CN104293879A - 一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法。所述的检测方法包括以下步骤：以无菌操作取样品加水稀释震荡混匀，做成均匀稀释液，再进一步加水稀释；取灭菌吸管吸取不同浓度的均匀稀释液，接种于TTC营养琼脂平板上，对灭菌吸管采用无菌生理盐水冲洗，将冲洗液接种于TTC营养琼脂平板上，将营养琼脂平板转动，使混匀均匀；同时取未加入任何样品的TTC营养琼脂平板做空白对照；对加有样品菌液及空白对照的TTC营养琼脂平板，待琼脂凝固后，翻转平板，置于水浴锅内进行培养，进行菌落计数。.本发明在将样品稀释液接种于培养基中后进行培养时，培养温度控制在45-47℃，可使菌液更好的生长繁殖，整个操作遵循无菌操作，检测结果更真实可靠。
Description
技术领域
本发明属于食品检测领域，具体涉及一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法。
背景技术
发酵乳制品口感独特，营养丰富，受到人们的热切追捧。发酵乳制品主要发酵菌乳酸菌对人体健康有益，而凡能发酵碳水化合物产物乳酸的细菌统称为乳酸菌。乳酸菌是一种革兰氏阳性菌，根据其种系进化过程中形成的不同生化指标可将其分为：低GC含量组，如乳酸杆菌属、肠球菌属及乳酸球菌属等，高GC含量的双歧杆菌，这些菌种形态结构、代谢特征及生理学特点等均不这完全相同。人类及其他动物体内如肠道、阴道黏膜等部位均天然存在着乳酸菌。乳酸菌可帮助调节肠道微生物平衡，促进营养吸收，可改善肝功能，防止乳糖不耐症，还有抗癌及抗衰老等作用。将乳酸菌用于食品中，可提高食品附加值及保藏性。正因为乳酸菌的上述优点，目前，乳酸菌已作为益生菌在乳制品中广泛添加，同时，也广泛用于药品领域中。此外，乳酸菌在工业领域中也有广泛应用，如用其发酵产生苹果酸及乳酸来酿造苹果酒及葡萄酒。乳酸菌数量是评价该类产品营养价值及保健作用的重要指标，目前，市场流通的产品中乳酸菌的含量多数达到109
Cfu/ml左右。
虽然乳酸菌在生活各大领域中均有广泛应用，但随着食物种类的增多，乳酸菌应用也带来了一系列的安全问题，其质量问题也日益严重化与多样化。目前，市场上发酵乳制品种类繁多，且均宣称含有多种乳酸菌，给消费者的选择及相关部门的质量监督均带来较大困难。因此，对食品尤其是发酵乳制品中的乳酸菌种类进行定性检测以更好的对发酵乳制品进行质量管理，保障消费者的权利具有重要意义。菌落总数的测定可以了解产品在生产、加工及包装及贮存、运输等过程中受外界污染的情况，研究显示，乳酸菌乳制品中的污染菌在产品货架期内可以存活，对消费者的健康造成了极大的威胁。因此，对乳酸菌乳制品的污染菌总数进行检测对保证乳酸菌乳制品的质量及消费者的健康均具有重大意义。而乳酸菌乳制品本身含有大量的活性乳酸菌，给其污染菌的菌落计数带来较大困难。目前，日本《乳菌菌粉末清凉饮料菌落总数测定》用添加剂青霉素G钾的葡萄糖琼脂培养基与添加4%氯化钠的BCP平板计数琼脂培养基上生长菌浇的差值作为菌落总数，但这种方法培养基添加的选择性抑制成分对检测具有很大的影响，检测结果灵敏度及准确度均较低，且操作繁琐。为此，本发明提供一种检测周期短，检测结果准确的乳酸菌乳制品中除乳酸菌外的菌落总数的检测方法。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中存在的缺陷提供一种一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，包括以下步骤：
（1）样品预处理：以无菌操作取5-10ml样品加水50-100ml稀释震荡混匀，做成均匀稀释液，再进一步加水稀释；
（2）样品接种：取1ml的灭菌吸管吸取步骤（1）中制得的不同浓度的均匀稀释液，接种于TTC营养琼脂平板上，对灭菌吸管采用1-3ml的无菌生理盐水冲洗，将冲洗液接种于TTC营养琼脂平板上，将营养琼脂平板转动，使混匀均匀；
（3）空白对照：取未加入任何样品的TTC营养琼脂平板做空白对照；
（4）待步骤（2）与步骤（3）中的TTC营养琼脂平板的琼脂凝固后，翻转平板，置于水浴锅内进行培养，进行菌落计数。
优选的，步骤（1）中所加入的水为灭菌水。
优选的，步骤（1）中所述的均匀稀释液中样品与水的体积比为1:10，再进一步加水稀释的均匀稀释液的浓度分别为1:100,1:1000。
优选的，步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂的组分为：蛋白胨 10.0g/ml,牛肉浸粉 3.0,氯化钠 5.0,琼脂15.0,TTC,pH值为7.4-7.6。
优选的，步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸馏水中，并在121℃条件下灭菌15-30min。
优选的，步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂平板中TTC的含量为3-5mg/ml。
优选的，步骤（4）中的培养时间均为46-48h，水浴锅的温度均为46-48℃。
步骤（4）中的菌落计数的具体方法为：选择菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数的测定标准，对于100以内的菌落数，按实际菌落数，对于大于100的菌落数，采用2位有效数字，2位有效数字数的读数四舍五入，平板内有链状菌落生长时，若仅有一条链，可视为一个菌落，若有不同来源的几条链，将每条链作为一个菌落计数。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
1.本发明在将样品稀释液接种于培养基中后进行培养时，培养温度控制在45-47℃，避免了过高的温度影 响细菌生长，也避免了过低的温度使琼脂易于凝固，导致琼脂不易于菌液混合充分，可使菌液更好的生长繁殖。
2. 本发明中所有操作及所有相关试剂均严格执行无菌原则，避免了操作过程中带入的污染菌对检测结果的影响，检测结果更真实可靠。
2.本发明将样品菌液采用无菌水稀释成一系列不同浓度的稀释液，同时进行空白对照，保证了菌落计数的准确性与灵敏度。
具体实施方式
本发明通过以下具体实施例更详细的说明本发明，可以使本专业技术人员更全面的了解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，包括以下步骤：
（1）样品预处理：以无菌操作取5ml样品加灭菌水50ml稀释震荡混匀，做成1:10的均匀稀释液，再进一步加灭菌水稀释为1:100,1:1000的均匀稀释液；
（2）样品接种：取1ml的灭菌吸管吸取步骤（1）中制得的不同浓度的均匀稀释液，接种于TTC营养琼脂平板上，对灭菌吸管采用1ml的无菌生理盐水冲洗，将冲洗液接种于TTC营养琼脂平板上，将营养琼脂平板转动，使混匀均匀；
（3）空白对照：取未加入任何样品的TTC营养琼脂平板做空白对照；
（4）待步骤（2）与步骤（3）中的TTC营养琼脂平板的琼脂凝固后，翻转平板，置于46℃水浴锅内培养46h，进行菌落计数。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂的组分为：蛋白胨 10.0g/ml,牛肉浸粉 3.0,氯化钠 5.0,琼脂15.0,TTC,pH值为7.4。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸馏水中，并在121℃条件下灭菌15min。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂平板中TTC的含量为3mg/ml。
步骤（4）中的菌落计数的具体方法为：选择菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数的测定标准，对于100以内的菌落数，按实际菌落数，对于大于100的菌落数，采用2位有效数字，2位有效数字数的读数四舍五入，平板内有链状菌落生长时，若仅有一条链，可视为一个菌落，若有不同来源的几条链，将每条链作为一个菌落计数。
实施例2
一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，包括以下步骤：
（1）样品预处理：以无菌操作取10ml样品加灭菌水100ml稀释震荡混匀，做成1:10的均匀稀释液，再进一步加灭菌水稀释为1:100,1:1000的均匀稀释液；
（2）样品接种：取1ml的灭菌吸管吸取步骤（1）中制得的不同浓度的均匀稀释液，接种于TTC营养琼脂平板上，对灭菌吸管采用3ml的无菌生理盐水冲洗，将冲洗液接种于TTC营养琼脂平板上，将营养琼脂平板转动，使混匀均匀；
（3）空白对照：取未加入任何样品的TTC营养琼脂平板做空白对照；
（4）待步骤（2）与步骤（3）中的TTC营养琼脂平板的琼脂凝固后，翻转平板，置于48℃水浴锅内培养48h，进行菌落计数。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂的组分为：蛋白胨 10.0g/ml,牛肉浸粉 3.0,氯化钠 5.0,琼脂15.0,TTC,pH值为7.6。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸馏水中，并在121℃条件下灭菌30min。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂平板中TTC的含量为3-5mg/ml。
步骤（4）中的菌落计数的具体方法为：选择菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数的测定标准，对于100以内的菌落数，按实际菌落数，对于大于100的菌落数，采用2位有效数字，2位有效数字数的读数四舍五入，平板内有链状菌落生长时，若仅有一条链，可视为一个菌落，若有不同来源的几条链，将每条链作为一个菌落计数。
实施例3
一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，包括以下步骤：
（1）样品预处理：以无菌操作取8ml样品加灭菌水80ml稀释震荡混匀，做成1:10的均匀稀释液，再进一步加灭菌水稀释为1:100,1:1000的均匀稀释液；
（2）样品接种：取1ml的灭菌吸管吸取步骤（1）中制得的不同浓度的均匀稀释液，接种于TTC营养琼脂平板上，对灭菌吸管采用2ml的无菌生理盐水冲洗，将冲洗液接种于TTC营养琼脂平板上，将营养琼脂平板转动，使混匀均匀；
（3）空白对照：取未加入任何样品的TTC营养琼脂平板做空白对照；
（4）待步骤（2）与步骤（3）中的TTC营养琼脂平板的琼脂凝固后，翻转平板，置于47℃水浴锅内培养47h，进行菌落计数。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂的组分为：蛋白胨 10.0g/ml,牛肉浸粉 3.0,氯化钠 5.0,琼脂15.0,TTC,pH值为7.5。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸馏水中，并在121℃条件下灭菌20min。
步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂平板中TTC的含量为3-5mg/ml。
步骤（4）中的菌落计数的具体方法为：选择菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数的测定标准，对于100以内的菌落数，按实际菌落数，对于大于100的菌落数，采用2位有效数字，2位有效数字数的读数四舍五入，平板内有链状菌落生长时，若仅有一条链，可视为一个菌落，若有不同来源的几条链，将每条链作为一个菌落计数。
以上所述实施例只是本发明的较佳实例，并非来限制本发明实施范围，故凡依本发明申请专利范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括本发明专利申请范围内。
Claims (8)
1.一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）样品预处理：以无菌操作取5-10ml样品加水50-100ml稀释震荡混匀，做成均匀稀释液，再进一步加水稀释；
（2）样品接种：取1ml的灭菌吸管吸取步骤（1）中制得的不同浓度的均匀稀释液，接种于TTC营养琼脂平板上，对灭菌吸管采用1-3ml的无菌生理盐水冲洗，将冲洗液接种于TTC营养琼脂平板上，将营养琼脂平板转动，使混匀均匀；
（3）空白对照：取未加入任何样品的TTC营养琼脂平板做空白对照；
（4）待步骤（2）与步骤（3）中的TTC营养琼脂平板的琼脂凝固后，翻转平板，置于水浴锅内进行培养，进行菌落计数。
2.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所加入的水为灭菌水。
3.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述的均匀稀释液中样品与水的体积比为1:10，再进一步加水稀释的均匀稀释液的浓度分别为1:100,1:1000。
4.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂的组分为：蛋白胨 10.0g/ml,牛肉浸粉 3.0,氯化钠 5.0,琼脂15.0,TTC,pH值为7.4-7.6。
5.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸馏水中，并在121℃条件下灭菌15-30min。
6.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（2）与步骤（3）中所述的TTC营养琼脂平板中TTC的含量为3-5mg/ml。
7.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（4）中的培养时间均为46-48h，水浴锅的温度均为46-48℃。
8.根据权利要求1所述的一种发酵乳制品中菌落总数的检测方法，其特征在于，步骤（4）中的菌落计数的具体方法为：选择菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数的测定标准，对于100以内的菌落数，按实际菌落数，对于大于100的菌落数，采用2位有效数字，2位有效数字数的读数四舍五入，平板内有链状菌落生长时，若仅有一条链，可视为一个菌落，若有不同来源的几条链，将每条链作为一个菌落计数。
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