CN103913532A - 一种利用离子交换色谱法测定n-乙酰氨基葡萄糖的方法 - Google Patents
一种利用离子交换色谱法测定n-乙酰氨基葡萄糖的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103913532A CN103913532A CN201410147268.8A CN201410147268A CN103913532A CN 103913532 A CN103913532 A CN 103913532A CN 201410147268 A CN201410147268 A CN 201410147268A CN 103913532 A CN103913532 A CN 103913532A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acetamido
- deoxy
- glucose
- exchange chromatography
- acetylglucosamine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法。在离子交换色谱仪上，采用DionexAminoPacPA10色谱柱，柱温30℃，以10mmol/L氢氧化钠为流动相，电导检测器检测，采用外标法绘制N-乙酰氨基葡萄糖的浓度-峰面积标准曲线，计算得到N-乙酰氨基葡萄糖的含量。本发明首次建立了高效液相离子交换色谱精确定量测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法，采用DionexAminoPacPA10色谱柱，通过10mmol/L氢氧化钠等度洗脱显著提高了N-乙酰氨基葡萄糖的分离度及检测效率。该方法精密度高、重现性好、准确度高、能够实现对样品的直接检测，无需对样品进行其他前处理，大大减少分析时间、提高检测方法的准确性、方便可靠，对于N-乙酰氨基葡萄糖产品的检测评价和推广应用具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于化学物质定量分析技术领域，涉及一种N-乙酰氨基葡萄糖的定量分析方法，具体涉及一种利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法。
背景技术
N-乙酰氨基葡萄糖是几丁质和壳聚糖重要的水解产物，N-乙酰氨基葡萄糖作为治疗骨关节炎、风湿性关节炎药物已经在医药领域得到广泛应用。此外，N-乙酰氨基葡萄糖作为低热量甜味剂在食品添加剂领域也有广泛的应用。
目前，对N-乙酰氨基葡萄糖的定量测定主要采用以下几种方法：
（1）3,5-二硝基水杨酸（DNS法）。该法对于N-乙酰氨基葡萄糖有较好的显色效果，但此法灵敏度较低，测定范围较小，在200-1000 ug/L之间。
（2）改良的Schales法。该法对于N-乙酰氨基葡萄糖也有较好的显色效果，此法的测定范围在10-80 ug/L之间灵敏度较高，稳定性好，重复性好，但是其测定范围较窄，对实验操作要求较高，误差较大。
（3）Elson-Morgan法。该法是测定氨基糖的特征显色法，用于测定N-乙酰氨基葡萄糖时需将N-乙酰氨基葡萄糖水解成游离的氨基葡萄糖后测定，其缺点是N-乙酰氨基葡萄糖在水解过程中存在不完全水解现象，因此该法不能用于精确测定N-乙酰氨基葡萄糖的含量。
上述化学方法都是通过显色反应来实现样品中N-乙酰氨基葡萄糖含量的测定，显色反应受样品自身颜色的影响较大，难以精确定量，误差较大。因此研究和开发一种准确、快速的N-乙酰氨基葡萄糖的定性、定量分析方法对于该类产品的检测评价和推广应用具有重要的意义。
发明内容
发明目的：针对现有检测技术的不足，本发明的目的是提供一种利用离子交换色谱法检测N-乙酰氨基葡萄糖的方法，该方法精密度高、重现性好、准确度高，能够实现对样品的直接检测，无需对样品进行其他前处理，大大减少分析时间、提高检测方法的准确性、方便可靠。
技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种利用离子交换色谱法检测N-乙酰氨基葡萄糖的方法，包括以下步骤：
（1）离子交换色谱系统与色谱条件：
在美国Dionex ICS5000离子交换色谱系统上，采用Dionex AminoPac PA10（2×250mm）色谱柱带保护柱，柱温30℃，自动上样，上样量25μL；以10mmol/L氢氧化钠为流动相，流速0.25mL/min。电化学检测器检测模式为金工作电极和pH-Ag/AgCl复合型参比电极，采用积分脉冲安培检测法和色谱峰面积积分法测定N-乙酰氨基葡萄糖的含量；
（2）N-乙酰氨基葡萄糖保留时间（RT）和标准工作方程测定
以N-乙酰氨基葡萄糖标准品配制0.5-10mg/L的标准溶液，采用步骤（1）中的色谱条件分析，得到N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间；利用外标法绘制N-乙酰氨基葡萄糖浓度--峰面积标准曲线，得到N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程；
（3）N-乙酰氨基葡萄糖的测定
将含N-乙酰氨基葡萄糖的待测样品溶解于20-30℃的蒸馏水中，定容并调节待测N-乙酰氨基葡萄糖的浓度0.5-10.0mg/L，于10000rpm条件下离心10min后以0.22μm微滤膜过滤上清液得样品液，采用步骤（1）中的色谱条件进行色谱检测，根据N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间确定N-乙酰氨基葡萄糖峰，根据N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程计算N-乙酰氨基葡萄糖的含量。
步骤（2）中，N-乙酰氨基葡萄糖保留时间为4.784min；
步骤（2）中，N-乙酰氨基葡萄糖标准工作方程为：A = 3.3849c+1.0002。上述标准工作方程中，A表示色谱峰面积（nC·min），c表示N-乙酰氨基葡萄糖组分浓度（mg/L）。
有益效果：与现有的N-乙酰氨基葡萄糖的测定方法相比，本发明利用高效液相离子交换色谱测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法具体的优点包括：首次建立了高效液相离子交换色谱精确定量测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法，采用Dionex AminoPac PA10（2×250mm）色谱柱，通过10mmol/L氢氧化钠等度洗脱显著提高了N-乙酰氨基葡萄糖的分离度及检测效率。该方法精密度高、重现性好、准确度高、能够实现对样品的直接检测，无需对样品进行其他前处理，大大减少分析时间、提高检测方法的准确性、方便可靠，对于N-乙酰氨基葡萄糖产品的检测评价和推广应用具有重要意义。
附图说明
图1是N-乙酰氨基葡萄糖标准品离子色谱图；图中横坐标表示N-乙酰氨基葡萄糖组分的保留时间RT（min），纵坐标表示电化学检测器所检测得到的脉冲安培信号（nC）；
图2是含N-乙酰氨基葡萄糖实际样品的高效液相离子交换色谱测定的图谱；图中横坐标表示N-乙酰氨基葡萄糖组分的保留时间RT（min），纵坐标表示电化学检测器所检测得到的脉冲安培信号（nC）。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明
实施例1
1）高效液相离子交换色谱系统及色谱条件
高效液相离子交换色谱系统：美国Dionex ICS-5000离子色谱系统，配备双泵（DP）内置真空脱气模块、电化学检测器（ED）和自动进样器（Dionex AS-DV），色谱系统的运行软件采用Chromeleon 6.80色谱工作站；色谱条件：色谱柱： Dionex AminoPac PA10色谱柱（2×250mm）；保护柱为Dionex AminoPac PA10（2×50mm）；柱温：30℃；进样体积：25.0μL，流速为0.25mL/min。
淋洗条件：以10mmol/L氢氧化钠为淋洗液进行等度洗脱。
信号检测：电化学检测器检测模式为金工作电极和pH-Ag/AgCl复合型参比电极，采用积分和脉冲安培检测法和色谱峰面积积分法测定N-乙酰氨基葡萄糖的含量，该组分测定的标准四电位波形如表1所示。
表1 N-乙酰氨基葡萄糖测定的标准四电位波形
2）N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间（RT）和标准工作方程的测定
N-乙酰氨基葡萄糖购自美国Sigma公司。配制0.5-10mg/L的N-乙酰氨基葡萄糖标准溶液，采用上述高效液相离子交换色谱系统测定N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间和标准工作方程，测定结果如图1和表2所示。图中色谱峰为：N-乙酰氨基葡萄糖。色谱峰保留时间（RT）：N-乙酰氨基葡萄糖 4.784min。
表2 N-乙酰氨基葡萄糖高效液相离子交换色谱标准工作方程测定
N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程为：A=3.3849c+1.0002，相关系数R2=0.9973；标准工作方程中，A表示色谱峰面积（nC·min），c表示N-乙酰氨基葡萄糖的浓度（mg/L）。检出限（mg/L）：0.018，定量限：0.062（mg/L），精密度（%）：保留时间相对偏差≤0.19%，峰面积相对偏差≤0.52%，加标回收率：100.78%-108.43%。
实施例2 实际样品中N-乙酰氨基葡萄糖组分的定量分析
含N-乙酰氨基葡萄糖样品的预处理：将含N-乙酰氨基葡萄糖的待测样品溶解于20-30℃的蒸馏水中，定容并调节待测N-乙酰氨基葡萄糖的浓度0.5-10.0mg/L，于10000rpm条件下离心10min后以0.2μm微滤膜过滤上清液得样品液，再转入色谱仪自动上样瓶进行色谱测定。
分析和定量测定N-乙酰氨基葡萄糖样品：采用外标法以上述N-乙酰氨基葡萄糖的标准方程定性分析和定量测定N-乙酰氨基葡萄糖样品中N-乙酰氨基葡萄糖的含量。
由图2可知，采用Dionex AminoPac PA10（2×250mm）色谱柱，柱温30℃，上样量25.0μL，以10mmol/L氢氧化钠为淋洗液进行等梯度洗脱，流速为0.25mL/min，实际N-乙酰氨基葡萄糖样品中N-乙酰氨基葡萄糖能够实现高效、快速地分离和检测。在图2中，峰1为N-乙酰氨基葡萄糖的色谱峰。利用实施例1中的标准方程，对上样中N-乙酰氨基葡萄糖的含量进行定量，上样中N-乙酰氨基葡萄糖含量的实际测定结果为1.18mg/L。
Claims (3)
1.一种利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于：
（1）离子交换色谱系统与色谱条件
在美国Dionex ICS5000离子交换色谱系统上，采用Dionex AminoPac PA10色谱柱带保护柱，柱温30℃，自动上样，上样量25μL；以10mmol/L氢氧化钠为流动相，流速0.25mL/min；电化学检测器检测模式为金工作电极和pH-Ag/AgCl复合型参比电极，采用积分脉冲安培检测法和色谱峰面积积分法测定N-乙酰氨基葡萄糖的含量；
（2）N-乙酰氨基葡萄糖保留时间和标准工作方程测定
以N-乙酰氨基葡萄糖标准品配制0.5-10mg/L的标准溶液，采用步骤（1）中的色谱条件分析，得到N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间；利用外标法绘制N-乙酰氨基葡萄糖浓度--峰面积标准曲线，得到N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程；
（3）N-乙酰氨基葡萄糖的测定
将含N-乙酰氨基葡萄糖的待测样品溶解于20-30℃的水中，定容并调节待测N-乙酰氨基葡萄糖的浓度0.5-10.0mg/L，于10000rpm条件下离心10min后以0.22μm微滤膜过滤上清液得样品液，采用步骤（1）中的色谱条件进行色谱检测，根据N-乙酰氨基葡萄糖的保留时间确定N-乙酰氨基葡萄糖峰，根据N-乙酰氨基葡萄糖的标准工作方程计算N-乙酰氨基葡萄糖的含量。
2.根据权利要求1所述的利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步骤（2）中：所述的保留时间为4.784min。
3.根据权利要求1所述的利用离子交换色谱法测定N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步骤（2）中：所述的标准工作方程为：A = 3.3849c+1.0002；式中，A表示色谱峰面积，单位为nC·min，c表示N-乙酰氨基葡萄糖组分浓度，单位为mg/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410147268.8A CN103913532A (zh) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 一种利用离子交换色谱法测定n-乙酰氨基葡萄糖的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410147268.8A CN103913532A (zh) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 一种利用离子交换色谱法测定n-乙酰氨基葡萄糖的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103913532A true CN103913532A (zh) | 2014-07-09 |
Family
ID=51039373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410147268.8A Pending CN103913532A (zh) | 2014-04-14 | 2014-04-14 | 一种利用离子交换色谱法测定n-乙酰氨基葡萄糖的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103913532A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107153037A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-12 | 国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所 | 一种基于窄分布壳聚糖的超滤膜截留率检测方法 |
| CN113917065A (zh) * | 2021-09-30 | 2022-01-11 | 江南大学 | 一种利用离子色谱同时测定乳糖-n-丙糖ii和乳糖-n-新四糖的检测方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH057496A (ja) * | 1991-07-02 | 1993-01-19 | Shin Etsu Chem Co Ltd | オリゴ糖の製造方法 |
| JP2001019698A (ja) * | 1999-07-05 | 2001-01-23 | Japan Science & Technology Corp | 硫酸化オリゴ糖化合物およびその合成法 |
-
2014
- 2014-04-14 CN CN201410147268.8A patent/CN103913532A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH057496A (ja) * | 1991-07-02 | 1993-01-19 | Shin Etsu Chem Co Ltd | オリゴ糖の製造方法 |
| JP2001019698A (ja) * | 1999-07-05 | 2001-01-23 | Japan Science & Technology Corp | 硫酸化オリゴ糖化合物およびその合成法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| DIONEX 中国有限公司应用研究中心: "《Dionex公司分析柱-手册》", 30 December 2004 * |
| 任连杰等: "积分脉冲安培检测 高效阴离子交换色谱法测定盐酸氨基葡萄糖口腔崩解片含量", 《中国生化药物杂志》, vol. 30, no. 5, 31 December 2009 (2009-12-31), pages 323 - 325 * |
| 任连杰等: "积分脉冲安培检测高效阴离子交换色谱法测定盐酸氨基葡萄糖口腔崩解片含量", 《中国生化药物杂志》 * |
| 张思维等: "高效阴离子色谱法测定保健食品中的盐酸氨基葡萄糖", 《色谱》 * |
| 沈国等: "高效离子色谱法测定氨基葡萄糖类化合物", 《中国卫生检验杂志》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107153037A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-12 | 国家海洋局天津海水淡化与综合利用研究所 | 一种基于窄分布壳聚糖的超滤膜截留率检测方法 |
| CN107153037B (zh) * | 2017-05-17 | 2019-11-26 | 自然资源部天津海水淡化与综合利用研究所 | 一种基于窄分布壳聚糖的超滤膜截留率检测方法 |
| CN113917065A (zh) * | 2021-09-30 | 2022-01-11 | 江南大学 | 一种利用离子色谱同时测定乳糖-n-丙糖ii和乳糖-n-新四糖的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109030658B (zh) | 一种婴幼儿乳粉中低聚果糖和棉子糖的检测方法 | |
| CN111443151A (zh) | 复方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的检测方法 | |
| CN102901791A (zh) | 一种再造烟叶中碳酸钙含量的测定方法 | |
| CN110514778B (zh) | 一种果汁中22种糖、糖醇及醇类同时检测的方法 | |
| CN102879485B (zh) | 保留指数在鉴别蜂蜜掺假淀粉糖浆中的应用方法 | |
| CN105372371A (zh) | 同时测定再造烟叶中草酸、琥珀酸、硫酸和磷酸根的离子色谱方法及应用 | |
| CN102288688B (zh) | 一种利用高效液相离子交换色谱测定低聚木糖的方法 | |
| CN103743844A (zh) | 甲醇中乙醇含量的测定方法 | |
| CN103913532A (zh) | 一种利用离子交换色谱法测定n-乙酰氨基葡萄糖的方法 | |
| CN102590370B (zh) | 一种同步测定木质纤维原料反应体系中单糖、糖醛酸和糖酸的方法 | |
| CN110940746A (zh) | 一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法 | |
| CN103728404B (zh) | 离子色谱法测定甲磺酸甲酯含量的方法及应用 | |
| CN110146604A (zh) | 一种测定缓释药物制剂中低含量焦亚硫酸钠的分析方法 | |
| CN103512974B (zh) | 用hplc快速测定饲用金霉素及其杂质含量的方法 | |
| CN111007194B (zh) | 一种利用离子色谱定量尼龙单体中钠离子含量的方法 | |
| CN102331462A (zh) | 一种测定烟用水基胶中氨含量的方法 | |
| CN105334283B (zh) | 离子色谱法同时测定再造烟叶中草酸根、琥珀酸根、硫酸根和磷酸根的样品前处理方法 | |
| Wang et al. | Determination of major sialic acids in dairy products by electrophoretic stacking technology with contactless conductivity detection | |
| CN105259294A (zh) | 一种检测三聚氰胺氰尿酸盐中三聚氰胺和氰尿酸残留量的方法 | |
| CN107389774A (zh) | 一种液体中金属阳离子的毛细管电泳检测方法 | |
| CN104198488A (zh) | 一种测定苯胺中游离氯离子含量的方法 | |
| CN103323541A (zh) | 肝素钠封管注射液的质量检测方法 | |
| CN103995062B (zh) | 一种高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质的方法 | |
| CN105021731A (zh) | 一种葡萄糖酸的检测方法 | |
| CN104931563A (zh) | 一种高选择性的电位型葡萄糖传感器 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140709 |