CN102507809A

CN102507809A - 测定亚硒酸钠维生素e注射液中维生素e含量的方法

Info

Publication number: CN102507809A
Application number: CN201110390110XA
Authority: CN
Inventors: 魏桂香; 张江艳; 李倩; 裴志勤
Original assignee: HEBEI KEXING DRUG INDUSTRY Co Ltd
Current assignee: HEBEI KEXING DRUG INDUSTRY Co Ltd
Priority date: 2011-11-30
Filing date: 2011-11-30
Publication date: 2012-06-20

Abstract

本发明公开了一种测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法，即利用HPLC法测定维生素E的含量，该方法的色谱条件为：（1）色谱柱Welchrom-C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；（2）流动相为混合比例为2：98的水和甲醇；（3）紫外检测器的检测波长为285nm；所用流动相的流速为1.2mL/min，进样体积为20μL，柱温为35℃。本发明具有操作简便、重复性良好、专属性强等特点，提高了检测的灵敏度和准确度，另外本发明避免使用传统检测方法中利用气相色谱进行检测使用易燃气体的情况，提高了操作的安全性。本发明适用于对亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E的含量进行测定。

Description

测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及定量测定制剂中维生素E含量的方法，具体地说是一种测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法。

背景技术

国内对用HPLC法测维生素E预混剂中微生素E的含量的研究较多，但对亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量测定的液相方法研究较少。测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E的含量的常用方法为气相方法，2010版中华人民共和国药典有详细的描述。

目前，亚硒酸钠维生素E注射液都是以亚硒酸钠和DL-α-生育酚油状原料和适宜的辅料配制而成，用于防治动物的各种维生素E缺乏症。目前2010版《中国兽药典》亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量测定主要为气相色谱法，但由于气相色谱法操作复杂，重现性不好，检测时间长，经试验，高效液相色谱法测定亚硒酸钠维生素E中维生素E的结果准确可靠，且操作简便、快速，使标准的适用性更强。

发明内容

本发明要解决的技术问题，是提供一种测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法，该方法属于HPLC法，具有操作简便、准确、重复性好、专属性强等特点。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法，该方法属于HPLC法，其色谱条件为：

（1）色谱柱Welchrom -C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；

（2）流动相为混合比例（体积比）为2：98的水和甲醇；

（3）紫外检测器的检测波长为285nm。

作为本发明的一种限定，该HPLC法测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法，其色谱条件为：所用流动相的流速为1.2mL/min，进样体积为20μL，柱温为35℃。

本发明方法的建立过程：

1、仪器与试剂

仪器：岛津LC-2010A高效液相色谱仪（LC-2010型号检测器，LC-2010型号泵，LC-2010柱温箱，LC-2010自动进样器），LCsolution色谱工作站；

试剂：甲醇（色谱纯），水（二次去离子水），亚硒酸钠维生素E注射液（样品，河北科星药业有限公司生产），维生素E对照品（中国药品生物制品检定所批号100062-200608，含量为98.8%）。

2、含量测定方法的建立

2.1、波长的选择

根据维生素E紫外光吸收具有的特性，测定了它的甲醇溶液在紫外光下的吸收图谱，维生素E的检测波长选用285nm。

2.2、溶液的配制

溶剂为甲醇。

对照品溶液的配制：精密称取维生素E对照品100mg置于100mL的棕色容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液M。

样品溶液的配制：精密量取样品2mL（约相当于维生素E 100mg）置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液D。

2.3、溶剂、空白辅料的干扰性试验和维生素E的定性

为排除色谱图中有溶剂和空白辅料干扰维生素E峰的出现，对单独的溶剂和空白辅料进行专属性试验，以增加检测的准确性。

溶剂的影响：取溶剂甲醇过滤，作为样品N。

空白辅料的影响：按配方量除维生素E外，亚硒酸钠和其他辅料按工艺制成100mL样品溶液，作为空白样品1。精密量取此空白样品1，2.00mL置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得，作为样品F。

照上述色谱条件进样，分别取样品N和样品F各20μL，进样，记录色谱图，见图1和图2。

结果显示：由图1可以看出检测结果接近于基线没有干扰峰出现，表明溶剂对维生素E的测定没有影响。由图2可以看出没有干扰峰出现，表明空白辅料和亚硒酸钠对维生素E测定结果没有影响。

维生素E的定性：取2.2项下的对照品溶液M 20μL，按照上述色谱条件进样，记录色谱图，如图3所示；取2.2项下的样品溶液D 20μL，按照上述色谱条件进样，记录色谱图，如图4所示。

说明样品溶液的色谱图中维生素E与对照品溶液的色谱图中维生素E保留时间一致。

2.4、样品的测定

取批号为11062601、110628014和11071601的三批样品，依照上述2.2方法制备样品溶液，每批样品分别做2个平行，各取20μL进样，按外标法计算亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E的含量，测定结果如表1所示，根据试验测定结果，确定维生素E含量为标示量的90.0%-110.0%。

2.5、方法的专属性

由于维生素E本身的特性，对空气中的氧气、光和热比较敏感，在操作的过程中会发生降解，避免降解产物对色谱峰的干扰，现进行破坏性试验下的分离，验证检测方法。

破坏性试验下的分离：取本含量测定所需的样品5组，每组3个平行，分别置于酸性环境（0.1mol/L的盐酸溶液中）、碱性环境（0.1mol/L的氢氧化钠溶液中）、氧化环境（20%双氧水中）、热环境（60℃）和光环境（4000LμX）的条件下，破坏3h，取破坏后的样品各20μL，进样，实验结果表明，本制剂在上述破坏性条件下均有降解产物生成，但是降解产物与主峰均能够达到较好的分离效果，且降解产物峰之间也可以有较好的分离效果。

2.6、线性关系及范围的考察

取不同进样量的对照品溶液M：5μL、10μL、20μL、25μL和30μL，照上述色谱条件注入液相色谱仪，并记录色谱图，如图5-9所示。

通过色谱图计算质量与峰面积之间的线性关系，得维生素E的线性回归曲线与回归方程。以峰面积A为纵坐标，对照品质量（C）（μg）为横坐标进行线性回归，得维生素E的线性回归方程A=23.778X+0.1139(R=0.999999)，测定结果如表2所示，结果显示维生素E在质量为4.8μg—23.8μg范围内的线性关系良好。

2.7、检测线及定量限的确定

将对照品溶液M逐级稀释，进样，记录峰高，当峰高为基线噪声的10倍高时的浓度即定量限浓度为1.6μg/mL，2-3倍高时的浓度即检测限浓度为0.5μg/mL。

2.8、耐用性的考察

选用不同生产厂家和规格的色谱柱，对同一样品按上述试验条件进行测定，记录色谱图，检测结果如图10–13所示，测定结果如表3所示，结果显示理论塔板数良好，分离度，拖尾因子均符合规定，试验表明不同的色谱柱测定时，耐用性良好，能够达到要求。

2.9、精密度试验的考察

取对照品溶液M，5份各20μL，按照上述色谱条件连续进样5次，并记录色谱图，如图14-18所示。计算该方法进样的精密度，测试结束如表4所示，测得维生素E的相对标准偏差RSD﹤2%，表明本方法的进样精密度良好。

2.10、稳定性试验

取对照品溶液M和样品溶液D分别放置0h、2h、4h、6h后进样测定,每个时间段分别进样，实验结果如表5所示，并计算得出维生素E的平均峰面积的相对标准偏差RSD﹤2%，说明供试品溶液在6h内稳定。

2.11、重复性试验

精密量取同一批号的亚硒酸钠维生素E注射液样品5份，测定其含量，结果维生素E的平均含量为99.5%，结果如表6所示，相对标准偏差RSD＜2%。说明方法的重复性良好。

2.12、添加空白辅料的回收率的考察

供试品溶液A：精密量取2.3项下的空白样品1，1.00ml置于50mL棕色容量瓶中共9份，分为3组，每组3份，每组分别加入维生素E对照品 40mg，50mg，60mg（相当于标示量的80%，100%，120%），用甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，即得。

对照品溶液H：精密称取维生素E对照品40mg，置于50ml的棕色容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

照上述方法，测定维生素E的含量，按下式计算回收率，结果如表7所示，表明平均加样回收率为100.0%（n=9），RSD为0.33%，说明其回收率合格。

2.13、不添加空白辅料的回收率的考察

供试品溶液S：精密量取样品溶液1.00ml置于50ml棕色容量瓶中，共9份，分为3组，每组3份，每组分别加入维生素E对照品 40mg，50mg，60mg（相当于标示量的80%，100%，120%），用甲醇溶解并定容，摇匀，即得。

对照品溶液I：精密称取维生素E对照品50mg，置于50ml的棕色容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

照上述方法，测定维生素E的含量，计算回收率，结果如表8所示，表明平均加样回收率为100.2%（n=9），RSD为0.35% ，说明其回收率合格。

通过上述方法的建立过程，本方法测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E的含量能够达到真实和准确地分析要求。

由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于：本发明采用HPLC法检测亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量，操作简单，提高了检测的灵敏度和准确度；另外本发明避免了传统检测方法利用气相色谱进行检测时使用易燃气体的情况，提高了操作的安全性。

本发明适用于对亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E的含量进行测定。

附图说明

图1为本发明溶剂干扰性试验的HPLC图；

图2为本发明空白辅料干扰性试验的HPLC图；

图3为本发明维生素E对照品的HPLC图；

图4为本发明亚硒酸钠维生素E注射液样品的HPLC图；

图5为本发明对照品浓度为5μL线性范围测定的HPLC图；

图6为本发明对照品浓度为10μL线性范围测定的HPLC图；

图7为本发明对照品浓度为20μL线性范围测定的HPLC图；

图8为本发明对照品浓度为25μL线性范围测定的HPLC图；

图9为本发明对照品浓度为30μL线性范围测定的HPLC图；

图10为本发明色谱柱型号为岛津VP-ODS柱（250*4.6mm，5μm）的耐用性检测的HPLC图；

图11为本发明色谱柱型号为Agilent Eclipse XDB-C₁₈（250*4.6mm，5μm）的耐用性检测的HPLC图；

图12为本发明色谱柱型号为Diamonsil C₁₈(2)（150*4.6mm，5μm）的耐用性检测的HPLC图；

图13为本发明色谱柱型号为Thermo BDS HYPERSIL（150*4.6mm，5μm）的耐用性检测的HPLC图；

图14为本发明对照品精密度试验第1次测定的HPLC图；

图15为本发明对照品精密度试验第2次测定的HPLC图；

图16为本发明对照品精密度试验第3次测定的HPLC图；

图17为本发明对照品精密度试验第4次测定的HPLC图；

图18为本发明对照品精密度试验第5次测定的HPLC图；

本发明下面将结合说明书附图与具体实施例作进一步详细说明，但是本发明的保护范围并不限于实施例。

具体实施方式

以下实施例只用于说明本发明，并不限定本发明。

实施例 一种测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法

本测量方法是利用HPLC法测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量。该方法的色谱条件为：

（1）色谱柱Welchrom -C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；

（2）流动相为混合比例为2：98的水和甲醇，混合比例为体积比；

（3）紫外检测器的检测波长为285nm；

其中：所用流动相的流速为1.0-1.2mL/min，进样体积为10-20μL，柱温为30-35℃。

二、实测

按照以下检测方法对4批亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E进行含量测定。

利用色谱柱Welchrom -C₁₈（250mm×4.6mm，5μm），以水：甲醇= 2：98（体积比）为流动相，检测波长为285nm，流速为1.2mL/min，柱温35℃，进样量20μL，理论塔板数按维生素E峰计算应不小于5000，主峰与杂质峰的分离度符合要求，拖尾因子不大于1.5。

对照品溶液的配制：取维生素E对照品100mg精密称定置100mL的棕色容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液M。

样品溶液的配制：精密量取亚硒酸钠维生素E注射2.00mL（约相当于维生素E 100mg）置100mL的棕色容量瓶中甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得样品溶液D。

在本发明的色谱条件下，取样品溶液和对照品溶液各20μL，进样，记录色谱图，以外标法按峰面积计算维生素E的含量。主峰保留时间约为20min。

结果见下表：

Claims

1.一种测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法，其特征在于：它是利用HPLC法测定维生素E的含量，该方法的色谱条件为：

（1）色谱柱Welchrom -C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；

（2）流动相为混合比例为2：98的水和甲醇；

（3）紫外检测器的检测波长为285nm。

2.根据权利要求1所述的测定亚硒酸钠维生素E注射液中维生素E含量的方法，其特征在于该方法的色谱条件为：所用流动相的流速为1.2mL/min，进样体积为20μL，柱温为35℃。