当蛋黄卵磷脂的重量份大于15份时，乳剂粒径会急剧增大，当蛋黄卵磷脂的重量份小于1.2份时，结果乳剂不稳定，药物析出；当乙二胺四乙酸盐的重量份大于0.025份时，呈现大于1um的粒子，当乙二胺四乙酸盐的重量份小于0.002份时，甲氧基苯胺值大于3.0；当中链油的重量份大于250份时，形成乳剂不稳定，储存期间易分层，当中链油的重量份小于20份时，乳剂中药物会析出；当稳定剂的重量份大于7份时，易出现较大乳粒，当稳定剂的重量份小于0.8份时，放置分层；当等渗调节剂的重量份大于27.5份时，渗透压偏高，当等渗调节剂的重量份小于2.2份时，结果渗透压低于人体血浆渗透压；当抗氧剂的重量份大于0.375份时，有关物质单杂不能进一步减小，当抗氧剂的重量份小于0.03份时，有关物质单杂接近1.0%。由于实验数据繁杂，在本发明中不一一列出，仅以较优实施例为例进行说明。

以下采用现有紫杉醇注射液和本发明实施例1～6制得的注射液1～3和冻干乳剂4～6进行动物实验。由于注射液1～3和冻干乳剂4～6的试验结果一致，因此为避免重复，仅以注射液2为例进行说明，以下称为本发明紫杉醇乳剂。

一、过敏试验、溶血试验和刺激实验

1、过敏试验：取豚鼠12只，随机分成两组，分别腹腔注射6mg/mL（毫克/毫升）的现有紫杉醇注射液和本发明紫杉醇乳剂，剂量3mg/只，隔天1次，连续3次，首次注射后第14天和第21天，各组每次取3只豚鼠，按6mg/只静脉注射进行攻击，按表17全身过敏反应评级标准判定过敏反应分值。结果如表18所示。

表17全身过敏反应评级标准表

评级	体征	结果判定
			0	无明显反应	阴性

1	轻微抓鼻颤抖或竖毛	阴性
			2	有几次咳嗽、抓鼻、颤抖或竖毛	阳性
3	多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐	阳性
			4	痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡	阳性

表18过敏反应的试验结果

从表18可知，现有紫杉醇水针组为3级，本发明紫杉醇乳剂组为1级，说明本发明明显减轻了原紫杉醇注射液所具有的严重过敏反应。

2、溶血实验：取新西兰家兔1只，于颈动脉取血10mL，除去纤维蛋白原，加等量生理盐水，2000rpm*10min离心，倾去上清液，加入红细胞压积5倍的生理盐水，2000rpm离心，倾去上清液，如此反复至上清液无红色后。取压积兔红细胞1ml，加生理盐水混悬至50ml（2%兔红细胞生理盐水混悬液）供试验用。取现有紫杉醇注射液、本发明紫杉醇乳剂作为供试液。试验加样顺序及溶血实验结果见表19，试验结果示于表20。

表19溶血实验加样顺序表

表20溶血实验结果比较表

从表20可知，现有紫杉醇注射液与2%兔红细胞生理盐水混悬液37℃水浴可产生溶血反应，本发明紫杉醇乳剂与2%兔红细胞生理盐水混悬液37℃水浴不产生溶血反应，说明本发明采用蛋黄卵磷脂代替了现有的聚氧乙烯蓖麻油起到了良好的防溶血效果。

3、血管刺激性实验：取新西兰兔6只，随机分成两组，分别在左耳外缘静脉注射现有紫杉醇注射液和本发明紫杉醇乳剂，右耳外缘静脉注射同体积的生理盐水，每天一次，连续3天，末次注射后24小时观察，并进行病理学镜检，摄像。观察结果显示现有紫杉醇注射液组家兔出现水肿、充血，而本发明紫杉醇乳剂组家兔可见进针点血管周围有少量淤血，但未见水肿、硬结、坏死等，表明现有紫杉醇注射液有明显刺激性，本发明紫杉醇乳剂无明显刺激性。

4、肌肉刺激性实验：取新西兰兔6只，随机分成两组，分别在左侧股四头肌注射本发明紫杉醇乳剂和现有紫杉醇注射液，右股四头肌注射同体积的生理盐水，48小时后切开股四头肌观察，评级标准如表21所示，结果示于表22。

表21肌肉刺激性评级标准表

反映级别	刺激反应现象
		0	无变化
1	轻度充血，范围0.5*1.0cm以下
		2	中度充血，范围0.5*1.0cm以上
3	重度充血，肌肉变性
		4	肌肉坏死、有褐色变性
5	广泛性坏死

表22肌肉刺激性结果比较表

兔号

本发明紫杉醇乳剂分值

兔号

现有紫杉醇注射液分值

1	0	4	2
				2	0	5	2
3	0	6	2
				平均分值	0	平均分值	2

从表21和表22可知，现有紫杉醇注射液组出现中度充血，本发明紫衫醇乳剂组未见病变。

二、抑瘤试验和毒性评价

1、抑瘤试验：取昆明种小鼠（雌性，体重18-22g），采用人乳腺癌细胞在小鼠背部进行接种，肿瘤长大后，取肿瘤液0.1mL/只接种于小鼠前肢腋皮下，每组10只。

取肿瘤体积均一的小鼠24只，随机分成3组，于第1、5、10天，按照下表给药间隔静脉注射给药，末次给药后解剖，称肿瘤的重量。

表23抑瘤试验

组别	剂量	平均瘤重	抑瘤率
				现有紫杉醇注射液	20mg/kg	0.16g	70.37%
本发明紫杉醇乳剂	20mg/kg	0.10g	82.22%
				生理盐水	/	0.54g	-

从表23可知，本发明紫杉醇乳剂相对于现有紫杉醇注射液的抑瘤活性有较大的提高，说明本发明紫杉醇乳剂的抑瘤效果较好。

2、毒性试验：取昆明种小鼠56只，随机分为7组，每组8只，雌雄各半。生理盐水为对照，单次注射，剂量递增，观察14天，统计小鼠死亡率。

毒性试验的结果在95%可信限下，统计半数致死量（MedianLethalDose，简称LD50），现有紫杉醇注射液LD50=97mg±20mg/kg,而本发明紫杉醇乳剂LD50=186mg±27mg/kg，说明相对于现有紫杉醇注射液，本发明紫杉醇乳剂的毒性明显降低。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims

1.一种含紫杉醇的组合物，其特征在于，包括1重量份的紫杉醇和1.2～15重量份的蛋黄卵磷脂，0.002～0.025重量份的乙二胺四乙酸盐、20～250重量份的中链油、0.8～7重量份的稳定剂、2.2～27.5重量份的等渗调节剂和0.03～0.375重量份的抗氧剂，所述组合物的pH值范围为4.0～6.0，其中，以质量百分比计，所述蛋黄卵磷脂含有80％～85％的磷脂酰胆碱和15％～18％磷脂酰乙醇胺。

2.如权利要求1所述的含紫杉醇的组合物，其特征在于，所述稳定剂包括油酸、油酸钠、聚乙二醇400中的一种或几种；所述等渗调节剂为甘油；所述抗氧剂为维生素E。

3.如权利要求2所述的含紫杉醇的组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。

4.如权利要求3所述的含紫杉醇的组合物，其特征在于，所述注射剂为脂肪乳注射液，包括1重量份的紫杉醇、15重量份的蛋黄卵磷脂、0.025重量份的乙二胺四乙酸盐、250重量份的中链油、0.75重量份作为稳定剂的油酸、6.25重量份作为稳定剂的聚乙二醇400、27.5重量份的等渗调节剂和0.375重量份的抗氧剂，900～1000重量份的注射用水，并且使用枸橼酸或盐酸调节pH值为4.5～5.5。

5.如权利要求3所述的含紫杉醇的组合物，其特征在于，所述注射剂为冻干乳剂，包括1重量份的紫杉醇、1.2重量份的蛋黄卵磷脂、0.002重量份的乙二胺四乙酸盐、20重量份的中链油、0.3重量份作为稳定剂的油酸钠、0.5重量份作为稳定剂的聚乙二醇400、2.2重量份的等渗调节剂和0.03重量份的抗氧剂，90～110重量份的冻干赋形剂，并且使用枸橼酸或盐酸调节pH值为5.0～6.0。

6.如权利要求5所述的含紫杉醇的组合物，其特征在于，所述冻干赋形剂包括海藻糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖和甘露醇中的一种或几种。

7.一种制备如权利要求4所述的含紫杉醇的组合物的方法，其特征在于，包括：

在高速剪切下将油相加入水相，形成初乳；

调节初乳的pH值至5.0～6.0；

将调节pH值后的初乳进行高压均质形成均质液；

调节所述均质液的pH值至4.5～5.5；

8.一种制备如权利要求5或6所述的含紫杉醇的组合物的方法，其特征在于，包括：

将等渗调节剂、乙二胺四乙酸盐、聚乙二醇400和油酸钠用水溶解，形成水相溶液；

将调节pH值后的初乳进行高压均质形成均质液；

采用注射用水对均质液进行稀释5～20倍，形成稀释液；

在稀释液中加入冻干赋形剂进行搅拌溶解，形成溶解液；

对溶解液进行除菌过滤、灌装和冷冻干燥处理。