CN103592390A - 茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。本发明是以绿原酸为对照品，茵木愈肝颗粒为供试品，通过高效液相色谱法进行的鉴别和含量检测。高效液相色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：0.5％冰醋酸(20：80)为流动相，检测波长为327nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于4000。本发明采用高效液相色谱法对绿原酸进行鉴别和含量检测，方法更科学，检测手段更先进，定性定量更准确，不仅可以更好更全面的反映茵木愈肝颗粒的有效成分，而且还可以杜绝采用其他药材代替茵陈投料生产的情况，从而确保了该药品的质量，保证了用药的安全有效。

Description

茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种药物制剂中活性成分的质量检测方法，具体来说，涉及的是一种治疗湿热型肝炎的中药颗粒剂中绿原酸的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。

背景技术

本发明涉及一种药物制剂中活性成分的质量检测方法，具体来说，涉及的是一种治疗湿热型肝炎的中药颗粒剂中绿原酸的质量检测方法，属于药品质量控制技术领域。

本发明具体涉及的治疗湿热型肝炎的中药颗粒剂即茵木愈肝颗粒，由茵陈、木贼、黄芩、板蓝根、大黄、白茅根等药材，经适当工艺制备得到，该制剂对于辩证为湿热之证的病毒性肝炎、胆囊炎均有很好的疗效。。

茵木愈肝颗粒中茵陈、木贼具有清利热湿、退黄的功效，经研究证明，茵陈的主要有效成分——绿原酸具有具有抗菌、抗病毒、免疫调节、抗氧化等多种作用；木贼的主要有效成分——山柰素具有抗炎、抗氧化、抗溃疡等多种作用。在对茵木愈肝颗粒的分析中发现本品中的主要有效成分为绿原酸。

通过查询目前国内外的相关文献发现，仅有单独测定茵陈制剂中的绿原酸或单独测定木贼制剂中山柰素的报道，还没有关于对由茵陈、木贼、黄芩、板蓝根、大黄、白茅根组成的复方制剂中的绿原酸和山柰素进行检测昀文献报道。为了更好的控制茵木愈肝颗粒的质量，保证临床用药的安全性，有必要建立一套完整的质量控制标准以更好的控制本品的质量。

茵木愈肝颗粒的制备工艺中主要涉及制备方法为：取茵陈400g，木贼400g，大黄100g，板蓝根200g，黄芩200g，白茅根200g。将6味药材洗净，按比例混合，加药材总重量的6-10倍的水煎煮2次，每次1.5小时，合并2次煎煮液，过滤，并浓缩至90℃时相对密度为1.05，待冷却至室温，加入乙醇，使药液含醇量为70％，搅匀，静置24小时，取上清液，回收乙醇后，浓缩至60℃时相对密度为1.25的浸膏，加蔗糖，糊精，乙醇适量，制成软材，过12目筛制成颗粒，干燥，即得。

经过分析可以得知，整个生产工艺中质量控制比较简单，可能会因为生产批次的不一样，或者就算是同一批次也会生产出含量各不相同、品质不均匀的产品。如果在颗粒制备完成或者制备过程中，进行适当的鉴别和含量检测，这无疑会对产品的质量和疗效稳定起着至关重要的作用。

发明内容

本发明的目的是针对中药制剂茵木愈肝颗粒，提供一种可以全面鉴别及检测该制剂有效成分之——绿原酸的质量检测方法，确保了该药物制剂的安全有效。

为实现上述发明目的，本发明采用的具体技术方案如下：

茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法，其特征在于：以绿原酸为对照品，以甲醇、0.5％冰醋酸溶液的混合物为流动相，甲醇：0.5％冰醋酸溶液v／v=20：80，用高效液相色谱法进行鉴别和含量检测。

所述高效液相色谱的条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比20：80的甲醇-0.5％冰醋酸溶液为流动相，检测波长为327nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于4000。

所述鉴别检测的具体方法如下：

A对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇制成每1ml中含0.1mg的对照品溶液；

B供试品溶液的制备：精密称定茵木愈肝颗粒0.5g，置于锥形瓶内，加入甲醇：水v／v=50：50的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；

C液相色谱测定色谱峰：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。

所述含量检测的具体步骤如下：

A对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇溶液制成每1ml中含0.1mg的对照品溶液；

B供试品溶液的制备：精密称定茵木愈肝颗粒0.5g，置于锥形瓶内，加入甲醇：水v／v=50：50的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；

C液相色谱测定色谱峰：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。

发明人对鉴别方法和含量测定方法的可行性进行了验证研究；具体实验资料如下：

1、绿原酸的高效液相鉴别研究

方法：高效液相色谱法

样品和对照品处理方法：精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇溶液制成每1ml中含0.1mg的对照品溶液液。供试品溶液制备：取供试品0.5g，精密称定，置锥形瓶内，加入50ml甲醇：水v／v=50：50的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5μm)

流动相：甲醇：0.5％冰醋酸溶液(20：80)

检测波长：327nm

流速：1.0ml／min

结果：在拟定条件下，样品中有与对照品保留时间一致的色谱峰。

2、绿原酸的高效液相含量测定研究

方法：高效液相色谱法

1.仪器与实验药

Agilent1200型高效液相色谱仪，KQ3200DB型数控超声波清洗器。甲醇为色谱级，冰醋酸为分析纯。绿原酸对照品为中国药品生物制品检定所提供，茵木愈肝颗粒由解放军总医院第一附属医院提供。

2.方法与结果

2.1色谱条件：

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5μm)

流动相：甲醇：0.5％冰醋酸溶液(20：80)

检测波长：327nm

流速：1.0ml／min

2.2溶液制备

2.2.1精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇溶液制成每1ml中含0.1mg的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液制备：取供试品0.5g，精密称定，置锥形瓶内，加入50ml甲醇：水v／v=50：50的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.3系统适用性实验：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，结果绿原酸的保留时间为5.813min，绿原酸峰与前后色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板以绿原酸峰计算为6250。

2.4线性关系：分别精密吸取2.2.1项下对照品溶液1，2，5，10，15，20μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值Y对进样量X进行回归，得标准曲线方程：Y=3173.61X+0.5692(r=0.9999)，结果表明绿原酸进样量在2.5-20ng范围内峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.5精密度研究：精密吸取2.2.1项下对照品溶液10μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，测得绿原酸峰面积RSD为1.05％，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性研究：精密吸取2.2.2项下对照品溶液10μl，分别在0，2，4，6，8，12小时注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，测得绿原酸峰面积RSD为1.99％，表明供试品溶液在12小时内稳定。

2.7重复性实验：精密吸取2.2.2项下样品溶液10μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，测得绿原酸峰面积RSD为1.91％，表明仪器精密度良好。

2.8回收率实验：精密称取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3组，每组3份，分别精密添加绿原酸对照溶液适量，按照2.2.2项下方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件测定峰面积，计算回收率，回收率为100.15％，RSD=2.58％，实验结果表明本品具有良好的回收率。

2.9样品含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。本品每1g含绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)不得少于2.5mg。

本发明的优点是采用高效液相色谱法对绿原酸的鉴别及含量进行检测，方法更科学，检测手段更先进，定性定量更准确，不仅可以更好更全面的反映茵木愈肝颗粒的有效成分，而且还可以杜绝采用其他药材代替茵陈投料生产的情况，从而保证该药品的质量，保证用药安全有效。

本发明的另一优点是，通过对绿原酸的鉴别和含量检测，可以在颗粒制备之前就进行质量控制，以便生产出质量合格的产品，同时，也可以为产品提供一种科学合理的检测方法，以便从生产和流通领域控制产品质量。

具体实施例

下面结合实施例对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明技术方案仅限于以下实施例。

实施例1绿原酸的鉴别

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.5％冰醋酸溶液(20：80)为流动相；检测波长为327nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于4000。精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇溶液制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取本品粉末约0.5g，精密称定，置于锥形瓶内，加入50ml甲醇：水v／v=50：50的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，检测，供试品色谱中应存在与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。

实施例2绿原酸的含量测定

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.5％冰醋酸溶液(20：80)为流动相；检测波长为327nm；理论板数按绿原酸峰计算应不低于4000。精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇溶液制成每1ml中含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。取本品粉末约0.5g，精密称定，置于锥形瓶内，加入50ml甲醇：水v／v=50：50的溶液，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，测定即得。

Claims (4)

1.茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法，其特征在于：以绿原酸为对照品，以甲醇、0.5％冰醋酸溶液的混合物为流动相，甲醇：0.5％冰醋酸溶液v／v=20：80，用高效液相色谱法进行鉴别和含量检测。

2.根据权利要求1所述的茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱的条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比20：80的甲醇-0.5％冰醋酸溶液为流动相，检测波长为327nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于4000。

3.根据权利要求1所述的茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法，其特征在于：所述鉴别检测的具体方法如下：

A对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇制成每1ml中含0.1mg的对照品溶液；

B供试品溶液的制备：精密称定茵木愈肝颗粒0.5g，置于锥形瓶内，加入甲醇：水v／v=50：50的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；

C液相色谱测定色谱峰：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。

4.根据权利要求1所述的茵木愈肝颗粒中绿原酸的质量检测方法，其特征在于：所述含量检测的具体步骤如下：

A对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，用甲醇溶液制成每1ml中含0.1mg的对照品溶液；

B供试品溶液的制备：精密称定茵木愈肝颗粒0.5g，置于锥形瓶内，加入甲醇：水v／v=50：50的溶液50ml，精密称定后，超声提取30分钟，取出，放冷，再精密称定并采用甲醇：水v／v=50：50的溶液补足失去的重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液；

C液相色谱测定色谱峰：分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，检测出供试品色谱中与对照品色谱峰保留时间相一致的色谱峰。