CN103630636A

CN103630636A - 多种饲用调味剂的同时测定方法

Info

Publication number: CN103630636A
Application number: CN201310597528.7A
Authority: CN
Inventors: 李兰兰; 赵华文; 杨旭; 赵先英; 贺建; 向星
Original assignee: Third Military Medical University TMMU
Current assignee: Third Military Medical University TMMU
Priority date: 2013-11-22
Filing date: 2013-11-22
Publication date: 2014-03-12
Anticipated expiration: 2033-11-22
Also published as: CN103630636B

Abstract

本发明公开了多种饲用调味剂的同时测定方法，系采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃，流速1.0mL/min，以A（乙腈）和B（质量分数为0.1%的三氟乙酸溶液并用三乙胺调节pH至4.0）为流动相进行梯度洗脱，229nm-282nm变波长检测，可以同时测定7种饲用调味剂（I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和NHDC）的含量，检测准确、灵敏、重复性好、经济高效、省时省力。

Description

多种饲用调味剂的同时测定方法

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，涉及饲用调味剂的含量测定方法。

背景技术

科学研究表明，采食量在很大程度上决定着动物的生长速度，早期增重快的动物，直到上市其体重都保持生长优势并可提早达到上市体重。因此，养殖业需要做更多的工作以确保动物能尽可能的增加采食量。这也意味着提高饲料的适口性是未来畜牧养殖业不可忽略的重要工作之一。目前为预防动物受到外来疾病的感染，饲料中多添加有较多的添加剂如维生素和各种药物等，相应的由于添加剂的加入也造成饲料带有苦涩味等。另外饲料采用的各种原料难免存在变异，这些都会造成饲料适口性的降低，影响动物采食量，进而影响动物的生长性能。而在饲料中添加香味剂、甜味剂等调味剂，可以有效改善饲料的气味和滋味，通过动物的嗅觉和味觉引诱和增进动物采食，缩短饲养周期，提高养殖业的经济效益。因此，饲用调味剂的优劣，已成为其市场销售量的决定性因素。

目前，饲用调味剂的检测方法主要有高效液相色谱法、分光光度法和薄层色谱法等，其中高效液相色谱法最为常用。但是，现有的高效液相色谱法多存在以下问题：针对不同的调味剂，需要使用不同的液相色谱条件分别进行检测，不能同时检测多种调味剂，检测效率低，不适合大批量样品的检测。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供多种饲用调味剂的同时测定方法，准确、灵敏、重复性好、经济高效、省时省力。

为达到上述目的，经研究，本发明提供如下技术方案：

多种饲用调味剂的同时测定方法，包括以下步骤：

A.混合标准溶液的配制：准确称取7种调味剂I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和新橙皮苷二氢查尔酮（NHDC）的标准品，用水溶解并稀释制成浓度为0.04～1.00mg/L的系列混合标准溶液；所述调味剂I+G由5’-肌苷酸二钠（IMP）和5’-鸟苷酸二钠（GMP）按重量比1:1混合而成；

B.样品溶液的配制：准确称取调味剂样品，加水超声提取10-20分钟，离心取上清液，重复提取-离心操作3次，合并上清液，用水稀释制成浓度为45-55mg/mL的溶液，微孔滤膜过滤，收集滤液作为样品溶液；

C.标准曲线的绘制：分别精密量取浓度为0.04～1.0mg/L的系列混合标准溶液各10μL注入液相色谱仪，进行梯度洗脱和变波长检测，记录色谱图，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标进行线性回归，绘制标准曲线；

色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃，流速1.0mL/min，流动相A为乙腈，流动相B为质量分数为0.1%的三氟乙酸溶液并用三乙胺调节pH至4.0；

梯度洗脱程序如下：0.00-2.00分钟，流动相A和流动相B的体积比为5:5；2.01-7.00分钟，流动相A和流动相B的体积比为6:4；7.01-14.00分钟，流动相A和流动相B的体积比为8:2；14.01分钟以后，流动相A和流动相B的体积比为5:5；

变波长程序如下：0.00-2.00分钟，检测波长为229nm；2.01-4.00分钟，检测波长为239nm；4.01-10.00分钟，检测波长为268nm；10.01分钟以后，检测波长为282nm；

D.样品溶液的测定与结果计算：精密量取样品溶液10μL注入液相色谱仪，按照步骤C所述色谱条件、梯度洗脱程序和变波长程序进行检测，记录色谱图，采用标准曲线法计算样品中调味剂的含量。

进一步，所述步骤A具体为：准确称取7种调味剂I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和新橙皮苷二氢查尔酮（NHDC）的标准品，用水溶解并稀释制成浓度分别为0.04、0.10、0.20、0.50、1.00mg/L的系列混合标准溶液。

进一步，所述步骤B具体为：准确称取调味剂样品，加水超声提取10分钟，离心取上清液，重复提取-离心操作3次，合并上清液，用水稀释制成浓度为50mg/mL的溶液，用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，收集滤液作为样品溶液。

进一步，所述步骤C中色谱柱的规格为4.6mm×150mm，5μm。

本发明的有益效果在于：本发明采用高效液相色谱法同时测定7种饲用调味剂（I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和NHDC）的含量，准确、灵敏、重复性好、经济高效、省时省力。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为混合标准溶液的高效液相色谱分析图，色谱峰从左至右依次为I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和NHDC。

图2为调味剂样品溶液1的高效液相色谱分析图。

图3为调味剂样品溶液2的高效液相色谱分析图。

图4为调味剂样品溶液3的高效液相色谱分析图。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。

1、混合标准溶液的配制

准确称取调味剂I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和NHDC的标准品，分别用水溶解并稀释制成浓度为20.00mg/mL的单标准储备液；准确移取上述7种单标准储备液各2.50mL至25mL容量瓶中，用水稀释制成浓度为2.00mg/mL的混合标准工作液；再将该混合标准工作液用水稀释制成浓度分别为1.00、0.50、0.20、0.10、0.04mg/mL的系列混合标准溶液。

2、样品溶液的配制

准确称取调味剂样品，加水超声提取10分钟，离心取上清，重复提取-离心操作3次，合并上清液，用水稀释制成浓度为50mg/mL的溶液，过孔径为0.45μm的微孔滤膜，收集滤液作为样品溶液。

调味剂样品1为瑞士潘可士玛公司产品“超甜甜3D”；调味剂样品2为瑞士潘可士玛公司产品“瑞甜甜”；调味剂样品3为瑞士潘可士玛公司产品“超甜甜”。

3、高效液相色谱分析

精密量取浓度为1.00mg/mL的混合标准溶液10μL注入液相色谱仪，进行梯度洗脱和变波长检测，记录色谱图。

色谱条件如下：色谱柱为Inertsil ODS-SP柱（4.6×150mm，5μm），检测器为二极管阵列检测器，柱温30℃，流速1.0mL/min，流动相A为乙腈，流动相B为质量分数为0.1%的三氟乙酸溶液并用三乙胺调节pH至4.0；

梯度洗脱程序如下表：

时间（min）	0.00-2.00	2.01-7.00	7.01-14.00	≥14.01
					流动相A（%，体积百分比）	50	60	80	50
流动相B（%，体积百分比）	50	40	20	50

变波长程序如下表：

时间（min）	0.00-2.00	2.01-4.00	4.01-10.00	≥10.01
					波长（nm）	229	239	268	282

结果见图1，可见在上述色谱条件下，7种调味剂相互之间分离度良好，达到定量测定的要求。

4、标准曲线及检出限

分别精密量取浓度为1.00、0.50、0.20、0.10、0.04mg/mL的系列混合标准溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标进行线性回归，绘制标准曲线。

精密量取浓度为0.04mg/mL的混合标准溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，根据标准曲线计算各调味剂的测得浓度，再计算6次测得浓度的标准偏差，三倍标准偏差即为该调味剂的检测限。

7种调味剂的标准曲线和检测限见表1。

表1.7种调味剂的标准曲线和检测限

*：Y代表峰面积，X代表调味剂的浓度（mg/mL）。

5、样品测定及结果计算

在相同色谱条件下，分别精密量取样品溶液1、2、3各10μL注入液相色谱仪，进行梯度洗脱和变波长检测，记录色谱图。根据表1中各调味剂的标准曲线，按下述公式计算样品中相关调味剂的含量：

X = \frac{C * V}{m}

X：样品中调味剂的含量，mg/kg；

C：由标准曲线求得的调味剂的浓度，mg/mL；

V：样品溶解的体积，mL；

m：样品称样量，kg。

样品溶液1、2、3的色谱图分别见图2、图3、图4。不同调味剂样品的检测结果见表2。

表2.样品中调味剂的含量（mg/kg）

6、方法重复性

精密量取样品溶液110μL注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样8次，计算各调味剂8次测得含量的相对标准偏差（RSD）。结果见表3。

表3.样品1中各调味剂含量的相对标准偏差

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims

1.多种饲用调味剂的同时测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

A.混合标准溶液的配制：准确称取7种调味剂I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和新橙皮苷二氢查尔酮的标准品，用水溶解并稀释制成浓度为0.04～1.00mg/L的系列混合标准溶液；所述调味剂I+G由5’-肌苷酸二钠和5’-鸟苷酸二钠按重量比1:1混合而成；

2.根据权利要求1所述的多种饲用调味剂的同时测定方法，其特征在于，所述步骤A具体为：准确称取7种调味剂I+G、安赛蜜、糖精钠、香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚和新橙皮苷二氢查尔酮的标准品，用水溶解并稀释制成浓度分别为0.04、0.10、0.20、0.50、1.00mg/L的系列混合标准溶液。

3.根据权利要求1所述的多种饲用调味剂的同时测定方法，其特征在于，所述步骤B具体为：准确称取样品，加水超声提取10分钟，离心取上清液，重复提取-离心操作3次，合并上清液，用水稀释制成浓度为50mg/mL的溶液，用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤，收集滤液作为样品溶液。

4.根据权利要求1所述的多种饲用调味剂的同时测定方法，其特征在于，所述步骤C中色谱柱的规格为4.6mm×150mm，5μm。