CN103614451A - 一种化妆品微生物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种化妆品微生物的检测方法，该检测方法，包括以下步骤：先分别配制高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、不含样品的空白对照液和含微生物的阳性对照液；然后将制得的高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、空白对照液和阳性对照液分别注入四个含有培养基的培养皿中进行培养并进行菌落计数，仔细观察细菌培养结果，通过对比对细菌进行鉴定。该方法采用SCDLP增菌液对样品进行稀释，可明显提高检测灵敏度，将卵磷脂吐温80营养琼脂作为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的培养基，使操作更为简单，检测结果更准确。

Description

一种化妆品微生物的检测方法

技术领域

本发明属于化妆品安全性检测领域，具体涉及一种化妆品微生物的检测方法。

背景技术

随着我国经济社会的发展、人民生活质量的提高，化妆品工业近年来得到了快速发展，化妆品的种类与数量也与日俱增，其质量的好坏倍受相关监管部门及众多消费者的关注与重视。为了提高化妆品的护肤和化妆效果，生产企业往往在其中添加了多种与蛋白质、脂肪、动物组织、维生素、无机盐和水分等，化妆品的PH值为4-7，因此，化妆品成份中丰富营养成分及合适的PH值，为微生物的生长和繁殖提供了良好的条件，易导致化妆品腐败变质。

人们使用含有微生物的化妆品可直接导致皮肤疾病，严重危害了人们尤其是女性消费者的健康，因此，化妆品中的微生物检测是化妆品质量控制的重要项目和检验化妆口合格的重要指标。近年来研究表明，在对化妆品进行微生物检测过程中，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等重要的致病菌检测率较低，引起这一结果的原因主要有两件：第一，部分生产企业在生产化妆品的过程中，对质量进行严格控制，化妆品未受到微生物的污染；第二，化妆品中其他成份或现有检测技术的缺陷使得微生素未能被检出。2007版《化妆品卫生规范》中提出的对化妆品进行微生物检测的方法复杂，而且存在技术上的缺陷，因此，为了保证我国化妆品的质量，保障人们的健康，寻找一种对化妆品微生物检出率高，操作又简便的检测方法至关重要。

发明内容

为解决化妆品微生物检测现有技术中的不足，本发明提供了一种可以对化妆品微生物进行快速检测，且微生物检出率高的检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种化妆品微生物的检测方法，包括以下步骤：

（1）分别配制高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、不含样品的空白对照液和含微生物的阳性对照液；

（2）将步骤（1）中制得的高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、空白对照液和阳性对照液分别注入四个含有培养基的培养皿中进行培养并进行菌落计数，仔细观察细菌培养结果，通过对比对细菌进行鉴定。

优选的，所述的高浓度的化妆品样品备检溶液由以下方法制备：无菌称取10~20g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得高浓度的化妆品样品备检溶液。

或无菌称取10~20g疏水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐温80，充分混匀，制得高浓度的化妆品样品备检溶液。

优选的，所述的低浓度的化妆品样品备检溶液由以下方法制备：无菌称取1~3g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得低浓度的化妆品样品备检溶液。

或无菌称取1~3g疏水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐温80，充分混匀，制得低浓度的化妆品样品备检溶液。

优选的，所述的空白对照液由以下方法制备：将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

优选的，所述的阳性对照液由以下方法制备：将1~3g标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

优选的，所述的标准菌株为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌或酵母菌标准菌株中的一种或几种。

优选的，所述的大肠埃希菌为大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、所述的白色念珠菌为白色念珠菌ATCC10231、所述的金黄色葡萄球菌为金黄色葡萄球菌菌株NICPBP26112、所述的铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌标准菌株NICPBP10211。

优选的，所述的培养基为卵磷脂-吐温80营养琼脂或虎红琼脂。

优选的，所述的步骤（2）具体为：取高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各2~5ml分别加入到不同的培养皿中，所述培养皿中加入卵磷脂-吐温80营养琼脂作为培养基，将培养皿置入37℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数;

或取高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各2-5ml分别加入到不同的培养皿中，所述的培养皿中含有虎红琼脂作为培养基，将培养皿置入28℃恒温生化培养箱培养72h，然后进行菌落计数。

优选的，所述的对细菌进行鉴定的具体方法为：经过培养后，

高浓度的化妆品样品备检溶液和/或低浓度的化妆品样品备检溶液与阳性对照液中同时培养出特定特征的菌落，且空白对照液中未培养出特定特征的菌落说明待测样品中含有和具有所述特定特征的菌落；

所述特定特征菌落的具体特征为：粪大肠菌群菌落呈中等大小、灰白的半透明、中间凸起有菌心，湿润菌落；

铜绿假单胞菌在卵磷脂吐温80营养琼脂平板上菌落比粪大肠菌群小，呈白色不透明较湿润，可产生绿色的绿脓菌素；

金黄色葡萄球菌在卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基上菌落周围可产生与平板相似的透明晕圈；

酵母菌在虎红琼脂平板上菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调，多为白色、土黄色或红色。

本发明同现有技术相比，具有以下有益效果：

（1）大多数化妆品中含有不同不同种类和剂量的防腐剂，而增菌液中含有卵磷脂和吐温，这两种成分可以中和化妆品中的防腐剂，使处于休眠状态下细菌修复和生长，传统的检测技术中采用生理盐水对样品进行稀释，在样品浓度为1：10时菌落数不超标甚至未见细菌菌落，而本发明中采用SCDLP增菌液对样品进行稀释，可明显提高检测灵敏度。

（2）SCDLP增菌液代替大肠菌群的肉汤培养基，并不影响检测结果，本发明中我们采用SCDLP增菌液代替大肠埃希菌的肉汤培养基并不影响检测结果，却使检测过程更为简便。

（3）卵磷脂吐温80营养琼脂为广谱培养基，本发明中，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌在该培养基中均可生长良好，均有典型菌落特征，采用卵磷脂吐温80营养琼脂对上述菌种进行细菌培养，并不影响这些菌种的检测结果，却使检测过程更为简便。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明：

实施例1：

（2）将步骤（1）中制得的高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、空白对照液和阳性对照液分别注入四个含有培养基的培养皿中进行培养并进行菌落计数，仔细观察细菌培养结果，通过对比对细菌进行鉴定。

（1）无菌称取10g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液；无菌称取1g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液。

（2）将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

（3）将1g标准金黄色葡萄球菌NICPBP26112、大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、铜绿假单胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

（4）取1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液、0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各2ml分别加入到不同的含有卵磷脂-吐温80营养琼脂的培养皿中，将培养皿置入37℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数。

经过培养后，含有空白对照液的培养皿中未培养出菌株，含有1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有阳性对照液的培养皿均有中等大小、灰白的半透明、中间凸起有菌心，湿润菌落，说明样品中含有大肠埃希菌。

实施例2：

（1）无菌称取20g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得2g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液；无菌称取2g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得0.2g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液。

（2）将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

（3）将1g标准金黄色葡萄球菌NICPBP26112、大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、铜绿假单胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

（4）取2g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液、0.2g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各5ml分别加入到不同的含有卵磷脂-吐温80营养琼脂的培养皿中，将培养皿置入37℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数。

经过培养后，含有空白对照液的培养皿中未培养出菌株，含有2g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有阳性对照液的培养皿均有菌落，菌落周围有与平板相似的透明晕圈，说明样品中含有金黄色葡萄球菌。

实施例3：

（1）无菌称取10g疏水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐温80，充分混匀，制得1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液；无菌称取1g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液。

（2）将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

（3）将1g标准金黄色葡萄球菌NICPBP26112、大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、铜绿假单胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

（4）取1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液、0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各5ml分别加入到不同的含有虎红琼脂的培养皿中，将培养皿置入28℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数。

经过培养后，含有空白对照液的培养皿中未培养出菌株，含有1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有阳性对照液的培养皿均有大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，白色或土黄色的菌落，说明化妆品样品中含有酵母菌。

实施例4：

（1）无菌称取20g疏水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐温80，充分混匀，制得2g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液；无菌称取2g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得0.2g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液。

（2）将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

（3）将1g标准金黄色葡萄球菌NICPBP26112、大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、铜绿假单胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

（4）取2g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液、0.2g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各5ml分别加入到不同的含有虎红琼脂的培养皿中，将培养皿置入28℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数。

经过培养后，含有空白对照液的培养皿、含有1g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿、含有0.1g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液的培养皿均未培养出菌株，含有阳性对照液的培养皿有菌落，说明化妆品样品中无细菌。

实施例5：

（1）无菌称取15g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得1.5g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液；无菌称取1.5g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得0.15g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液。

（2）将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

（3）将1g标准金黄色葡萄球菌NICPBP26112、大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、铜绿假单胞菌菌株NICPBP10211、白色念珠菌菌株ATCC10231和酵母菌标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

（4）取1.5g/ml高浓度的化妆品样品备检溶液、0.15g/ml低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各5ml分别加入到不同的含有卵磷脂-吐温80营养琼脂的培养皿中，将培养皿置入37℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数。

经过培养后，含有空白对照液的培养皿、含有1.5g/ml高浓度化妆品样品备检溶液的培养皿、含有0.15g/ml低浓度化妆品样品备检溶液的培养皿中均未培养出菌株，含有阳性对照液的培养皿中有菌落，说明样品中无细菌。

以上所述实施例只是本发明的较佳实例，并非来限制本发明实施范围，故凡依本发明申请专利范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括本发明专利申请范围内。

Claims (10)

1.一种化妆品微生物的检测方法，包括以下步骤：

（1）分别配制高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、不含样品的空白对照液和含微生物的阳性对照液；

（2）将步骤（1）中制得的高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、空白对照液和阳性对照液分别注入四个含有培养基的培养皿中进行培养并进行菌落计数，仔细观察细菌培养结果，通过对比对细菌进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的高浓度的化妆品样品备检溶液由以下方法制备：无菌称取10~20g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得高浓度的化妆品样品备检溶液；

或无菌称取10~20g疏水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐温80，充分混匀，制得高浓度的化妆品样品备检溶液。

3.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的低浓度的化妆品样品备检溶液由以下方法制备：无菌称取1~3g亲水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得低浓度的化妆品样品备检溶液；

或无菌称取1~3g疏水性样品加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，加入5ml吐温80，充分混匀，制得低浓度的化妆品样品备检溶液。

4.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的空白对照液由以下方法制备：将100ml SCDLP增菌液加入玻璃瓶中，制得空白对照液。

5.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的阳性对照液由以下方法制备：将1~3g标准菌株加入到100ml SCDLP增菌液的玻璃瓶中，充分混匀，制得阳性对照液。

6.根据权利要求5所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的标准菌株为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌或酵母菌标准菌株中的一种或几种。

7.根据权利要求6所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的大肠埃希菌为大肠埃希菌标准菌株AMMS8099、所述的白色念珠菌为白色念珠菌ATCC10231、所述的金黄色葡萄球菌为金黄色葡萄球菌菌株NICPBP26112、所述的铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌标准菌株NICPBP10211。

8.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的培养基为卵磷脂-吐温80营养琼脂或虎红琼脂。

9.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的步骤（2）具体为：取高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各2~5ml分别加入到不同的培养皿中，所述培养皿中加入卵磷脂-吐温80营养琼脂作为培养基，将培养皿置入37℃恒温生化培养箱培养48h，然后进行菌落计数;

或取高浓度的化妆品样品备检溶液、低浓度的化妆品样品备检溶液、阳性对照液及空白对照液各2-5ml分别加入到不同的培养皿中，所述的培养皿中含有虎红琼脂作为培养基，将培养皿置入28℃恒温生化培养箱培养72h，然后进行菌落计数。

10.根据权利要求1所述的一种化妆品微生物的检测方法，其特征在于，所述的对细菌进行鉴定的具体方法为：经过培养后，

高浓度的化妆品样品备检溶液和/或低浓度的化妆品样品备检溶液与阳性对照液中同时培养出特定特征的菌落，且空白对照液中未培养出特定特征的菌落说明待测样品中含有和具有所述特定特征的菌落；

所述特定特征菌落的具体特征为：粪大肠菌群菌落呈中等大小、灰白的半透明、中间凸起有菌心，湿润菌落；

铜绿假单胞菌在卵磷脂吐温80营养琼脂平板上菌落比粪大肠菌群小，呈白色不透明较湿润，可产生绿色的绿脓菌素；

金黄色葡萄球菌在卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基上菌落周围可产生与平板相似的透明晕圈；

酵母菌在虎红琼脂平板上菌落大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调，多为白色、土黄色或红色。