CN103599130A - 抗鸡新城疫病毒特异性转移因子及口服液制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，包括：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫；监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，在抗体水平达到28～29时，无菌取实验鸡的脾脏；处理所述鸡的脾脏得到抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子可以提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫效应，能保护正常机体细胞免受病毒感染，因此使用本发明的转移因子可以起到预防鸡新城疫病毒感染，保护正常机体细胞免受鸡新城疫病毒侵害的作用，从而降低发病率；同时对于遭到鸡新城疫病毒感染的鸡使用转移因子进行治疗，可有效的改善临床症状，提高治愈率，降低死亡率。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学领域，具体地说，涉及抗鸡新城疫病毒特异性转移因子及口服液制备方法和用途。
背景技术
鸡新城疫（ND）又称亚洲鸡瘟，是由禽副流感病毒型新城疫病毒（NDV）引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性、致死性疾病。病鸡发病后表现为呼吸困难，咳嗽气喘，出现水样稀粪，重者死亡。新城疫病毒最大的特点就是易发生变异，导致鸡体内已经出现的抗鸡新城疫病毒特异性抗体失去中和病毒的作用，因而使鸡容易感染，甚至造成大规模流行。
尽管目前已经有一些抗鸡新城疫病毒的药物制剂，但是现有药物制剂的针对性不强，疗效有限，而且，治疗性制剂多是在发病后才应用的，不起预防作用。对于新城疫易感鸡群，定期对鸡群免疫接种新城疫疫苗是预防新城疫的有效方法。其次，应提高鸡体自身免疫力，通过药物干预提高机体抗感染能力或调解免疫力，也是一种预防新城疫的有效方法，转移因子可起到此作用。
转移因子（transfer factor，TF）是由小于10KD（道尔顿）大小的分子组成的，是从淋巴细胞中提取的一类低分子肽与核苷酸复合物，具有传递免疫信息、激发免疫细胞活性、调节免疫功能、增强机体非特异性细胞免疫功能等作用，被誉为T细胞活性的触发剂，细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。
从免疫学上分，TF可分为特异性转移因子和非特异性转移因子两大类。特异性转移因子系采用某种特定病原感染或免疫人群、动物后再提取含该抗原特异活性的转移因子。目前人医临床已经应用有乙型肝炎病毒特异转移因子、各种肿瘤特异转移因子、流行性出血热病毒转移因子、布氏菌转移因子、疱疹病毒转移因子、乙型脑炎转移因子、结核菌转移因子等。
TF的特异性免疫学活性作用机制为：特异性活性是指TF具有转移特异性细胞免疫反应的能力，转变非免疫的淋巴细胞，使其能与相应抗原结合，此活性的存在依赖于TF供体的免疫状态，活性的检测需要有特异抗原的刺激，活性的表达非常迅速并可用受体TF连续传递。TF的特异性活性表现在如下几个方面：（1）转移皮肤迟发型超敏反应：TF能够转移特异性皮肤迟发型超敏反应。（2）诱导淋巴细胞对特异抗原反应：TF在体内外都可将特异性免疫信息传递给淋巴细胞，使其处于致敏状态。TF抗原特异活性据推测是T细胞直接或间接通过巨噬细胞进行的，经特异性抗原免疫后制成的TF可使受体淋巴细胞或正常非免疫淋巴细胞在体外经TF致敏后，在试管中呈阳性反应。另外，白细胞移动抑制试验（LMI）也是检测TF抗原特异活性的简便方法，存在相关抗原时，细胞移动受到抑制，而非相关抗原则细胞移动不受到抑制。
传统生产方法生产的转移因子都是关于非特异性转移因子的制备方法，且针对疾病没有特异性，治疗效果不稳定。原料经预处理、绞碎、匀浆、反复冻融、离心、透析、离心、过滤等工艺制成，经传统生产工艺加工会破坏原材料的生物活性成分，有效成分利用率低，且生产周期长，至少需要7天。此外，传统工艺中绞碎工艺多采用立式胶体磨，灭活多是在37℃灭活24小时，冻融工艺多采用-20℃反复冻融8次以上，离心分离多采用4℃，4200r/min离心15min，效率低，产品易变性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现有技术生产的转移因子都是关于非特异性转移因子的。
本发明的技术方案如下：
一种抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，包括：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫；监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，在抗体水平达到28～29时，无菌取实验鸡的脾脏；处理所述鸡的脾脏得到抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。
进一步，所述选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫包括：首次免疫每只实验鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只实验鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只实验鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗；所述无菌取实验鸡的脾脏包括：将实验鸡的脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用pH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲（PBS）液洗涤一次，将脾脏剪成小段放入平皿中并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，用pH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
进一步，所述处理所述鸡的脾脏包括：剪摘、称量清洗、初绞、精绞、灭活、冻融、离心分离和超滤。
进一步：所述初绞的次数为1～3次。
进一步：所述精绞包括将初绞的猪脾与纯化水按1:1～2的质量比混合，置于胶体磨中研磨得到匀浆，所述精绞的时间为1～3分钟。
进一步：所述灭活包括将质量占匀浆质量的0.1～0.3%甲醛溶液加入到匀浆中，所述甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%；所述灭活的条件为37～40℃下灭活6～10小时，中间间隔2～4小时震摇1次。
进一步：所述冻融包括将灭活的匀浆置于-80℃冻融，反复冻融2～4次。
进一步：所述离心分离采用管式离心机，将冻融的匀浆在室温下以12000～15000r/min的转速连续离心，去沉淀，取上清液备用；所述超滤使用截留分子量为5000～6000道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行过滤，再用0.20～0.24μm的微孔滤膜进行过滤除菌。
本发明所要解决的另一技术问题是现有技术生产的转移因子的口服液都是关于非特异性转移因子的口服液。
本发明的另一技术方案如下：
一种如上所述的制备方法制备的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的口服液的制备方法，包括：向抗鸡新城疫病毒特异性转移因子中加入注射用水，加入盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，得到抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的口服液。
本发明的又一技术方案如下：
一种如上所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的口服液的提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫的用途。
本发明的技术效果如下：
1、本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子制备的口服液口服后可以提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫效应，能保护正常机体细胞免受病毒感染，因此使用本发明的转移因子可以起到预防鸡新城疫病毒感染，保护正常机体细胞免受鸡新城疫病毒侵害的作用，从而降低发病率；同时对于遭到鸡新城疫病毒感染的鸡使用转移因子进行治疗，可有效的改善临床症状，提高治愈率，降低死亡率。
2、本发明生产的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子制备的口服液主要成分为低分子活性多肽和核糖，是一种低分子肽-核苷酸复合物，而不是蛋白质；其应用安全，过量使用也无毒副作用，无药物残留；活性高，临床用量小，见效快，使用后24～36小时就可发挥作用，效果可持续7天以上。
3、本发明制备的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液给7日龄雏鸡饮用，每只0.2ml，同时免疫新城疫疫苗，7天后测血清抗体，比普通鸡脾制备的转移因子的鸡只抗体高2～3个滴度。
4、本发明的灭活和冻融工艺可大大缩短生产周期，本发明改进工艺后生产周期仅需3天，节省了大量的人力物力，提高了转移因子的生产效率，为满足工业化大规模生产提供了可行途径。
5、本发明的制备方法应用分体胶体磨，优选为JM-F-100分体胶体磨，避免了以前立式胶体磨转速低，液体易与电机直接接触的缺点，以及克服了电机工作中产生的热与磨齿产生的热互串，易使电机发热，从而使被处理物料变性的缺点，有效的保护了原料中原有的生物活性物质不被破坏，极大的提高了生产效率，增加了产量，适合工业化大规模推广应用。
6、本发明的制备方法应用管式离心机，克服了制备过程中原料粘度大，颗粒小，比重差小，絮状物多等问题；且加工材料原有生物活性成分主要为多肽、氨基酸，本发明制备方法有效的保护了加工材料原有生物活性成分不被破坏；同时采用室温下12000～15000r/min高速连续离心的方法，避免了传统方法中离心温度和时间的限制，节省了生产时间，极大的节省了人力物力，增加了产量，每天产量可达2.5吨，约2500L，提高了收益率，1kg脾脏大约出2.3L半成品，适用于工业化大规模推广应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备的步骤如下：
步骤S1：饲喂健康鸡群。
选取健康的鸡，按常规饲养程序饲喂20～30天。健康鸡是指没有任何疾病、变异或者潜在疾病的鸡。
步骤S2：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫。
首次免疫每只鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。
步骤S3：无菌取实验鸡的脾脏。
监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，第三次免疫后一周，在抗体水平达到28～29时取鸡脾脏。将新鲜的鸡脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用PBS液（pH为7.2～7.4）洗涤一次，再将脾脏剪成小段放入平皿中并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，再用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤3次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
步骤S4：初绞。
将鸡脾原料置于绞肉机装料斗内，按绞肉机操作规程进行操作，初绞2次，并用洁净物料桶盛装。
步骤S5：精绞。
将初绞的鸡脾与纯化水按1:2的质量比混合，置于立式胶体磨装料斗中，按立式胶体磨操作规程将其研磨1.5分钟，制成匀浆，并用洁净物料桶盛接。所用纯化水为原水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜方法制得的供药用的水，不含任何添加剂。
步骤S6：灭活。
按匀浆总质量的0.1%加甲醛溶液，37℃灭活6小时，间隔2小时震摇1次。甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%。
步骤S7：冻融。
将灭活的匀浆，置于-80℃冷库反复冻融2次，融化温度不超过37℃。
步骤S8：离心分离。
将冻融的匀浆置于管式分离机中，室温以13000r/min连续离心，去沉淀，取上清液备用。
步骤S9：超滤。
使用截留分子量为5000道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行加压过滤。再用0.22μm的微孔滤膜进行过滤除菌，即得超滤液为抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。超滤液在-20℃以下，保存期为12个月。
步骤S10：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子检验。
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子经pH值、无菌检验、含量测定、鉴别检验、高分子量物质检验等检验项目合格后，-20℃保存备用。
步骤S11：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备。
将抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的溶液移入配液罐中，根据抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量测定结果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.0mg/ml，核糖含量不少于30μg/ml，搅拌30分钟后，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，混匀，即得抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液。所用注射用水是普通注射用水，由纯化水经蒸馏所得。
实施例2：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备的步骤如下：
步骤S1：饲喂健康鸡群。
选取健康的鸡，按常规饲养程序饲喂20～30天。健康鸡是指没有任何疾病、变异或者潜在疾病的鸡。
步骤S2：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫。
首次免疫每只鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。
步骤S3：无菌取实验鸡的脾脏。
监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，第三次免疫后一周，在抗体水平达到28～29时取鸡脾脏。将新鲜的鸡脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1.5%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤2次，再将脾脏剪成小段放入平皿中，并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，再用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤2次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
步骤S4：初绞。
将鸡脾原料置于绞肉机装料斗内，按绞肉机操作规程进行操作，初绞3遍，并用洁净物料桶盛装。
步骤S5：精绞。
将初绞的鸡脾与纯化水按1:1.5的质量比混合，置于立式胶体磨装料斗中，按立式胶体磨操作规程将其研磨2分钟，制成匀浆，并用洁净物料桶盛接。所用纯化水为原水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其适宜方法制得的供药用的水，不含任何添加剂。
步骤S6：灭活：
按匀浆总质量的0.2%加甲醛溶液，37℃灭活8小时，间隔3小时震摇1次。甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%。
步骤S7：冻融。
将灭活的匀浆，置于-80℃冷库反复冻融3次，融化温度不得超过37℃。
步骤S8：离心分离。
将冻融的匀浆置于管式分离机中，室温以15000r/min连续离心，去沉淀，取上清液备用。
步骤S9：超滤。
使用截留分子量为6000道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行加压过滤。再用0.22μm的微孔滤膜进行过滤除菌，即得超滤液为抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。超滤液在-20℃以下，保存期为12个月。
步骤S10：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子检验。
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子经pH值、无菌检验、含量测定、鉴别检验、高分子量物质检验等检验项目合格后，-20℃保存备用。
步骤S11：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备。
将抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的溶液移入配液罐中，根据抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量测定结果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.0mg/ml，核糖含量不少于30μg/ml，搅拌30分钟后，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，混匀，即得抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液。所用注射用水是普通注射用水，由纯化水经蒸馏所得。
实施例3：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备的步骤如下：
步骤S1：饲喂健康鸡群。
选取健康的鸡，按常规饲养程序饲喂20～30天。健康鸡是指没有任何疾病、变异或者潜在疾病的鸡。
步骤S2：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫。
首次免疫每只鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。
步骤S3：无菌取实验鸡的脾脏。
监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，第三次免疫后一周，在抗体水平达到28～29时取鸡脾脏。将新鲜的鸡脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤3次，再将脾脏剪成小段放入平皿中，并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，再用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤4次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
步骤S4：初绞。
将鸡脾原料置于绞肉机装料斗内，按绞肉机操作规程进行操作，初绞3遍，并用洁净物料桶盛装。
步骤S5：精绞。
将初绞的鸡脾与纯化水按1:1的质量比混合，置于立式胶体磨装料斗中，按立式胶体磨操作规程将其研磨3分钟，制成匀浆，并用洁净物料桶盛接。所用纯化水为原水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其适宜方法制得的供药用的水，不含任何添加剂。
步骤S6：灭活。
按匀浆总质量的0.3%加甲醛溶液，40℃灭活10小时，间隔4小时震摇1次。甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%。
步骤S7：冻融。
将灭活的匀浆，置于-80℃冷库反复冻融4次，融化温度不得超过37℃。
步骤S8：离心分离。
将冻融的匀浆置于管式分离机中，室温以12000r/min连续离心，去沉淀，取上清液备用。
步骤S9：超滤。
使用截留分子量为5500道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行加压过滤。再用0.23μm的微孔滤膜进行过滤除菌，即得超滤液为抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。超滤液在-20℃以下，保存期为12个月。
步骤S10：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子检验。
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子经pH值、无菌检验、含量测定、鉴别检验、高分子量物质检验等检验项目合格后，-20℃保存备用。
步骤S11：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备。
将抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的溶液移入配液罐中，根据抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量测定结果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.0mg/ml，核糖含量不少于30μg/ml，搅拌30分钟后，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，混匀，即得抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液。所用注射用水是普通注射用水，由纯化水经蒸馏所得。
实施例4：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备的步骤如下：
步骤S1：饲喂健康鸡群。
选取健康的鸡，按常规饲养程序饲喂20～30天。健康鸡是指没有任何疾病、变异或者潜在疾病的鸡。
步骤S2：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫。
首次免疫每只鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。
步骤S3：无菌取实验鸡的脾脏。
监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，第三次免疫后一周，在抗体水平达到28～29时取鸡脾脏。将新鲜的鸡脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤3次，再将脾脏剪成小段放入平皿中，并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，再用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤4次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
步骤S4：初绞。
将鸡脾原料置于绞肉机装料斗内，按绞肉机操作规程进行操作，初绞1遍，并用洁净物料桶盛装。
步骤S5：精绞。
将初绞的鸡脾与纯化水按1:1.2的质量比混合，置于立式胶体磨装料斗中，按立式胶体磨操作规程将其研磨1分钟，制成匀浆，并用洁净物料桶盛接。所用纯化水为原水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其适宜方法制得的供药用的水，不含任何添加剂。
步骤S6：灭活。
按匀浆总质量的0.25%加甲醛溶液，39℃灭活7小时，间隔4小时震摇1次。甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%。
步骤S7：冻融。
将灭活的匀浆，置于-80℃冷库反复冻融2次，融化温度不得超过37℃。
步骤S8：离心分离。
将冻融的匀浆置于管式分离机中，室温以14000r/min连续离心，去沉淀，取上清液备用。
步骤S9：超滤。
使用截留分子量为5500道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行加压过滤。再用0.24μm的微孔滤膜进行过滤除菌，即得超滤液为抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。超滤液在-20℃以下，保存期为12个月。
步骤S10：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子检验。
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子经pH值、无菌检验、含量测定、鉴别检验、高分子量物质检验等检验项目合格后，-20℃保存备用。
步骤S11：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备。
将抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的溶液移入配液罐中，根据抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量测定结果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.0mg/ml，核糖含量不少于30μg/ml，搅拌30分钟后，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，混匀，即得抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液。所用注射用水是普通注射用水，由纯化水经蒸馏所得。
实施例5：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备的步骤如下：
步骤S1：饲喂健康鸡群。
选取健康的鸡，按常规饲养程序饲喂20～30天。健康鸡是指没有任何疾病、变异或者潜在疾病的鸡。
步骤S2：选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫。
首次免疫每只鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗。
步骤S3：无菌取实验鸡的脾脏。
监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，第三次免疫后一周，在抗体水平达到28～29时取鸡脾脏。将新鲜的鸡脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤3次，再将脾脏剪成小段放入平皿中，并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，再用PBS（pH为7.2～7.4）液洗涤4次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
步骤S4：初绞。
将鸡脾原料置于绞肉机装料斗内，按绞肉机操作规程进行操作，初绞1遍，并用洁净物料桶盛装。
步骤S5：精绞。
将初绞的鸡脾与纯化水按1:1.5的质量比混合，置于立式胶体磨装料斗中，按立式胶体磨操作规程将其研磨2分钟，制成匀浆，并用洁净物料桶盛接。所用纯化水为原水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其适宜方法制得的供药用的水，不含任何添加剂。
步骤S6：灭活。
按匀浆总质量的0.2%加甲醛溶液，37℃灭活8小时，间隔2小时震摇1次。甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%。
步骤S7：冻融。
将灭活的匀浆，置于-80℃冷库反复冻融2次，融化温度不得超过37℃。
步骤S8：离心分离。
将冻融的匀浆置于管式分离机中，室温以15000r/min连续离心，去沉淀，取上清液备用。
步骤S9：超滤。
使用截留分子量为6000道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行加压过滤。再用0.22μm的微孔滤膜进行过滤除菌，即得超滤液为抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。滤液在-20℃以下，保存期为12个月。
步骤S10：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子检验。
抗鸡新城疫病毒特异性转移因子经pH值、无菌检验、含量测定、鉴别检验、高分子量物质检验等检验项目合格后，-20℃保存备用。
步骤S11：抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的制备。
将抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的溶液移入配液罐中，根据抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量测定结果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.0mg/ml，核糖含量不少于30μg/ml，搅拌30分钟后，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，混匀，即得抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液。所用注射用水是普通注射用水，由纯化水经蒸馏所得。
实施例6：初绞次数对抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的影响
传统工艺中初绞次数一般为3次，经反复研究确定初绞次数为1次，极大的节省了人力物力。
本发明的制备方法中，将鸡脾脏使用绞肉机进行不同次数的重复绞碎，每组绞碎的脾脏样品设置3个平行样，其他生产工艺按照实施例2的步骤执行，不同绞碎次数生产出的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量检测结果见表1。
表1不同绞碎次数生产出的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量检测结果
| 实验组 | 脾脏重复绞碎次数 | 多肽含量（mg/ml） | 核糖含量(μg/ml) |
| 第1组 | 1次 | 1.73±0.34 | 48.63±0.75 |
| 第2组 | 2次 | 1.82±0.27 | 50.12±0.64 |
| 第3组 | 3次 | 1.77±0.11 | 50.32±0.85 |
注：以上结果均是用“统计产品与服务解决方案”软件（Statistical Productand Service Solutions，SPSS）分析软件得出的结果，当P＞0.05时，表示与差异不显著；当0.01＜P＜0.05时，表示与差异显著；当P＜0.01时，表示与差异极显著。
结果分析：从检测结果分析，第1组、第2组、第3组，各组之间差异均不显著。因此，得出结论：增加初绞的次数对抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量无影响。根据实验结果，确定最优的初绞次数为1次。
实施例7：精绞时间对抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的影响
传统工艺中并未确切提及精绞时间的问题，在本发明的改进工艺中经反复研究精绞时间对抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量的影响，最终确定精绞时间为2分钟，节省了生产时间和成本。
本实施例中，将初绞后的鸡脾脏使用立式胶体磨进行不同时间精绞处理，每组样品设置3个平行样，其他生产工艺按照实施例2的步骤执行，不同精绞时间生产出的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量检测结果见表2。
表2不同精绞时间生产出的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子含量检测
结果
| 实验组 | 循环时间（mins） | 多肽含量（mg/ml） | 核糖含量(μg/ml) |
| 第1组 | 1 | 1.26±0.31 | 41.12±0.43 |
| 第2组 | 2 | 1.76±0.27 | 56.45±0.91 |
| 第3组 | 3 | 2.18±0.11 | 58.63±1.22 |
注：以上数据均是用SPSS分析软件得出的结果，当P＞0.05时，表示与差异不显著；当0.01＜P＜0.05时，表示与差异显著；当P＜0.01时，表示与差异极显著。
结果分析：从检测结果分析，第1组与第2组、第3组之间，P值均＜0.05，差异显著；第2、第3组之间P值＞0.05，表明两组之间差异不显著。由此得出结论：根据试验结果，确定2分钟为精绞脾脏时胶体磨最适循环时间。
实施例8：不同浓度的甲醛灭活对抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的影响
传统工艺中关于甲醛灭活的终浓度一般为0.1%，本发明的改进工艺中甲醛灭活的终浓度为0.2%，结果显示0.2%的甲醛终浓度灭活更完全彻底，对产品活性亦无影响。
本实施例中，为验证甲醛对鸡脾脏外源微生物的灭活效果，新鲜鸡脾脏经检验无菌及无外源病毒，采取添加指示细菌（大肠杆菌K88、K99、987P）和病毒（猪细小病毒）后的灭活试验，生产工艺按照实施例2的步骤执行。结果表明，0.2%及以上浓度甲醛对精绞液中添加的指示微生物能完全彻底灭活，对产品活性亦无影响。确定0.2%为鸡脾转移因子注射液中精绞液外源病毒的甲醛灭活浓度。
①试验设计
本实施例中，在《中国兽药典》2010年版（三部）规定的生物制品允许的甲醛残留量范围内，设置了4种不同的甲醛浓度，以检验不同浓度甲醛对脾脏精绞后匀浆液的外源微生物灭活效果。
②灭活效果检测
细菌灭活效果检测，按“中华人民共和国食品卫生检验法――微生物部分”进行，对添加细菌逐个进行细菌计数。猪细小病毒使用荧光抗体技术进行检验。
③方法
实验分为灭活组和对照组。灭活组：分别在每一份精绞液中加入甲醛，使其终浓度为0.1%、0.2%、0.3%，然后再添加指示细菌和病毒，充分混匀后，室温下放置24小时其间振摇数次。对照组不加甲醛溶液只加指示细菌和病毒，其他组份同灭活组。实验结果见表3～6。
④试验结果
表30.1%甲醛溶液对精绞液中添加指示菌的灭活效果
表40.2%甲醛溶液对精绞液中添加指示菌的灭活效果
表50.3%甲醛溶液对精绞液中添加指示菌的灭活效果
从表3～5可以看出，终浓度0.1%的甲醛可以部分灭活精绞液中的指示细菌，但灭活不彻底，依然有部分活菌残留在精绞液中；终浓度0.2%及以上的甲醛可以彻底灭活精绞液中的指示细菌，活菌计数结果为0。据此，选定终浓度0.2%为精绞液中甲醛的外源微生物灭活浓度。
表6不同浓度甲醛对精绞液中猪细小病毒（指示病毒）的灭活效果
表6结果表明：0.1%～0.3%各浓度的甲醛均可有效灭活精绞液中的外源指示病毒。因此，对于灭活外源病毒，可任意选用以上各种终浓度甲醛。
终浓度为0.1%的甲醛虽然能大量减少指示细菌的数量，但仍有大量细菌未被灭活；而随着甲醛浓度的提高，终浓度0.2%及以上的甲醛，指示细菌全部被灭活。依据《中国兽药典》2010年版（三部）规定甲醛残留量不得超过0.2%，0.2%为甲醛残留量的上限。考虑到后续工艺中没有单独针对甲醛的去除工艺，且甲醛为毒性物质，过多残留可能造成较大应激。0.2%的甲醛浓度足以灭活指示细菌和病毒，因此确定0.2%甲醛浓度为鸡脾转移因子注射液生产工艺中脾脏精绞后的甲醛灭活终浓度。
实施例9：0.2%浓度的甲醛溶液灭活条件下不同灭活时间对抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的影响。
传统工艺中灭活多是在37℃灭活24小时；传统工艺中冻融工艺多采用-20℃反复冻融8次以上。
本发明的改进工艺中应用终浓度为0.2%甲醛灭活，37℃灭活时间为8小时，结果显示，0.2%的甲醛终浓度下，灭活8小时更完全彻底，对产品活性亦无影响。
本实施例中，为验证不同灭活时间对鸡脾脏外源微生物的灭活效果，新鲜鸡脾脏经检验无菌及无外源病毒，采取添加指示细菌（大肠杆菌K88、K99、987P）的灭活试验，生产工艺按照实施例2的步骤执行。结果表明，0.2%的甲醛终浓度下，灭活8小时更完全彻底，对产品活性亦无影响。确定8小时为鸡脾转移因子口服液中精绞液外源病毒的甲醛灭活时间。
表7不同灭活时间对精绞液中添加指示菌的灭活效果
从表7中可以看出，灭活6～7小时可以部分灭活精绞液中的指示细菌，但灭活不彻底，依然有部分活菌残留在精绞液中；灭活8小时以上可以彻底灭活精绞液中的指示细菌，活菌计数结果为0。据此，选定8小时为精绞液中甲醛的外源微生物灭活时间。
实施例10：冻融次数对半成品的影响。
传统工艺中对冻融次数并未特别说明，存在争议，为此本实施例研究了冻融次数对半成品含量的影响。
本发明研究了如下冻融次数的不同试验组，以摸索生产工艺中最佳的脾脏匀浆液的冻融次数，从而最大限度获得高收率。其他生产工艺按照实施例1的步骤执行，提取液检测结果见表8。
表8冻融次数对多肽和核糖含量的影响
| 冻融次数 | 多肽（mg/ml） | 核糖（μg/ml） |
| 1 | 0.56±0.21 | 17.36±3.09 |
| 2 | 1.42±0.25 | 50.0±5.47 |
| 3 | 1.40±0.15 | 49.56±4.17 |
| 4 | 1.43±0.22 | 49.35±5.04 |
结果分析：从1次冻融开始，随着冻融次数的增加，多肽和核糖含量逐渐提高，冻融次数与提取液含量呈正相关；冻融次数增加到2次以上后，多肽和核糖含量并不随冻融次数的增加而提高，第3、4次冻融组之间差异不显著，与其他组别均差异显著。
经过2次冻融后5批产品多肽和核糖含量的检测结果见表9。
表92次冻融的5批中试产品的多肽和核糖含量测定
| 批号 | 多肽（mg/ml） | 核糖（μg/ml） | 冻融次数 |
| 201102231 | 1.61 | 39.47 | 2 |
| 201103121 | 1.65 | 40.58 | 2 |
| 201104051 | 1.43 | 44.31 | 2 |
| 201105221 | 1.50 | 42.08 | 2 |
| 201106121 | 1.54 | 41.65 | 2 |
由表9可以得出结论：2次反复冻融为转移因子注射液生产工艺中脾脏匀浆液的最佳冻融次数。
实施例11：上述制备方法制备的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫的用途。
通过迟发型超敏反应进行特异性免疫反应验证试验。具体实验如下：
1材料与方法
1.1药品及试剂
鸡新城疫灭活疫苗；抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服溶液；正常鸡脾转移因子口服溶液；2,4-二硝基氯苯（DNFB）；丙酮。
1.2实验动物及分组
选用体重18～22g的健康无特定病原体（Specefic pathogen Free，SPF）级昆明系小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，第1组为本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服溶液组；第2组为正常鸡脾转移因子口服溶液组；第3组为生理盐水对照组。
1.3方法
实验1组和2组的小鼠背部皮下注射浓度为1.25%的2,4-二硝基氯苯（DNFB）丙酮溶液0.02ml/只致敏，每日2次，于致敏后第2天每日分别口服灌胃本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液和正常鸡脾转移因子口服溶液0.5ml/只，连续10天，对照组用生理盐水作同样处理。给药后10天，实验组小鼠和对照组小鼠，均皮下腹腔注射新城疫灭活疫苗0.5ml/只，于注射后1天，实验组小鼠在右足垫中间注射0.25%的2,4-二硝基氯苯（DNFB）丙酮溶液0.02ml/只进行攻击，同时左足垫中间注射丙酮0.02ml/只，进行对照（致敏与攻击中间间隔10天）。对照组仅右足作同量的0.25%的2,4-二硝基氯苯（DNFB）丙酮溶液注射。攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，从踝关节剪下左右足称重，对照组小鼠只剪右足，实验组小鼠的左右足分别与对照组右足进行比较，作为肿胀值（mg）。
2结果
由表10可见，本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的实验1组小鼠左右足部肿胀明显增加，增加值在15.0%～20%之间，与对照组相比差异极显著（P＜0.01）。而正常鸡脾转移因子口服液的实验2组小鼠左右足部也肿胀，但其程度不及实验1组，与实验1组相比差异极显著（P＜0.01）。
表10各组小鼠迟发性超敏反应的结果
注：结果以平均收（mean）±标准差（SD）表示，*P＜0.05，**P＜0.01与对照组相比；#P＜0.05，##P＜0.01与实验1组相比。
3结论与讨论
二硝基氯苯（DNFB）诱导的迟发型超敏反应（DTH）是一种主要由辅助性T细胞（Th1）中介的细胞免疫反应。当半抗原DNFB第2次与皮肤接触时，它与皮肤中表达MHCⅡ类分子的抗原体呈细胞结合，激活组织中的Th1细胞，后者释放的趋化因子和细胞因子等可导致局部巨噬细胞的聚集和血管通透性的升高，从而引起炎症区域的明显肿胀，迟发型超敏反应常作为一种简易和敏感的方法来估计整体动物的细胞免疫功能。
文献报道指出，经腹腔注入EB病毒特异性牛血转移因子，可诱导实验小鼠对EB病毒抗原足蹠皮肤的特异性迟发型超敏反应。用DNFB丙酮溶液刺激小鼠，进行迟发型超敏反应实验，实验结果表明，口服本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液后，可诱导实验小鼠对新城疫疫苗产生明显的特异性皮肤迟发型超敏反应，服用本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液的实验1组小鼠左右足部肿胀明显增加，增加值在15.0%～20%之间，与对照组相比差异极显著（P＜0.01）。而服用正常鸡脾转移因子口服液的实验2组小鼠左右足部也肿胀，但其程度不及实验1组，与实验1组相比差异极显著（P＜0.01）。从而进一步证明，转移因子的抗原依赖性特异效应。本研究结果将为进一步推广使用口服转移因子提供可靠的实验依据；同时也再一次证明，兽医临床上用抗鸡新城疫病毒特异性转移因子可提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫效应。
实施例12：上述制备方法制备的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫的用途。
通过白细胞移动抑制试验进行特异性免疫反应验证试验。具体实验如下：
1材料与方法
1.1材料
抗原：鸡新城疫病毒。
致敏动物或被检动物：口服本发明的鸡新城疫特异性转移因子口服液的鸡。
Hank’s液、9×15mm的培养皿、水平转子离心机、湿盒、微量移液器、打孔器。
1.2方法
1.2.1鸡灌服本发明的鸡新城疫特异性转移因子口服液
选取健康鸡6只，随机分为2组，分别为TF组和空白对照组，TF组按0.25～0.5ml/只/日饮服本发明的鸡新城疫特异性转移因子口服液，连用3日；同时空白对照组饮服生理盐水，做同样处理。
1.2.2取肝素抗凝血
由致敏动物或被检动物无菌操作采血10ml左右，放入含有肝素的无菌试管中。自然沉降，分离血浆，吸取血浆，未经免疫的对照组按同样操作采血处理。
1.2.3淋巴细胞提取
（1）取抗凝血2毫升，加3毫升Hanks液使之稀释。加3毫升淋巴细胞，分层液液面之上（沿管壁轻轻加入，勿使两液相混）。
（2）2000转/分离心30分钟，吸淋巴细胞层到另一试管中加5倍体积的Hanks液洗1-2次，1500转/分离心10分钟，弃上清液即成。
1.2.4吸出的血浆用3倍容量0.83%NH4Cl溶液处理7分钟，使全部红细胞溶解。白细胞在2000rpm于室温内离心沉淀15分钟。
1.2.5用Hank’s液洗涤三次。在最后一次洗涤后，白细胞浓缩在含有青霉素50单位/毫升，链霉素50微克/毫升和10%灭活牛胎血清的Hank’s液中。
1.2.6取悬浮液进行白细胞计数并将悬浮液调整到含3×108个细胞/毫升，每毫升细胞悬液分别与0.5ml、1ml、2ml新城疫抗原混合放于无菌西林瓶中，然后在37℃孵育30分钟。
1.2.7用Hank’s液配制1%琼脂糖溶液，其中，青霉素（500单位/毫升），含7.5%NaHCO3（0.65毫升/100毫升琼脂）的链霉素（500微克/毫升）和15%牛血清。将琼脂糖（8毫升）倒入9×15mm便于处理的平皿内，放平，盖好，让其凝固。
1.2.8用打孔器在1%琼脂糖平板上打5个直径为2.3mm的孔，每个检验组做两个平板。用微量移液器分别加入经新城疫抗原处理的已免疫过本发明的新城疫疫苗的鸡的白细胞和正常鸡的淋巴细胞，以及未经新城疫抗原处理的已免疫过本发明的新城疫疫苗的鸡的白细胞和正常鸡的淋巴细胞，将每个平板放在带湿盒中孵育24小时后观察结果。
2结果判定
显微镜判定：取培养皿观察，加有抗原的组与被致敏的动物白细胞的孔细胞移出半径小，或不移行出，未加抗原的对照组，则细胞移出的半径大，两者差异明显。
移动指数（MI）：可用求积仪求出面积。
移动指数（MI）=有抗原存在时白细胞移动面积/无抗原存在时白细胞移动面积
3结果
实验组和对照组分别做3个平行，显微镜判定结果显示，用新城疫疫苗强化免疫组白细胞移出半径明显比空白对照组小，差异显著（P＜0.05）。
白细胞移动抑制指数的实验结果如表11所示。
表11各组鸡只白细胞移动抑制指数的实验结果
4讨论与结论
当抗原刺激机体时，机体可同时产生体液免疫反应和细胞免疫反应。在效应性T淋巴细胞接受抗原时，就进一步分化增殖形成致敏的淋巴细胞，使机体处于致敏状态。当机体再次接受同样抗原时，致敏的T淋巴细胞一方面直接表现出杀伤靶抗原的作用；另一方面则释放出各种淋巴因子，其中主要包括各种白细胞介素和淋巴因子，去调动或激活各种免疫细胞以及相关的非免疫细胞，达到清除靶抗原的目的。在淋巴因子中，对同一细胞就有多种淋巴因子相互作用，如对巨噬细胞和粒细胞，就有吸引因子、激活因子和游走抑制因子等多种淋巴因子在起作用。
本实验就是在某一抗原致敏的淋巴细胞中，再次加入同种抗原，刺激淋巴细胞产生巨噬细胞游走抑制因子（MMIF）和白细胞游走抑制因子（LMIF），结果导致这些细胞的游走抑制。
本实验结果显示，本发明的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子口服液具有促进免疫系统淋巴细胞产生移动抑制因子的作用，与对照组相比差异显著（P＜0.05），由此进一步说明本品是一种很好的特异性免疫增强剂。
Claims (10)
1.一种抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于，包括：
选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫；
监测实验鸡体内新城疫病毒疫苗免疫抗体水平，在抗体水平达到28～29时，无菌取实验鸡的脾脏；
处理所述鸡的脾脏得到抗鸡新城疫病毒特异性转移因子。
2.如权利要求1所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于，
所述选择健康鸡作为实验鸡进行新城疫灭活疫苗强化免疫包括：首次免疫每只实验鸡注射0.5ml弱毒疫苗，14d后进行第二次免疫，每只实验鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，21d时进行第3次免疫，每只实验鸡注射1.0ml油乳剂灭活苗，28d时进行第四次免疫，每只鸡肌肉注射1.0ml油乳剂灭活苗；
所述无菌取实验鸡的脾脏包括：将实验鸡的脾脏置于无菌玻璃器皿中，用1%的新洁尔灭溶液浸泡半小时，浸泡完后用酒精消毒脾脏表面，用剪刀剪去脂肪及包膜，用pH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液洗涤一次，将脾脏剪成小段放入平皿中并用眼科剪将脾脏剪成1m3小块，用pH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液洗涤3次，以除去血细胞、色素物质及剪碎过程中机械损伤的细胞。
3.如权利要求1所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于，所述处理所述鸡的脾脏包括：剪摘、称量清洗、初绞、精绞、灭活、冻融、离心分离和超滤。
4.如权利要求3所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于：所述初绞的次数为1～3次。
5.如权利要求3所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于：所述精绞包括将初绞的猪脾与纯化水按1:1～2的质量比混合，置于胶体磨中研磨得到匀浆，所述精绞的时间为1～3分钟。
6.如权利要求3所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于：所述灭活包括将质量占匀浆质量的0.1～0.3%甲醛溶液加入到匀浆中，所述甲醛溶液中甲醛的质量浓度≥37%；所述灭活的条件为37～40℃下灭活6～10小时，中间间隔2～4小时震摇1次。
7.如权利要求3所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于：所述冻融包括将灭活的匀浆置于-80℃冻融，反复冻融2～4次。
8.如权利要求3所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的制备方法，其特征在于：
所述离心分离采用管式离心机，将冻融的匀浆在室温下以12000～15000r/min的转速连续离心，去沉淀，取上清液备用；
所述超滤使用截留分子量为5000～6000道尔顿的中空纤维超滤膜对上清液进行过滤，再用0.20～0.24μm的微孔滤膜进行过滤除菌。
9.一种如权利要求1～8任一项所述的制备方法制备的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的口服液的制备方法，其特征在于，包括：
向抗鸡新城疫病毒特异性转移因子中加入注射用水，
加入盐酸或氢氧化钠溶液调pH至6.5～7.3之间，得到抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的口服液。
10.一种如权利要求9所述的抗鸡新城疫病毒特异性转移因子的口服液的提高鸡体对新城疫病毒抗原的特异性免疫的用途。
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