CN104807946A

CN104807946A - 一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法

Info

Publication number: CN104807946A
Application number: CN201310559492.3A
Authority: CN
Inventors: 盛洁; 包亚君
Original assignee: IVC Nutrition Corp
Current assignee: IVC Nutrition Corp
Priority date: 2014-01-27
Filing date: 2014-01-27
Publication date: 2015-07-29

Abstract

本发明公开了一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，包括以下步骤：（1）检测样品处理；（2）标准品的制备；（3）色谱条件设定；（4）样品对照，在检测样品处理过程中加入二乙三胺五乙酸（DTPA）和维生素C，以调节离子强度，掩蔽微量元素离子对检测的干扰，从而实现直接准确测定保健品中叶酸的含量。这一技术色谱检测结果准确可靠，解决了传统测定过程所得结果与实际值偏离的问题，满足实际测定要求。

Description

一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法

技术领域

本发明属于高效液相色谱法（HPLC）在食品药品组分分析中的具体应用，具体通过对色谱条件的巧妙选择，实现对特定的复杂组分实际样品中叶酸的含量进行准确的定性和定量分析。

背景技术

叶酸是一种重要的B族维生素，其化学名称为碟酰谷氨酸，具有促进泌乳、健美皮肤、防止白发、增进食欲和防治口腔溃疡的功效，除了天然存在于绿叶蔬菜和动物肉蛋奶、肝脏中，其中在肝脏中含量最为丰富。除了天然存在以外，叶酸作为添加剂被适量加入到一些营养强化食品、保健食品中，准确测定叶酸含量对产品的生产加工、功效评价等有重要意义。叶酸测定目前多采用分光光度法和微生物测定法，微生物测定法具有设备简便、灵敏度高的特点，但需要时间长，分光光度法的方法选择性较差，特别对复杂成分的样品，干扰较大，检测结果准确性较差。高效液相色谱法虽然具有选择性好、灵敏度高的优点，特别对复杂组分样品中叶酸测定更显示其优越性，在国内外得到广泛应用。但是对某些特别复杂组分样品中叶酸的测定结果与理论值相差甚远，有待于以此为基础建立一套更加准确可靠的方法。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于提出一套HPLC方法测定保健食品中叶酸含量的具体条件，通过添加二乙三胺五乙酸和维生素C，掩蔽营养品样品中的微量元素离子，同时调节离子强度，选择与之配套的其他检测条件，得到色谱最佳峰形，有效解决不进行此项处理时结果偏离实际的问题，实现了直接对复杂基质保健食品中叶酸含量的准确测定。

2、技术方案

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）检测样品处理：取适量样品磨细并称量，置于50ml棕色容量瓶中，加入适量DTPA和维生素C，用0.5％氨水超声使溶解，并控制PH=8~9，之后用少量0.5％氨水定容；取适量所得溶液于离心管中，离心约15 min，取上清液待测；

（2）标准品的制备：精密称取20mg叶酸对照品至一100 ml棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液。精密吸取1 ml标准贮备液至一10ml容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准工作溶液；

（3）色谱条件设定：

a. 色谱柱：采用5 μm反相C8色谱柱（250 mm ×416 mm）；

b. 流动相：

流动相A： 0.05M Na₃PO₄ (pH 2.5)：甲醇=90：10;

流动相B： 0.05M Na₃PO₄(pH 2.5)：甲醇=10：90;

梯度：在18 min时达70% B

流速： 1 mL/min；

c. 检测器及检测波长：用二极管阵列检测器对叶酸标准溶液进行光谱扫描，在280 nm处有最大吸收峰，因此在检测试验中选择波长为280 nm；

d. 进样量：20 μL；

e. 柱温：30 °C

（4）进样前，将样品用0.45 μm过滤器过滤；

（5）通过待测样品与标准品的保留时间和峰面积关系进行对比，确定样品。

进一步的，所述步骤（1）中的DTPA和维生素C也可应用结构与它们类似，功能十分相近的EDTA、抗坏血酸钠盐、钾盐等相似物质。

进一步的，所述步骤（3）中还可应用类似C8色谱柱的反相柱。

更进一步的，测定对象名称不仅限于保健品，也可以是膳食补充剂或含有叶酸的药品等非保健品，或是生物及其制品。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明通过添加DTPA和维生素C后可以在检测时有效排除Zn、Fe等元素对检测的干扰，解决了通常方法检测时结果严重偏离实际值的问题，从而实现了直接对复杂基质保健食品中叶酸含量的准确测定。

附图说明

图1为原有和新型色谱方法对叶酸含量进行测定所得谱图；

图中A为标准品的色谱图；B为原有方法对One Centure active adults 50+样品中叶酸含量测定的色谱图；C为新方法对One Centure active adults 50+样品中叶酸含量测定的色谱图。t=9.9 min附近的峰为叶酸测定峰，B中叶酸测定峰的峰面积为764，C中叶酸测定峰的峰面积为802。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

如图1所示，One Centure active adults 50+样品中叶酸含量的测定：

（1）检测样处理：取20片One Centure active adults 50+样品磨细，精密称量相当于1 mg叶酸的样品置于50 ml棕色容量瓶中，加入0.3 g DTPA和0.5 g维生素C，用0.5％氨水超声使溶解，并控制PH=8~9，之后用少量0.5％氨水定容；取适量所得溶液于离心管中，离心约15 min，取上清液用0.45um滤膜过滤后进样。

（2）对照品溶液准备：精密称取20 mg叶酸对照品至一100 ml棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液。精密吸取1ml标准贮备液至一10ml容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准工作溶液。之后将叶酸储备液逐级稀释为浓度分别为10，15，20，25，30 ug/ml的溶液，用0.45 um滤膜过滤后进样。

（3）按照第三部分发明内容中所述的色谱条件设定色谱检测条件，进样检测，并在相应保留时间处读取峰面积。

（4）按如下方程计算样品中叶酸的含量：

其中ω _样为待测样品中叶酸的含量，单位为μg/g；C _对为对照品溶液的浓度，单位为μg/ml；A _对为对照品溶液的峰面积；A _样为样品溶液中叶酸的峰面积；m _样为样品的称量重量，单位为g。

（5）One Centure active adults 50+ 样品检测所得谱图如附图1C所示，多次实验证明该方法的线性范围为：0.181μg-0.544μg，方法检出限为0.075 μg，加标平均回收率为 98%。事实证明利用此方法可以准确测出相关样品叶酸的含量，并且色谱图峰形好，干扰小，方法满足检测的需要，而未用此方法处理的样品叶酸的检出含量偏离实际值。

此方法还检测了不同品种的片剂中的叶酸含量，测定证实本方法灵敏度高、选择性好、干扰很小。加标回收率试验得到平均回收率为98.8%。因此，此方法适用于保健食品中叶酸含量的实际检验。

Claims

1.一种测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

（2）标准品的制备：精密称取20mg叶酸对照品至一100 ml棕色容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液;

精密吸取1 ml标准贮备液至一10ml容量瓶中，用0.5％氨水溶解并稀释至刻度，作为标准工作溶液；

（3）色谱条件设定：

a. 色谱柱：采用5μm反相C8色谱柱（250 mm ×416 mm）；

b. 流动相：

流动相A：0.05M Na₃PO₄ (pH 2.5)：甲醇=90：10；

流动相B：0.05M Na₃PO₄(pH 2.5)：甲醇=10：90；

梯度：在18 min时达70% B；

流速：1 mL/min；

d. 进样量：20 μL；

e. 柱温：30 °C；

（4）通过待测样品与标准品的保留时间和峰面积关系进行对比，确定保健品中叶酸的含量。

2.根据权利要求1所述测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，其特征在于：所述步骤（1）中的DTPA和维生素C也可应用结构与它们类似，功能十分相近的EDTA、抗坏血酸钠盐、钾盐等相似物质。

3.根据权利要求1所述测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，其特征在于：所述步骤（3）中还可应用类似C8色谱柱的反相柱。

4.根据权利要求1所述测定保健食品中叶酸含量的色谱方法，其特征在于：测定对象不仅限于保健品，也可以是膳食补充剂或含有叶酸的药品等非保健品，或是生物及其制品。