CN107961260A - 治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的药剂及其制备方法 - Google Patents

治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的药剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的纯天然药剂及其制备方法，药剂主要由以下原料制得：以质量份数计，蒲公英3‑10份，黄芪多糖1‑4份，黄芪总黄酮1‑4份，益生菌1‑4份。制备方法包括：将蒲公英、黄芪分别水煎、过滤得到各自的粗提物，然后将黄芪粗提物进行水提醇沉提取后，底部沉淀为黄芪多糖，上清液为黄芪总黄酮；将蒲公英提取物、黄芪多糖、黄芪总黄酮混合后，添加益生菌混合发酵，即可。本发明的药剂属于廉价易得的纯天然药物制剂，无毒副作用，也保证了禽肉制品日后作为食品的安全性，该药剂的成功研制具有重要的现实意义。

Description

治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的药剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及禽类养殖加工技术领域，具体而言，涉及一种用于治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的纯天然药剂及其制备方法。
背景技术
随着生活水平的逐步提高，人类对禽类产品的需求越来越高，禽类养殖业一直是关系着民生的重大支柱产业之一，2010年至今，我国城市居民动物性食品消费仍处在稳定增长的阶段，特别是肉制品与蛋制品，还将出现迅速增加的态势。而随着广大农村居民收入的增加，肉类和蛋类的消费将会出现迅速增长的趋势。总体而言，未来15-20年内，中国居民的禽类产品消费将进入稳定增长时期，我国禽类养殖业的发展仍具有很大的发展潜力。
在现代养殖业中，由于受环境中诸多因素的影响，很容易造成机体免疫机能下降，抗病力降低，从而影响动物的生产性能，甚至影响疫苗的免疫效果，由各种原因引起的腹泻是影响禽类发育、生长的主要疾病，尤其是大肠杆菌引起的腹泻疾病，几乎遍及每个养殖场，该病流行性广，发病率、死亡率高，大大降低了饲料转化率，使养殖成本显著增加，严重制约禽类养殖业的发展，长期以来一直是禽类养殖生产过程中的一大难题。
现有技术中一般采用抗生素来进行治疗，但是由于人们日益注重营养和健康，因此对食品安全性的要求也越来越高，使得一些可能给人类带来潜在危害作用的药物和添加剂，如抗生素、激素等正逐渐被禁用。
因此，从天然药物中寻找安全、高效、无残留的药物来替代抗生素和化学药物是禽类营养与免疫学研究的重要方向。近年来，中药和益生菌以其天然性、低毒性、安全可靠、多功能、低残留、不污染环境等优点倍受关注，开始应用于禽类肠道疾病的防治，成为研究的热点，但基本停留在单味中药或中药复方及益生菌的单独应用上。中药由于药效发挥缓慢、某些有效成分不易吸收等问题出现作用不稳定而限制了其在实践中的推广，而单一使用益生菌存在稳定性差、应用范围有限、作用效果不稳定等不足。
鉴于此将中药有效成分与益生菌联合起来使用，增强彼此的使用效果将成为研究的方向。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种能够用于治疗、预防针对禽类大肠杆菌性的腹泻病的药剂，该药剂的成功研制既能防治疾病又能提高禽类机体免疫机能，属于廉价易得的纯天然药物制剂，无毒副作用，保证了禽肉制品作为食品的安全性，该药剂的成功研制具有重要的现实意义，并且该药物制剂本身原料配方较简单，药性温和，具有清热去火、补脾益气、扶正祛邪之功效，本发明在研发该药剂时正是利用了原料之间的协同作用，通过抑制致病性大肠杆菌的生长繁殖，保护和促进肠内正常菌群的生长，修复肠道粘膜等受损组织，增强机体的免疫功能，既达到治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的目的，又不会扰乱本身体内正常菌群生长情况，也不会破坏本身的各项机能，还能提高饲料转化率，为养殖户降低了养殖成本，创造一定的经济效益。
本发明的第二目的在于提供上述药剂的制备方法，该制备方法本身操作简单、操作条件温和，前后步骤衔接紧密，整个制备工艺中没有三废产生，绿色环保，适于广泛推广应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供了一种用于治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的纯天然药剂，主要由以下原料制得：以质量份数计，蒲公英3-10份，黄芪多糖1-4份，黄芪总黄酮1-4份，益生菌1-4份。
现有技术中，养殖业常用的用于治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的方式便是采用大量抗生素，抗生素本身在控制疾病方面疗效显著，但是副作用明显：一方面，使肠道内的有益菌群生长受抑制，扰乱肠道对营养物质的吸收与利用，降低饲料转化率，并且用药后，采食量、胃肠功能等机能还没得到及时恢复，使幼雏的生长发育受阻，增加养殖成本；另一方面，由于养殖业对抗生素的过度依赖，造成动物源性大肠杆菌耐药株不断增多，耐药机制日趋复杂，致使细菌耐药性问题日趋严重。可见使用抗生素只可暂时解决腹泻疾病的问题，但是随之带来的诸多问题却无法得到彻底解决。
因此，为了解决以上技术问题，本发明提供了一种纯天然成分的用于治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的药剂，原料配方中除了中药还添加了益生菌，通过原料之间的协同作用，使药物制剂不但能解决腹泻问题，而且采食量、肠胃功能不会受到影响，还能同时保护和促进肠内正常菌群的生长，提高机体的免疫功能，达到治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的目的。
在本发明中，中药作为主料，功能主要是抗菌、抗炎，以防治禽大肠杆菌性腹泻病，其中蒲公英性味甘、苦、寒，清热解毒、消炎利尿，价格低廉，资源广泛，具有抗病原微生物，提高免疫功能等功效，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等均有较好的抑制作用，有“天然抗生素”之称，因此实际应用时质量份数较高，控制在3-10份之间。
黄芪性温、味甘，具有补气升阳、利水消肿等功效，除能增强免疫功能外，还有保肝消炎等功能。黄芪多糖是黄芪的主要活性成分之一，可作为免疫促进剂或调节剂，提高生物利用度，更好发挥抑菌和调节机体免疫功能的作用。黄芪总黄酮是黄芪的另一种主要活性成分，有增强免疫、抗炎等功效。黄芪多糖、黄芪总黄酮药理活性明显，萃取及分离方法相对较复杂，分离率较低，因此应用时质量份数较低，控制在1-4份之间。
优选地，本发明的益生菌为嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的混合，嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的质量比更优为1：(0.5-2)，最优为1：1。
嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性菌，无芽孢，兼性厌氧菌，可调整肠道菌群平衡，对致病微生物有拮抗作用，促进蛋白质、糖等吸收，增加肠道有益菌的生长。枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，革兰氏阳性菌，有芽孢，需氧菌，可促进有益厌氧菌的生长，间接抑制其他致病菌生长，提高免疫力等作用。
为了进一步提高各原料药之间互相配伍关系，更优选地，以质量份数计，蒲公英5-8份，黄芪多糖2-3份，黄芪总黄酮2-3份，益生菌2-3份。
最优地，以质量份数计，蒲公英5份，黄芪多糖2份，黄芪总黄酮2份，益生菌2份。
发明人通过添加蒲公英、黄芪多糖、黄芪总黄酮等中药成分与益生菌联合应用，其中中药抗菌、抗炎、提高机体免疫力，其他原料成分则可以很好的调整肠道菌群平衡，有效解决腹泻症状等，而使用抗生素后肠道有益菌群的平衡遭到破坏，影响营养物质的吸收同时降低机体的免疫功能，中药成分联合益生菌恰恰解决了这个技术问题，从而促进机体恢复。
值得注意的在于，本发明的原料配比均是发明人通过大量的创造性实验优化出的较优用量，只有在添加这些原料以及该原料配比前提下才能保证制备出的药物制剂拥有优异的性能，现有技术中普遍的做法均是单独采用中药或单独采用益生菌进行制备，本发明中特将中药有效成分与益生菌联合来防治禽大肠杆菌性腹泻病，取得了非常良好的效果，值得广泛推广应用。
还有，本发明在具体选择中药成分时，严格控制了每个原料的添加量，而且每一个原料的加量相对多与少均是有一定考究的，最终实践出最优添加量，为后续制作该药物制剂提供了可参照的配方以及具体用量，具有一定的参考价值。比如本发明的中药成分作为主要起到抗菌的物质，因此一般加量会略大，还有益生菌除了协同起到治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的作用外，而且采食量、肠胃功能不会受到影响，还能同时保护和促进肠内正常菌群的生长，从根本上实现提高机体的免疫功能。但是对于其他原料来说，主要是为了在基础料的基础之上起到增效的作用，因此需要根据每种原料自身的性质选择合适的用量，不能添加量太大，否则反而会影响机体的正常生长状况。可见只有严格按照本发明的方案进行配料制备得到的用于治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的药物制剂才会具有本发明所描述的各方面性能，缺少任何一种原料或者其中任何一种原料不在本发明的要求用量范围内，均会影响实施本发明的方案达到本发明的发明目的。
本发明上述药剂主要用于治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病，无论是预防还是治疗方面均具有很好的效果，尤其是非常适用于鸡养殖过程中的应用。
本发明除了提供了上述药剂，还提供了药剂的具体制备方法，包括如下步骤：
将蒲公英、黄芪分别水煎、过滤得到各自的粗提物，然后将黄芪粗提物进行水提醇沉提取后，底部沉淀为黄芪多糖，上清液为黄芪总黄酮；
将蒲公英提取物、黄芪多糖、黄芪总黄酮混合后，添加益生菌混合发酵，即可。
本发明实施例的制备方法本身具有能完整保留原料的有效成份的优点，而且方法简单易于操作，操作条件温和，前后步骤之间衔接紧密，每个操作步骤均是发明人通过大量实践所确定出来的，为后续实施提供了可参考的数据。
优选地，水煎次数为3次以上，在加料时需要注意先将蒲公英、黄芪水煎多次，充分提取药物有效成分，避免有效成分的浪费。
水煎后，将粗提物过滤，合并滤液，因为中草药中如果混有杂质，会影响药物本身的保存及作用效果。
优选地，得到粗提物后采用旋转蒸发仪进行浓缩，浓缩的提取物浓度控制在1g/mL。浓缩时使用旋转蒸发仪，可控制温度，在蒸发水分的同时避免了高温破坏药物成分的问题。
本发明所采用的提取方法最好选择为传统水提醇沉法，提取率高，操作简便。
优选地，添加益生菌混合发酵的时间为18-26h，发酵温度为20-35℃，控制比较适宜的操作条件可以使得制备得到的药剂质量更优异。
最后，发酵步骤后最好还包括灭菌、质量检测、密封包装的步骤，其中灭菌的温度最好控制在60-70℃之间，灭菌的时间最好控制在20-30min之间，灭菌的目的是为了排除杂菌的污染，当然灭菌的温度不能太高，否则药物制剂中的有效成分会被破坏。
本发明的用于治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的药物制剂主要由中药组份和益生菌组份组成，其中，中药成份既有抗菌、抗炎作用，又能提高机体免疫机能，对各种病原微生物引起的禽大肠杆菌性腹泻病有特效；益生菌成份具有保护肠粘膜，为肠道有益微生物菌群提供营养因子、维护肠道有益菌群的生态平衡，调节胃肠机能，提高机体的抗应激能力、促进免疫细胞增殖、增强免疫功能等作用。本发明中益生菌与中药成分相互配伍存在协同促进的作用，具有抗菌、抗炎、维护菌群平衡、增强机体免疫力、提高饲料转化率等功效，对禽类大肠杆菌性腹泻病的防治效果显著。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明的药物制剂为纯天然药物制剂，无毒副作用，本身原料配方较简单，药性温和，具有清热去火、补脾益气、扶正祛邪之功效，本发明在研发该药剂时正是利用了原料间的协同作用，通过抑制致病性大肠杆菌的生长繁殖，保护和促进肠内正常菌群的生长，修复肠道粘膜等受损组织，增强机体的免疫功能，既达到治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的目的，又不会扰乱本身体内正常菌群生长情况，也不会破坏本身的各项机能，又能提高饲料转化率，为养殖户降低了养殖成本，创造一定的经济效益；
(2)本发明上述药剂的制备方法本身操作简单、操作条件温和，前后步骤衔接紧密，整个制备工艺中没有三废产生，绿色环保，适于广泛推广应用。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
现根据具体各个原材料的抑菌情况进行试验，具体试验过程如下：
1)根据正交表L9(34)，设计4因素3水平的正交试验，分析多种中药联合益生菌对致病菌的抑菌效果，确定最佳比例，见下表1、2。
表1 正交表
注：A为蒲公英；B为黄芪多糖；C为黄芪总黄酮；D为益生菌。
表2 因素水平表(单位：μl)
注：A为蒲公英；B为黄芪多糖；C为黄芪总黄酮；D为益生菌。
2)取灭菌试管、编号、排列，每支试管5ml液体培养基，按正交试验设计加入相应药液，取每种菌液各50μl加入试管，设培养液对照、致病菌株对照，37℃培养24h；所有试验管均稀释106、108、1010倍，稀释后各取200μl涂板，37℃培养24h，每个试验重复3次，取细菌计数平均值。结果见表3。
表3 细菌计数平均值
3)结果采用极差分析法，筛选最佳比例组方。结果见表4，其中K1、K2、K3分别为各因子1水平、2水平、3水平细菌数之和，极差R为K1、K2、K3中最大值与最小值的差值，采用直观分析法分析，极差R与抑菌效果呈正相关，即该因子极差R数值越大，其抑菌效果的影响越大；因素各水平之和与抑菌效果呈负相关，即K数值越大，其抑菌效果的影响越小，得出A1B2C2D2＝5:2:2:2为最佳比例组方。
表4 极差法分析中药联合益生菌抑菌作用结果
注：A为蒲公英；B为黄芪多糖；C为黄芪总黄酮；D为益生菌。
实施例1
1)各原料按如下用量配料：蒲公英5份，黄芪多糖2份，黄芪总黄酮2份，益生菌2份，其中益生菌为嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的混合；
2)将蒲公英及黄芪分别水煎3次合并滤液得粗提物，用旋转蒸发仪分别浓缩至1g/mL的浓度，黄芪粗提物采用传统水提醇沉法提取，沉淀为黄芪多糖粗品，每1g溶于100mL水制成1％黄芪多糖水溶液，上清液即黄芪总黄酮粗品，经测定浓度为128μg/mL；将嗜酸乳杆菌加入到MRS肉汤中，厌氧条件下，40℃恒温培养48h，枯草芽孢杆菌加入到LB肉汤中，37℃恒温培养18-24h，将嗜酸乳杆菌与枯草芽孢杆菌按1:1的质量比例混合，取蒲公英粗提物与黄芪多糖粗品、黄芪总黄酮粗品均匀混合，再添加益生菌混合发酵，发酵温度控制在20-35℃之间，发酵时间18-26h。
3)最后，灭菌、质量检测、密封包装，其中灭菌的温度控制在60-70℃之间，灭菌的时间控制在20-30min之间，即得药剂成品。
实施例2
1)各原料按如下用量配料：蒲公英5份，黄芪多糖2份，黄芪总黄酮2份；
2)将蒲公英及黄芪分别水煎3次合并滤液得粗提物，用旋转蒸发仪分别浓缩至1g/mL的浓度，黄芪粗提物采用传统水提醇沉法提取，沉淀为黄芪多糖粗品，每1g溶于100mL水制成1％黄芪多糖水溶液，上清液即黄芪总黄酮粗品，经测定浓度为128μg/mL；取蒲公英粗提物与黄芪多糖粗品、黄芪总黄酮粗品均匀混合，即可。
3)最后，灭菌、质量检测、密封包装，其中灭菌的温度控制在60-70℃之间，灭菌的时间控制在20-30min之间，即得药剂成品。
实施例3
1)各原料按如下用量配料：益生菌2份，将嗜酸乳杆菌加入到MRS肉汤中，厌氧条件下，40℃恒温培养48h，枯草芽孢杆菌加入到LB肉汤中，37℃恒温培养18-24h，将嗜酸乳杆菌与枯草芽孢杆菌按1:1的质量比例混合发酵，发酵温度控制在20-35℃之间，发酵时间18-26h。
实验例1
将本发明实施例1-3制备出的用于治疗、预防禽大肠杆菌性腹泻病的药物制剂作如下实验：随机挑选品种相同、健康状况相近、饲养与管理条件一致的1日龄雏鸡100只，随机分为5组，分别为试验组A、B、C、模型组、对照组，每组20只。其中，试验A组混饲本发明实施例1的中药及益生菌联合药物制剂；试验B组混饲本发明实施例2的中药联合药物制剂；试验C组混饲本发明实施例3的益生菌药物制剂，感染前后分别连续饲喂7日；对照组与模型组不添加任何药物，
以上药物与基础日粮混合均匀后，采取自由采食饲养方式，每天早上8点、晚上8点观察，记录试验鸡精神状态、体重、采食量、腹泻率、死亡率，连续观察22日，试验结束。试验结果见表5、6。
试验方法：相同条件下预饲喂7天，每7天早上空腹称重，并做记录。开始试验，第15天，试验组A、B、C、模型组每只皮下注射0.4mL大肠杆菌菌液(9×108CFU)，本发明药物按体重10mL/kg添加入饲料，模型组及对照组不添加药物，感染前后分别连续饲喂7日，每天观察试验鸡的临床变化，并进行记录。22天试验期结束，称重。
疗效判断标准：
轻微，精神状态良好，采食量、饮水量正常，轻微腹泻，可自愈。
中度，精神状态欠佳，采食量减少，饮水量增加，轻微腹泻。
严重，精神沉郁，食欲废绝，饮水减少，脱水、腹泻严重，消瘦明显。
疗效评价指标：死亡率＝死亡鸡/试验鸡数×100％；
腹泻率＝腹泻数/试验鸡数×100％；
料重比＝各组增重/采食量×100％。
表5 本发明药物制剂对鸡源大肠杆菌腹泻病的防治效果
腹泻症状 A组 B组 C组 模型组 对照组
试验数 20 20 20 20 20
无 8 3 4 2 7
轻微 6 8 8 7 8
中度 2 4 4 5 2
严重 4 5 4 6 3
腹泻率％ 60.0 85.0 80.0 90.0 65.0
死亡率％ 20.0 35.0 20.0 45.0 15.0
表6 本发明药物制剂对试验鸡料重比的影响
增重变化(g) A组 B组 C组 模型组 对照组
前7天 1903.3 1815 1594.9 1759.6 1653.75
中7天 3163.75 3370.95 3204.01 3063.15 3142.75
后7天 3753.85 3165.05 2939.29 3553.62 3516.12
总增重 8820.9 8351 7963.29 7076.37 8312.62
采食量 19235.2 19155.7 18950.25 17672.4 19030.45
料重比(％) 45.86 43.60 42.02 40.04 43.68
从上表5、6中可以看出，使用本发明实施例的药物制剂的试验雏鸡的整体精神状况、饮食情况优于同类药物对照组和对照组，腹泻病的发病率也明显低于同类药物对照组和对照组，并且该药剂不仅适用于鸡的养殖，还适用于其他禽，比如鸭、鹅等，只要是禽大肠杆菌性腹泻病都适用。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种用于治疗、预防禽类大肠杆菌性腹泻病的药剂，其特征在于，主要由以下原料制得：以质量份数计，蒲公英3-10份，黄芪多糖1-4份，黄芪总黄酮1-4份，益生菌1-4份。
2.根据权利要求1所述的药剂，其特征在于，以质量份数计，蒲公英3-10份，黄芪多糖1-4份，黄芪总黄酮1-4份，益生菌1-4份。
3.根据权利要求1所述的药剂，其特征在于，以质量份数计，蒲公英5份，黄芪多糖2份，黄芪总黄酮2份，益生菌2份。
4.根据权利要求1-3任一项所述的药剂，其特征在于，所述益生菌为嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的混合；
优选地，嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的质量比为1：(0.5-2)，更优为1：1。
5.权利要求1-4任一项所述的药剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将蒲公英、黄芪分别水煎、过滤得到各自的粗提物，然后将黄芪粗提物进行提取后，底部沉淀为黄芪多糖，上清液为黄芪总黄酮；
将蒲公英提取物、黄芪多糖、黄芪总黄酮混合后，添加益生菌混合发酵，即可。
6.根据权利要求5所述的药剂的制备方法，其特征在于，黄芪粗提物采用的为传统水提醇沉法进行提取；
优选地，得到粗提物后采用旋转蒸发仪进行浓缩，浓缩的提取物浓度控制在1g/mL之上。
7.根据权利要求5所述的药剂的制备方法，其特征在于，水煎次数为3次以上。
8.根据权利要求5所述的药剂的制备方法，其特征在于，添加益生菌混合发酵的时间为18-26h，发酵温度为20-35℃。
9.根据权利要求5所述的药剂的制备方法，其特征在于，发酵步骤后还包括灭菌、质量检测、密封包装的步骤。
10.根据权利要求9所述的药剂的制备方法，其特征在于，灭菌的温度控制在60-70℃，灭菌的时间控制在20-30min之间。
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