CN103728404B - 离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用。甲磺酸甲酯在碱性条件下加热水解生成甲磺酸和甲醇，以电导检测器为检测手段，经过阴离子交换柱分离后经过抑制器，然后通过检测甲磺酸的含量从而得到甲磺酸甲酯的含量。本发明首次利用离子色谱法对甲磺酸甲酯进行检测，甲磺酸甲酯在碱性条件下能够完全水解，将甲磺酸甲酯在最佳的水解条件水解后，利用离子色谱仪对溶液进行分离检测；所需仪器设备简单，成本低廉，避免了使用色谱-质谱联用技术，简化了操作过程，降低了成本。本方法的整体稳定性，重现性理想，测定数据准确可靠，可以广泛应用于生物制药、药代动力学研究、食品安全等领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定甲磺酸甲酯的新方法，特别是离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用。
背景技术
甲磺酸甲酯(methylmethanesulfonate，MMS)是一种能够损伤DNA的烷化剂，主要使嘌呤碱基上的氮、氧原子发生甲基化，导致DNA双链断裂、点突变。所以甲磺酸甲酯是一种直接致突变物，具有致癌性，对甲磺酸甲酯准确的测定具有非常重要的意义，尤其是在药物中的含量。目前测定甲磺酸甲酯的方法主要有液相色谱-质谱法和气相色谱质谱法，但是这两种方法的操作都比较繁琐，尤其是气相色谱-质谱联用技术不仅操作繁琐，检测成本也很高。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供了离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用。
一种离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法，甲磺酸甲酯在碱性条件下加热水解生成甲磺酸和甲醇，以电导检测器为检测手段，经过阴离子交换柱分离后经过抑制器，然后通过检测甲磺酸的含量从而得到甲磺酸甲酯的含量。
一种所述的方法测定齐多夫定中的甲磺酸甲酯含量，步骤如下：
1)标准溶液的配制：称取甲磺酸0.1g置于10mL的容量瓶中，加入去离子水定容；
2)淋洗液配制：6.3mmol／LNaHCO3和1.7mmol／LNa2CO3的混合液；
3)标准曲线制作：采用逐级稀释的方法配制不同浓度标准溶液色谱进样分析，得线性回归方程为Y＝8.71781X-1.77812，线性相关系数R＝0.9994；
4)甲磺酸甲酯的前处理：称取甲磺酸甲酯0.1g置于10mL的容量瓶中，加入2mL甲醇待甲磺酸甲酯溶解后加入去离子水定容置刻度；甲磺酸甲酯的水解条件为：pH值为10、水解温度为80℃、水解时间为15min；
5)测定：淋洗液由泵输送流经阴离子交换柱，所述的步骤4)中甲磺酸甲酯水解后的产物进入分离系统，在阴离子交换柱上被分离，流经抑制器，最后进入检测器检测后得色谱峰，对色谱峰面积处理后得实验数据；
6)实际样品的测定：用所述的步骤4)中样品前处理的方法将齐多夫定水溶液配制好，进行 水解，水解液色谱进样；进样量：30μL，泵的流速为0.5mL／min。
水解后的甲磺酸在0.5—10mg／L的范围内具有线性关系，线性相关系数为0.9994，检出限为0.10mg／L，加标回收率为92.06％-97.28％，相对标准偏差(RSD)0.80％。
一种所述的方法的应用，应用于食品、环境、药代动力学分析领域的能够完全水解的酯类物质。
本发明的有益效果：
本发明首次利用离子色谱法对甲磺酸甲酯进行检测，甲磺酸甲酯在碱性条件下能够完全水解，将甲磺酸甲酯在最佳的水解条件(最佳的pH值、温度和水解时间)水解后，利用离子色谱仪对溶液进行分离检测；本方法所需仪器设备简单，成本低廉，避免了使用色谱-质谱联用技术，大大的简化了操作过程，降低了成本。本方法的整体稳定性，重现性理想，测定数据准确可靠，可以广泛应用于生物制药、药代动力学研究、食品安全等领域。目前国内外尚无关于离子色谱法测定甲磺酸甲酯的报道。
附图说明
图1是甲磺酸标准品的离子色谱图(0.05mmol／L)；
图2是甲磺酸甲酯随pH值变化的水解曲线图；
图3是甲磺酸甲酯随水解时间变化的水解曲线图；
图4是甲磺酸甲酯随温度变化的水解曲线图；
图5是0.05mmol／L甲磺酸甲酯(在最佳水解条件下水解后)色谱图。
具体实施方案
下面结合实施例对本发明做进一步具体说明。
离子色谱法测定齐多夫定中甲磺酸甲酯的含量：
具体步骤如下：
1、标准溶液的配制：精确称取甲磺酸0.1g置于10mL的容量瓶中，加入去离子水定容至刻度；精确称取甲磺酸甲酯0.1g置于10mL的容量瓶中，加入适量甲醇待甲磺酸甲酯全部溶解后加入去离子水定容至刻度；
2、标准曲线制作：采用逐级稀释的方法配制不同浓度标准溶液；
3、样品前处理：精确称取齐多夫定10mg置于10mL的容量瓶中，加入去离子水溶解、定容至刻度，在温度80℃、pH值10、时间15min进行水解。
4、淋洗液的选择：试验不同浓度的淋洗液配比，最终确定为：6.3mmol／L NaHCO3、1.7mmol／LNa2CO3.
5、水解条件的优化：试验不同pH值、水解温度、水解时间对甲磺酸甲酯水解率的影响。甲磺酸甲酯随时间变化水解率曲线见附图3、随pH值变化曲线见附图4、随温度变化曲线见附图5。最终确定最佳水解条件为：温度80℃、pH值10、时间15mmin；
6、标准溶液色谱图：进样量：30μL，分别取0.05mmol／L甲磺酸和甲磺酸甲酯(在最佳水解条件下水解后)进样，得到甲磺酸标样色谱图(附图1)和甲磺酸甲酯标样色谱图。
7、实际样品的测定：进样量：30μL，泵的流速为0.5mL／min。在以上试验条件下，利用本发明可以实现对齐多夫定中甲磺酸甲酯的测定。
实施例
1实验部分
1.1仪器与试剂
IC2010离子色谱仪(东曹生物科技有限公司)、SuperIC-AZ分析柱、2510Branson超声波清洗器(美国Branson Ultrasonics公司)
甲磺酸(分析纯)、甲磺酸甲酯(分析纯)、碳酸钠(分析纯)、碳酸氢钠(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)、甲醇(分析纯)。齐多夫定来自浙江新华制药厂。
1.2色谱条件
色谱柱：TSKgel SuperIC-AZ淋洗液：6.3mmol／L NaHCO3、1.7mmol／LNa2CO3
抑制胶：TSKsupperss IC-A。流速：0.5mL／min检测器：电导器温度：40℃
进样量：30μL
1.3溶液的配置
甲磺酸标准储备液：取甲磺酸0.10g，置于100mL容量瓶中加去离子水定容至刻度，得浓度为1000mg／L，置于冰箱中备用。甲磺酸甲酯储备液：取甲磺酸甲酯0.10g，置于100mL容量瓶加入适量乙醇使甲磺酸甲酯充分溶解，加去离子水定容至刻度，得浓度为1000mg／L，置于冰箱备用。
1.4样品前处理
准确称取齐多夫定样品0.10g，置于100mL容量瓶中加入适量去离子水超声溶解，加入去离子水定容至刻度，得浓度为1000mg／L。在pH值为10、温度为80℃的条件下水解15min，直接进样测定。
2结果与讨论
2.1水解条件的优化
甲磺酸甲酯在常温及中性条件下比较稳定，但在碱性条件下会发生水解，这也是我们试验的 理论根据，考虑到酯类物质水解效率主要由溶液碱性、温度和时间。因此我们对这三个水解条件进行优化。水解率是根据相同摩尔浓度的甲磺酸和甲磺酸甲酯(水解后)的峰面积计算。水解率计算公式见公式(1)
2.1.1水解pH值的选择考虑到甲磺酸甲酯pH值对水解程度的影响，我们试验时保持对甲磺酸甲酯溶液的水解时间和水解温度不变，只改变溶液的pH值。观察pH值对甲磺酸甲酯水解率的影响。以pH值为横坐标，甲磺酸甲酯水解率为纵坐标作图。结果表明当pH值为10时甲磺酸甲酯的水解效果最好。如附图3所示。
2.1.2水解时间的选择考虑到甲磺酸甲酯水解时间对水解程度的影响，保持甲磺酸甲酯溶液的pH值为10、温度为80℃不变，只改变甲磺酸甲酯溶液的水解时间，观察水解时间对甲磺酸甲酯水解率的影响。以甲磺酸甲酯溶液的水解时间为横坐标，甲磺酸甲酯水解率为纵坐标作图。结果表明当水解时间为15min时甲磺酸甲酯的水解效果最好。如附图2所示。
2.1.3水解温度的选择考虑到水解温度对甲磺酸甲酯水解率的影响，保持甲磺酸甲酯溶液的pH值为10、水解时间为15min不变，只改变溶液的水解温度。观察水解温度对甲磺酸甲酯水解率的影响。以水解温度为横坐标，甲磺酸甲酯水解率为纵坐标作图。结果表明当水解温度为80℃时甲磺酸甲酯的水解效果最好。如附图4所示。
2.1.4甲磺酸甲酯水解浓度范围别取0.5mg／L、1.0mg／L、2.0mg／L、5.0mg／L、10.0mg／L的甲磺酸甲酯在pH值为10、温度为80℃的条件下水解15min，不同浓度的甲磺酸甲酯的水解率分别为：100％、100％、100％、100％、97.04％。可见，在述浓度范围内，在最佳条件下，甲磺酸甲酯能够完全水解。甲磺酸甲酯水解后的色谱图见附图5.
2.2方法学考察
标准曲线制备：分别配置10.00mg／L、5.00mg／L、2.00mg／L、1.00mg／L、0.50mg／L的甲磺酸标准溶液按照上述色谱条件进样，以峰面积对应质量溶度进行线性回归得线性回归方程Y＝8.71781X-1.77812线性相关系数R＝0.9994；重现性试验：取5mg／L甲磺酸标准品在上述色谱条件下连续进样七针，记录色谱图。甲磺酸的RSD为0.86％；取7个试管每个试管中都加入5.00mg／L的甲磺酸甲酯，在上述水解条件下水解后进样，记录色谱图。甲磺酸甲酯的RSD为0.80％；检出限：通过信躁比等于3(S／N＝3)计算得，检出限为0.10mg／L；加标回收率：另取7个试管从1000mg／L的齐多夫定样品溶液中分别取10mL(在最佳水解条件 下水解后)加入50μL浓度为1000mg／L的甲磺酸标样，使每个试管中样品加标后浓度为5.00mg／L。将加入标样的样品在最佳的试验条件下进样，并根据峰面积计算加标回收率。样品的加标回收率分别为：92.06％、94.08％、97.28％、94.43％、94.43％、96.98％、96.90％。
2.3样品测定
取5批样品按照实验条件水解，在上述色谱条件下进样，均未检测到甲磺酸甲酯。
3结论
上述实施例根据甲磺酸甲酯在碱性条件下水解生成甲磺酸，采用离子色谱法测定齐多夫定中残留的甲磺酸甲酯。本实验研究了pH值、温度、时间对甲磺酸甲酯的影响，确定了甲磺酸甲酯的最佳水解条件，同时还确定了最佳色谱条件。该方法操作简单、重现性好，并且在实际样品的检测中具有很高的准确性。
本方法利用甲磺酸甲酯在碱性条件下能完全水解生成甲磺酸和甲醇，通过检测甲磺酸甲酯水解后的甲磺酸的含量来测定甲磺酸甲酯的含量。利用离子色谱法，以电导检测器为检测手段，阴离子交换柱为分离手段来检测甲磺酸的含量。这样不仅简化了操作过程，还降低了检测成本。并且本方法还具有很好的稳定性和灵敏度。
本发明所述的离子色谱法测定甲磺酸甲酯，巧妙的利用甲磺酸甲酯在碱性条件下能够完全水解这一特点，避免了气相色谱-质谱联用技术的使用。大大简化了操作、降低了检测成本。并且本方法具有很好的稳定性和灵敏度。
本发明的方法还可以应用于其他的能够水解完全的酯类化合物的检测，还可以应用于食品、环境和药代动力学分析领域。
上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求保护范围内，对本发明做出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种测定齐多夫定中的甲磺酸甲酯含量的方法，其特征在于，
甲磺酸甲酯在碱性条件下加热水解生成甲磺酸和甲醇，以电导检测器为检测手段，经过阴离子交换柱分离后经过抑制器，然后通过检测甲磺酸的含量从而得到甲磺酸甲酯的含量；
步骤如下：
1）标准溶液的配制：称取甲磺酸0.1g置于10mL的容量瓶中，加入去离子水定容；
2）淋洗液配制：6.3mmol/L NaHCO3和1.7mmol/LNa2CO3的混合液；
3）标准曲线制作：采用逐级稀释的方法配制不同浓度标准溶液色谱进样分析，得线性回归方程为Y=8.71781X-1.77812，线性相关系数R=0.9994；
4）甲磺酸甲酯的前处理：称取甲磺酸甲酯0.1g置于10mL的容量瓶中，加入2mL甲醇待甲磺酸甲酯溶解后加入去离子水定容置刻度；甲磺酸甲酯的水解条件为：pH值为10、水解温度为80℃、水解时间为15min；
5）测定：淋洗液由泵输送流经阴离子交换柱，所述的步骤4）中甲磺酸甲酯水解后的产物进入分离系统，在阴离子交换柱上被分离，流经抑制器，最后进入检测器检测后得色谱峰，对色谱峰面积处理后得实验数据；
6）实际样品的测定：用所述的步骤4)中样品前处理的方法将齐多夫定水溶液配制好，进行水解，水解液色谱进样；进样量：30μL，泵的流速为0.5mL/min；
水解后的甲磺酸在0.5-10mg/L的范围内具有线性关系，线性相关系数为0.9994，检出限为0.10mg/L，加标回收率为92.06%-97.28%，相对标准偏差（RSD）0.80%。
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