CN103704349A

CN103704349A - 一种基于药食同源的驴奶粉配方

Info

Publication number: CN103704349A
Application number: CN201310694005.4A
Authority: CN
Inventors: 魏华; 徐锋; 许恒毅; 彭珊珊; 熊勇华; 何丽华; 黄楚楚; 杨栋
Original assignee: Nanchang University
Current assignee: Nanchang University
Priority date: 2013-12-18
Filing date: 2013-12-18
Publication date: 2014-04-09

Abstract

本发明公开了一种基于药食同源的驴奶粉配方，配方以驴奶粉为主，辅以添加益生元、益生菌及药食同源可用的山药、百合、核桃等。该驴奶粉配方能显著增加免疫低下小鼠的免疫力，具体体现在显著地提高淋巴细胞的转化能力（细胞免疫功能），增加血清溶血素的生成量（体液免疫功能），增强碳廓清能力（单核巨噬细胞功能）和NK细胞的杀伤活性（NK细胞活性）。

Description

一种基于药食同源的驴奶粉配方

技术领域

本发明属于保健领域，具体来说是一种增强机体免疫力的驴奶粉配方。

背景技术

驴奶由于具有良好的药效，在国内外典籍中多有涉及。如在我国《本草纲目》中记载：“驴乳，气味甘，冷利，无毒，热频饮之可治气郁，解小儿热毒，不生痘疹”；在维吾尔和蒙古等少数名族医学中，有用驴奶治疗结核病、肝硬化和胃溃疡、百日咳的记载。此外，秘鲁人认为驴奶可治气喘、气管炎、糖尿病等疾病。已有科学研究发现，鲜驴奶对猪霍乱沙门氏菌及志贺氏菌具有显著的抑制作用；同时Xueying Mao报道，驴奶与人肺癌细胞A549共孵育后，起到抗肿瘤和抑制肿瘤增殖分化的作用；马龙等研究证实鲜驴奶脂肪在体外具有抑制结核杆菌生长的作用；苏德奇研究表明高剂量的鲜驴乳具有抗氧化作用，并猜测与驴奶中富含溶菌酶和维生素C有关。然而，目前对驴奶的研究主要集中于其营养成分的分析，而在驴奶的综合开发利用方面上缺乏深入系统的研究。因此，开展驴奶粉复合配方的应用基础研究，拓宽其应用途径，具有重要的社会经济效益。

发明内容

本发明提供如下技术路线：

本发明旨在为驴奶的市场开发提供新途径，以驴奶粉为基质，辅以添加益生元、益生菌以及药食同源的山药、百合和核桃，寻找一种增强机体免疫力的驴奶粉配方。本发明包括如下技术方案：

一种基于药食同源的驴奶粉配方，驴奶粉中添加益生元、益生菌以及山药、百合和核桃。

所述的益生元为低聚果糖、菊糖和低聚半乳糖的混合物，各按0.985 mg/g剂量添加到驴奶粉。

所述的益生菌采用菌粉活菌数为5.0×10¹⁰cfu/g的鼠李糖乳杆菌，各按0.4 mg/g的剂量添加到驴奶粉。

所述山药、百合和核桃，分别按0.9 mg/g、1.2 mg/g和0.6 mg/g剂量添加到驴奶粉。

本驴奶粉配方能显著增强免疫力。

为评价本发明在驴奶粉的基础上进一步增强机体免疫力，通过对免疫低下小鼠进行分组灌胃，含生理盐水组，驴奶粉组和驴奶粉配方组。

在采用腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下小鼠后，按灌胃组别分别连续灌胃28天。

灌胃结束后，取小鼠脾脏，研磨得到脾淋巴细胞，添加ConA刺激淋巴细胞，观察不同灌胃组别小鼠的淋巴细胞的转化能力。

灌胃结束后，通过尾静脉注射墨汁，评价不同灌胃组别小鼠的碳廓清能力。

在灌胃结束前的第四天，腹腔注射绵阳血红细胞，待灌胃结束后取小鼠脾脏研磨得到脾淋巴细胞，评价NK细胞对靶细胞YAC-1的杀伤能力。

在灌胃结束前的第四天，腹腔注射绵阳血红细胞，待灌胃结束后取血，测定血清溶血素的生成。

具体实施方式

实施例1

一种基于药食同源的驴奶粉配方，驴奶粉中添加益生元、益生菌以及山药、百合和核桃。所述的益生元为低聚果糖、菊糖和低聚半乳糖的混合物，各按0.985 mg/g剂量添加到驴奶粉。所述的益生菌采用菌粉活菌数为5.0×10¹⁰cfu/g的鼠李糖乳杆菌，各按0.4 mg/g的剂量添加到驴奶粉。所述山药、百合和核桃，分别按0.9 mg/g、1.2 mg/g和0.6 mg/g剂量添加到驴奶粉。

实施例2

免疫低下小鼠的制备：购买BALB/c小鼠72只，放置动物房观察一周后，隔日腹腔注射环磷酰胺溶液，第一天按100 mg/kg剂量注射，第三天按80 mg/kg剂量注射，制备免疫低下小鼠

小鼠灌胃组别的设置：将小鼠随机分成3组，每组10只，依次为空白组，驴奶组，保健驴奶粉组。每组小鼠灌喂期均为28天，每只小鼠的灌喂量为300 μL/日。空白组的小鼠灌胃0.85%的无菌生理盐水，驴奶粉组和驴奶粉配方组的小鼠按5 g/kg的剂量灌胃。

脾细胞悬液的制备：采用劲椎脱臼法处死小鼠，用75%的乙醇浸泡2 min中，消毒处理。将小鼠置于解剖托盘中，沿腹膜解剖小鼠，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液平皿中，去除脾脏上粘连的结缔组织，并轻轻洗涤后将脾转移至无菌Hank's液平皿中。用镊子将脾在40目纱布上轻轻磨碎，经200目筛网过滤后获得单细胞悬液。细胞悬液经1000 rpm离心10 min后，按10:1比例加入红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解时间约5 min左右。1000 rpm离心10 min，去除上清液，细胞沉淀用无菌Hank's液洗涤2次。将细胞悬浮于1 mL RPMI1640完全培养液中，用台盼兰染色计数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为3 × 10⁶个/mL。

细胞免疫功能的测定——小鼠淋巴细胞转化实验：将每一份脾细胞悬液分4孔加入24孔细胞培养板中，每孔1 mL，其中3个孔作为平行样孔，均加入50 μL ConA液（相当于5 μg/mL），剩余1孔中加入50 μL细胞培养液代替ConA液作为空白孔。置5% CO₂，37 ℃孵箱中培养72 h；培养结束前4 h，每孔轻轻吸去0.7 mL上清液，再加入0.7 mL不含血清的RPMI1640培养液，同时每孔加入50 μLMTT溶液（5 mg/mL），继续培养4 h。培养结束后，每孔加入l mL酸性异丙醇，充分吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，于酶标仪570 nm波长下测量各孔的吸光OD值并记录。实验结果如表1所示，结果表明：与生理盐水组相比，灌胃单一组分的驴奶粉不能提高脾淋巴细胞的转化率（p>0.05），而灌胃驴奶粉配方组小鼠的脾淋巴细胞转化率显著高于驴奶粉组的小鼠（p<0.05）。

表1 不同的灌胃组别对Con-A诱导的脾淋巴细胞转化的影响（X±SD）

组别	剂量	动物数量/只	ConA 诱导脾淋巴细胞增殖OD 差值by ConA OD-value
				空白对照组	0.85%生理盐水	10	0.253±0.123
驴奶粉组	5 g/kg	10	0.246±0.051
				驴奶粉配方组	5 g/kg	10	0.339±0.079^{a b}

注：a表示与空白对照组相比，p<0.05，b表示与驴奶粉组相比，p<0.05。

体液免疫功能的测定——血清溶血素实验：在灌胃第28天时对小鼠进行腹腔注射0.2 mL 2%的SRBC，免疫第5天后采取眼眶取血。将收集到的血样于37 ℃静置1 h，2000 rpm 4 ℃冷冻离心10 min，小心吸取血清，避免吸入血红细胞。血清用SA缓冲液稀释200倍供测定。样品反应管中依次加入l mL稀释的小鼠血清，0.5 mL SRBC（10%），l mL稀释的补体；空白对照管中用1 mL SA缓冲液代替血清样品，充分混匀后于37 ℃恒温水浴保温30 min，移至冰浴中终止反应。2000 rpm离心10 min，取l mL上清液加3 mL都氏试剂，摇匀放置10 min。以空白对照管作空白，540 nm波长比色读取吸光度。SRBC半数溶血值的测定：取0.25 mL SRBC（5%）加都氏液至4 mL，540 nm波长比色读取吸光度，即为实验中所用SRBC半数溶血时的吸光度值。样品反应管半数溶血值CH₅₀按下式计算：每只小鼠的血清CH₅₀ =样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值×稀释倍数。实验结果如表2所示，结果表明：在小鼠血清溶血素产生方面，与生理盐水空白组相比，单一驴奶粉组与驴奶粉配方组均具有显著性差异（p<0.05），但驴奶粉配方组比单一驴奶粉组显著地增加血清溶血素的产生。

表2 不同的灌胃组别对小鼠血清溶血素的影响（X±SD）

组别	剂量	动物数量/只	血清溶血素
				空白对照组	0.85%生理盐水	10	161.62±7.26
单一驴奶粉组	5 g/kg	10	169.08±3.56 ^a
				驴奶粉配方组	5 g/kg	10	173.91±6.20 ^{a b}

单核-巨噬细胞吞噬能力的测定——小鼠碳廓清实验：注射墨汁：按0.1 mL/kg剂量从小鼠尾静脉注射墨汁，待墨汁注射后，立即计时。注入墨汁后2 min与8 min，分别从内眦静脉丛取血20 μL，并立即将其加到2 mL 0.1% Na₂CO₃溶液中，充分混匀。于600 nm波长处测光密度值OD值，以Na₂CO₃溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重记录。以吞噬指数a表示小鼠碳廓清的能力，按下式计算吞噬指数a：

吞噬指数a=。

实验结果如表3 所示，结果表明：驴奶粉配方组能显著增强小鼠碳廓清能力（p<0.05）。

表3 不同的灌胃组别对小鼠碳廓清能力的影响（X±SD）

注：a表示与空白对照组相比，p<0.05，b表示与驴奶粉组相比，p<0.05

组别	剂量	动物数量/只	吞噬指数/k	校正吞噬指数/a
					空白对照组	0.85%生理盐水	10	0.019±0.003	5.008±0.538
单一驴奶粉组	5 g/kg	10	0.026±0.010	5.716±0.643
					驴奶粉配方组	5 g/kg	10	0.037±0.012	6.817±0.568 ^{a b}

NK细胞活性的测定——乳酸脱氢酶(LDH)测定法：在96孔细胞培养板上，实验孔中加入效应细胞（2 × 10⁷个/mL）和靶细胞（4 × 10⁵个/mL）各100 μL（效靶比=50:1)，靶细胞自然释放孔中加靶细胞和培养液各100 μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5% Triton各100 μL，上述各项均设三个平行孔。于37 ℃，5% CO₂培养箱中培养4 h；将96孔培养板以1500 rpm离心10 min，每孔吸取上清100 μL，同时加入LDH基质液100 μL，反应10 min后每孔加入30 μL的HCl（1 M），在酶标仪490nm处测定OD值并记录。实验结果如表4所示，结果表明：驴奶粉配方组对小鼠NK细胞杀伤活性具有显著地增强作用（p<0.05），而单一组分的驴奶粉虽能提高其杀伤活性，其效果却不显著（p>0.05）。

表4 不同灌胃组别对小鼠NK细胞杀伤活性的影响（X±SD）

组别	剂量	动物数量/只	NK细胞的活性/%
				空白对照组	0.85%生理盐水	10	18.813±2.288
驴奶粉组	5 g/kg	10	23.673±4.789
				驴奶粉配方组	5 g/kg	10	31.544±4.098 ^{a b}

Claims

1.一种基于药食同源的驴奶粉配方，其特征在于：驴奶粉中添加益生元、益生菌以及山药、百合和核桃。

2.如权利要求1中所述的驴奶粉配方，其特征在于：所述的益生元为低聚果糖、菊糖和低聚半乳糖的混合物，各按0.985 mg/g剂量添加到驴奶粉。

3.如权利要求1中所述的驴奶粉配方，其特征在于：所述的益生菌采用菌粉活菌数为5.0×10¹⁰cfu/g的鼠李糖乳杆菌，各按0.4 mg/g的剂量添加到驴奶粉。

4.如权利要求1中所述的驴奶粉配方，其特征在于：所述山药、百合和核桃，分别按0.9 mg/g、1.2 mg/g和0.6 mg/g剂量添加到驴奶粉。