CN105572289A - 一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,所述方法采用液相色谱法对梯度浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测并得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,以标准溶液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线;随后采用流动相提取样品中新甲基橙皮苷二氢查耳酮,并结合超声处理,得到样品处理液,将样品处理液在与标准溶液相同的色谱条件下进行检测,换算得混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。本发明弥补了目前尚没有混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量检测方法的不足之处,无需进行复杂的样品前处理即可进行检测,且检测出峰稳定,具有灵敏、高效、准确、稳定的特点。
Description
技术领域
本发明属于饲料添加剂中成分分析检测技术领域,具体涉及一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法。
背景技术
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入待测样品,由流动相带入柱内,在柱内各成分被分离后,依次进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。这种方法已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术,是分析化学、生物化学和环境化学工作者手中必不可少的工具。
新甲基橙皮苷二氢查耳酮,简称NHDC,淡黄色粉末,是一种具有苦味抑制和风味改良的功能性甜味剂。甜味来得慢,后味持续时间长,甜味清爽且愉快,能有效降低人体和动物体对动物饲料中可能带有的苦味的敏感程度。NHDC甜度达到最大值的时间要比糖精和蔗糖都长,而且持续时间也较长。
在饲料添加剂领域,可使饲料口味超甜,增大崽猪食欲,明显促进其生长和降低每千克增重的饲料消耗。新橙皮苷二氢查耳酮与别的甜味剂复配使用时,尤其是与糖精复配时,能产生优良的协同作用,而糖精的金属余味可能会造成严重的问题(特别是当其用于仔猪日粮中时),足够浓度的NHDC是提供余味掩盖作用所必须的。然而,目前饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测没有国家标准,也没有现成的方法。
发明内容
针对现有技术存在的上述不足,本发明所要解决的技术问题是:怎样提供一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,用以弥补目前尚没有相关检测方法的不足,使该方法能够对混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量进行精准定量,且具有无需进行复杂的前处理、检测结果灵敏、准确、高效、稳定的特点。
为了解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,包括如下步骤:
1)采用甲醇水溶液作为溶剂,配制梯度浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液;
2)采用液相色谱法对步骤1)配制的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,以新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线;其中,色谱条件为采用C18液相色谱柱、流动相为甲醇水溶液、检测波长为282nm;
3)向混合型饲料添加剂中加入所述流动相,并进行超声处理,得到样品处理液;
4)将步骤3)得到的样品处理液在与步骤2)相同的液相色谱条件下进行检测,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,根据步骤2)建立的标准曲线计算出样品处理液中的新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度,并结合所述样品处理液的体积和样品质量,计算出混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。
相比现有技术,本发明具有如下有益效果:
1、为了弥补目前尚没有针对混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量检测方法的不足,本发明考虑到新甲基橙皮苷二氢查耳酮难溶于水的特性,以甲醇水溶液作为流动相,用该流动相对样品中新甲基橙皮苷二氢查耳酮进行提取,并根据样品中各成分组成的性质,选择C18柱作为固定相,并通过创造性的研究得出适用于本发明混合型饲料添加剂分离的色谱条件,使得各成分在该色谱条件下能充分分离开,在检测波长282nm条件下新甲基橙皮苷二氢查耳酮能够稳定出峰,出峰时间在10~20分钟之间,出峰不会拖尾、重叠,不会有干扰峰出现,进而使本发明检测结果精确,可靠性高。
2、本发明先对不同浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测,避免了单点计算带来的误差,进而使检测结果更加准确、可靠,制得的标准曲线相关系数更高,为后续样品的检测奠定了可靠的定量基础。
3、本发明无需进行复杂的样品前处理,只需采用甲醇水流动相对混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮进行提取,前处理过程更加简单,本发明还研究出提取过程中最佳料液比和超声时间,在此条件下新甲基橙皮苷二氢查耳酮提取最完全,能够保证良好的提取效果,进而使检测结果更加准确。
4、本发明检测方法使用的设备和试剂均为通用设备,适用于饲料厂进行大批量自检,具有良好的应用推广前景。
附图说明
图1为本发明方法新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和说明书附图对本发明作进一步详细说明。本实施案例在以本发明技术为前提下进行实施,现给出详细的实施方式和具体的操作过程,来说明本发明具有创造性,但本发明的保护范围不限于以下的实施例。
本实施例主要设备有分析天平、高效液相色谱和一些常见实验室玻璃仪器;所用的试剂有色谱级甲醇、二氢查耳酮标准品,所用的其它试剂均为色谱纯级试剂,所用水为纯水。
一、本发明混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,包括如下步骤:
1)采用甲醇水溶液作为溶剂,配制梯度浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液;
2)采用液相色谱法对步骤1)配制的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,以新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线;其中,色谱条件为采用C18液相色谱柱、流动相为甲醇水溶液、检测波长为282nm;
3)向混合型饲料添加剂中加入所述流动相,并进行超声处理,得到样品处理液;
4)将步骤3)得到的样品处理液在与步骤2)相同的液相色谱条件下进行检测,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,根据步骤2)建立的标准曲线计算出样品处理液中的新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度,并结合所述样品处理液的体积和样品质量,计算出混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。
上述步骤1)中为配制浓度依次为0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mg/mL的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液,这样得到的标准曲线线性相关性更好,使得样品的检测计算结果更加准确。
上述甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为40~60:60~40,过滤后备用。选择这样的流动相,有利于样品中各组分充分分离开,且新甲基橙皮苷二氢查耳酮的出峰时间合适,为10~20分钟。
上述C18液相色谱柱规格为250mm长×4.6mm内径,填料粒度为5μm。
上述液相色谱检测过程中控制柱温为室温,流动相流速为0.8~1.5mL/min,进样量为20~30μL。
上述步骤3)将混合型饲料添加剂与所述流动相按照3~5g:100mL的质量体积比混合,并进行超声处理20~60min,得到样品处理液。这样的提取条件,使得待检测样品中新甲基橙皮苷二氢查耳酮提取更加完全,检测结果更加真实可靠。
上述混合型饲料添加剂为以二氧化硅和/或蛭石为载体的混合型饲料添加剂,特别是指甜味剂。
上述得到的样品处理液如果经过本发明液相色谱方法检测,检测的282nm处吸光度值最大大于0.8,则对样品处理液进行一定的浓度稀释后再重新进行检测,这样检测结果更加准确可靠。
本发明检测原理:采用新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品,用甲醇水流动相配制成梯度浓度的二氢查耳酮标准溶液,用液相色谱仪在本发明设定的色谱条件下对各浓度的标准溶液中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量进行测定,并得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,建立浓度-峰面积标准曲线;采用甲醇水流动相对混合型饲料添加剂中的新甲基橙皮苷二氢查耳酮进行提取,得到样品处理液,并采用与标准溶液测定相同的液相色谱条件对样品处理液进行洗脱,使样品处理液中的各成分能够相互分离开来,在线检测分离液282nm左右处的吸光度值,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,并根据上述标准曲线进行计算可以得到样品处理液中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的浓度,进一步可结合样品处理液的体积和样品质量,计算出样品中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量,进行精准定量分析。
二、具体测定实施例:
1、试剂:
甲醇:色谱纯;水:GB/T6682-2008中一级水;新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品。
2、主要仪器设备:
高效液相色谱仪:配紫外检测器;分析天平:感量为0.0001g。
3、色谱条件:
3.1色谱柱:C18色谱柱,250mm(长)×4.6mm(内径),粒度5μm。
3.2流动相:甲醇250mL,纯水250mL,混合均匀,过滤后备用。
3.3柱温:室温。
3.4流动相流速:1.0mL/min。
3.5进样量:20μL。
3.6检测波长:282nm。
4、分析步骤:
4.1标准储备液配制:
准确称取0.1000g新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准品于100mL容量瓶中,加流动相定容至刻度,此溶液新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度为1.0mg/mL。
4.2标准工作液配制:
分别移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL储备液至10mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,该系列新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度依次分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL。
4.3标准曲线的绘制:
用液相色谱仪在上述“3、色谱条件”下进行检测,新甲基橙皮苷二氢查耳酮的出峰时间在10~20分钟之间,计算出峰的峰面积,以标准溶液的浓度为横坐标,相应峰面积为纵坐标做标准曲线,绘制的标准曲线方程为y=32103916.7671x+157679.6685,R2=0.9997,标准曲线如图1所示。
4.4试样溶液制备:
称取饲料添加剂甜味剂约3.0-5.0g(精密称取)于烧杯中,加入流动相,超声20min,再转移到100mL容量瓶中,加流动相定容至刻度,得到试样溶液;其中,所述甜味剂与流动相的质量体积比为3~5g:100mL。
4.5试样的检测:
在与4.3相同的液相色谱条件下,对4.4试样溶液中新甲基橙皮苷二氢查耳酮进行检测,计算出峰的峰面积,并根据上述得到的标准曲线方程计算出试样溶液中的新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度,根据下述式1计算得到样品中新甲基橙皮苷二氢查耳酮质量百分含量(X),单位以%计,每份样品至少重复两次平行试验:
式中:
C——试样溶液中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);
V——试样溶液体积,单位为毫升(mL);
K——试样溶液的稀释倍数;
m——称取试样的质量,单位为克(g)。
计算结果表示到小数点后两位;在重复性条件下获得的两次独立平行测定结果取平均值,得到最终检测结果,两次独立平行测定结果的相对标准偏差(RSD)不大于2%。
经计算,本实施例甜味剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的两次独立平行测定结果分别为0.207%和0.209%,两次独立平行测定结果的相对标准偏差(RSD)不大于2%,具有良好的平行性,检测结果稳定;计算两次独立平行测定结果的平均值0.207%+0.209%/2=0.208%,得到本实施例甜味剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的质量含量为0.208%。
最后说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (7)
1.一种混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)采用甲醇水溶液作为溶剂,配制梯度浓度的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液;
2)采用液相色谱法对步骤1)配制的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液进行检测,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,以新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线;其中,色谱条件为采用C18液相色谱柱、流动相为甲醇水溶液、检测波长为282nm;
3)向混合型饲料添加剂中加入所述流动相,并进行超声处理,得到样品处理液;
4)将步骤3)得到的样品处理液在与步骤2)相同的液相色谱条件下进行检测,得到新甲基橙皮苷二氢查耳酮出峰的峰面积,根据步骤2)建立的标准曲线计算出样品处理液中的新甲基橙皮苷二氢查耳酮浓度,并结合所述样品处理液的体积和样品质量,计算出混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮的含量。
2.根据权利要求1所述混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,步骤1)中为配制浓度依次为0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mg/mL的新甲基橙皮苷二氢查耳酮标准溶液。
3.根据权利要求1所述混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,所述甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为40~60:60~40,过滤后备用。
4.根据权利要求1所述混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,所述C18液相色谱柱规格为250mm长×4.6mm内径,填料粒度为5μm。
5.根据权利要求1所述混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,液相色谱检测过程中控制柱温为室温,流动相流速为0.8~1.5mL/min,进样量为20~30μL。
6.根据权利要求1所述混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,步骤3)将混合型饲料添加剂与所述流动相按照3~5g:100mL的质量体积比混合,并进行超声处理20~60min,得到样品处理液。
7.根据权利要求1所述混合型饲料添加剂中新甲基橙皮苷二氢查耳酮含量的检测方法,其特征在于,所述混合型饲料添加剂为甜味剂。
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