CN103627811B - 一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用 - Google Patents

一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103627811B
CN103627811B CN201310673844.8A CN201310673844A CN103627811B CN 103627811 B CN103627811 B CN 103627811B CN 201310673844 A CN201310673844 A CN 201310673844A CN 103627811 B CN103627811 B CN 103627811B
Authority
CN
China
Prior art keywords
amplification reaction
salmonellas
lamp
reaction system
meat
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310673844.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103627811A (zh
Inventor
姜毓君
满朝新
庞心怡
周文琦
赵玥明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northeast Agricultural University
Original Assignee
Northeast Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northeast Agricultural University filed Critical Northeast Agricultural University
Priority to CN201310673844.8A priority Critical patent/CN103627811B/zh
Publication of CN103627811A publication Critical patent/CN103627811A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103627811B publication Critical patent/CN103627811B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/10—Enterobacteria
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用，试剂盒由Bst DNA聚合酶、LAMP扩增反应体系，阴性对照液和阳性对照液组成。其中，LAMP扩增反应体系由LAMP引物组和扩增反应液组成，其中每25μL LAMP扩增反应体系由10μM F3和B3，40μM FIP和BIP，1×thermopol buffer,1M甜菜碱,3.5μL dNTP,6mM MgCl2和1μL模板DNA组成，其余部分由灭菌双蒸水补足。本发明可以对肉中污染的沙门氏菌进行快速简便的检测，无需复杂的热循环仪，普通的水浴锅就可以满足温度的要求。具有快速、灵敏、简便、高效的优点。

Description

一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用，属于食品安全技术领域。
背景技术
沙门氏菌在环境中广泛存在，是一种引起食源性疾病的重要致病菌，能引起人胃肠炎、伤寒、败血症等症状。沙门氏菌菌属类型多样，抗原复杂，目前已分离出2500多个血清型。最近的一项研究美国食源性疾病暴发的报告中指出沙门氏菌是最常见的细菌性病原体，占所有细菌性食物中毒的52%。在我国近年来，沙门氏菌也是微生物引起食源性疾病中最主要的病原菌之一，占17.19%。许多动物性食品尤其是生肉，都是沙门氏菌污染的主要来源。目前检测沙门氏菌的传统方法费时费力，或者需要复杂昂贵的仪器等缺点已经不适用于现代检测。环介导等温扩增技术（LAMP）由Notomi等人于2000年建立，利用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶，通过对靶基因的6个区段设计的4条特异性的引物，在恒温（60～65℃）、短时间（1h）条件下达到对目的基因的高效扩增。由于LAMP的扩增产物是靶基因的一系列反向重复形成的类似花椰菜结构，电泳呈现的是不同片段大小组成的阶梯式图谱，也可以根据生成的焦磷酸镁沉淀通过肉眼来判断反应是否发生。本方法所采用的试剂盒技术能够对肉中沙门氏菌进行快速灵敏的检测。
发明内容
本发明提供了一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒。目的在于解决传统方法检测沙门氏菌繁琐和费时费力的缺陷以及现有PCR技术对仪器要求较高的不足，从而提供一种快速简便，灵敏度更高的，并且适用于基层单位采用的检测肉中沙门氏菌的方法及检测试剂盒。
本发明技术方案如下：一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒，由Bst DNA聚合酶、LAMP扩增反应体系，阴性对照液和阳性对照液组成，其特征在于，LAMP扩增反应体系含有以下两组引物组中的任一一组：
（1）上游内引物FIP：5’-gacgactggtactgatcgatagtttttcaacgtttcctgcgg-3’；
下游内引物BIP：5’-ccggtgaaattatcgccacacaaaacccaccgccagg-3’；
上游外引物F3：5’-ggcgatattggtgtttatgggg-3’；
下游外引物B3：5’-aacgataaactggaccacgg-3’；
（2）上游内引物FIP：5’-cccagatccccgcattgttgatttttccgccccatattatcgctat-3’；
下游内引物BIP：5’-gaccatcaccaatggtcagcattttattggcggtatttcggtggg-3’；
上游外引物F3：5’-gttcaacagctgcgtcatga-3’；
下游外引物B3：5’-cgctattgccggcatcatta-3’。
进一步地，引物组的选择对于检出限至关重要，优选引物组为：
上游内引物FIP：5’-gacgactggtactgatcgatagtttttcaacgtttcctgcgg-3’；
下游内引物BIP：5’-ccggtgaaattatcgccacacaaaacccaccgccagg-3’；
上游外引物F3：5’-ggcgatattggtgtttatgggg-3’；
下游外引物B3：5’-aacgataaactggaccacgg-3’。
按照体积份数组成如下：1份8U/μL的Bst DNA聚合酶、24份的LAMP扩增反应体系，1份的阴性对照液和1份的阳性对照液。
所述LAMP扩增反应体系由LAMP引物组和扩增反应液组成，其中每25μL LAMP扩增反应体系由10μM F3和B3，40μM FIP和BIP，1×thermopol buffer,1M甜菜碱,3.5μL dNTP,6mM MgCl2和1μL模板DNA组成，其余部分由灭菌双蒸水补足。
所述阳性对照液为沙门氏菌标准菌株培养液中提取的基因组DNA溶液，阴性对照液为灭菌双蒸水。
本发明还提供了一种应用上述试剂盒快速检测肉中沙门氏菌的方法。
所述试剂盒用于检测肉中沙门氏菌具体步骤如下：
1）提取待测物DNA：取25g待检肉样置于无菌均质袋中，加入225mL生理盐水，拍打匀浆，提取肉中沙门氏菌的DNA；
2）环介导等温扩增：以DNA提取物为模板进行LAMP扩增，将除Bst DNA聚合酶以外的LAMP反应体系在95℃预变性5～10min，然后迅速置于0～4℃加入Bst DNA聚合酶，65℃酶促反应60min，最后升温至80℃使酶失活2min；
3）电泳检测：取5μL扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在110V电压下电泳40min，利用凝胶成像系统观察结果。
本发明快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒中按照体积份数由1份8U/μL的Bst DNA聚合酶、24份的LAMP扩增反应体系，1份的阴性对照液和1份的阳性对照组成。所述LAMP扩增反应体系由LAMP引物组和扩增反应液组成。其中每25μL LAMP扩增反应体系由10μM F3和B3，40μM FIP和BIP，1×thermopol buffer,1M betain,3.5μL dNTP和6mM MgCl2，1μL模板DNA组成，其余部分由灭菌双蒸水补足。阳性对照为沙门氏菌标准菌株培养液中提取的基因组DNA；阴性对照为灭菌双蒸水。
引物均是针对沙门氏菌的吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白（invA）设计的，是高度保守的属特异性基因。LAMP引物组中外引物与内引物比例关系为1:8时扩增效果最好。
本发明的有益效果：可以对肉中污染的沙门氏菌进行快速简便的检测，无需复杂的热循环仪，普通的水浴锅就可以满足温度的要求。由于LAMP的引物是针对靶基因的6个区段设计的，因此特异性很强。从反应时间来看，LAMP只需2h就可以得出最终结果，而传统方法对阴性样品的确定需要4h。与同样是基于核酸检测的PCR方法相比，检测灵敏度可以提高100倍，从而具有较高的灵敏度。因此，本发明为肉中的沙门氏菌的检测提供了一个快速、灵敏、简便、高效的新方法，特别是基层实验室快速初筛沙门氏菌，提供了一个新的思路。
附图说明
图1具体实施方式实例1检测结果电泳图；
（1，实施例1阳性对照；2，实施例2阳性对照；3，实施例1；4，实施例2；5，实施例1阴性对照；6，实施例2阴性对照）。
图2为具体实施方式实施例1灵敏度测试实验中LAMP扩增的电泳图；
（M，marker；1，沙门氏菌浓度9.8×107CFU/mL；2,沙门氏菌浓度9.8×106CFU/mL；3，沙门氏菌浓度9.8×105CFU/mL；4，沙门氏菌浓度9.8×104CFU/mL；5，沙门氏菌浓度9.8×103CFU/mL；6，沙门氏菌浓度9.8×102CFU/mL；7，沙门氏菌浓度9.8×101CFU/mL；8，沙门氏菌浓度9.8×100CFU/mL；9，沙门氏菌浓度9.8×10-1CFU/mL；10,阴性对照）。
图3为具体实施方式实施例1灵敏度测试实验中PCR扩增的电泳图；
（M，marker；1，沙门氏菌浓度9.8×107CFU/mL；2,沙门氏菌浓度9.8×106CFU/mL；3，沙门氏菌浓度9.8×105CFU/mL；4，沙门氏菌浓度9.8×104CFU/mL；5，沙门氏菌浓度9.8×103CFU/mL；6，沙门氏菌浓度9.8×102CFU/mL；7，沙门氏菌浓度9.8×101CFU/mL；8，沙门氏菌浓度9.8×100CFU/mL；9，沙门氏菌浓度9.8×10-1CFU/mL；10,阴性对照）。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合实施例说明。
实施例1
1.采用细菌基因组试剂盒提取待检肉样中的沙门氏菌DNA
2、以提取物作为模板进行LAMP扩增，反应体系为25μL
LAMP扩增条件为：95℃反应5min，迅速置于4℃加入Bst酶，65℃反应60min，80℃使酶钝化2min。
3、扩增产物的电泳检测
取5μL扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在110V电压下电泳40min，并利用凝胶成像系统观察结果（图1）。
本实施方法对仪器设备要求简单，只需水浴条件即可完成，耗时较短，约2小时即可完成，检测灵敏度高，检出限为9.8×101CFU/mL。
实施例2
1、待检肉样的DNA提取，方法同实施例1。
2、以提取物作为模板进行LAMP，反应体系为25μL。
3、扩增产物的电泳检测
取5μL扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在110V电压下电泳40min，并利用凝胶成像系统观察结果。
本实施方法对仪器设备要求简单，只需水浴条件即可完成，耗时较短，约2小时即可完成，检测灵敏度高，检出限为5.7×102CFU/mL。
实施例3关于灵敏度的测试
对本发明实施例1的方法进行灵敏度的测试，具体如下：
鲜猪肉购自当地农贸市场，人工染菌前经国标法确认不含有沙门氏菌。取25g猪肉样品放入盛有并225mL BPW的无菌均质袋中，制成1：10稀释液，人工接种沙门氏菌，于37℃培养12h后。调整匀浆液中菌体浓度为添加107，然后进行10倍梯度稀释，使沙门氏菌浓度即为107CFU/mL～10-1CFU/mL，分别提取每一组人工污染肉浆中沙门氏菌的DNA，方法同实施例1，以提取物作为模板进行LAMP和PCR反应，扩增结果的电泳图如图2所示，图2从左到右依次为marker,9.8×107CFU/mL，9.8×106CFU/mL，9.8×105CFU/mL，9.8×104CFU/mL，9.8×103CFU/mL，9.8×102CFU/mL，9.8×101CFU/mL，9.8×100CFU/mL，9.8×10-1CFU/mL,阴性对照。
由图2、图3可知，LAMP检测肉中污染的沙门氏菌的灵敏度为9.8×101CFU/mL，比PCR灵敏度高100倍。
实施例4
本发明快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒中按照体积份数由1份8U/μL的Bst DNA聚合酶、24份的LAMP扩增反应液，1份的阴性对照液和1份的阳性对照组成。所述LAMP扩增反应体系由LAMP引物组和扩增反应液组成。其中每25μL LAMP扩增反应体系由10μM F3和B3，40μM FIP和BIP，1×thermopol buffer,1M betain,3.5μL dNTP和6mM Mgcl2，1μL模板DNA组成，其余部分由灭菌双蒸水补足。阳性对照为沙门氏菌标准菌株培养液中提取的基因组DNA；阴性对照为灭菌双蒸水。
本实施方式的试剂盒应用于具体实施方式一、二、三中的LAMP扩增步骤。本试剂盒需
要在-20℃的条件下保存。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒，由Bst DNA聚合酶、LAMP扩增反应体系，阴性对照液和阳性对照液组成，其特征在于，LAMP扩增反应体系含有以下引物组：
上游内引物FIP：5’-cccagatccccgcattgttgatttttccgccccatattatcgctat-3’；
下游内引物BIP：5’-gaccatcaccaatggtcagcattttattggcggtatttcggtggg-3’；
上游外引物F3：5’-gttcaacagctgcgtcatga-3’；
下游外引物B3：5’-cgctattgccggcatcatta-3’。
2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，按照体积份数组成如下：1份8U/μL的Bst DNA聚合酶、24份的LAMP扩增反应体系，1份的阴性对照液和1份的阳性对照液。
3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述LAMP扩增反应体系由LAMP引物组和扩增反应液组成，其中每25μL LAMP扩增反应体系由10μM F3和B3，40μM FIP和BIP，1×thermopol buffer,1M甜菜碱,3.5μL dNTP,6mM MgCl2和1μL模板DNA组成，其余部分由灭菌双蒸水补足。
4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述阳性对照液为沙门氏菌标准菌株培养液中提取的基因组DNA溶液，阴性对照液为灭菌双蒸水。
CN201310673844.8A 2013-12-11 2013-12-11 一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用 Active CN103627811B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310673844.8A CN103627811B (zh) 2013-12-11 2013-12-11 一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310673844.8A CN103627811B (zh) 2013-12-11 2013-12-11 一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103627811A CN103627811A (zh) 2014-03-12
CN103627811B true CN103627811B (zh) 2015-07-01

Family

ID=50209257

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310673844.8A Active CN103627811B (zh) 2013-12-11 2013-12-11 一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103627811B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107022632A (zh) * 2017-05-19 2017-08-08 深圳职业技术学院 一种沙门氏菌检测用引物组、试剂盒及应用
CN109402271A (zh) * 2017-08-14 2019-03-01 中国科学院微生物研究所 用于检测沙门氏菌的引物系统和试剂盒以及他们的应用和检测沙门氏菌的方法
TR201820388A2 (tr) 2018-12-25 2019-01-21 Tuerkiye Bilimsel Ve Teknolojik Arastirma Kurumu Tuebitak Salmonellanin klasi̇k kültür metoduna alternati̇f hizli ve taşinabi̇li̇r mi̇kroakişkan tespi̇t si̇stemi̇

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101149355A (zh) * 2007-11-09 2008-03-26 东北农业大学 一种检测牛乳中沙门氏菌的方法
CN101153327A (zh) * 2007-09-21 2008-04-02 珠海市疾病预防控制中心 沙门氏菌检测用引物、检测方法、检测试剂盒
CN101880711A (zh) * 2010-03-11 2010-11-10 中华人民共和国徐州出入境检验检疫局 金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法
CN102206703A (zh) * 2011-01-23 2011-10-05 浙江省质量技术监督检测研究院 三种食源性致病菌多重快速检测法及检测引物组和试剂盒
CN102424842A (zh) * 2011-12-21 2012-04-25 中国人民解放军疾病预防控制所 沙门氏菌的lamp检测方法及其专用引物与试剂盒
CN102851383A (zh) * 2012-09-21 2013-01-02 武汉真福医药科技发展有限公司 快速检测沙门氏菌的lamp试剂盒
CN103320434A (zh) * 2013-06-28 2013-09-25 华南理工大学 一种沙门氏菌lamp引物组和试剂盒及检测方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101153327A (zh) * 2007-09-21 2008-04-02 珠海市疾病预防控制中心 沙门氏菌检测用引物、检测方法、检测试剂盒
CN101149355A (zh) * 2007-11-09 2008-03-26 东北农业大学 一种检测牛乳中沙门氏菌的方法
CN101880711A (zh) * 2010-03-11 2010-11-10 中华人民共和国徐州出入境检验检疫局 金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法
CN102206703A (zh) * 2011-01-23 2011-10-05 浙江省质量技术监督检测研究院 三种食源性致病菌多重快速检测法及检测引物组和试剂盒
CN102424842A (zh) * 2011-12-21 2012-04-25 中国人民解放军疾病预防控制所 沙门氏菌的lamp检测方法及其专用引物与试剂盒
CN102851383A (zh) * 2012-09-21 2013-01-02 武汉真福医药科技发展有限公司 快速检测沙门氏菌的lamp试剂盒
CN103320434A (zh) * 2013-06-28 2013-09-25 华南理工大学 一种沙门氏菌lamp引物组和试剂盒及检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAMP技术在检测原料乳及乳制品致病菌方便的应用;胡惠秩;《中国乳品工业》;20111231;第39卷(第6期);摘要及第56页右栏第2段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103627811A (zh) 2014-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101149355B (zh) 一种检测牛乳中沙门氏菌的方法
CN106434884A (zh) 快速恒温检测单核细胞增生李斯特菌的方法、引物及试剂盒
CN103484536B (zh) 一种快速检测乳中阪崎肠杆菌的试剂盒及其应用
CN104946780A (zh) 一种快速检测肉中金黄色葡萄球菌的试剂盒及应用
CN103627811B (zh) 一种快速检测肉中沙门氏菌的试剂盒及其应用
CN104232784A (zh) 一种牛肉中三种主要致病菌多重pcr检测方法
CN104726594B (zh) 食源性致病菌五重荧光pcr检测试剂盒
CN107022632A (zh) 一种沙门氏菌检测用引物组、试剂盒及应用
CN101412993A (zh) 一种纳豆激酶固体发酵方法
CN103320435A (zh) 含内标的单核细胞增生李斯特氏菌lamp检测试剂盒
CN103866031B (zh) 大肠杆菌o157:h7的pcr检测引物及检测试剂盒
CN102424861B (zh) 检测食品中沙门菌的环介导等温扩增方法及试剂盒
CN104263841A (zh) 马铃薯中黑胫病菌的实时荧光lamp检测方法及试剂盒
CN104313128A (zh) 基于环介导等温扩增技术检测禾谷镰孢菌的方法及引物组合物
CN103571943A (zh) 一种鼠伤寒沙门氏菌的核酸检测方法
CN103276061A (zh) 一种检测布鲁菌的lamp核酸试纸条试剂盒及其应用
CN101492741A (zh) 一种定量检测猪肺炎支原体的方法
CN104673885A (zh) 嗜肺军团菌ⅰ型检测试剂盒及嗜肺军团菌ⅰ型检测方法
CN104278098A (zh) 肠出血性大肠杆菌o157∶h7 lamp-lfd检测试剂盒及其检测方法
CN103993072B (zh) 一种快速鉴定致病性香鱼假单胞菌的多重pcr检测试剂盒及其方法
CN102676684A (zh) 同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法
CN106282392A (zh) 一种肠炎沙门氏菌pcr检测引物、检测试剂盒及检测方法
CN104388574A (zh) 一种致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌双重pcr检测方法
CN104164510A (zh) 利用多重pcr技术对食源性致病菌进行高通量快速检测的方法
CN104862399B (zh) 检测食品中蜡样芽孢杆菌的含扩增内标的pcr方法及试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant