CN105021731A - 一种葡萄糖酸的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种葡萄糖酸的检测方法，其解决了现有检测方法复杂、检测时间长的技术问题，其包括如下步骤：系统适应性；取葡萄糖酸锌对照品，加水溶解并定量稀释制成对照品溶液和供试品溶液；量取对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程。本发明可用于葡萄糖酸的测定。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测方法，尤其是涉及一种葡萄糖酸的检测方法。
背景技术
葡萄糖酸锌在临床上除了用于治疗缺锌引起的生长发育迟缓、营养不良、厌食症等，还可用来治疗口腔溃疡、胃溃疡、尘肺、普通感冒，提高机体免疫力，促进智力发育等。
葡萄糖酸是葡萄糖的醛基经氧化生成的糖酸，是一种有机弱酸，其分子式中含有五个羟基，是一种五羟基己酸。葡萄糖酸无毒，无腐蚀性，与锌离子通过络合作用形成水溶性的络合物。
中国药典2010年版二部葡萄糖酸锌颗粒质量标准中采用滴定法测定锌离子的含量。测试方法规定如下：取装量差异项下的内容物，研细，混合均匀，精密称取本品适量(约相当于葡萄糖酸锌0.5g)，加水100ml，微热使溶解，加氨-氯化铵缓冲液(pH＝10.0)10ml，加氟化铵1g与铬黑T指示剂少许，用乙二胺四醋酸二钠液(0.05mol/L)滴定至溶液自紫红色变为蓝绿色，并持续30秒不褪色。每1ml的乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)相当于22.78mg的C12H22O14Zn。该方法用于测定锌元素的含量。虽然锌元素在自然界中是稳定的，但在特定条件下葡萄糖酸根可能会降解成其他物质，致使锌盐中葡萄糖酸的含量降低，这不仅会影响到与其络合的锌离子，而且也会对产品的质量带来影响。
公开号为CN 102565212 A和CN 102590370 A的中国发明专利公开了采用离子交换色谱配备电导检测器测定葡萄糖酸的方法，其分别采用离子交换色谱配备电导检测器测定和离子交换色谱配备电化学检测器测定。
上述方法中离子交换色谱法受淋洗液水质影响较高,要求用二次去离子的超纯水才能准确测定。采用梯度淋洗条件复杂，检测时间长。
发明内容
本发明就是为了解决现有检测方法复杂、检测时间长的技术问题，提供一种方法简单、检测时间短的葡萄糖酸的检测方法。
本发明所提供的葡萄糖酸的检测方法，其包括如下步骤：(1)系统适应性：称取葡萄糖酸锌对照品，加水溶解并制成每1ml中含葡萄糖酸0.84mg的溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，葡萄糖酸峰与相邻辅料峰的分离度应大于1.5，连续进样5次，所得葡萄糖酸峰面积的相对标准偏差不超过2.0％；(2)取葡萄糖酸锌对照品，精密称定，分别加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖酸0.67mg、0.84mg和1.01mg的溶液作为对照品溶液；取葡萄糖酸锌颗粒，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖酸0.84mg的溶液，作为供试品溶液；(3)量取所述三种对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关系数不小于0.99；另取供试品溶液，同法测定，用线性回归方程计算。
优选地，液相色谱仪的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱长150mm-250mm，内径为4.6mm。
优选地，色谱柱为Venusil HILIC。
优选地，色谱系统流动相为甲酸水溶液和甲醇的混合溶剂。
优选地，甲酸水溶液(浓度单位g/100ml)0.01％～0.10％。
优选地，甲酸水溶液和甲醇的体积比为(1.86～1.22)：1。
优选地，甲酸水溶液和甲醇的比为1.5:1。
优选地，色谱系统适用的流速范围在0.8ml/min和1.2ml/min之间；适用的柱温范围在25℃和35℃之间。
优选地，甲酸水溶液的浓度(浓度单位g/100ml)为0.05％；适用的流速1.0ml/min；适用的柱温是30℃。
优选地，使用蒸发光检测器，检测条件是漂移管温度：110℃，载气流速：2.0L/min，增益：8。
本发明中，根据蒸发光散射检测器的原理，样品浓度和检测器响应之间呈指数关系，经对数转换后可呈线性。因线性方程的截距不为零，含量测定宜采用随行标曲法，根据线性方程，可获得准确的结果。
附图说明
图1葡萄糖酸锌对照品的HPLC图谱；
图2葡萄糖酸锌颗粒供试品的HPLC图谱；
图3葡萄糖酸锌对照品线性标准曲线图；
图4葡萄糖酸锌空白颗粒的HPLC图谱；
图5线性试验代表HPLC图谱；
图6线性试验标准曲线图；
图7回收率试验代表HPLC图谱；
图8A、图8B、图8C、图8D分别为本发明耐用性试验HPLC谱图；其中，
图8A耐用性考察-流动相比例改变谱图；
图8B耐用性考察-pH改变谱图；
图8C耐用性考察-流速改变谱图；
图8D耐用性考察-柱温改变谱图。
具体实施方式
下面结合具体实例说明本发明，而不是限制本发明的范围。
实施例
1、葡萄糖酸锌颗粒中葡萄糖酸的含量测定
1.1仪器与试药
Agielnt 1200高效液相色谱仪(配备蒸发光散射检测器)；
METTLER XP205电子天平
葡萄糖酸锌颗粒
葡萄糖酸锌对照品
1.2系统适用性
称取葡萄糖酸锌对照品适量，加水溶解并制成每1ml中约含葡萄糖酸0.84mg的溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，葡萄糖酸峰与相邻辅料峰的分离度应符合要求，连续进样5次，所得葡萄糖酸峰面积的相对标准偏差不得过2.0％。
1.3对照品溶液配制
分取称取葡萄糖酸锌对照品21.49mg，26.66mg和31.88mg，加水溶解并定量稀释至25ml，摇匀，作为对照品溶液(1)、(2)、(3)。
1.4供试品溶液配制
分别称取葡萄糖酸锌颗粒1.4019g和1.4145g，加水溶解并稀释至10ml，摇匀作为供试品溶液。
1.5色谱条件
色谱柱：Venusil HILIC
蒸发光散射检测器(参考条件：漂移管温度：110℃，载气流速：2.0L/min，增益：8)
流动相：0.05％的甲酸水溶液-甲醇(60:40)
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：20ul
1.6样品检测
精密量取上述三种对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关系数(r)应不小于0.99；同法测定供试品溶液，用线性回归方程计算供试品中葡萄糖酸的含量。
1.7实验结果
对照品线性方程为y＝2.143x+4.2872，R2为0.9996。测得的葡萄糖酸锌颗粒中葡萄糖酸的含量分别为99.58％和99.92％。检测图谱见图1-图4。
表1 葡萄糖酸含量测定数据处理结果
2、线性试验
称取葡萄糖酸锌标准品适量，加水溶解并分别稀释制成葡萄糖酸浓度为0.66，0.75，0.83，0.91，0.99mg/ml的系列溶液，分别进样20ul，记录峰面积。以峰面积的对数值为纵坐标，进样浓度(mg/ml)的对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：y＝2.3534x+4.3248；R2＝0.9980。试验结果表明，葡萄糖酸在0.6580～0.9869mg/ml的浓度范围内线性关系良好。代表图谱见图5和图6。
表2 线性试验结果
| 样品浓度C | 峰面积A | LogC | LogA |
| 0.6580 | 7764.3 | -0.1818 | 3.8901 |
| 0.7457 | 10863.6 | -0.1274 | 4.0360 |
| 0.8225 | 13371.4 | -0.0849 | 4.1262 |
| 0.9102 | 16664.8 | -0.0409 | 4.2218 |
| 0.9869 | 20546.5 | -0.0057 | 4.3127 |
3、回收率试验
按处方量称取各辅料适量，分别加入标示量80％、100％、120％的葡萄糖酸锌，用水溶解并稀释成线性范围内高、中、低三种浓度的供试液，各三份，照含量测定方法测定，计算回收率。试验结果表明，葡萄糖酸平均回收率均为99.87％，RSD为0.14％，说明本方法准确度良好。代表图谱见图7。
表3 回收率试验结果
4、重复性试验
取葡萄糖酸锌颗粒，配制6份作为供试品溶液，照含量测定项方法进样分析，试验结果表明，葡萄糖酸含量测定的RSD值为0.75％，表明本方法重复性良好。
表4 重复性试验结果
5、中间精密度试验
取葡萄糖酸锌颗粒，配制6份相同浓度的供试液，由两个分析人员分别在不同日期按含量测定方法进行测定，试验结果表明，葡萄糖酸的平均含量为100.3％，RSD值为0.80％，说明本方法中间精密度良好。
表5 中间精密度试验结果
6、溶液稳定性试验
取供试品溶液，分别于0、2、4、8、12小时进样分析，试验结果表明，葡萄糖酸峰面积的RSD值(n＝5)为1.17％，表明供试品溶液在12小时内稳定。
表6 溶液稳定性试验结果
| 时间(h) | 0 | 2 | 4 | 8 | 12 | RSD(％) |
| 峰面积 | 14192.7 | 14463.2 | 14151.9 | 14536.6 | 14387.1 | 1.17 |
7、耐用性试验
取葡萄糖酸锌颗粒，将含量测定的色谱条件做微小变动(改变流动相的组成比例，pH值，柱温，流速)，进样测定，试验结果表明：色谱条件(流动相比例，pH值，柱温，流速)做微小变动，对葡萄糖酸锌颗粒中葡萄糖酸的含量测定的结果没有影响。
表7 耐用性试验结果
本方法采用高效液相色谱法，蒸发光检测器，十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，为常见通用的检测方法，样品检出时间短，分析效率高。
Claims (10)
1.一种葡萄糖酸的检测方法，其特征是包括如下步骤：
(1)系统适应性：称取葡萄糖酸锌对照品，加水溶解并制成每1ml中含葡萄糖酸0.84mg的溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，葡萄糖酸峰与相邻辅料峰的分离度应大于1.5，连续进样5次，所得葡萄糖酸峰面积的相对标准偏差不超过2.0％；
(2)取葡萄糖酸锌对照品，精密称定，分别加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖酸0.67mg、0.84mg和1.01mg的溶液作为对照品溶液；取葡萄糖酸锌颗粒，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖酸0.84mg的溶液，作为供试品溶液；
(3)量取所述三种对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关系数不小于0.99；另取供试品溶液，同法测定，用线性回归方程计算。
2.根据权利要求1所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于所述液相色谱仪的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱长150mm-250mm，内径为4.6mm。
3.根据权利要求2所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于所述色谱柱为Venusil HILIC。
4.根据权利要求1所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于色谱系统的流动相为甲酸水溶液和甲醇的混合溶剂。
5.根据权利要求4所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于甲酸水溶液浓度为0.01％～0.10％，单位为g/100ml。
6.根据权利要求4所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于甲酸水溶液和甲醇的体积比为(1.86～1.22)：1。
7.根据权利要求6所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于甲酸水溶液和甲醇的比为1.5:1。
8.根据权利要求1或5所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于色谱系统的适用的流速范围在0.8ml/min和1.2ml/min之间；适用的柱温范围在25℃和35℃之间。
9.根据权利要求8所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于所述甲酸水溶液的浓度为0.05％，单位为g/100ml；适用的流速1.0ml/min；适用的柱温是30℃。
10.据权利要求1所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于使用蒸发光检测器，检测条件是漂移管温度：110℃，载气流速：2.0L/min，增益：8。
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2015
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