CN103724381A

CN103724381A - 刺槐素-7-o-鼠李糖葡萄糖苷的制备方法及其用途

Info

Publication number: CN103724381A
Application number: CN201210389149.4A
Authority: CN
Inventors: 张铁军; 许浚; 韩越; 王丽莉
Original assignee: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co Ltd
Current assignee: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co Ltd
Priority date: 2012-10-15
Filing date: 2012-10-15
Publication date: 2014-04-16

Abstract

本发明提供了一种以小蓟为原料制备刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的方法及其在制药中的新用途。本发明的刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷由小蓟经提取、过滤、浓缩、离心后得沉淀；沉淀用有机溶剂提取脱脂后，再用碱溶酸沉法纯化，即得纯的刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷。它对醛糖还原酶具有明显的抑制作用。临床可用于醛糖还原酶相关糖尿病并发症的预防和治疗。

Description

刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的制备方法及其用途

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及以小蓟为原料制备刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的技术工艺及其在制药中的新用途。

背景技术

糖尿病(diabetes meUitus，DM)是一组以持续高血糖为主要特征的代谢综合征。随着人民生活水平的日益提高，糖尿病患病率有急剧增加的趋势，已成为影响人类身体健康的常见疾病之一。长期高血糖会引起多种急慢性并发症，如糖尿病肾病、视网膜病变、神经病变、心脑血管病变等，从而导致了糖尿病患者的高致残率和致死率。大量研究证实，糖尿病并发症是由于糖尿病患者体内多元醇代谢通路异常致使体内山梨醇蓄积造成。醛糖还原酶(aldosereductase，AR)是多元醇代谢通路的关键酶，它可将葡萄糖还原成山梨醇，山梨醇又由于自身有极性原因使其不易通过细胞膜，因此造成体内蓄积。大量动物实验和临床研究表明醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitors，ARIs)可有效改善糖尿病患者多元醇代谢通路异常，从而达到预防和延缓糖尿病并发症的产生。

ARIs按结构大致可分为海因类，羧酸及其衍生物类及其它，如杂环类，化合物。索比尼尔是第一个在体内具有较高活性的海因类化合物，但因严重的过敏反应已终止于临床实验。虽然此后有不少此类药物进入临床研究，但都因为严重的毒副作用而被迫终止，只有依帕司他（Epalrestat）作为治疗糖尿病肾病及神经性病变的药物，仍然在临床上使用，但并未获得FDA的认可。

刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷结构式如下：

刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷为黄酮类化合物，主要在醉鱼草科和菊科植物中含有，如野菊花、密蒙花、缬草等，具有广泛的药理作用。如抗炎、止血等。国内外文献均未见有关刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷抑制醛糖还原酶活性的报道。本发明提供了一种刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的制备方法及其作为醛糖还原酶抑制剂，用于糖尿病并发症的治疗。

发明内容

本发明的目的是提供一种刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的制备方法及其作为醛糖还原酶抑制剂的用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一方面，本发明提供一种以小蓟为原料制备刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）取小蓟药材经溶剂提取；

（2）将步骤（1）所得的提取液浓缩，放至室温，离心，得沉淀；

（3）将步骤（2）中的沉淀用有机溶剂提取脱脂后，弃去有机层，得沉淀；

（4）将步骤（3）中的沉淀加入适当浓度氢氧化钠溶液，并加入醇溶液，搅拌使溶解，过滤，取滤液，用酸调节pH至6-7，析出沉淀，过滤，滤饼用蒸馏水充分清洗后，干燥，粉碎，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷。

优选地，所述步骤（1）中的提取方法为温浸、热回流和/或渗漉。

所述步骤（1）中的溶剂选自水、碱溶液、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种；优选为40%-95%（体积分数）的乙醇溶液。

所述步骤（3）中的有机溶剂为石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯等。

所述步骤（4）中的氢氧化钠溶液优选为浓度5%-20%。

所述步骤（4）中的醇溶液为甲醇、乙醇或二者的混合溶液等；优选为30%-70%（体积分数）的乙醇溶液。

所述步骤（4）中的酸为浓盐酸、冰醋酸或浓硫酸等。

上述制备方法简单易行、提取效果好、易于工业推广应用。

又一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含上述刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷。

优选地，所述药物组合物为胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。

可以采用常规方法将刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷与任何一种或一种以上药用辅料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述剂型。

再一方面，本发明提供所述的刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷在制备预防和/或治疗醛糖还原酶相关疾病的药物中的用途。

优选地，其中所述糖尿病并发症为白内障、视网膜病变、神经病变、肾脏病变等。

对本发明的药物的药效学部分进行了初步研究，结果发现本发明的药物对醛糖还原酶具有明显抑制作用。在上述药理活性试验的基础上，刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷在临床可用于醛糖还原酶相关糖尿病并发症的预防和治疗。

本发明的药物原料来源易得，易于产业化，可以根据需要制成各种剂型，为临床提供了使用更加方便、治疗更加有效、质量更加可控的现代中药，为患者带来更多的益处，从而产生了巨大的社会效益。

附图说明

图1不同浓度刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷对大鼠晶状体AR抑制率曲线

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

取小蓟药材10kg，用80%（体积分数）乙醇100L热回流提取二次，每次2小时，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，放置至室温，离心，收集沉淀。上述沉淀经二氯甲烷脱脂。脱脂后沉淀加入1L浓度5%氢氧化钠溶液，再加入3L乙醇，搅拌使溶解，过滤，取滤液，用浓盐酸调节pH至6-7，析出沉淀，抽滤，滤饼分别用50%（体积分数）乙醇和蒸馏水充分清洗后，干燥，粉碎，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷，含量为98.1%（重量）。

实施例2

取小蓟药材10kg，粉碎成粗粉，加入50L浓度50%（体积分数）乙醇浸泡6小时，再用80%（体积分数）乙醇250L渗漉提取，收集渗漉液，减压回收乙醇至无醇味，放置至室温，离心，收集沉淀，沉淀经石油醚脱脂。脱脂后沉淀加入0.5L浓度10%氢氧化钠溶液，加入1.5L乙醇，搅拌使溶解，过滤，取滤液，用浓硫酸调节pH至6-7，析出沉淀，抽滤，滤饼分别用60%（体积分数）乙醇和蒸馏水充分清洗后，干燥，粉碎，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷，含量为91.7%（重量）。

实施例3

取小蓟药材10kg，粉碎成粗粉，加入50L浓度70%（体积分数）乙醇（含1%氢氧化钠）温浸提取三次，每次6小时，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，放置至室温，用冰醋酸调节pH至6-7，析出沉淀，收集沉淀，沉淀经乙醚脱脂。脱脂后沉淀加入0.5L浓度10%氢氧化钠溶液，再加入1.5L乙醇，搅拌使溶解，过滤，取滤液，用冰醋酸调节pH至6-7，析出沉淀，抽滤，滤饼分别用50%（体积分数）乙醇和蒸馏水充分清洗后，干燥，粉碎，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷，含量为93.8%（重量）。

实施例4

取小蓟药材10kg，粉碎成粗粉，加入100L浓度80%（体积分数）丙酮水溶液热回流提取三次，每次2小时，收集提取液，减压回收丙酮后，放置至室温，离心，收集沉淀，沉淀经乙酸乙酯脱脂。脱脂后沉淀加入0.5L浓度20%氢氧化钠溶液，再加入1.5L乙醇，搅拌使溶解，过滤，取滤液，用浓盐酸调节pH至6-7，析出沉淀，抽滤，滤饼分别用30%乙醇和蒸馏水充分清洗后，干燥，粉碎，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷，含量为93.8%（重量）。

实施例5

取小蓟药材10kg，粉碎成粗粉，加入50L浓度95%（体积分数）乙醇，温浸提取三次，每次6小时，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，放置至室温，析出沉淀，收集沉淀，沉淀经乙醚脱脂。脱脂后沉淀加入0.5L浓度20%氢氧化钠溶液，再加入1.5L乙醇，搅拌使溶解，过滤，取滤液，用冰醋酸调节pH至6-7，析出沉淀，抽滤，滤饼分别用70%（体积分数）乙醇和蒸馏水充分清洗后，干燥，粉碎，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷，含量为92.8%（重量）。

实施例6

本发明药物的疗效由以下药效学试验证明：

1、药物及试剂

刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷：实施例1制备的样品，灰白色粉末（刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷含量98.1%）。用生理盐水配成合适浓度的溶液供试验用。

2、醛糖还原酶的提取

Wistar大鼠颈椎脱臼处死，立即摘取眼球，分离晶状体（冰上进行）放入20ml 10mMβ-巯基乙醇含有135mM磷酸缓冲液（pH7.0）中，匀浆，90000×g、4℃离心30min，取上清液，-20℃保存。

3、反应体系的建立

设立阳性对照组和阴性对照组，每组4个复孔。反应体系中加入180mM磷酸缓冲液（pH 7.0）225μL、1.0M硫酸锂溶液50μL、10mM DL-甘油醛溶液50μL、阳性对照溶液（提取的酶溶液100μL）、阴性对照组加去离子水100μL混合，30℃预热3min，加入0.3mM NADPH溶液50μL，30℃反应30min，加入0.5M的盐酸150μL终止反应，各测试管分别加入10mM咪唑含6M氢氧化钠溶液10μL，60℃反应20min，室温放冷后于激发波长360nm，吸收波长460nm检测荧光吸收度。

4、实验结果

刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷对醛糖还原酶的抑制活性测定结果见图1所示，结果表明刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷对醛糖还原酶呈现出剂量依赖的抑制作用，其IC₅₀为0.73μg/ml。

Claims

1.一种制备刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）取小蓟药材经溶剂提取，得提取液；

（2）将步骤（1）所得的提取液浓缩、放至室温，离心，得沉淀；

（3）将步骤（2）所得的沉淀用有机溶剂提取脱脂，弃去有机层，得沉淀；

（4）将步骤（3）所得的沉淀加入氢氧化钠溶液和醇溶液溶解，过滤，滤液用酸调节pH至6-7，析出沉淀，过滤、干燥，即得刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的提取方法为温浸、热回流和/或渗漉。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的溶剂选自水、碱溶液、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或几种的混合。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的溶剂选自40%-95%（体积分数）的乙醇溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的有机溶剂为石油醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的醇溶液为乙醇、甲醇或二者混合溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的醇溶液为30%-70%（体积分数）的乙醇溶液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中的氢氧化钠溶液浓度为5%-20%。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中酸可以为浓盐酸、冰醋酸或浓硫酸。

10.刺槐素-7-O-鼠李糖葡萄糖苷在制备预防和/或治疗醛糖还原酶相关疾病的药物中的用途。