CN108926533B - 一种替西罗莫司脂质体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种替西罗莫司脂质体及其制备方法，本发明的配方为替西罗莫司、磷脂、PEG化磷脂，进一步还可含有胆固醇、稳定剂，冻干保护剂，本发明针对替西罗莫司特有的理化性质，对处方组成与制备工艺进行了匹配性研究，研发了一种安全、质量稳定、制备工艺简单、可工业化生产的替西罗莫司脂质体，优选为冻干粉针剂，该制剂克服了现有制剂安全性、稳定性差等缺点，对替西罗莫司在抗肿瘤领域的进一步研究与应用奠定了坚实的基础。

Description

一种替西罗莫司脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种替西罗莫司脂质体及其制备方法。
背景技术
替西罗莫司(英文名，Temsirolimus)是西罗莫司的42-双羟甲基丙酸酯，其 结构式如下。替西罗莫司几乎不溶于水，且为非电解质，无法通过pH调节、成 盐等方法增加其溶解度。虽然在一些药学上可接受的有机溶剂(如乙醇、丙二醇、 聚乙二醇等)中溶解性较好，但是几乎都存在易氧化降解、内酯环裂解等化学稳 定性问题；另一方面，将替西罗莫司溶于上述有机溶剂中，临床使用时无法直接 使用0.9％氯化钠溶液、5％葡萄糖溶液等水溶液稀释，否则会析出沉淀，无法供 临床使用。由于上述诸多原因，使替西罗莫司成药具有较大的难度。
Figure RE-GDA0001341752730000011
研究表明，替西罗莫司在体内和体外模型中对肿瘤生长均表现出显著的抑制 作用，而非细胞毒性，它可以延迟肿瘤的发展时间或肿瘤复发时间。其作用机理 与西罗莫司类似，与胞质蛋白FKBP结合并形成复合体，从而抑制酶mTOR(雷 帕霉素的哺乳动物靶点)。mTOR激酶活性的抑制使得多个信号传导路径被抑制， 包括细胞因子刺激的细胞增殖、mRNA对多种关键蛋白的翻译(这些蛋白调节 细胞周期的G1期)和IL-2诱导的转录，从而抑制细胞周期从G1到S期的过程， 替西罗莫司这种对G1到S期阻滞的作用机理对于抗癌药物是一种新机理。
由于在肿瘤抑制方面的优势，替西罗莫司是第一个被美国FDA批准上市的 抗肿瘤的mTOR抑制剂，用于晚期肾细胞癌治疗的孤儿药。惠氏公司通过采用 大量的有机溶媒以解决替西罗莫司溶解性问题，同时采用含吐温80、有机溶剂 的特定稀释剂，以解决直接用水溶液稀释药物析出的问题，从而研制了一种替西 罗莫司的两瓶装制剂，包括替西罗莫司浓缩液和稀释剂
Figure BDA0001303910240000021
美国FDA 于2007年5月批准其上市，用于晚期肾癌，欧盟批准其用于至少具有三个以上 预后危险因子的晚期肾癌的一线治疗。该制剂中，替西罗莫司浓缩液组成为替西 罗莫司、无水乙醇、dl-α-生育酚、丙二醇、无水柠檬酸；稀释剂组成为吐温80、 聚乙二醇400、无水乙醇。但是该制剂也存在诸多缺点：①该制剂中含有大量有 机溶媒，用于静脉给药具有较大的刺激性；②该制剂含有吐温80，可能产生过 敏反应，说明书中明确指出，给药前须给予抗组胺剂；③该制剂与输液器具相容 性较差，由于其中含有吐温80，能够溶解出输液袋及输液管路中所含的增塑剂 (邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯)；④该制剂为两瓶装制剂，必须首先采用专用稀 释剂稀释，再用生理盐水稀释，否则会产生沉淀，这种两步稀释法操作繁琐，也 增加了二次污染的风险。
鉴于已上市替西罗莫司制剂存在诸多缺陷，因此，迫切需要开发一种新的安 全、稳定的替西罗莫司制剂。目前对于替西罗莫司新制剂研究的相关报道很有限， 专利CN200480021450.3公开了一种CCI-779(替西罗莫司)冻干制剂，该制剂 与上市
Figure BDA0001303910240000022
的主要区别在于将替西罗莫司溶液冻干，以增加其稳定性， 但经非胃肠道给药时，仍需首先用特定的含有吐温80、有机溶剂的稀释剂溶解， 再用生理盐水等水溶液稀释使用。专利CN201210460639.9公开了一种替西罗莫 司冻干制剂，通过加入助溶剂聚乙二醇硬脂酸酯15，可以直接通过注射用水或 生理盐水配制使用，解决了
Figure BDA0001303910240000023
和专利CN200480021450.3公开制剂需要 两瓶装，先必须使用特定稀释剂稀释，再经生理盐水稀释，操作繁琐，易造成二 次污染等问题。但是，该制剂使用了大量的表面活性剂聚乙二醇硬脂酸酯15助 溶，有文献(张嘉，李贻奎，李连达，等.聚山梨酯-80和泊洛沙姆188等4种 增溶剂对小鼠的急性毒性，中国新药杂志,2008,17(17):1491-1493)报道，该表 面活性剂经小鼠尾静脉注射急性毒性较大，甚至大于吐温80，可见其安全性问 题仍待商榷。文献(马海霞，邹祥.响应面分析法优化替西罗莫司脂质体的处方 工艺，全国抗生素学术会议，2013)制备了一种替西罗莫司脂质体，但其包封率 仅约83％；文献(Ran Mo,Qiong Sun,Nan Li,et al.Intracellular delivery and antitumor effects of pH-sensitiveliposomesbased on zwitterionic oligopeptide lipids， Biomaterials，2013,34(11):2773-2786.)通过在脂质体膜材中加入一种两亲性寡肽 HHG2C18，制备了一种替西罗莫司pH敏感脂质体，首先，该文献研究结果中显 示，当脂质体膜材中加入HHG2C18或PEGHG2C18后，所制备的空白脂质体、 载药脂质体粒径都明显增加，特别是加入PEGHG2C18后，对药物替西罗莫司的 载荷能力也明显降低，可见该成分对于脂质体成药性存在一定的影响，很可能会 影响脂质体的稳定性及药物的包封，而且根据该成分的结构，其疏水部分为两条 硬脂烷烃链，其与磷脂的亲和力明显不如PEG化磷脂(即聚乙二醇修饰磷脂)， 若作为脂质体膜材成分，很可能对于脂质体的形成、药物的包封都是不利的；其 次，文献(方超，施斌，洪鸣，等.粒径和MePEG相对分子质量对隐形纳米粒 体外巨噬细胞吞噬和大鼠体内长循环的影响，药学学报，2006,41(4):305-312.) 中分别比较了80nm、170nm和240nm粒径对体外巨噬细胞吞噬和大鼠体内长循 环的影响，结果显示随着粒径的减小，巨噬细胞吞噬量减小，大鼠血浆半衰期延 长，可见，该脂质体膜材中中加入PEGHG2C18后，脂质体粒径由原来普通脂质 体的100nm增至150nm，很可能对巨噬细胞吞噬、体内循环时间等存在不利影 响。
因此，针对于目前已有替西罗莫司制剂存在的不足，我们针对于替西罗莫司， 对一些安全性较好的常用剂型，如磺丁基醚-β-环糊精包合物、脂质体、脂肪乳 剂进行了筛选，期望找到一种与替西罗莫司匹配的剂型(见实施例1)，结果表 明，磺丁基醚-β-环糊精、脂肪乳剂对于替西罗莫司而言，成药可能性极低，主 要体现在：(1)高达50％的磺丁基醚-β-环糊精仍然无法实现对1mg/ml替西罗莫 司的包合；(2)替西罗莫司在常用注射用油(中链油、大豆油)中的溶解度太低， 无法满足制剂需求。而对于脂质体，采用常规的处方工艺制备，其质量也较差， 与上述文献中提到的替西罗莫司脂质体相似，但是相对于磺丁基醚-β-环糊精包 合物和脂肪乳剂两种剂型而言，脂质体成药性更好。经过大量的试验，我们发现 在普通脂质体的膜材中加入适量的PEG化磷脂，可以明显改善替西罗莫司脂质 体的质量。我们经过比较不含PEG化磷脂的替西罗莫司脂质体与含有PEG化磷 脂的替西罗莫司脂质体的包封率和稳定性，结果发现，通过加入PEG化磷脂等 可以明显提高包封率(＞90％)和稳定性(见实施例2)，这可能与替西罗莫司特 有的理化性质有关。
鉴于上述问题，本发明结合替西罗莫司的理化特性，通过大量试验研究，成 功开发了一种包封率高、质量稳定、安全的替西罗莫司脂质体，解决了已有替西 罗莫司制剂存在的不足，为临床研究与应用提供了新的制剂。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种包封率高、质量稳定、安全的替西罗莫司脂质体。 本发明的另一目的在于提供替西罗莫司脂质体的制备方法。
鉴于替西罗莫司现有制剂存在的问题，我们拟开发一种不含吐温80、单剂 包装、稳定、安全的制剂。结合替西罗莫司的理化性质，对环糊精包合物以及常 用的纳米包裹制剂(如脂质体、脂肪乳剂)等剂型进行研究，见实施例1。出乎 预料的是，只有脂质体才具有一定的可行性，而其他剂型未看出有任何可实施的 迹象，例如，替西罗莫司在常用注射用油(中链油、大豆油)中的溶解性很低， 10mg/g时仍然呈严重浑浊的状态；采用磺丁基醚-β-环糊精包合时，即使其用量 达到50％，也无法实现对1mg/ml的替西罗莫司实现包合。采用常规的脂质体处 方组成与用量时，对替西罗莫司而言，虽然勉强能得到脂质体，但质量相差甚远， 存在包封率低、药物泄漏、不溶性微粒大、稳定性差等一系列问题。在试验过程中，意外发现，若在处方中添加PEG化磷脂，与卵磷脂合用做包裹材料时，收 到了相当好的效果，完美的解决了上述问题。该发现可能与替西罗莫司的理化性 质有关，只有与其固有的特性相吻合，才能顺利制备出符合要求的脂质体。故本 研究的替西罗莫司脂质体，处方中含有PEG化磷脂，是本发明的核心技术特征 之一。
本发明一方面，提供一种替西罗莫司脂质体，其组成中除替西罗莫司、磷脂 外，还含有PEG化磷脂，提高脂质体包封率和稳定性。
为此，本发明提供一种替西罗莫司脂质体组合物，由以下重量比例的组分制 备而成：
替西罗莫司0.5-10份
磷脂10-100份
PEG化磷脂0.2-10份
胆固醇0-10份
稳定剂0-10份
冻干保护剂50-400份
溶媒适量。
优选的，本发明所述的脂质体组合物，由以下重量比例的组分制备而成：
替西罗莫司0.5-7份
磷脂15-80份
PEG化磷脂0.5-8份
胆固醇0-5份
稳定剂0.05-8份
冻干保护剂100-400份
溶媒适量。
更优选的，本发明所述的脂质体组合物，由以下重量比例的组分制备而成：
替西罗莫司1-5份
磷脂15-60份
PEG化磷脂1-5份
胆固醇0-4份
稳定剂0.1-5份
冻干保护剂100-350份
溶媒适量。
其中，所述溶媒包括在制备脂质体组合物的过程中使用的有机溶媒或者水， 这些溶媒在制备过程中使用，但在终产品中被干燥移除，所述适量是根据组分的 不同采用不同的量，以可以溶解有关组分为基本需要，所用的量属于本领域的常 规技术，并非本发明必不可少的技术特征。
其中，所述的磷脂选自高纯蛋黄卵磷脂、高纯大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢 化蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、 二芥酰基卵磷脂(DEPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二肉豆蔻酰基卵磷脂 (DMPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂(POPC)、磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、 大豆卵磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂中的一种或两种以上，优 选高纯蛋黄卵磷脂。
其中，所述的PEG化磷脂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)， 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DPPE-PEG)，优选二硬脂酰基磷脂酰乙醇 胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)；其中聚乙二醇分子量选自1000-8000，优选 2000-5000。
其中，所述的稳定剂包含螯合剂和/或抗氧剂，选自乙二胺四乙酸及其盐、α-生 育酚、α-生育酸琥珀酸酯、α-醋酸生育酚、柠檬酸、甘氨酸、谷氨酸、琥珀酸、 己二酸、苹果酸、马来酸、抗坏血酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、 谷胱甘肽、半胱氨酸、硫代甘油、叔丁基羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、没食 子酸丙酯中的一种或两种以上，优选α-生育酚、乙二胺四乙酸及其盐。
其中，所述的冻干保护剂选自麦芽糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、 山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏氨酸中的一种或两种以上，优选蔗糖、麦芽糖、 海藻糖。
本发明所述的脂质体组合物，根据需要还可加入助溶剂丙二醇0-40份。
本发明进一步提供本发明所述的脂质体组合物的制备方法，所述方法可以是以下方法：
取替西罗莫司、磷脂、PEG化磷脂、胆固醇、稳定剂，加有机溶媒适量，在 25-75℃下加热溶解，得有机相；称取适量注射用水，加热至25-75℃，得水相； 将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，即得脂质体粗品；将脂质体粗品进行 乳化，可将其置于高压均质机中进行均质乳化，或将其置于挤出器中依次通过不 同孔径的挤出膜挤出，或高压均质后再进行挤出，得脂质体溶液；称取配方量冻 干保护剂，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至全量；用 pH调节剂调节pH值；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫 司脂质体冻干粉针，所述的有机溶媒，选自无水乙醇、丙二醇、叔丁醇的一种或 两种以上。
也可以是以下方法：
取替西罗莫司、磷脂、PEG化磷脂、胆固醇、稳定剂，加适量有机溶媒，25 ℃～75℃下加热溶解，得有机相；在25℃～75℃下将有机相经旋转蒸发除去有 机溶媒，或将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取适 量注射用水，加热至25℃～75℃，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌，即得 脂质体粗品；将脂质体粗品进行乳化，可将其置于高压均质机中进行均质乳化， 或将其置于挤出器中依次通过不同孔径的挤出膜挤出，或高压均质后再进行挤 出，得脂质体溶液；称取配方量冻干保护剂，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶 解，并用注射用水定容至全量；用pH调节剂调节pH值；过0.22μm滤膜除菌、 分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉针，所述的有机溶媒，选自乙 醇、二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、乙腈、叔丁醇、乙丙二醇、甲醇的一种或两种 以上。
所述的稳定剂，根据其溶解性质，也可溶解于水相中。
所述的冻干保护剂，也可加入水相中。
所述的将脂质体粗品进行乳化，乳化方法优选为挤出乳化法；挤出膜孔径选 自2.0μm、1.0μm、0.8μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm，选用一种 或两种以上依次通过大孔径到小孔径的挤出。
上述方法中所述的pH调节剂，选自有机或无机酸或碱，选自枸橼酸、乙酸、 丙酸、盐酸、氢氧化钠、磷酸、三乙胺、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、枸橼酸钠、醋酸钠中的一种或两种以上。
所述的pH调节剂调节pH值，调节pH值至3-8；优选调节pH值至4-7；更 优选调节pH值至4-6。
本发明的替西罗莫司脂质体粒径为70-140nm。
本发明的优点在于：
(1)本发明的替西罗莫司脂质体，不含有吐温80、聚氧乙烯蓖麻油等增溶 剂，避免了已上市制剂
Figure BDA0001303910240000071
由吐温80等增溶剂引起的过敏反应。
(2)本发明的替西罗莫司脂质体，属于纳米包裹制剂，且其粒径为100nm 左右，具有EPR效应，对肿瘤部位具有一定的靶向作用。
(3)本发明的替西罗莫司脂质体，经过处方工艺的优化，具有包封率高、 稳定性好等特点，且通过制备成冻干制剂，更增加了替西罗莫司的化学稳定性；
(4)本发明的替西罗莫司脂质体，制备工艺简单，可实现工业化生产，而 且临床使用方便，无需多次采用不同稀释剂稀释。
具体实施方式：
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于 说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1不同制剂剂型对替西罗莫司的成药性研究
分别对磺丁基醚-β-环糊精包合物、脂质体、脂肪乳剂的成药性进行研究， 固定载药量为1mg/ml进行平行对比。现将主要研究方案与结果总结如下：
1.磺丁基醚-β-环糊精包合物
1.1处方工艺一
1.1.1处方
替西罗莫司 磺丁基醚-β-环糊精 注射用水
处方1 100mg 10g 至100ml
处方2 100mg 30g 至100ml
处方3 100mg 50g 至100ml
1.1.2制备方法
称取处方量磺丁基醚-β-环糊精，加适量注射用水溶解，并定容至100ml； 称取处方量替西罗莫司，加入磺丁基醚-β-环糊精水溶液中，常温下搅拌2h。
1.1.3结果评价
上述各处方下，搅拌2h后，均呈现严重浑浊状态。
1.2处方工艺二
1.2.1处方
Figure BDA0001303910240000081
1.2.2制备方法
称取处方量磺丁基醚-β-环糊精，加适量注射用水溶解，得水相；称取处方 量替西罗莫司、有机溶媒(无水乙醇或丙二醇或PEG400)，水浴超声使其溶解， 得有机相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，用注射用水定容至全量， 即得。
1.2.3结果评价
随着药物溶液加入磺丁基醚-β-环糊精水溶液中，各个处方配方下溶液都逐 渐变浑浊，其中以无水乙醇为溶媒，浑浊程度大于丙二醇和PEG400。
综上，磺丁基醚-β-环糊精很难实现对替西罗莫司的包合。
2.脂质体
2.1处方
处方1 处方2 处方3 处方4
替西罗莫司 100mg 100mg 100mg 100mg
磷脂EPCS 3.0g / / 2.0g
磷脂PC-98T / 3.0 / /
磷脂E80 / / 3.0g /
磷脂HSPC / / / 1.0g
胆固醇 200mg 200mg 200mg 200mg
无水乙醇 4ml 4ml 4ml 4ml
注射用水 至100ml 至100ml 至100ml 至100ml
2.2制备方法
称取处方量的替西罗莫司、磷脂、胆固醇，加处方量无水乙醇，在60℃下 加热溶解，得有机相；称取处方量注射用水，加热至60℃，得水相；将有机相 在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中， 依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，即得。
1.2.3结果评价
Figure BDA0001303910240000091
3.脂肪乳剂
替西罗莫司在常用注射用油(中链油、大豆油)中的溶解性考察
Figure BDA0001303910240000101
如果采用10％的油，要实现1mg/ml的载药量，也需要药物在油中的溶解度 达到10mg/g，而根据上述溶解性考察结果，替西罗莫司在中链油和大豆油中的 溶解性都很差，几乎无法实现脂肪乳剂的制备。
综上所述，(1)磺丁基醚-β-环糊精用量已达到50％，仍无法包合1mg/ml的 替西罗莫司；(2)替西罗莫司脂质体质量较差，如：有可见微粒、不稳定、包封 率不够高等；(3)替西罗莫司以10mg/g的浓度加入中链油或大豆油中，高温下 加热仍呈严重浑浊状态，无法溶解。可见，将替西罗莫司制备成磺丁基醚-β-环 糊精包合物、脂肪乳剂几乎无可能性，而替西罗莫司脂质体，虽然通过目前的处 方工艺制备质量仍然不好，但相对而言，通过处方工艺的优化更具有可行性。
实施例2PEG化磷脂对替西罗莫司脂质体开发的关键性
通常脂质体是由卵磷脂或卵磷脂与胆固醇组成。但是对替西罗莫司而言，处 方中必须添加适量的PEG化磷脂，否则无论如何调整处方与工艺，也无法制备 出稳定的脂质体，在极短的时间内出现混浊与沉淀的问题。典型验证方案如下所 示。
以DSPE-PEG2000为例：
1.处方：
组分 处方1 处方2 处方3 处方4 处方5 处方6
替西罗莫司 125mg 125mg 125mg 125mg 125mg 125mg
EPCS 3.5g 4.5g 5.5g 3.5g 3.5g 3.5g
胆固醇 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g
DSPE-PEG2000 / / / 10mg 50mg 100mg
乙醇 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml 4ml
注射用水 至100ml 至100ml 至100ml 至100ml 至100ml 至100ml
2.制备工艺
称取处方量的替西罗莫司、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)、胆固醇或 DSPE-PEG2000，加处方量乙醇，在50℃下加热溶解，得有机相；量取处方量注 射用水，加热至50℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得 脂质体粗品；将脂质体粗品依次经0.2μm、0.1μm、0.05μm挤出膜挤出，即得替 西罗莫司脂质体。
3.试验结果
DSPE-PEG2000对成药性的影响结果
Figure BDA0001303910240000111
结果分析：
当处方中不含有DSPE-PEG2000时，所制备的脂质体溶液呈混悬液状态， 且在较短时间内可明显观察到底部有沉淀物，即使当磷脂用量增至5.5％后，仍 然不能改善这种状态，经不溶性微粒检测显示含有大量微粒；另外，通过对其他 多种磷脂进行考察，也是相似的结果，都不能得到稳定的替西罗莫司脂质体。
当处方中加入少量DSPE-PEG2000后，溶液外观明显改善，呈半透明均一 液体，无沉淀、无可见微粒，经检测不溶性微粒也非常少，且放置24h后仍未见 微粒、沉淀，可见脂质体稳定性明显改善。同时，包封率比相同磷脂用量明显增 加。
同理，对DSPE-PEG5000、DPPE-PEG2000、DPPE-PEG5000等进行了考察， 可得到与DSPE-PEG2000相似的结果。
由此可见，PEG化磷脂的加入，对替西罗莫司脂质体而言至关重要，将直 接影响脂质体的成药性，是本发明的核心技术特征。
实施例3替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)3.5g、DSPE-PEG2000 0.125g、α-生育酚0.03g，加叔丁醇8.0g，在45℃下加热溶解，置于样品盘中， 经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取EDTA-2Na 0.01g、注射用水75g，加 热至45℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得 脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm 的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌 使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节pH值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为98.8nm。
实施例4替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.125g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)3.5g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG2000 0.125g、α-生育酚0.03g，加无水乙醇3.5g，在50℃下加热溶解， 得有机相；称注射用水75g，加热至50℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入 水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、 0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过超滤去除无水 乙醇；称取蔗糖25g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容 至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节pH值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、 冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为96.8nm。
实施例5替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.05g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)1.5g、DSPE-PEG200050mg、 α-生育酚0.005g，加适量无水乙醇溶解，在45℃下加热溶解，得有机相；将有机 相在45℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称注射用水90g，加热至45℃， 得水相；将水相加入脂质相，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于 挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液； 称取海藻糖5g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至 100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调节pH值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻 干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为70.6nm。
实施例6替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.1g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)2.0g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG50000.1g、α-生育酚0.01g，加无水乙醇1.0g，在30℃下加热溶解， 得有机相；称海藻糖15g、注射用水80g，加热至30℃，溶解，得水相；将有机 相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中， 依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；用注射用 水定容至100ml；用枸橼酸调节pH值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、 封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为78.2nm。
实施例7替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.1g、氢化大豆磷脂(HSPC)2.0g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG500020mg，加适量二氯甲烷溶解，在60℃下加热溶解，得有机相； 将有机相在40℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取EDTA-2Na 0.02％、 蔗糖20g、注射用水75g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中， 水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径 0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml； 用枸橼酸、枸橼酸钠调节pH值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口， 即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为90.8nm。
实施例8替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.075g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)1.5g、DPPE-PEG2000 0.1g， 加叔丁醇3.0g，在55℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中，经冷 冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称硫代甘油0.2g、EDTA-2Na 0.02g、葡萄糖 7g、山梨醇15g、注射用水70g，加热至55℃，溶解，得水相；将水相加入脂质 相中，搅拌使其充分溶解、分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机 中均质乳化，得脂质体溶液；用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调 节pH值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质 体冻干粉。
经测定，平均粒径为87.7nm。
实施例9替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.125g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)3.0g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG2000 0.15g、α-生育酸琥珀酸酯0.03g，加无水乙醇2.0g，在35℃下 加热溶解，得有机相；称取EDTA-2Na 0.01g、葡萄糖5g、注射用水70g，加热 至35℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体 粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤 出膜挤出，得脂质体溶液；称取葡萄糖8g、甘露醇10g，置于上述脂质体溶液中， 搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用盐酸调节pH值为3.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为89.8nm。
实施例10替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.125mg、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)3.5g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG2000 0.3g、α-醋酸生育酚0.02g，加丙二醇4.0g，在60℃下加热溶解， 得有机相；称取注射用水80g，加热至60℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条 件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过 孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过 超滤去除丙二醇；称取蔗糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注 射用水定容至100ml；用枸橼酸调节pH值为4.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、 冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为94.8nm。
实施例11替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)3.5g、胆固醇0.3g、 DPPE-PEG20000.125g、α-醋酸生育酚0.02g，加叔丁醇3.0g，甲醇2.0g，在55℃ 下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中，经冷冻干燥除去有机溶媒，得 脂质相；称EDTA-2Na 0.02g、注射用水70g，加热至55℃，溶解，得水相；将 水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解、分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置 于高压均质机中均质乳化，得脂质体溶液；称取葡萄糖7g、山梨醇15g，置于上 述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用乙酸、乙酸钠调节pH值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质 体冻干粉。
经测定，平均粒径为97.7nm。
实施例12替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)2.5g、1-棕榈酰基-2-油 酰基卵磷脂(POPC)0.5g、胆固醇0.25g、DSPE-PEG2000 0.2g、己二酸0.1g， 加无水乙醇4.5g，在60℃下加热溶解，得有机相；称取谷胱甘肽0.1g、注射用 水75g，加热至60℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀， 得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、 0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；将脂质体溶液通过刮板薄膜蒸发 器去除无水乙醇；称取木糖醇20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节pH值为6.5；过0.22μm 滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为102.0nm。
实施例13替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.15g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)2.0g、二棕榈酰磷脂酰胆 碱(DPPC)1.0g、DPPE-PEG2000 0.2g、二叔丁基对甲酚0.4g，加无水乙醇3.0g、 叔丁醇2.0g，在65℃下加热溶解，得有机相；称乙二胺四乙酸0.05g、注射用水 75g，加热至65℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质 体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、 0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取海藻糖10g、麦芽糖10g，置于上述 脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸调节pH值为 4.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为105.1nm。
实施例14替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.125g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)2.0g、二硬脂酰磷脂酰 胆碱(DSPC)1.0g、DPPE-PEG5000 0.1g，加适量无水乙醇溶解，得有机相；将 有机相在45℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取半胱氨酸0.5g、注 射用水85g，加热至45℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分， 得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm 的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌 使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸氢二钾、磷酸二氢钾调节pH值为 7.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为94.6nm。
实施例15替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.175g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)2.5g、二芥酰基卵磷脂 (DEPC)1.0g、胆固醇0.15g、DSPE-PEG1000 0.2g、没食子酸丙酯0.2g，加无 水乙醇4.0g，在55℃下加热溶解，得有机相；称取马来酸0.3g、注射用水75g， 加热至55℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂 质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，然后再置于挤出器中，依 次通过孔径0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖15g、蔗 糖5g、苏氨酸5g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用三乙胺调节pH值为8.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口， 即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为106.8nm。
实施例16替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.2g、大豆磷脂3.0g、二油酰基卵磷脂(DOPC)0.5g、 DPPE-PEG5000 0.2g，加丙二醇4.0g，在70℃下加热溶解，得有机相；称取苹果 酸0.5g、注射用水70g，加热至70℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条件下注 入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径 0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取葡萄糖14g， 甘露醇11g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml； 用枸橼酸、枸橼酸钠调节pH值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口， 即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为108.9nm。
实施例17替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.25g、高纯大豆卵磷脂(S100)4.0g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG80000.25g、α-生育酚0.04g，加叔丁醇8.0g、甲醇2.0g，在50℃下加 热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相； 称取谷氨酸0.5g、蔗糖10g、注射用水70g，加热至50℃，溶解，得水相；将水 相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤 出器中，依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质 体溶液；称取蔗糖15g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节pH值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封 口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为112.4nm。
实施例18替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.5g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)6.0g、胆固醇0.4g、 DSPE-PEG6000 0.5g，加无水乙醇5.0g，在50℃下加热溶解，得有机相；称取 EDTA-2Na 0.03g、谷胱甘肽0.6g、注射用水55g，加热至50℃，溶解，得水相； 将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤 出器中，依次通过孔径0.8μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出， 得脂质体溶液；将脂质体溶液通过刮板薄膜蒸发器去除无水乙醇；称取麦芽糖 20g、蔗糖15g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml； 用氢氧化钠调节pH值为8.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替 西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为125.5nm。
实施例19替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.7g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)8.0g、胆固醇0.5g、 DSPE-PEG4000 0.7g、α-生育酚0.08g，加叔丁醇10.0g、乙腈5.0g，在60℃下加 热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相； 称抗坏血酸0.1g、注射用水50g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质 相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中 均质乳化，然后再置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出 膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖20g、海藻糖20g，置于上述脂质体溶液中， 搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用乙酸、乙酸钠调节pH值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为130.2nm。
实施例20替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.3g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)2.5g、二肉豆蔻酰基卵磷 脂(DMPC)1.0g，胆固醇0.2g、DPPE-PEG1000 0.2g、叔丁基羟基茴香醚0.1g， 加适量二氯甲烷，在40℃下加热溶解，得有机相；将有机相在40℃下经旋转蒸 发除去有机溶剂，得脂质相；称取琥珀酸0.1g、麦芽糖10g，海藻糖13g、注射 用水70g，加热至40℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分， 得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，得脂质体溶液；用注 射用水定容至100ml；用枸橼酸调节pH值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、 冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为115.7nm。
实施例21替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.6g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)8.0g、胆固醇0.4g、 DSPE-PEG2000 0.5g、α-生育酚0.15g，加无水乙醇5.0g，在55℃下加热溶解， 得有机相；称取注射用水70g，加热至55℃，溶解，得水相；将有机相在搅拌条 件下注入水相中，混匀，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过 孔径1.0μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质 体溶液；将脂质体溶液通过超滤去除无水乙醇；称取麦芽糖10g、赤藓糖醇10g， 置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、 枸橼酸钠调节pH值为6.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西 罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为125.6nm。
实施例22替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.8g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)10.0g、胆固醇1.0g、 DPPE-PEG8000 0.9g，加适量二氯甲烷，在40℃下加热溶解，得有机相；将有机 相在40℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取硫代甘油0.6g、焦亚硫 酸钠0.2g、注射用水55g，加热至50℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中， 水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径2.0 μm、1.0μm、0.6μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂 质体溶液；称取蔗糖20g、麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解， 并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸调节pH值为5.0；过0.22μm滤膜除菌、 分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为133.6nm。
实施例23替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.4g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)3.0g、高纯蛋黄卵磷脂(98T) 3.0g、胆固醇0.2g、DSPE-PEG2000 0.3g、α-醋酸生育酚0.05g，加叔丁醇5.0g、 丙二醇2.0g，在60℃下加热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干 燥除去有机溶媒，得脂质相；称取亚硫酸氢钠0.1g、15g、木糖醇5g、苏氨酸5g、 注射用水70g，加热至60℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌使其充 分溶解分散，即得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.6 μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；用注射 用水定容至100ml；用枸橼酸调节pH值为4.0；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻 干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为124.0nm。
实施例24替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司1.0g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)10.0g、胆固醇0.4g、 DSPE-PEG20001.0g，加叔丁醇15.0g，乙腈5.0g，在60℃下加热溶解，得有机 相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取硫代甘油 0.8g、谷胱甘肽0.2g、麦芽糖10g、注射用水65g，加热至60℃，溶解，得水相； 将水相加入脂质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置 于挤出器中，依次通过孔径2.0μm、1.0μm、0.8μm、0.4μm、0.2μm、0.1μm、 0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖10g，置于上述脂质体溶液中， 搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用乙酸、乙酸钠调节pH值为5.5；过 0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为138.9nm。
实施例25替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.2g、高纯蛋黄卵磷脂(EPCS)3.5g、胆固醇0.2g、 DSPE-PEG20000.15g、α-生育酚0.02g，加叔丁醇8.0g，乙醇2.0g，在40℃下加 热溶解，得有机相；将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相； 称取半胱氨酸0.2g、注射用水75g，加热至40℃，溶解，得水相；将水相加入脂 质相中，搅拌使其充分溶解分散，得脂质体粗品；将脂质体粗品置于挤出器中， 依次通过孔径0.4μm、0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液； 称取海藻糖20g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节pH值为7.0；过0.22μm滤膜除菌、分 装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为105.6nm。
实施例26替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.25g、高纯蛋黄卵磷脂(PC-98T)4.0g、DSPE-PEG2000 0.2g、 α-生育酚0.03g，加适量三氯甲烷、甲醇，在35℃下加热溶解，得有机相；将有 机相在35℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称取EDTA-2Na 0.01g、注 射用水70g，加热至35℃，溶解，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分， 得脂质体粗品；将脂质体粗品置于高压均质机中均质乳化，然后再置于挤出器中， 通过孔径0.05μm的挤出膜挤出，得脂质体溶液；称取麦芽糖25g，置于上述脂 质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至100ml；用枸橼酸、枸橼酸钠调 节pH值为6.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为108.8nm。
实施例27替西罗莫司脂质体的制备
称取替西罗莫司0.1g、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)2.0g、胆固醇0.1g、 DSPE-PEG2000 0.1g，加适量三氯甲烷、乙腈，在35℃下加热溶解，得有机相； 将有机相在35℃下经旋转蒸发除去有机溶剂，得脂质相；称注射用水85g，加热 至60℃，得水相；将水相加入脂质相中，水化脂质成分，得脂质体粗品；将脂 质体粗品置于挤出器中，依次通过孔径0.2μm、0.1μm、0.05μm的挤出膜挤出， 得脂质体溶液；称取蔗糖10g，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射 用水定容至100ml；用盐酸调节pH值为5.5；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、 封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉。
经测定，平均粒径为90.1nm。
实施例28替西罗莫司脂质体稳定性考察
分别取实施例3、5、7、18、24样品，于40℃下放置30天考察稳定性，分 别于第0天、第10天、第20天、第30天取样，以粒径、包封率、药物含量为 指标进行评价。结果见下表1。可见，本发明的替西罗莫司脂质体稳定性良好。
表1替西罗莫司脂质体40℃下30天稳定性试验结果
Figure BDA0001303910240000211
注：记各实施例样品第0天药物含量为100％，其后药物含量为相对于第0天的百分含量。

Claims (10)

1.一种替西罗莫司脂质体组合物，其特征在于，由以下重量比例的组分制备而成：
替西罗莫司0.5-10份
磷脂10-100份
PEG化磷脂0.2-10份
胆固醇0-10份
稳定剂0-10份
冻干保护剂50-400份
溶媒适量。
2.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，由以下重量比例的组分制备而成：
替西罗莫司0.5-7份
磷脂15-80份
PEG化磷脂0.5-8份
胆固醇0-5份
稳定剂0.05-8份
冻干保护剂100-400份
溶媒适量。
3.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，由以下重量比例的组分制备而成：
替西罗莫司1-5份
磷脂15-60份
PEG化磷脂1-5份
胆固醇0-4份
稳定剂0.1-5份
冻干保护剂100-350份
溶媒适量。
4.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述的磷脂选自高纯蛋黄卵磷脂、高纯大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）、二硬脂酰磷脂酰胆碱（DSPC）、二芥酰基卵磷脂（DEPC）、二油酰基卵磷脂（DOPC）、二肉豆蔻酰基卵磷脂（DMPC）、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂（POPC）、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂中的一种或两种以上。
5.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述的PEG化磷脂选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG），二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DPPE-PEG）；其中聚乙二醇分子量选自1000-8000。
6.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述的稳定剂包含螯合剂和/或抗氧剂，选自乙二胺四乙酸及其盐、α-生育酚、α-生育酸琥珀酸酯、α-醋酸生育酚、柠檬酸、甘氨酸、谷氨酸、琥珀酸、己二酸、苹果酸、马来酸、抗坏血酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽、半胱氨酸、硫代甘油、叔丁基羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、没食子酸丙酯中的一种或两种以上。
7.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述的冻干保护剂选自麦芽糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏氨酸中的一种或两种以上。
8.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，根据需要还可加入助溶剂丙二醇0-40份。
9.如权利要求1-8任一项所述的脂质体组合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：
取替西罗莫司、磷脂、PEG化磷脂、胆固醇、稳定剂，加有机溶媒适量，在25-75℃下加热溶解，得有机相；称取适量注射用水，加热至25-75℃，得水相；将有机相在搅拌条件下注入水相中，混匀，即得脂质体粗品；将脂质体粗品进行乳化，可将其置于高压均质机中进行均质乳化，或将其置于挤出器中依次通过不同孔径的挤出膜挤出，或高压均质后再进行挤出，得脂质体溶液；称取配方量冻干保护剂，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至全量；用pH调节剂调节pH值；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉针，所述的有机溶媒，选自无水乙醇、丙二醇、叔丁醇中的一种或两种以上。
10.如权利要求1-8任一项所述的脂质体组合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：
取替西罗莫司、磷脂、 PEG化磷脂、胆固醇、稳定剂，加适量有机溶媒，25℃～75℃下加热溶解，得有机相；在25℃～75℃下将有机相经旋转蒸发除去有机溶媒，或将有机相置于样品盘中经冷冻干燥除去有机溶媒，得脂质相；称取适量注射用水，加热至25℃～75℃，得水相；将水相加入脂质相中，搅拌，即得脂质体粗品；将脂质体粗品进行乳化，可将其置于高压均质机中进行均质乳化，或将其置于挤出器中依次通过不同孔径的挤出膜挤出，或高压均质后再进行挤出，得脂质体溶液；称取配方量冻干保护剂，置于上述脂质体溶液中，搅拌使溶解，并用注射用水定容至全量；用pH调节剂调节pH值；过0.22μm滤膜除菌、分装、冻干、封口，即得替西罗莫司脂质体冻干粉针，所述的有机溶媒，选自乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、乙腈、叔丁醇、乙丙二醇的一种或两种以上。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102643707B1 (ko) 2019-01-22 2024-03-04 에오비안 파마슈티컬스, 인크. Mtorc 조절제 및 이의 용도
KR20230084095A (ko) 2020-03-27 2023-06-12 에오비안 파마슈티컬스, 인크. Mtorc1 조절제 및 이의 용도
CN111567806A (zh) * 2020-04-26 2020-08-25 武汉天德生物科技有限公司 硒化党参多糖脂质体及其制备方法和应用
CN112137968B (zh) * 2020-09-27 2023-04-07 晟薇药业(上海)有限公司 一种脂质体冻干粉制备配方及制备工艺
CN114886785B (zh) * 2022-06-07 2023-02-03 美尚(广州)化妆品股份有限公司 一种三元冻干组合物及其在冻干制剂中的应用
CN116803393B (zh) * 2023-08-24 2023-11-21 成都金瑞基业生物科技有限公司 一种pan-HER抑制剂的药物组合物及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101129361A (zh) * 2007-07-17 2008-02-27 山东华诺生物科技有限公司 西罗莫司脂质体冻干粉针及其制备工艺
CN102603866A (zh) * 2012-03-15 2012-07-25 中国药科大学 基于寡肽的pH敏感型两性离子及其在药剂中的应用
US20150079155A1 (en) * 2012-03-14 2015-03-19 Bioneer A/S Cationic Liposomal Drug Delivery System for Specific Targeting of Human CD14+ Monocytes in Whole Blood
WO2015068020A2 (en) * 2013-11-05 2015-05-14 García-Sánchez Gustavo A Immunosuppressive treatments, formulations and methods
CN105853403A (zh) * 2016-05-09 2016-08-17 上海天氏利医药科技有限公司 一种紫杉醇棕榈酸酯脂质体及其制备方法
US20170065520A1 (en) * 2015-09-09 2017-03-09 Manli International Ltd Stable liposomal formulations of rapamycin and rapamycin derivatives for treating cancer

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101011357A (zh) * 2006-11-16 2007-08-08 西安力邦医药科技有限责任公司 一种紫杉醇脂质体制剂的制备方法
AU2008227852B2 (en) * 2007-03-19 2011-02-24 Fresenius Kabi Oncology Ltd. Proliposomal and liposomal compositions
JPWO2013176223A1 (ja) * 2012-05-23 2016-01-14 国立大学法人大阪大学 炎症性疾患治療用医薬組成物
EP2914722A1 (en) * 2012-11-05 2015-09-09 Pronai Therapeutics, Inc. Dosing and administration of oligonucleotide cancer therapies
HRP20230863T1 (hr) * 2014-04-04 2023-11-10 AI Therapeutics, Inc. Inhalacijska formulacija rapamicina, namijenjena liječenju stanja povezanih sa starenjem
CN106580881A (zh) * 2015-10-16 2017-04-26 四川英路维特医药科技有限公司 一种地榆苷元脂质体及其制备方法、用途
CA3004939A1 (en) * 2015-11-10 2017-05-18 Children's Research Institute, Children's National Medical Center Echinomycin formulation, method of making and method of use thereof
CN111920768A (zh) * 2019-05-13 2020-11-13 复旦大学 一种包载分子靶向药物脂质体及其在制备治疗肿瘤药物中的应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101129361A (zh) * 2007-07-17 2008-02-27 山东华诺生物科技有限公司 西罗莫司脂质体冻干粉针及其制备工艺
US20150079155A1 (en) * 2012-03-14 2015-03-19 Bioneer A/S Cationic Liposomal Drug Delivery System for Specific Targeting of Human CD14+ Monocytes in Whole Blood
CN102603866A (zh) * 2012-03-15 2012-07-25 中国药科大学 基于寡肽的pH敏感型两性离子及其在药剂中的应用
WO2015068020A2 (en) * 2013-11-05 2015-05-14 García-Sánchez Gustavo A Immunosuppressive treatments, formulations and methods
US20170065520A1 (en) * 2015-09-09 2017-03-09 Manli International Ltd Stable liposomal formulations of rapamycin and rapamycin derivatives for treating cancer
CN105853403A (zh) * 2016-05-09 2016-08-17 上海天氏利医药科技有限公司 一种紫杉醇棕榈酸酯脂质体及其制备方法

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