CN104928344A - 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法 - Google Patents

食品中金黄色葡萄球菌的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104928344A
CN104928344A CN201510368441.1A CN201510368441A CN104928344A CN 104928344 A CN104928344 A CN 104928344A CN 201510368441 A CN201510368441 A CN 201510368441A CN 104928344 A CN104928344 A CN 104928344A
Authority
CN
China
Prior art keywords
staphylococcus aureus
food
detection method
diluent
food according
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510368441.1A
Other languages
English (en)
Inventor
熊开胜
张海防
谢建庭
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DONGCHEN-LEADER TESTING Co Ltd
Original Assignee
DONGCHEN-LEADER TESTING Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DONGCHEN-LEADER TESTING Co Ltd filed Critical DONGCHEN-LEADER TESTING Co Ltd
Priority to CN201510368441.1A priority Critical patent/CN104928344A/zh
Publication of CN104928344A publication Critical patent/CN104928344A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，先取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；再取所得稀释液接种到选择培养基，在37℃ 120rpm下振荡培养4h；然后将所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB 4789.10-2010的检测方法不存在显著差异，检测时间在3h以内，检测限为10～107cfu/mL。

Description

食品中金黄色葡萄球菌的检测方法
技术领域
本发明属于食品分析检测技术领域，具体涉及一种食品中金黄色葡萄球菌的检测方法。
背景技术
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是葡萄球菌属的一种，广泛存在于自然界中，如土壤、空气、水、物品表面以及人或动物的皮肤、鼻腔、咽部、肠道等处。
金黄色葡萄球菌是引起细菌性食物中毒的主要病原菌之一，广泛存在于自然界中。金黄色葡萄球菌的致病因子与其产生的毒素和酶有关。金黄色葡萄球菌肠毒素是分子量为24k Da～30k Da的水溶性蛋白质，已知有A、B、C1、C2、C3、D、E等12个血清型。金黄色葡萄球菌肠毒素是一组热稳定单纯蛋白，经100℃煮沸30min仍保持部分活性。金黄色葡萄球菌肠毒素能抗蛋白水解酶，进入消化道后仍保持活性。食用受污染食物后，肠毒素作用于肠壁，刺激呕吐中枢，并产生急性胃肠炎症状。金黄色葡萄球菌的适应性和抵抗外界不良环境的能力都很强，繁殖时会产生杀白细胞素、肠毒素、溶血毒素、血浆凝固酶等，可以引起恶心、呕吐、腹泻等胃肠疾病，还可以引起人类化脓感染，严重时可以导致败血症。因此，食品中金黄色葡萄球菌的检测受到了国内外研究学者的高度关注。
随着经济的发展和报道的透明，中国国内曝光的食品安全问题呈现明显上升趋势，据统计，我国2002～2011年食物中毒的事件一共有3373起，中毒人数11.47万人，死亡人数2088人。引发食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，中毒起数和人数均最多，分别占总起数的35.72％和总人数的57.04％。有效监控食品生产和流通领域的微生物污染，已经成为人们所面临的现实问题。
目前金黄色葡萄球菌检测方法主要包括传统的平板培养法、以分子生物学为基础的检测法、以免疫学位基础的检测法以及生物传感器法。这些方法有的费时费力、有的成本高，有的灵敏度低等均存在各自的不足。寻找一种快速、操作简便的检测方法是目前的研究重点。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，该方法检测时间在3h以内，检测限为10～107cfu/mL。
食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，包括以下步骤：
步骤1，取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；
步骤2，取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37℃120rpm下振荡培养4h；
步骤3，将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中食品样品的用量为20～70g，生理盐水的用量为100～300mL。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中均质时间为3～8min。
作为上述发明的进一步改进，步骤1中稀释倍数为5～20倍。
作为上述发明的进一步改进，步骤2中稀释液接种量为5～10v/v％。
作为上述发明的进一步改进，步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨3.0g、葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g、柠檬酸钠3.2g在1000mL水中加热溶化，调节pH至7.4，121℃高压灭菌20min，再加入氯化钠0.05g、亚碲酸钾0.12g、萘啶酮酸0.03g、苯乙醇0.15g、氯化锂0.14g、硫代硫酸钠0.21g、吖啶黄0.05g、丙酮酸钠0.14g、甘氨酸0.23g、甘露醇0.17g、柠檬酸钠0.15g，混合，即得。
作为上述发明的进一步改进，步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0.45μm。
本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB 4789.10-2010的检测方法不存在显著差异，检测时间在3h以内，检测限为10～107cfu/mL。
具体实施方式
实施例1
步骤1，取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；
步骤2，取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37℃120rpm下振荡培养4h；
步骤3，将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。
步骤1中食品样品的用量为20g，生理盐水的用量为100mL。
步骤1中均质时间为3min。
步骤1中稀释倍数为5倍。
步骤2中稀释液接种量为5v/v％。
步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨3.0g、葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g、柠檬酸钠3.2g在1000mL水中加热溶化，调节pH至7.4，121℃高压灭菌20min，再加入氯化钠0.05g、亚碲酸钾0.12g、萘啶酮酸0.03g、苯乙醇0.15g、氯化锂0.14g、硫代硫酸钠0.21g、吖啶黄0.05g、丙酮酸钠0.14g、甘氨酸0.23g、甘露醇0.17g、柠檬酸钠0.15g，混合，即得。
步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0.45μm。
实施例2
步骤1，取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；
步骤2，取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37℃120rpm下振荡培养4h；
步骤3，将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。
步骤1中食品样品的用量为35g，生理盐水的用量为150mL。
步骤1中均质时间为5min。
步骤1中稀释倍数为8倍。
步骤2中稀释液接种量为7v/v％。
步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨3.0g、葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g、柠檬酸钠3.2g在1000mL水中加热溶化，调节pH至7.4，121℃高压灭菌20min，再加入氯化钠0.05g、亚碲酸钾0.12g、萘啶酮酸0.03g、苯乙醇0.15g、氯化锂0.14g、硫代硫酸钠0.21g、吖啶黄0.05g、丙酮酸钠0.14g、甘氨酸0.23g、甘露醇0.17g、柠檬酸钠0.15g，混合，即得。
步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0.45μm。
实施例3
步骤1，取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；
步骤2，取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37℃120rpm下振荡培养4h；
步骤3，将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。
步骤1中食品样品的用量为50g，生理盐水的用量为200mL。
步骤1中均质时间为7min。
步骤1中稀释倍数为15倍。
步骤2中稀释液接种量为9v/v％。
步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨3.0g、葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g、柠檬酸钠3.2g在1000mL水中加热溶化，调节pH至7.4，121℃高压灭菌20min，再加入氯化钠0.05g、亚碲酸钾0.12g、萘啶酮酸0.03g、苯乙醇0.15g、氯化锂0.14g、硫代硫酸钠0.21g、吖啶黄0.05g、丙酮酸钠0.14g、甘氨酸0.23g、甘露醇0.17g、柠檬酸钠0.15g，混合，即得。
步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0.45μm。
实施例4
步骤1，取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质，然后过滤，滤液用去离子水稀释；
步骤2，取步骤1所得稀释液接种到选择培养基，在37℃120rpm下振荡培养4h；
步骤3，将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。
步骤1中食品样品的用量为60g，生理盐水的用量为240mL。
步骤1中均质时间为7min。
步骤1中稀释倍数为12倍。
步骤2中稀释液接种量为9v/v％。
步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨3.0g、葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g、柠檬酸钠3.2g在1000mL水中加热溶化，调节pH至7.4，121℃高压灭菌20min，再加入氯化钠0.05g、亚碲酸钾0.12g、萘啶酮酸0.03g、苯乙醇0.15g、氯化锂0.14g、硫代硫酸钠0.21g、吖啶黄0.05g、丙酮酸钠0.14g、甘氨酸0.23g、甘露醇0.17g、柠檬酸钠0.15g，混合，即得。
步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0.45μm。
将实施例1至4所得结果与国标金黄色葡萄球检测方法中的第二法Baird-Parker平板计数法结果进行比较，结果如下：
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
本发明方法所测结果(cfu/mL) 20 4354 136570 1098520
国标法所测结果(cfu/mL) 21 4500 129870 1120000
由上表可知，本发明提供的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法与国标GB 4789.10-2010的检测方法不存在显著差异。

Claims (7)

1.食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，取食品样品，研磨，碎屑加至生理盐水中混合，均质、过滤，滤液用去离子水稀释；
步骤2，取步骤1所得稀释液接种到选择培养基， 37℃、120rpm振荡培养4h；
步骤3，将步骤2所得菌液稀释，稀释液过滤浓缩，取2μL浓缩液，加至微生物快速检测仪中进行检测。
2.根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤1中食品样品的用量为20～70g，生理盐水的用量为100～300mL。
3.根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤1中均质时间为3～8min。
4.根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤1中稀释倍数为5～20倍。
5.根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤2中稀释液接种量为5～10v/v%。
6.根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤2中选择培养基的制备方法为取胰蛋白胨17.0g、氯化钠5.0g、植物蛋白胨3.0g、葡萄糖2.5g，磷酸氢二钾2.5g、柠檬酸钠3.2g在1000mL 水中加热溶化，调节 pH至7.4，121℃高压灭菌 20min，再加入氯化钠0.05g、亚碲酸钾0.12g、萘啶酮酸0.03g、苯乙醇0.15g、氯化锂0.14g、硫代硫酸钠0.21g、吖啶黄0.05g、丙酮酸钠0.14g、甘氨酸0.23g、甘露醇0.17g、柠檬酸钠0.15g，混合，即得。
7.根据权利要求1所述的食品中金黄色葡萄球菌的检测方法，其特征在于：步骤3中过滤浓缩的过滤器孔径为0.45μm。
CN201510368441.1A 2015-06-29 2015-06-29 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法 Pending CN104928344A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510368441.1A CN104928344A (zh) 2015-06-29 2015-06-29 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510368441.1A CN104928344A (zh) 2015-06-29 2015-06-29 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104928344A true CN104928344A (zh) 2015-09-23

Family

ID=54115769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510368441.1A Pending CN104928344A (zh) 2015-06-29 2015-06-29 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104928344A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105603043A (zh) * 2016-04-08 2016-05-25 董建红 一种金黄色葡萄球菌选择性培养基
CN105755100A (zh) * 2016-04-08 2016-07-13 董建红 一种对金黄色葡萄球菌分离率高的选择性培养基
CN108410945A (zh) * 2018-03-09 2018-08-17 芜湖市食品药品检验中心(市药品不良反应监测中心) 餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法
CN109694897A (zh) * 2019-02-28 2019-04-30 广西康佳龙农牧集团有限公司 一种发酵饲料含菌量的检测方法
CN109735599A (zh) * 2019-01-18 2019-05-10 河南省商业科学研究所有限责任公司 一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中华人民共和国卫生部: "食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验", 《中华人民共和国国家标准》 *
尚新彬等: "仪器法快速检测鲜乳微生物的可靠性研究", 《农产品工程.技术》 *
杨小蓉等: "从婴儿奶粉中快速检测产肠毒素金黄色葡萄球菌的研究", 《现代预防医学》 *
王娟等: "应用VITEK2 Comoact全自动微生物测定仪对药品中金黄色葡萄球菌的鉴定", 《中国处方药》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105603043A (zh) * 2016-04-08 2016-05-25 董建红 一种金黄色葡萄球菌选择性培养基
CN105755100A (zh) * 2016-04-08 2016-07-13 董建红 一种对金黄色葡萄球菌分离率高的选择性培养基
CN108410945A (zh) * 2018-03-09 2018-08-17 芜湖市食品药品检验中心(市药品不良反应监测中心) 餐饮中金黄色葡萄球菌的快速检测方法
CN109735599A (zh) * 2019-01-18 2019-05-10 河南省商业科学研究所有限责任公司 一种提高易起泡液态食品中金黄色葡萄球菌检出限的方法
CN109694897A (zh) * 2019-02-28 2019-04-30 广西康佳龙农牧集团有限公司 一种发酵饲料含菌量的检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104928344A (zh) 食品中金黄色葡萄球菌的检测方法
CN102943113B (zh) 大肠杆菌o157的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和试剂盒
CN101974450A (zh) 一株肠膜明串珠菌及其应用
CN112725219B (zh) 一种青春双歧杆菌菌株及其应用
CN103756935A (zh) 一种双歧杆菌和乳酸杆菌混合发酵培养基及发酵方法
CN101333519B (zh) 乳酸乳球菌和嗜热链球菌中胆盐水解酶与胞外多糖的提取方法
CN101497915B (zh) 用于快速检测金黄色葡萄球菌的试剂及其方法
CN103614451A (zh) 一种化妆品微生物的检测方法
CN103013861A (zh) 枯草芽孢杆菌hjda32菌株及其所产细菌素的制备方法
CN105961997A (zh) 一种利用失活微生物去除柑橘汁中展青霉素的方法及应用
CN107586742A (zh) 一株高产果聚糖的解淀粉芽胞杆菌及其应用
CN103525736A (zh) Vbnc状态啤酒易感乳酸菌的诱导及复苏方法
CN102321540B (zh) 乳酸双芽菌发酵液的制备方法及利用该发酵液制备乳酸双芽菌发酵液复合防腐剂的方法
CN101597598A (zh) 亚硝酸盐还原酶的制备方法及其酶制品
CN104046584A (zh) 一种青春双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株
CN104046585A (zh) 一种动物双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株
CN106591174B (zh) 一株产细菌素的弯曲乳杆菌及其应用
CN101143153A (zh) 乳杆菌信号分子微生态制剂及其制备方法
CN102914649A (zh) 一种快速检测速冻食品中金黄色葡萄球菌的试剂盒及其检测方法
CN114806944B (zh) 植物乳杆菌lp11、其发酵液及制备方法和应用
CN103667124A (zh) 一株具有降解肌酐和尿素能力的乳酸菌及其筛选方法
CN104651470A (zh) 一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基及其应用
CN107760624A (zh) 一种产乙醛脱氢酶的植物乳杆菌及其应用
CN111254096A (zh) 一种改善室内环境卫生的方法
CN105385636A (zh) 一株产细菌素的肠膜明串珠菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20150923